MAPK信号通路

目的 建立超高效液相色谱-质谱联用(UFLC-MS/MS)法分析蜈蚣中3种酶解多肽成分TD1(LEEDLERSEERL)、TMedium cut-off membranesD2(EEKDKALQNAEGEVAAL)、TD3(MILPTGASSF),比较不同品种蜈蚣中肽类成分的差异，寻找蜈蚣特异性多肽，用于蜈蚣的鉴别。方法 3种肽类成分的UFLC-MS/MS法，色谱柱为XSelect HSS T_3(4.6 mm×150 mm, 3.5μm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液，梯度洗脱。采用三重四极杆质谱检测器，电喷雾离子化(ESI),正离子模式下多反应监测(MRM)进行信号采集。样品采用正交试验方法，对蛋白提selleckchem取方法进行优化，最终确定提取方法为蛋白裂解液超声处理60 min。得到的蜈蚣蛋白提取溶液经胃蛋白酶酶解并脱盐后，注入液质联用仪分析。测定了20批蜈蚣及8批其他动物药中3种肽类成分，并对结果进行比较。结果 在地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎中未检出TD2和TD3,TD1与TD2在少棘巨蜈蚣与哈氏蜈蚣、墨江蜈蚣中存在较大差异，TD3在少棘巨蜈蚣与黑头蜈蚣、Ferrostatin-1半抑制浓度多棘蜈蚣中有较大差异。结论 该方法可用于区分少棘巨蜈蚣与地龙、僵蚕、水蛭、土鳖虫和全蝎，同时通过比较3种肽段的差异，区分药典品种少棘巨蜈蚣和4种常见非药典品种蜈蚣，为蜈蚣的质量评价和基础研究提供参考。

