MAPK信号通路

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)N蛋白的抗原性，为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导表达获得重组N蛋白，纯化后经Western blot方法检测其反应原性，免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示：重组N蛋白在IPTIDN-6556G终浓度为1.0 mmol/L,Diabetes genetics37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量，该重组蛋白主要以可溶selleckchem BMS-354825性蛋白的形式表达；Western blot结果显示，纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合，具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示：PDCoV N蛋白抗原性好，可作为诊断试剂盒的候选抗原。

目的 探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原19-9(CA19-9)和谷氨酰转肽酶(GGT)单一及联合检测在原发性肝癌早期诊断中的临床应用价值。方法 选取原发性肝癌患者19例，肝硬化患者20例，慢性乙型肝炎患者31例以及健康体检者30例作为研究对象，采用磁微粒化学发光法检测血清中CHI3L1的Barasertib水平，化学发光法检测血清AFP及CA19-9水平，速率法检测血清中GCompound C分子量GT的水平。采用非参数秩和检验进行差异分析，通过ROC曲线下面积分析，比较单项及联合检测的诊断价值。结果 单项指标检测中，CHI3L1的AUCCross-species infection最大，为0.848,灵敏度最高，为89.5%,AFP的特异度最高，为95.1%;多指标联合检测时，CHI3L1+AFP和CHI3L1+AFP+CA19-9的AUC最大，均为0.884,高于各指标单项检测的AUC,CHI3L1+AFP、CHI3L1+AFP+CA19-9、CHI3L1+AFP+GGT和4项指标联合检测时灵敏度最高，为94.7%。结论 CHI3L1在原发性肝癌早期诊断方面有较大的价值，CHI3L1、AFP、CA19-9及GGT联合诊断能提高诊断效能。

微/纳米塑料作为一种新型污染物，广泛存在于自然水体和土壤环境中。微/纳米塑料有着较大的比表面积、含氧官能团及较强的吸附能力，容易吸附D-Lin-MC3-DMA体外水体中的各类污染物，包括抗生素类有机物。微/纳米塑料与抗生素结合形成的吸附体毒性会增强，而微/纳米塑料本身的Tumor-infiltrating immune cell性质及环境因素会影响到其与抗生物的相互作用。本文全面综述了微/纳米塑料与抗生素类有Adezmapimod机污染物的相互作用机制，梳理了微/纳米塑料的性质，如种类、粒径和老化程度等对其吸附抗生素的影响，总结了环境因素，如pH、有机大分子、盐度、重金属离子和温度对微/纳米塑料与抗生素相互作用的影响，并对未来研究的重点内容提出展望，以期为进一步明晰微塑料和抗生素的吸附行为及机理、微塑料/抗生素吸附体的环境行为及对生物体的健康风险提供参考。

背景:Hippo-Yes相关蛋白1(Hippo-Yes-associated protein 1,YAP1)通路在胃癌(gastric cancer,GC)的发生和转移中的重要性引起了相当多的研究和关注;然而,YAP1在胃癌中的调控网络尚不完全清楚。泛素-蛋白酶体体系是YAP1最重要的转录后调控途径之一,迄今为止,仅有少数去泛素化酶,如OTUB2、USP10和USP47被报道可通过去泛素化稳定YAP1蛋白参与肿瘤调控。然而,在胃癌中尚未有调控YAP1的去泛素化酶被报道。方法:通过生物信息学分析以及8×GTIIC荧光素酶报告基因系统、RT-q PCR和蛋白质免疫印迹等分子实验,鉴定泛素特异性肽酶49(Ubiquitin-specific peptidase49,USP49)为胃癌中YAP1蛋白的新去泛素化酶。通过CCK8细胞增殖、Transwell侵袭和迁移、克隆形成等体外细胞表型实验和化疗敏感性实验,以及细胞系来源的或患者来源的异种移植瘤裸鼠模型,阐明USP49在胃癌中的生物学功能。利用蛋白免疫共沉淀实验、GST-Pull down实验研究USP49与YAP1的相互作用。双荧光素酶报告基因和染色质共沉淀等实验探究YAP1/TEAD4对USP49基因启动子的调控作用。最后,我们收集了organ system pathology482名胃癌患者的组织样本和临床随访信息,通过进一步的免疫组化实验鉴定USP49蛋白与YAP1及其靶基因结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和富半胱氨酸血管生成诱导物61(cysteine-rich angiogenic inducer 61,CYR61)蛋白在胃癌组织和邻近正常组织中的表达水平及其相关性。利用Kaplan-Meier plotter预后分析和COX比例风险模型研究USP49表达与胃癌患者预后相关性。结果:在这项研究中,USP49被鉴定为YAP1的一种新型去泛素化酶,下调USP49可抑制胃癌细胞的增殖、转移、耐药和腹膜转移。USP49的过度表达显示出相反的生物学效应。此外,USP49被YAP1/TEAD4复合物转录激活,从而与YAP1通路形成正反馈环路,促进胃癌细胞的恶性进展。最后,临床验证发现USP49在胃癌组织中高表达Entinostat分子量,并与YAP1及其靶基因、CTGF和CYR61的表达呈正相关。Kaplan-Meier plotter生存分析和COX回归分析显示USP49高表达Bucladesine价格与胃癌患者预后不良相关,是胃癌的一个独立预后因子。此外,USP49和YAP1均高表达的患者总体生存期更短。结论:本研究证明,USP49不仅可以通过直接结合并去泛素化YAP1蛋白促进YAP1/TEAD4复合物在胃癌细胞中的促癌活性,还能作为YAP1直接调控的新靶基因,形成USP49/YAP1正反馈环路,从而促进胃癌细胞恶性进展。因此,USP49/YAP1正反馈环的异常激活在胃癌的恶性进展中起着关键作用,本研究结果有望为胃癌提供新的预后指标和治疗靶点。

