目的:1.探究Yes相关蛋白1(Yes-associaBMS-907351体外ted protein 1,YAP1)抑制剂Verteporfin(VP)和顺铂(cis-Diamminedichloroplatinum,CDDP)对食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)细胞存活率的影响,并探究VP与CDDP联合应用是否对ESCC细胞存在协同作用;2.探究VP与CDDP单独及联合应用对ESCC细胞恶性表型的影响;3.探究VP与CDDP在ESCC中联合作用的分子机制。方法:1.采用噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法检测不同浓度的VP和CDDP在作用24 h、48 h、72 h后对细胞生存率的影响,并使用Graph Pad Prism 9计算IC_(50);2.根据两种药物的IC_(50),每种药物选三个浓度对细胞进行联合处理,使用MTT法测定细胞存活率。根据联合用药后的细胞存活率,使用在线数据分析工具Synergy Finder 2.0与Compu Syn软件计算协同分数(synergy score)和联合指数(combination index,CI),确定VP和CDDP联合用药之间的相互作用,并确定后续实验的药物联合使用浓度;3.VP和CDDP单药或联合用药作用于KYSE150和KYSE30细胞,使用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用碘化丙啶(propidium lodide,PI)染色检测细胞的死亡情况;通过二氢乙锭(dihydroethidium,DHE)探针检测细胞的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色检测细胞的凋亡情况;丹酰尸胺(dansylcadaverine,MDC)染色检测细胞的自噬情况;采用细胞聚集实验和细胞分离实验检测ESCC细胞同质黏附能力;采用划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;4.采用Western blot实验检测VP和CDDP单药或联合用药对凋亡相关蛋白PARP-1和Procaspase-3、转移相关分子MMP-2以及对AKT信号通路的影响。结果:1.不同浓度的VP或CDDP均导致KYSE150和KYSE30的细胞活力下降,且呈剂量和时间依赖性;2.与单独用药相比,VP与CDDP联合用药显著抑制了细胞的生存,经Synergy Finder 2.0和Compu Syn计算,VP与CDDP联合使用具有协同效应;3.与对照组相比,单独用药组细胞开始变圆,CDDP组细胞出现肥大,而与单独用药相比,联合用药对细胞形态的影响更大,细胞数量减少更多,细胞肥大明显,形态不佳。经PI染色后发现单独用药组较对照组细胞死亡增加,而与单独用药组相比,联合用药组细胞死亡数量更多;与对照组相比,单独用药组增加了ROS水平,而联合用药导致细胞内ROS水平较单独用药组的ROS水平更高;经DAPI染色后发现,对照组凋亡细胞极少,单独用药组凋亡率出现增高,细胞核出现凝集,而联合用药组比单独用药组的细胞凋亡率更高,细胞出现核凝集和核碎裂;通过MDC染色发现,VP组自噬降低,CD点击此处DP组自噬增强且出现自噬空泡,而联合用药组自噬降低;通过细胞聚集实验和细胞分离实验检测到单独用药组细胞的黏附能力较对照组增强,而联合用药组细胞同质黏附力又显著强于单独用药组;通过划痕愈合实验发现,划痕48 h后单独用药组划痕宽度较对照组稍宽,而联合用药组的划痕宽度又显著大于单独用药组;4.与单独用药相比,VP和CDDP联合应用导致凋亡蛋白PARP-1和Procaspase-3表达量均明显下调;转移相关分子MMP-2表达降低;与对照组及单独用药相比,联合用药组的细胞AKT信号通路中p-AKT的表达水平明显下调,而总蛋白AKT的表达没有明显变化。结论:1.VP与CDDP单独应用均能抑制ESCC细胞的生存;2.VP与CDDP联合应用对ESCC细胞有协同抑制作用;3.VP与CDDP联合用药比单独用药更能降低ESCC细胞的增殖能力;导致细胞死亡、ROS水平、凋亡增加,自噬受抑;并能增强细胞间黏附力、降低细胞迁移能力;4.VP与CDDP联合用药通过凋亡蛋白PARP-1、caspase-3的活化来促进ESCMedia degenerative changesC细胞的凋亡;通过降低细胞中MMP-2的表达来减弱ESCC细胞的迁移侵袭能力;VP与CDDP对ESCC细胞的协同作用可能通过AKT信号通路发挥作用。