固有免疫是机体抵抗病原体入侵的第一道防线,固有免疫通过模式识别受体(Pattern recognitionreceptors,PRRs)识别保守的病原体相关分子模式(Pathogen associated molecular patterns,PAMPs)来发挥功能。细菌脂多糖、脂多肽、鞭毛蛋白以及病毒核酸物质等抗原成分可以被Toll样受体(Toll-likereceptors,TLRs)识别,经过一系列信号转导,诱导炎性细胞因子以及Ⅰ型干扰素产生,激活强烈的免疫应答,从而清除入侵机体的病原微生物。IKK(IκB kinase)复合体是TLRs下游重要的接头蛋白,由催化亚基IKKα、IKKβ,以及调节亚基NEMO组成。在接收到上游活化信号后,IKK复合体被激活,进一步磷酸化核转录因子 κB(Nucleartranscription factor-κB,NF-κB)的抑制物IκB,IκB进而发生泛素化并通过蛋白酶体途径降解,释放NF-κB异源二聚体入核,介导炎性细胞因子的表达,最终清除病原体。但炎性细胞因子过度表达会造成组织器官的损伤,甚至诱发细胞因子风暴,危及生命。因此,炎性细胞因子的表达受到精密的调控。有文献报道,根据IKKβ NEMO结合结构域(NEMO binding domain,NBD)设计的多肽可以抑制IKKβ与NEMO的结合,从而抑制NF-κB的活化和炎性细胞因子的表达。后续的研究也进selleck激酶抑制剂一步证实NBD多肽在结肠炎、关节炎等动物模型中均发挥明显的抑炎功能,但靶向IKK复合体的其他肽类抑制剂报道较少。实验室前期成果显示,IκB激酶相互作用蛋白(IκB kinase interacting protein,IKIP)可以通过N端结构与NEMO竞争性结合IKKα/β从而抑制IKK复合体的形成,最终发挥抑制炎症反应的功能。本研究的主要目的是明确IKIP抑制炎症反应的功能域,并根据这段序列设计合成多肽。进一步阐明多肽在炎症反应中的功能和作用机制。最后将多肽应用于炎症动物模型以及类风湿关节炎中进一步明确多肽在体内的功能及临床应用价值。为了明确IKIP的抑炎功能域,我们构建了一系列鼠源IKIPN端截短体,实验结果显示 IKIPFL(full length,1-374)、IKIP(16-374)、IKIP(31-374)与 IKKβ有明显结合作用,并且可以显著抑制NF-Protein-based biorefineryκB启动子的活性以及IKKβ的磷酸化,而 IKIP(61-374)、IKIP(76-374)、IKIP(91-374)与 IKKβ 无结合作用并且没有明显的功能。以上结果说明IKIP 31-60氨基酸序列(amino acid,aa)是其抑制炎症反应的功能域。我们在IKIP 31-60 aa的基础上设计合成了两条多肽:F0(31-45 aa)和F1(46-60aa),并设计合成了阴性对照多肽:F2(61-75 aa)。我们在多肽N端连接TAT穿膜肽,并检测了多肽的细胞通透性和细胞毒性。实验结果显示多肽具有细胞通透性,同时对细胞的生存没有明显的影响,也不会导致细胞凋亡和坏死。接下来,我们对三条多肽的功能进行了验证。实验结果显示多肽F1可以明显抑制NF-κB启动子的活性以及IKKβ的磷酸化,而多肽F0和F2并没有明显的作用。同时多肽F1可以明显抑制配体刺激诱导的NF-κB信号通路活化以及TNF-α、IL-6、IL-1β等炎性细胞因子的表达;而作为阴性对照的多肽F2并没有明显的作用。以上结果说明多肽F1是发挥抑炎功能的IKIP活性多肽。进一步的机制研究显示,三条多肽中只有F1与IKKβ有明显的结合作用。并且多肽F1可以明显抑制IKKβ与NEMO的结合,从而抑制IKK复合体的形成。为了进一步研究多肽在动物体内的功能,我们构建了小鼠炎症模型。实验结果显示多肽F1在LPS诱导的小鼠脓毒血症模型中可以抑制血清中炎性细胞因子的表达,减轻肺组织的病理损伤,同MLN4924半抑制浓度时显著降低小鼠死亡率;在Zymosan诱导的小鼠急性关节炎模型中,多肽F1可以明显降低患肢踝关节的肿胀程度,抑制关节组织中炎性细胞因子的表达,减轻踝关节的病理损伤。为了进一步探索多肽F1的临床应用价值,我们获取了类风湿关节炎患者的滑膜组织,并分离了滑膜成纤维细胞。实验结果显示多肽F1可以明显抑制滑膜成纤维细胞中炎性细胞因子的过度表达。在本论文中,我们发现IKIP31-60 aa是其抑制炎症反应的功能域,根据这段序列设计合成的多肽F1(46-60 aa)可以与NEMO竞争性结合IKKβ,从而抑制NF-κB信号通路的活化以及炎性细胞因子的表达。同时多肽F1在LPS诱导的小鼠脓毒血症模型以及Zymosan诱导的小鼠急性关节炎模型中发挥保护作用,并且多肽F1也可以显著抑制类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞中炎性细胞因子的过度表达。我们的研究为临床治疗炎症性疾病提供了参考。创新性:1.本研究发现IKIP 31-60 aa是其抑制炎症反应的重要功能域,并且根据这段序列设计合成的多肽F1(46-60 aa)具有明显的抑炎功能。2.多肽F1是靶向IKK复合体的肽类抑制剂,可以通过与NEMO竞争性结合IKKβ,从而抑制IKK复合体的形成,最终抑制NF-κB的活化以及炎性细胞因子的表达。3.炎症性疾病是临床常见疾病,严重影响人类生命健康和生活质量。本研究发现多肽F1可以明显抑制炎症动物模型以及类风湿关节炎中的炎症反应,为临床治疗炎症性疾病提供了参考。

目的：研究在体外条确认细节件下多西环素（doxycycline,DOX）对前成骨细胞株MC3T3-E1成骨分化的影响及可能机制。方法：在成骨诱导剂体外诱导MC3T3-E1细胞株成骨分化条件下，茜素红染色检测成骨细胞分化；实时定量PCR检测DOX对MC3T3-E1细胞相关成骨基因OCN、Runx2的影响；用DOX、MEK抑制剂（U0126）单独或联合处理MC3T3-E1细胞后，Western blot检测N-cadherin、p-MEK及p-ERK等蛋白的表达。结果：在MC3T3-E1细胞株体外成骨诱导分化中，加入DOX可以增强茜素红染色阳性率。DOX上调MC3T3-E1细胞相关成骨基因OCN、Runx2的表达。DOX处理MC3T3-E1细胞后，其N-cadherin蛋白表达水平下降（P <0.05）,p-MEK和p-ERK蛋白的表达增加（P <0.05）。而MEK拮抗剂（U0126）则显著上调N-cadherin蛋白表达水平，同时降低p-MEK、p-ERK水平。用U012SAG半抑制浓度6联合DOX处理MC3T3-E1细胞后，DOX对N-cadherin、p-MEK和sustained virologic responsep-ERK蛋白水平的影响可被U0126拮抗。在MC3T3-E1细胞株体外成骨诱导分化中，同时存在DOX和U0126时，茜素红染色阳性率低于单独DOX组。结论：DOX可以促进MC3T3-E1细胞株的体外成骨分化；而DOX的这一效应可能是通过MEK-ERK信号通路参与完成的。