目的：基于黏附斑激酶（FAK）为中心的细胞外基质-整合素-细胞骨架跨膜信号系统，探讨化瘀消癥复方对输卵管妊娠滋养selleck Wnt-C59细胞迁移的调控机制。方法：对输卵管妊娠绒毛滋养层细胞进行体外培养与鉴定，以含化瘀消癥复方水提液的培养基对输卵管妊娠滋养细胞进行培养，分为A（空白）组、B(FAK抑制剂Y15)组、C(Y15+中药中剂量)组、D（中药低剂量）组、E（中药中剂量）组、F（中药高剂functional biology量）组；应用Transwell法检测各组药物对滋养细胞迁移力的影响，Western Blot法检测各组药物对FAK、p-FAK、整合素β1(Integrin β1)、桩蛋白（Paxillin）、尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）蛋白表达的影响。结果：与A组比较，各给药组均能显著抑制细胞的迁移能力（P<0.05），各中药组呈一定的剂量依赖性；与A组、B组比较，C组、F组均可下调FAK、p-FAK、Integrin β1Etoposide、Paxillin、uPA蛋白表达水平（P<0.05）；各中药组对蛋白的影响呈一定的浓度依赖性。结论：化瘀消癥复方可能发挥与FAK抑制剂类似的效应，起到抑制输卵管妊娠滋养细胞迁移的作用，其机制可能是与下调Integrin β1，抑制FAK的信号转导，引起下游Paxillin的表达减少，负调控uPA，进而降调滋养细胞黏附斑激酶跨膜信号系统活性相关。

目的 观察解郁清心宁神方治疗冠心病焦虑抑郁状态的临床疗效。方法 将2018年1月—2020年12月就诊于石家庄市中医院刘真名中医工作室的60例冠心病合并焦虑抑郁状态患者随机分为对照组30例与治疗组30例，2组均给予西药常规治疗，治疗组加服解郁清心宁神方，对照组加服氟哌噻吨美利曲辛片(1片/次，1次/d),2组均治疗8周。观察比较2组治疗前及治疗8周后中医症状(胸胁胀痛、心烦易怒、情绪不宁、失眠多梦)积分、医院焦虑抑郁量表(HADS)评分、西雅图心绞痛量表(SAQ)评分。结Hepatocyte-specific genes果 治疗8周后，2组胸胁胀痛、心Dolutegravir体外烦易怒、情绪不宁、失眠多梦积分及HADS评分均明显降低(P均<0.05)更多,且治疗组均明显低于对照组(P均<0.05)。2组SAQ评分均明显升高(P均<0.05),且治疗组明显高于对照组(P<0.05)。结论 解郁清心宁神方可有效减少心绞痛发作及改善焦虑抑郁状态，为治疗冠心病焦虑抑郁状态提供了新思路和方法。

目的：探讨植物提取物白藜芦醇对多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）大鼠模型颗粒细胞内自噬的影响，并探讨其对SIRT1/AMPK通路的调控作用。方法：体外培养PCOS的SD大鼠卵巢颗粒细胞，用不同浓度白藜芦醇（5、10、20、40μmol/L）处理不同时间（24、48、72 h）,MTT法观察卵巢颗粒细胞增殖率的变化；电镜观察细胞内自噬水平的变化；Western blot检测细胞内沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator T1,SIRT1)、单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK）、磷酸化的AMPK(pAMPK)ABT-263、Beclin1和p62的表达变化，并检测SIRT1特异性抑制剂EX527作用后，细胞内上述蛋白的表达情况。结果：MTT结果显示，白藜芦醇能明显促进颗粒细胞增殖（P<0.05），呈浓度-时间依赖性（P<0.05）；电镜结果bioinspired microfibrils表明白藜芦醇能降低细胞内的自噬体数量（P<0.05）。Western blot结果显示白藜芦醇可以增强卵巢颗粒细胞内SIRT1和pAMPK的蛋白表达水平（P<0.05），抑制细胞内BeclinPuromycin分子量1的表达（P<0.05），增加p62的表达；联合SIRT1特异性抑制剂EX527作用后，颗粒细胞内的SIRT1和pAMPK蛋白表达水平明显降低，Beclin1表达明显增加（P<0.05）,p62却明显降低（P<0.05）。结论：白藜芦醇能抑制PCOS卵巢颗粒细胞内自噬水平并促进其增殖，这与白藜芦醇激活SITR1/AMPK通路密切相关。

