MAPK信号通路

目的 探讨雷帕霉素对慢性脑血流低灌注小鼠自噬机制的影响。方法 30只SPF级C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、构建双侧颈总动脉确认细节狭窄(BCAS)模型(模型组)、模型+治疗组(均n=10)。模型+治疗组小鼠予以雷帕霉素灌胃治疗。Morris水迷宫实验检测小鼠学习记忆情况；苏木精-伊红染色观察小鼠额叶皮质和海马组织的病理变化；TUNEL染色检测小鼠额叶皮质和海马组织神经元凋亡；Western blot检测额叶皮质和海马中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和自噬相关蛋白LC3、P62、Aβ_(1-42)、APP、BACE1蛋白的表达。结果 与假手术组比较，模型组小鼠认知损害加重、额叶皮质和海马神经元损伤、氧化应激水平提高、神经元凋亡率升高，Bcl-2蛋白下降，Bax、LC3-Ⅱ、P62、Aβ_(1-42)、APP和BACE1蛋白升高(均P<0.05)；与模型组比较，模型+治疗组小鼠认知能力提高，额叶皮质和海马神经元损伤减轻，氧化应激水平下降，神经Decitabine化学结构元凋亡率降低，Bcl-2蛋白、LC3-Ⅱ蛋白水平升高，Bax蛋白，P62、Aβ_(1-42)、APP和BACE1蛋白水平降低(均P<0.bioprosthetic mitral valve thrombosis05)。结论 雷帕霉素通过激活自噬改善慢性脑血流低灌注小鼠认知损害。

目的 研究木犀草素对人非小细胞肺癌A549细胞凋亡及自噬的影响。方法 使用不同浓度木犀草素分别干预A549细胞12、24、36 h, MTT法检测细胞活力以筛选合适的作用浓度和时间。12.5、25、50μmol/L木犀草素分别干预A549细胞24 h, Hoechst33258染色观察木犀草素对A549细胞凋亡的影响，Western blot检测caspase-9、caspase-3、Bax、Bcl-2、LC-3、PI3K、Akt和mTOR蛋白表达。A549细胞转染pEGFP-LC3质粒后，分别用12.5、25、50μmol/L木犀草素干预24 h,观察自噬斑点的形成。结果 木犀草素呈剂量和时间依赖性地降低A549neuromuscular medicine细胞活力，24、36 h的IC_(50)分别为29.88、22.41μmol/L。12.5、25、50μmol/L木犀草素剂量依赖性地促进A549细胞凋亡，促进cleaved-caspase-9、cleaved-caspase-3和Stem Cells & Wnt抑制剂Bax蛋白表达，抑制Bcl-2表达，促进自噬斑点的形成，同时可抑制PI3K、Akt和mTOR的磷Protein Tyrosine Kinase抑制剂酸化。结论 木犀草素可诱导A549细胞凋亡及自噬，其作用可能与抑制PI3K/Akt/mTOR通路有关。

目的 探究仙鹤草（APL）对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法 裸鼠皮下注射肝癌Hep G2细胞，建立裸鼠移植瘤模型；将裸鼠随机分为5组：对照组（Control）、仙鹤草低剂量组（APL 6g/kg）、仙鹤草中剂量组（APL 12g/kg）、仙鹤草高剂量组（APL 24BioBreeding (BB) diabetes-prone ratg/kg）和5-氟尿嘧啶组（5-FUNavitoclax说明书 20mg/kg）。30d后检测肿瘤重量；检测30d期间肿瘤体积变化；TUNEL检测肿瘤组织凋亡；Western blot检测Caspase-3、Bax、Bcl-2、LC3-I、LC3-II、Beclin1、p62蛋白表达水平；免疫组化染色检测Ki67、VEGF阳性细胞数。结果 与Control组比较，APL各剂量组和5-FU 20mg/kg组裸鼠肿瘤重量、体积显著降低，裸鼠肿瘤组织细胞凋亡率显著升高，裸鼠肿瘤组织细胞凋亡率显著升高，Bcl-2蛋白水平显著降低，LC3-II/LC3-I比值和Beclin1蛋白水平显著升高，p62蛋白水平显著降低，Ki67、VPuromycin使用方法EGF阳性细胞数显著降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论 仙鹤草抑制肝癌裸鼠移植瘤的生长，可能参与机制为诱导肿瘤细胞凋亡和自噬，抑制肿瘤细胞增殖。

