MAPK信号通路

在人的一生中,人造血干/祖细胞(human hematopoietic stem and progenitor cells,hHSPCs)具有多谱系分化与长期再生的潜能,对各种成熟血细胞的持续产生与维持至关重要。对小鼠和斑马鱼的研究证实,造血干/祖细胞最初出现于主动脉背腹侧的主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区域中的造血内皮细胞(hemogenic endothelium cells,HECs),通过内皮细胞向造血细胞转化(endothelial to hematopoietic transition,EHT)产生。但是目前我们对人EHT过程的研究与认识还稍显匮乏,对人EHT与造血内皮细胞谱系决定之间的具体机制尚不明确,在一定程度上限制了 hHSPCs在再生医学领域的应用。造血发育是一个由复杂的转录因子网络调控的渐进过程,独立生长因子(Growth factorindependent-1,GFI1)是其中一个重要的转录调控因子,在多系血细胞发育中发挥重要作用,也是小鼠EHT的关键调控因子。但是有关GFI1在人的造血发育与hHSPCs的形成中的作用报道较少,GFI1是否在人EHT中发挥着与在小鼠中同样重要的作用还不得而知。人胚胎干细胞(Human embryonic stem cells,hESCs)具有强大的自我更新能力和全谱系分化潜能,被广泛的应用于人体各系统组织细胞发育研究和再生医学研究。因此,本文利用hESCs作为模型,在体外研究人类早期造血发育过程中的调控机制。首先,本研究利用CRISPR/Cas9技术构建三株GFI1敲除人胚胎干细胞细胞系H1-GFI1-/–1/2/3#,并将其进行体外单层造血分化,使其分化为造血干/祖细胞。我们通过该模型探索GFI1在人造血分化中对HSPCs的生成的影响,并通过降低人外周血中hHSPCs的GFI1基因表达,来探究其对hHSPCs功能的影响;接下来,我们在人造血内皮报告细胞系H1-GATA2WT/GFP(在造血内皮标志基因GATA2后插入表达绿色荧光蛋白GFP的人胚胎干细胞系)中敲除GFI1,构建细胞系H1-GATA2WT/GFP-GFI1-/-,进一步研究GFI1对造血发育关键细胞—HECs的作用;最后,为了进一步探究GFI1在EHT中Analytical Equipment的调控机制,我们将GFI1敲除的HECs与野生型HECs进行了转录组测序、染色质开放性测序ATAC-seq 以及蛋白质-DNA 互作检测(Cleavage Under Targets and TagmeRP56976体外ntation,CUT&Tag)分析。通过上述研究,结果显示:1.与野生型对照组相比,H1-GFI1-/-在造血分化过程中无法产生造血祖细胞及各谱系血细胞,但可产生正常的内皮细胞,表明GFI1缺失会造成人血液发育过程中内皮向造血转化功能的障碍;人外周血hHSPCs实验表明GFI1具有维持人外周血hHSPC的正常功能的作用。2.H1-GATA2WT/GFP-GFI1-/-经过造血分化后,可以产生HECs,但是分选出的HECs不再具有产生造血祖细胞的能力。在GFI1敲除细胞系造血分化过程中回补GFI1表达,则可重新产生造血祖细胞。结果提示GFI1不影响造血内皮的谱系发育,但是对EHT过程是必不可少的。3.转录组测序结果提示GFI1敲除的HECs的内皮相关基因表达上调,造血相关基因表达下调。ATAC-seq结果显示GFI1敲除显著降低HECs中血细胞发育相关基因的染色质开放程度。此结果提示在EHT发生之前,内皮细胞已在染色质基因开放性上产生了分化倾向性,开始形成独特的基因表达模式。通过CUT&Tag分析,我们进一步发现EHT过程中,GFI1的直接调控靶点—PI3CP-690550分子式K-Akt信号通路。上述生物信息学分析结果提示GFI1可通过直接结合PI3K-Akt信号通路和维持特定染色质开放这两种方式来调节人内皮细胞向造血细胞的转化,继而控制hHSPCs产生。我们在体外造血分化模型中利用广谱PI3K通路抑制剂—LY294002抑制该信号通路,导致造血干/祖细胞产生受阻,提示PI3K-Akt信号通路对EHT过程具有调控作用。综上所述,上述工作表明GFI1在人EHT过程中具有重要作用,并揭示了其在该过程中的分子机制,明确了维持正常EHT所需的表观遗传调控机制的重要性。我们的工作有助于全面了解EHT背后的分子机制,从而有助于在体外获得更多的造血干/祖细胞,为其在再生医学领域的应用奠定基础。