目的 探讨延龄草总皂苷(total saponins from Trillium tschonoskii maxim,TST)对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老大鼠认知功能及线粒体自噬的影响。方法 雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组(D-gal,皮下注射)、干预组(TST,灌胃给予低、中、高3个剂量),每组10只，连续给药6周。Morris水迷宫评价大鼠认知功能；HE、Nissl染色观VX-765察海马及Bucladesine采购皮质组织形态；免疫组织化学法检测Pink1、Parkin的定位表达；Western blot检测Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、p62、Beclin1的表达水平。结果 与正常对照组相比，D-gal模型组逃避潜伏期时间延长、穿越平台次数减少(P<0.05);大鼠海马组织内神经元数量明显减少；海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达减少；Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显下降，p62的表达明显升高(P<0.05)。与D-gAffinity biosensorsal模型组相比，TST各剂量组逃避潜伏期时间缩短、穿越平台次数增多、停留在平台所在象限时间增加(P<0.05);海马神经元数量明显增多；海马组织Pink1、Parkin阳性细胞表达增多；Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白的表达明显升高，p62的表达明显降低(P<0.05)。结论 TST具有明确的神经保护作用，对D-gal所致衰老大鼠的学习记忆降低具有改善作用，其机制可能与Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ及Beclin1蛋白表达升高、激活线粒体自噬有关。

细胞穿膜肽(CPPs)是一种能够直Nucleic Acid Modification接适配细胞膜表面分子并穿透细胞膜进入细胞的多肽。CPPs通常通过共价偶联的方式连接到纳米载体的表面,从而赋予载体穿透细胞膜的特性。然而CPPs与聚合物或者脂质的杂交使得材料的生物代谢过程极为复杂,远没有氨基酸本身简单明了,这就使得杂交材料具有一些系统性的器官毒性。基于此,本文设计并合成了一种仅有氨基酸构成的纳米载体,且该多肽同时具有自组装、载药和靶向的三个特征,避免了使用聚合物和脂质所带来的复杂性,不仅降低了成本,也提升了其生物安全性。本文提出的十八肽(peptide)序列为FFAARTMIWY(d-P)GAWYKRI。通过超声的辅助,它能够在水溶中自组装形成170 nm左右的纳米小球,在装载了si RNA和DOX后,它的形貌没有明显改变,粒径少许增加。PeptiPF-02341066使用方法de的净电荷为正,能装载带负电的RNA(1:0.046 w/w),且同时装载疏水性药物阿霉素(1:0.2 w/w)。细胞实验证明它能够通过小窝蛋白介导的胞吞、静电作用和PD-L1受体的介导来携带药物进入细胞。相比与商业化的转染试剂聚l-赖氨酸(PLL)和聚乙烯亚胺(PEI)而言,它具有更低的细胞毒性和更高的转染效率,仅转染30 min就能在Bemcentinib MW细胞内明显地观察到核酸携带的荧光信号。负载si RNA后,通过q-RTPCR和Western blot证实其能够诱导m RNA的降解和干扰Survivin蛋白的表达。共载DOX和si RNA能够诱导MDA-MB-231细胞的凋亡。体内实验证实它具有良好的生物相容性,共载si RNA和DOX能够显著抑制肿瘤的生长,降低肿瘤的肺转移,改善DOX诱导的心肌炎。

随着乳腺肿瘤整形与乳房重建在国内新的临床应用趋势,更鉴于新的循证医学数据不断累积,中国抗癌协会乳腺癌专业委员会召集外科、整形、放疗、内科、病理等多学科专家,在《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2018年版)》的基础上共同商讨制定了《乳腺肿瘤整形与乳房重建专家共识(2022年版)》,2022年版新增了腔镜乳房重建、胸肌前乳房重建及乳房重建的个案管理等内容,并将初版的保留乳头乳晕的全乳切除章节更名为保守性全乳切除,并做了大量内容补充及更新。共识也对胸肌前乳房重建、游离腹壁下动脉穿支皮瓣(deep inferior epigastriAutoimmune Addison’s diseasec artery perforator flap,DIEP)手术等临床热点进行了详尽AM-2282 IC50的阐述。相信本次更新会给各层级医院提www.selleck.cn/products/ch-223191高乳腺肿瘤整形及乳房重建临床水平,提升治疗规范化,优化治疗结局助力,最终提高患者满意度。