为研究第四类脲酶抑制剂(4~(th )UI)与尿素不同配施方式对结球白菜生长及其部分品质指标的影响，利用室外盆栽方法，以结球白菜的鲜重、株高、叶长、叶宽、叶绿素含量、可溶性糖、根系活力为检测selleckchem CP-690550对象，在施肥量相同的情况下，4~(th) UI掺入尿素的3种不同配施方式均能显著提高结球白菜产量、品质指标和养分指标。其中，在B组方式中，1%的抑制剂用量效果最佳Infection Control，能增产32.82%;在C组方式中，0.2%的抑制剂用量效果最佳，能增产80.49%,株高提高17.34%,结球白菜的总氮和总磷含量分别提高61.36%和78.85%,根系活力提高26.61%;在D组方式中，0.2%的抑制剂用量效果最佳，能增产50.01%。在同一配施方式下，中低浓度的脲酶抑制剂掺量对作物增产效果最佳；在抑制剂浓度相同的3种不同配施方式下，以C组方式及其在此种配施方式下掺入尿素含量0.2%的4~(th )UI分别为最佳抑制剂购买CX-5461配施方式和最佳抑制剂用量。

本研究采用菌丝生长速率法，评价了12种GSK2118436双香豆素类天然产物衍生物(BCM1～BCM12)对棉花红腐病菌(Fusarinum moniliforme)、立枯病菌(Rhizoovert hepatic encephalopathyctonia solani)、枯萎病菌(Fusarium oxysporum)的抑菌效果。初筛试验结果表明，BCM4、BCM7、BCM8、BCM12对3种棉花病原菌的综合抑菌率优于其他8种双香豆素类天然产物衍生物。进一步毒力测定表明BCM4、BCM7、BCM8Tezacaftor核磁、BCM12对棉花红腐病菌的EC_(50)分别为33.89、21.55、29.63、28.60μg/mL,对棉花立枯病的EC_(50)分别为24.42、17.36、28.56、22.71μg/mL,对棉花枯萎病的EC_(50)分别为39.06、19.54、37.24、35.12μg/mL。与阳性对照醚菌酯相比，BCM7对棉花红腐病菌、立枯病菌、枯萎病菌的EC_(50)均低于醚菌酯，其相对抑菌效果分别为醚菌酯的1.45倍、1.94倍、1.63倍；BCM12对棉立枯病菌的EC_(50)低于醚菌酯，其相对抑菌效果为醚菌酯的1.49倍；BCM4对棉花立枯病菌的EC_(50)低于醚菌酯，其相对抑菌效果为醚菌酯的1.38倍。BCM4、BCM8、BCM7、BCM12均具有良好开发价值和应用前景。

目的:探讨紫杉醇通过上调HO-1表达，促进心肌细胞微管结构稳定预防缺血/再灌注(MI/R)损伤的机制。方法:将大鼠离体的灌注Langendorff心脏随机分为三组：对照组、缺血组、紫杉醇组，15 min的平衡期后，对照组进行120 min的常氧灌注；缺血组，缺血30 min后常氧再灌注120 min;紫杉醇组，缺血30 min后，在使用1μmol/L的紫杉醇常氧再灌注120 min;之后采用免疫组化方法和自由基检测试剂盒检测微管破坏情况，采用蛋白质印迹法研究潜在机制。结果:通过免疫组织化学分析微管形态，在对照组中可见微管结构完整，无明显断裂；在缺血组中可见微管连续中断，微管断裂；在紫杉醇组中可见CP-690550体外微管结构基本完整，但微管稍有粗selleckchem乱。蛋白质印迹分析显示紫杉醇组中JNK1的磷酸化水平显著增加。此外，HO-1的表达水平随着紫杉醇处理而增加，这可以被JNKMetal-mediated base pair的特异性抑制剂JNK-IN-8抑制。结论:紫杉醇在缺血时能维持微管结构稳定，通过心肌细胞JNK途径诱导HO-1表达或许是其中机制之一。