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）/细胞外调节蛋白激酶（ERKMinimal associated pathological lesions）信号通路在逆转乳腺癌内分泌治疗耐药中的作用。方法 采用人乳腺癌细胞系MCF-7和T47D分别建立他莫昔芬治疗耐药细胞株MCF-7/TAMR和T47D/TAMR。分析MCF-7细胞与MCF-7/TAMR细胞、T47D细胞与T47D/TAMR细胞增殖能力和MAPK/ERK信号通路分子表达情况的差异。分析丝裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）抑制剂U01CH-223191细胞培养26抑制MAPK/ERK信号通路后，对MCF-7/TAMR和T47D/TAMR细胞增殖的抑制作用、细胞周期分布以及转录因子表达的影响。结果 与MCF-7细胞和T47D细胞比较，MCF-7/TAMR细胞和T47D/TAMR细胞的增殖速度显著加快（P<0.05），克隆形成能力显著增强（P<0.000 1）,MAPK/ERK信号通路分子[ERK、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（pERK）和c-MYC]表达量显著增高。采用MEK抑制剂U0126抑制MAPK/ERK信号通路后，MCF-7/TAMR细胞和T47D/TAMR细胞的增殖速度显著减慢（P<0.000 1），细胞周期发生停滞，MAPK/ERK信号通路的转录因子类固醇受体共激活因子（SRC-1）、E26转录因子-2(ETS-2)和c-JUselleck HPLCN基因的相对表达量明显降低（P<0.01）。结论 抑制MAPK/ERK通路可逆转乳腺癌细胞的内分泌治疗耐药，或可为制定内分泌治疗耐药乳腺癌患者的治疗方案提供新的思路。

为了探究肝细胞癌中miR-452-5p对患者预后生存的影响及其对肝癌细胞增殖、迁移的作用。采用肿瘤基因组图谱（TCGA）数据库中肝细胞肝癌数据集对miR-452-5p进行差异表达分析和Kaplan-Meier生存分析。采用TargetscanHuman和miRDB靶基因数据库对miR-452-5p靶基因进行预测；采用基因差异表达分析和加权基因共表达网络分析（WGCNA）的方法对数据集GSE14520进行分析计算。用Lipofectmine-2000将miR-4stratified medicine52-5p模拟物、模拟物阴性对照和miR-452-5p抑制剂、抑制剂阴性对IDN-6556生产商照分别转染到Huh7细胞中。分别采用RT-qPCR和Western blot实验，检测4组细胞中RORα在mRNA和蛋白水平上的表达情况。采用CCK-8、Transwell实验，检测4组细胞的增殖活力以及迁移能力。双荧光素酶报告基因实验验证Huh7细胞中miR-452-5p与RORα的调控关系。经TCGA数据分SAHA溶解度析，miR-452-5p在肝癌组织中高表达且显著影响患者预后总生存期。通过miRNA靶基因预测、基因差异表达分析、WGCNA分析，筛选出关键基因RORα和LAMC1。通过KaplanMeier生存分析得知RORα的异常表达显著影响肝癌患者的预后总生存期。肝癌细胞中miR-452-5p的过表达，会降低RORα的mRNA和蛋白表达，同时增强肝癌细胞的增殖能力和迁移能力。双荧光素酶报告基因实验结果证实了miR-452-5p靶向RORα的3′UTR区。在肝细胞癌患者中高表达的miR-452-5p靶向抑制了RORα的表达，促进了肝癌细胞增殖和迁移，进而加剧了肝癌的进展和预后不良。

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)H19及STAT3/IL-21通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)发生发展中的作用。方法 45只SD大鼠分为对照组(n=15)、SAP组(n=15)和转录激活因子3(STAT3)抑制组(n=15)。SAP组大鼠经胰胆管逆行微量泵入5%牛磺胆酸钠(0.1 mL/100 g)制备SAP模型。对照组大鼠泵入生理盐水。STAT3抑制组大鼠在诱导SAP后经腹腔注射STAT3system immunology抑制剂(STAT3-IN-1),剂量为10 mg/kg。其余两组注射等体积0.5%DMSO。造模后24 h处死大鼠，留取血清及肠道组织标本。酶联免疫吸附法(ELASA)检测大鼠血清淀粉酶及IL-21水平，RT-PCR法测定各组大鼠血清中H19和STAT3基因mRNA表达水平，以及测定各组大鼠肠道组织中带状闭合蛋白-1(ZO-1)、咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白(Claudin)-1和Claudin-2基因mRNA表达差异。结果 与对照组比较，两个实验组大鼠血清中淀粉酶表达明显升高(F=51.120,P<0.01),证明造模成功；SAP组大鼠血清IL-21较对照组明显升高，STAT3被抑制后，IL-21呈下降趋势(F=40.220,P<0.01)。SAP组大鼠血清中H19、STAT3基因mRNA表达均明显升高，而与SAP组比较，STAT3抑制组两基因表达水平均呈降低趋势(H19:F=15.165,STAT3:F=31.279,P<0.01)。此外，与对照组比较，SAP组大鼠肠道组织中ZO-1、Occludin、Claudin-1基因mRNA表达明显降低，而Claudin-2基因表达明显升确认细节高；与SAP组比较，STAT3抑制剂组ZO-1、Occludin、Claudin-1基因mRNA表达均呈下降趋势，Claudin-2基因表达明显升高(ZO-1:F=31.478,Occludin:F=24.614,ClauSAG配制din-1:F=13.839,Claudin-2:F=11.496,P<0.01)。结论 大鼠SAP相关性肠屏障功能障碍发生发展可能与STAT3/IL-21通路介导的H19表达上调有关。