针对目前奶味香基成本高、蛋白源种类与含量不足、风味单一、产香周期长等缺点,本课题以大豆分离蛋白(SPI)部分替代稀奶油,以两种不同酶法与发酵法相结合,制备得到两款兼具浓厚发酵香气和干酪风味的新型奶味香基。通过分析两款香基的风味差异及原因,选定两步酶法结合发酵法为制备稀奶油-SPI香基的最佳方法;同时通过菌酶不同处理针对该香基的主要代谢物S63845和关键挥发性风味物质进行系统分析,探究菌、酶对香基风味形成的不同作用;最后将两步法获得的香基以不同浓度梯度加入面包中,探究其对面包品质的影响,以期为开发更具成本效益、健康益处和风味价值的奶味香基提供新的思路。分别以一步酶法结合发酵(同一阶段在稀奶油-SPI底物中同时加入乳酸菌、蛋白酶和脂肪酶)和两步酶法结合发酵(在稀奶油-SPI底物中先加入乳酸菌和蛋白酶,该阶段结束后再加入脂肪酶)制备得到两款稀奶油-SPI香基,对两款香基的风味差异及原因进行系统的研究。总体来说,两步酶法结合发酵法是制备新型稀奶油-SPI复合风味香基的最佳方法。两步酶法结合发酵能够更好地促进干酪乳杆菌(Lactobacillus casei LC1)的生长,p H值更低(5.21),Specialized Imaging Systems可滴定酸度更高(2.15(乳酸,%)),并拥有更高含量的乳酸(6.18 mg/g)、苹果酸(1.06 mg/gICI 46474)和丁二酸(5.05 mg/g),蛋白降解也更为完全,多肽和游离氨基酸得到积累,同时短链挥发性羧酸以及3-羟基-2-丁酮、苯甲醛、糠醛、δ-十二内酯等重要挥发性风味物质的含量也较高,香基也因此拥有更强的发酵香味和酸味属性,并获得更高的总体感官评价;而一步酶法结合发酵制备的香基中乙酸(1.59 mg/g)和柠檬酸(1.23 mg/g)含量更高,游离脂肪酸和中长链挥发性酸的含量也较高,这导致其刺激性酸败味更为明显。选定两步酶法结合发酵法为最佳方法,跳过该方法完整制备工艺中一个或多个过程来制备菌酶不同处理组,研究L.casei LC1、蛋白酶和脂肪酶对该法制备得到的香基中主要代谢物和挥发性风味物质的影响,以及对香基特征性风味形成的作用。L.casei LC1可以消耗代谢柠檬酸以及丝氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸和异亮氨酸,能够促进乳酸、乙酸、多肽、小肽和短链游离脂肪酸的积累;蛋白酶能够促进大分子量的肽以及少部分的多肽和小肽的生成,精氨酸、丙氨酸、缬氨酸、赖氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸的积累;脂肪酶能够促进游离脂肪酸的生成,特异性代谢消耗组氨酸、色氨酸;蛋白酶和L.casei LC1共同作用时能促进游离氨基酸的释放以及L.casei LC1代谢增殖,从而促进关键挥发性风味物质苯甲醛、乙酸、3-羟基-2-丁酮、2,3-丁二酮、糠醛和2-戊基呋喃的产生;而先用蛋白酶再用脂肪酶处理,有利于关键挥发性风味物质丁酸、己酸、辛酸、癸酸、9-癸烯酸、十二酸、辛酸乙酯和δ-十二内酯的积累,以及促进醛、甲基酮和醇代谢转化成关键酯类和挥发性酸。将两步酶法结合发酵制备的香基以及空白奶油以不同梯度加入面包中,研究香基和空白奶油对面包品质的影响。与空白奶油相比,较少含量的稀奶油-SPI香基就能显著改变面包中挥发物的组成比例,香基的最低添加量组(2%JP+L)能将挥发物中醇类、醛类、酸类、酮类、酯类、杂环类和其他类的比例由对照组的65.33%、18.20%、0.44%、5.87%、6.32%、2.94%、0.91%调整为50.76%、11.81%、12.73%、4.66%、16.66%、2.72%、0.66%,而空白奶油最高添加量组(8%C)仅将挥发物比例变为67.60%、13.94%、0.19%、8.07%、6.11%、3.22%、0.86%。稀奶油-SPI香基和空白奶油都能促进面包比容增大,硬度下降,以及酵母产气量的提高,并随着添加量的上升效果越发显著。其中,稀奶油-SPI香基的效果更为明显,香基的最高添加量组(8%JP+L)其面包比容和酵母产气量分别由对照组的3.52 m L/g和2075 m L提高至4.19 m L/g和2306 m L,而硬度由对照组的336 g降低至172 g。稀奶油-SPI香基和空白奶油对面包色泽皆无显著性影响,但都在一定程度上减弱面团持气性。随着添加量的提高,空白奶油面团的G’和G”均呈现出先上升后下降的趋势,tanδ变化不大;而稀奶油-SPI香基面团的G’、G”和tanδ则先上升后下降再上升,这可能是由于后者香基中的SPI和面筋蛋白建立起新的交联结构,改善面团流变性。相较于空白奶油,香基能够更为显著地改善面包品质。

