第一部分PLCE1基因单核苷酸多态性在广西壮族儿童中的分布特点目的:分析PLCE1(Phospholipase CE1,PLCE1)基因单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorephism,SNP)位点rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224在广西壮族儿童中的分布情况,并同时比较其在不同民族、地区的基因型和等位基因型频率分布差异。方法:选取100例在右江民族医学院附属医院健康体检的广西壮族儿童,运用二代测序技术检测PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360及rs2274224四个位点的SNP。通过哈迪-温伯格平衡(Hardy-WeinLiraglutide MWberg Equilibrium,HWE)遗传定律评估样本是否具有群体代表性,应用SPSS22.0统计软件分析实验数据,运用卡方检验或fisher确切概率法比较上述各位点的基因型及等位基因型频率在广西壮族儿童中与其他民族及地区的分布差异。结果:1.PLCE1 SNP位点基因型及等位基因型在广西壮族儿童中分布情况:(1)广西壮族儿童中PLCE1基因rs17109674位点检测出G(63.5%)、A(36.5%)等位基因型和GG(36.0%)、GA(55%)、AA(9.0%)基因型;rs10786156位点检测出G(63.5%)、C(36.5%)等位基因型和GG(44.0%)、GC(39.0%)、CC(17.0%)基因型;rs3740360位点检测出A(76.0%)、C(24.0%)等位基因型和AA(60%)、AC(32%)、CC(7.0%)三种基因型;rs2274224位点检测出C(62.5%)、G(37.5%)等位基因型和CC(42.0%)、CG(41.0%)、GG(17.0%)基因型。PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360及rs2274224四个SNP位点的基因型频率在健康的广西壮族男、女性儿童中分布差异无统计学意义(P>0.05)。(2)PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360及rs2274224四个SNP位点的等位基因的频率在健康的广西壮族男、女性儿童中分布差异也无统计学意义(P>0.05)。2.PLCE1基因SNP位点在不同民族及地区分布情况:(1)rs17109674基因型及等位基因频率与千人基因组计划(1000 Genomes)数据库中公布的北京汉族人群、日本人Clinically amenable bioink群相比,差异具有统计学意义(P<0.05),但与西双版纳傣族人群比较差异无统计学意义(P>0.05);与芬兰人群相比,基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05),等位基因型分布差异无统计学意义(P>0.05)。(2)rs10786156位点基因型及等位基因型频率与1000 Genomes数据库中北京汉族人群、日本人群及芬兰人群相比,差异具有统计学意义(P<0.05),但与西双版纳傣族人群比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)rs3740360位点基因型及等位基因型频率与1000 Genomes数据库中北京汉族人群、芬兰人群相比,差异具有统计学意义(P<0.05),但与西双版纳傣族人群及日本人群比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)rs2274224位点基因型及等位基因型频率与1000 Genomes数据库中的北京汉族人群、日本人群、芬兰人群相比差异具有统计学意义(P<0.05),但与西双版纳傣族人群比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:广西壮族儿童PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个SNPs位点在不同地区分布不尽相同,具有地域性。第二部分PLCE1基因多态性及其血清学水平与广西壮族儿童原发性肾病综合征相关性的研究目的:探讨PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个SNP位点与广西壮族儿童原发性肾病综合征(Primary nephrotic synrome,PNS)发生及其对激素治疗的反应的相关性,同时研究PLCε1(Phospholipase Cε1,PLCε1)蛋白血清学水平在广西壮族PNS患儿中的表达情况,分析其意义。方法:采用回顾性研究,选取广西壮族PNS患儿155例及同期健康体检广西壮族儿童100例作为研究对象。运用Fast Target联合二代测序技术对PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个SNP位点进行基因分型;同时用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测样本的PLCε1蛋白血清浓度。采用SPSS22.0统计软件进行实验数据分析,运用HWE遗传定律评估健康对照组样本有无群体代表性,卡方检验或Fisher确切概率法分析基因型及等位基因型分布差异,logistic回归分析各SNP位点与广西壮族儿童PNS发病及其对激素治疗的反应的相关性,Mann-Whitney U秩和检验,分析各组间PLCε1蛋白浓度水平差异,连锁不平衡及单体型分析采用SHEsis软件。结果:(1)rs3740360位点基因型、显性模型(AC+CCvs AA)、等位基因型频率在PNS组与健康对照组间分布差异有统计学意义(X~2=11.725,P=0.03;X~2=8.884,P=0.003;X~2=5.770,P=0.016)。rs3740360位点显性模型AC+CC基因型、AC基因型及C等位基因与PNS发病风险相关,将性别、年龄等混杂因素排除后提示AC+CC基因型、AC基因型、C等位基因仍与PNS发病风险相关(OR:0.449,95%CI:0.256-0.786,P=0.005;OR=0.354,95%CI:0.188-0.667,P=0.001;OR=0.615,95%CI:0.390-0.971,P=0.037)。(2)rs17109674、rs10786156、rs2274224三个位点基因型、等位基因型频率在PNS组及健康组间分布差异无统计学意义(P>0.05)。进一步经逻辑回归分析,同时排除性别、年龄等混杂因素后进行逻辑回归校正,两次结果均显示上述3个位点基因型、等位基因与PNS发病风险无关(P>0.05)。(3)rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个位点基因型、等位基因频率在激素敏感型肾病综合征(SSNS)与激素耐药性型肾病综合征(SRNS)间分布差异无统计学意义(P>0.05)。进一步经逻辑回归分析,同时排除性别、年龄等混杂因素后进行逻辑回归校正,两次结果均显示上述4个位点基因型、等位基因与SRNS发病风险无关(P>0.05)。(4)PLCE1基因rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个位点存在连锁不平衡。(5)单倍体型结果显示:AGCG、GGCC、GGAG单倍体型在PNS组与健康对照组间分布差异有统计学意义(OR:0.282,95%CI:0.079-1.008,P=0.038;OR:0.327,95%CI:0.111-0.967,P=0.034;OR:4.616,95%CI1.179-18.069,P=0.016),提示AGCG、GGCCAZD1152-HQPA分子式单倍体型可能降低广西壮族儿童PNS发病风险,而GGAG单倍体型可能增加广西壮族儿童PNS的发病风险。(6)PNS组血清PLCε1蛋白水平显著低于健康组对照组,差异具有统计学意义(P<0.001);SRNS组中PLCε1蛋白水平也低于SSNS组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)rs3740360位点可能与广西壮族儿童PNS发病相关,其中AC基因型、AC+CC基因型、C等位基因可能降低广西壮族儿童PNS的发病风险。(2)rs17109674、rs10786156、rs3740360、rs2274224四个SNPs位点在PLCE1基因上存在连锁不平衡;AGCG、GGCC单倍体型可能降低广西壮族儿童PNS的发病风险,而GGAG单倍体型可能增加广西壮族儿童PNS的发病风险。(3)血清PLCε1蛋白水平可能为广西壮族儿童PNS一种保护性蛋白,可能与广西壮族儿童PNS对激素治疗的反应相关。