目的:探讨首荟通便胶囊对原发性肝癌患者载药微球介入术后便秘的影响。方法:回顾性筛选出临沂市肿瘤医院2019年7月至2CMV infection021年8月收治的原发性肝癌患者,以接受载药微球介Ceralasertib试剂入术治疗后发生便秘的92例患者作为研究对象,根据使用通便药物的不同分为2组,口服通便灵胶囊的患者作为对照组,口服首荟通便胶囊的患者作为观察组,以治疗后中医病症临床疗效、便秘症状疗效、不良反应发生情况为具体评价指标。结果:治疗后,2组患者中医病症临床疗效、便秘症状皆有改善,且观察组显著优于对照组,差异有统计学意义(均P<0.05);观察组患者不良反应发生率显著低于对照组,差异有统计学意义www.selleck.cn/products/PD-0325901(P <0.05)。结论:原发性肝癌患者载药微球介入术后易发生便秘等情况,首荟通便胶囊可较好地改善患者便秘症状,相较于常规药物疗效更加显著,可在临床推广。

目的 挖掘纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、阿替利珠单抗和度伐利尤单抗4种程序性细胞死亡1受体及其配体(PD-1/PD-L1)抑制剂相关心力衰竭事件风险信号，为临床安全用药提供参考。方法 基于美国FDA不良事件报告系统(FAERS)数据库，采用报告比值比法(ROR)和比例报告比值比法(PRR)对4种PD-1/PD-L1抑制剂相关Dentin infection心力衰竭事件进行信号检测。结果 患者以男性为主，年龄以65～85岁居多。4种PD-1/PD-L1抑制剂均检出心力衰竭事件，纳武利尤单抗、帕博利珠单抗、阿替利珠单抗和度伐利尤单抗发生心力衰竭事件的频次分别为592次、322次、189次和56次。其中急性左心衰竭在帕博利珠单抗中生成一个可疑信号，心力衰竭和急性心力衰竭在4种PD-1/PD-L1抑制剂中均有可疑信号生成，慢性心力衰竭在阿替利珠单抗中生成一个可疑信号。结论 4种PD-1/PD-L1抑制剂均可能诱发严重心力衰竭PI3K/Akt/mTOR抑制剂事件，临Compound 3化学结构床在使用时应加强用药监护。

目的 探讨血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9在2型糖尿病合并冠心病患者中的表达及其临床意义分析。方法 回顾性分析2019年12月至2021年selleck Z-IETD-FMK8月在我院治疗的54例2型糖尿病合并冠心病患者的临床资料，将其作为A组，将同期54例单纯2型糖尿病患者作为B组，将同期54例健康体检者作为C组，对比3组的血糖、血脂等各血生化指标，分析血清前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)与各指标的相关性。结果 A组PCSK9、FPG、HbA1c、FINS、TC、TG、LDL-C、hs-CRP、Hcy、IL-6水平均明显高于B组、C组，HDL-C水平明显低于B组、C组，差异有统计学意义（P <0.05）;Pearson分析显示，2型糖尿病合并冠心病患者PCSK9水平与FINS、TC、TG、LDL-C、hs-CRP、Hcy、IL-6呈正相关（r=0.269,0.215,0.207,0.304,0.241,0.273,0.256,P <0.05），与FPG、获悉更多HbA1c、HDL-C无明显相关性（r=0.128,0.117,-0.102,P> 0.05）。结论 PCSK9在2型糖尿病合并冠心病患者中呈高表达，与FINS、TC、TG、LDL-C、hs-CRP、Hcy、IL-6呈正相关，可影响脂质代谢，加重炎性反应，还能降解载脂蛋白E受体2和肝细胞表面的LDL-C受体，使LDL-C水平上升Biosimilar pharmaceuticals，影响TC、TG水平，在T2DM合并冠心病患者的诊断与治疗中具有重要价值。