目的：观Staurosporine溶解度察乳腺癌改良根治术后化疗患者发生心理失衡的影响因素。方法：选取300例乳腺癌改良根治术后化疗患者为研究对象，统计乳腺癌改良根治术后化疗患者发生心理失衡的情况，采用Logistic回归分析乳腺癌改良根治术后化疗患者发生心理失衡的影响因素。结果：300例乳腺癌改良根治术Bucladesine供应商后化疗患者发生心理失衡188例，占比62.67%；发生心理失衡者的年龄、家族史、婚姻状况、居住地、家庭人均月收入与未发生心理失衡者比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；发生心理失衡hepatic T lymphocytes者的高中及以下文化程度、偏低社会支持、有自我感受负担占比均高于未发生心理失衡者，差异有统计学意义（P<0.05）;Logistic回归分析结果显示，文化程度高中及以下、社会支持偏低、有自我感受负担均为影响乳腺癌改良根治术后化疗患者发生心理失衡的危险因素（OR>1,P<0.05）。结论：文化程度高中及以下、社会支持偏低、有自我感受负担均为影响乳腺癌改良根治术后化疗患者发生心理失衡的危险因素（OR>1,P<0.05）。

目的：探讨常规超声联合经皮超声造影（contrast-enhanced ultrasound,CEUS）对乳腺癌患者同侧前哨淋巴结（sentinel lymph node,SLN）转移的诊断价值。方法：随机选取2019年2月—2020年5月新疆生产建设兵团第六师总医院收治的70例乳腺癌患者，所有患者均接受常规超声与经皮超声造影检查，分析检查结果。结果：经皮超声造影诊断准确率为96.67%，显著高于常规超声诊断的77.78%(P <0.05)；常规超声诊断特异度、敏感度、阳性预测值和阴性预测值Antiobesity medications分别为79.25%、75.68%、71.79%、Erdafitinib配制82.35%，与经皮寻找更多超声造影诊断的96.23%、97.30%、94.74%、98.08%比较差异有统计学意义（P <0.05）。结论：乳腺癌患者同侧前哨淋巴结转移诊断过程中，结合常规超声与经皮超声造影检查方法，不仅能够显示前哨淋巴结状况和乳腺癌的大小、部位等，同时可以为疾病的诊治提供参考，值得临床采纳与推广。

胆管癌（CCA）是起源于胆道系统的恶性肿瘤，虽然手术治疗是CCA公认的根治手段，但由于胆道系统的特殊解剖特点MRTX849抑制剂及CCA的高侵袭性使得治疗效果并不理想。药Puerpal infection物治疗成为晚期CCA患者获得较好预后的选择，主要分为化学治疗、靶向治疗及免疫治疗。目前研究发现了成纤维细胞生长因子受体（FGFR）及异柠檬酸脱氢酶1 (IDH-1)两个重要的治疗靶点，由此衍生出的靶向治疗药物在临床试验中普遍展现了良好的效果。虽然CCA普遍表达PD-1/PD-L1，但对于免疫检查点抑制剂不敏感，通过联合使用其他免疫治疗药物可以提高治疗效果。与新兴的靶向治疗和免疫治疗相比，传NSC 127716研究购买统化学治疗在CCA治疗效果最为稳定，美国国立综合癌症网络指南建议顺铂+吉西他滨为晚期不可切除或有转移症状的CCA患者的一线化疗方案。这些药物的最新进展将会显著改善CCA患者的生存获益。