本实验旨在探究新生小鼠使用抗生素对棕色脂肪组织(BAT)功能的影响和机制。将6只孕龄14天的C57BL/6J孕鼠正常饲养至自然分娩,将新生小鼠随机分为对照组和抗生素组确认细节(n=19),从出生后第0天开始分别灌胃生理盐水和100 mg/kg头孢曲松,其中第0～6天的灌胃体积为10μL、第7～13天为100μL、第14～20天为200μL,所有子鼠由各自的母鼠自由哺喂;每天称量子鼠体重,第21天处死子鼠并收集血液、脏器和结肠粪便;采用HE染色观察BAT的indoor microbiome组织细胞形态,采用RT-qPCR测定BAT的能量消耗相关功能基因和免疫因子的表达水平;提取粪便DNA,采用qPCR测定粪便细菌浓度,采用16S rRNA测序分析粪便细菌的群落多样性和结构变化。结果显示,实验结束时两组小鼠的体重、胸腺系数、脾脏系数和BAT系数均未见统计学差异;与对照组相比,抗生素组小鼠BAT中单个细胞内的脂滴数量更多、体积更小,BAT的Ucp1、Prdm16、Fabp4、Pparg和Cebpa表达水平均显著升高,Tnf表达水平显著降低,而Il5、Il6、Il10的表达水平未见显著差异;qPCR和二代测序结果显示,与对照组相比,抗生素组小鼠粪便细菌的含量、多样性和均匀度显著下降,菌群结构出现剧烈改变,主要表现为厚壁菌门的相对丰度显著升高、拟杆菌门显著降低,且以鼠乳杆菌(Lactobacillus murinus)占绝对优势(59.9%)。本selleckchem研究表明新生小鼠使用抗生素可以在短时间内提高BAT的代谢水平和能量消耗、减少脂肪积累,推测可能与肠道菌群结构的改变以及炎症免疫信号的抑制有关,但仍需更多机制研究加以证明,停用抗生素后的长期健康效应值得进一步探索。

目的 探讨凝血4项指标及肿瘤标志物联合诊断乙型肝炎相关肝癌的效果。方法 选取2019年1月至2021年1月福建省肿瘤医院收治的40例乙型肝炎相关肝癌患者作为试验组，另选取同期40例乙型肝炎肝硬化患者作为对照组，均行凝血4项指标及肿瘤标志物检查，比较两组凝血4项指标及肿瘤标志物水平，并明确其诊断价selleckchem D-Lin-MC3-DMA值。结果 试验组活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)水平与对照组比较，差异无统计学意义(P>0.05);试验组凝血酶原时间(PT)高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);试验组甲胎蛋白(AFP)、岩藻糖苷酶(AFU)水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);绘制受试者工作特征(ROC)曲线，显示单项检测PT指标、肿瘤标志物检测及联合检测对乙型肝炎相关肝癌的曲线下面积(AUC)均>0.7,预测价值中等，其中联合检测的价值更为显著。结论 凝血4项指标及肿瘤标志物在诊断乙型肝炎相关肝癌方面均SCH727965供应商有一定的价值，联合检测对乙型肝炎相关肝癌患者的早sociology medical期诊断价值较高。

旨在研究猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)N蛋白的抗原性，为下一步诊断试剂盒的研发提供依据。试验通过RT-PCR的方法扩增PDCoV CH/GX/1468B/2017株完整的N基因并构建原核表达质粒pET32a-N,将pET32a-N转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中，经诱导表达获得重组N蛋白，纯化后经Western blot方法检测其反应原性，免疫昆明小鼠制备重组N蛋白多克隆抗体并进行效价测定(间接ELISA法)和特异性验证(间接免疫荧光法)。结果显示：重组N蛋白在IPTIDN-6556G终浓度为1.0 mmol/L,Diabetes genetics37℃诱导表达6 h的条件下可获得最高表达量，该重组蛋白主要以可溶selleckchem BMS-354825性蛋白的形式表达；Western blot结果显示，纯化后的重组N蛋白可以和PDCoV阳性猪血清发生特异性结合，具有良好的反应原性。制备的多克隆抗体的效价可达1∶64 000,间接免疫荧光法结果表明其能特异性识别和结合PDCoV,说明重组N蛋白具有较好免疫原性。提示：PDCoV N蛋白抗原性好，可作为诊断试剂盒的候选抗原。