目的 确定HIV-1 gp41 CHR肽CP621-652前7个氨基酸的作用以及CP621-652与NHR肽T21复Label-free immunosensor合物的结构取向，为下一步HIV gp41靶点的新型融合抑制剂改造提供线索。方法 合成7个丙氨酸（Ala）逐一替换CP621-652前7个氨基酸序列QIWNNRepSox分子量MT的突变体，测定其对HIV-1病毒的抑制活性，应用圆二色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳及凝胶排阻测定CP621-652及突变体与gp41 NHR肽T21的相互作用，合成N端带有半胱氨酸的CP621-652、C端带有半胱氨酸的N3-Methyladenine核磁HR肽T21及相应的同源二聚体，应用二硫键氧化折叠及平衡策略，分析CP621-652与T21复合物的结合取向。结果 CP621-652前7个氨基酸的Q~1、W~3、M~6、T~7被Ala替换后活性降低，圆二色谱、聚丙烯酰胺凝胶电泳及凝胶排阻色谱显示，CP621-652及突变体与gp41 NHR肽T21存在相互作用，形成螺旋复合物。N端带有半胱氨酸的CP621-652、C端带有半胱氨酸的NHR肽T21折叠后主要形成异源二聚体。交换平衡实验显示，异源二聚体比同源二聚体稳定。结论 Q~1、W~3、M~6、T~7是CP621-652的功能氨基酸，CP621-652与T21形成反平行螺旋结构。

目的:探讨a7胆碱能受体(a7nAChR)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)中的作用及兴奋a7nAChR减轻LPS诱导小鼠急性肺损伤的相关机制。方法:将20～75岁的男性ARDS患者分为吸烟组与非吸烟组，入院后24 h内检测血浆中IL-17、IL-6、TNF-α浓度。24只小鼠随机分为对照组、LPS组、LPS+a7nAChR激动剂组、LPS+a7nAChR抑制剂组，每组各6只。造模前1 h, LPS+a7nAChR激动剂、LPS+a7nHepatitis DAChR抑制剂组小鼠分别予以腹腔注射choline (10 mg/kg)、α-bungarotoxin (1μg/kg)。然后对照组通过气管导管滴注PBS溶液，其余3组小鼠更多气管导管内滴注LPS溶液建立小鼠ARDS模型。检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-17、IL-6、TNF-α水平。取左下肺组织行HE染色、肺损伤评分，右肺测肺组织湿/干比重，左上肺测RORγt蛋白及mRNA水平。结果:男性ARDS患者中，吸烟者外周血IL-17、IL-6、TNF-α水平低于非吸烟者(P<0.05)。a7nAChR激动剂降低小鼠肺损伤评分及肺组织湿/干比重(P<0.05),而a7nAChR抑制剂使其进一步升高(P<0.05)。肺损伤小鼠BALF中IL-17、IL-6、TNF-α水平较对照组升高(P<0.05),a7nAChR兴奋剂可使其降低(P<0.05),而a7nAChR抑制剂可使其进一步升高(P<0.05)。肺损伤小鼠肺组织RORγt蛋白及mRNA水平较对照组升高(P<0.05),a7nAChR兴奋剂可下调其表selleck产品达(P<0.05),而a7nAChR抑制剂可使其表达进一步上调(P<0.05)。结论:抑制a7nAChR可能通过在转录及翻译水平抑制RORγt表达减轻Th17细胞反应性反应，从而抑制炎症反应，减轻肺损伤。

目的 分析复方多粘菌素B软膏在烧伤重症监护室患者的应用情况，为烧伤治疗方案的选择提供参考。方法 选取自2015年1月至2019年12月收住北京积水潭医院烧伤科烧伤重症监护室的243例烧伤患者为研究对象。比较不同烧伤面积患者具体使用复方多粘菌素B的情况，比较使用和未使用复方多粘菌素B患者的肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）]及肾功能指标（尿素、肌酐），比较不同烧伤面积此网站患者使用和未使用复方多粘菌素B软膏的总治疗费用。结果 对243例患者的创面渗出液中的菌群进行分析发现，有172例患者创面有细菌检出，以铜绿假单胞菌检出为最多（27.91%,48/172），其次为鲍曼Hydrophobic fumed silica不动杆菌（14.53%,25/172），排名第三、四的分别是肺炎克雷伯菌（9.88%,17/172）和金黄色葡萄球菌（9.30%,16/172）。复方多粘菌素B软膏对绝大部分检出菌群敏感。单个烧伤患者住院期Tofacitinib间使用复方多粘菌素B软膏的最大量为492支，单次使用最大量为13支。243例患者中，219例使用了复方多粘菌素B软膏，24例患者未使用。使用与未使用复方多粘菌素B软膏患者的ALT、AST、尿素及肌酐水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。烧伤面积≤10%的患者使用复方多粘菌素B软膏组比未使用组的总治疗费用更低，前者日均治疗费用为后者的4%。结论 复方多粘菌素B软膏在烧伤治疗中的安全性高，对烧伤创面感染菌群敏感，可有效控制感染、促进创面恢复，特别是在小面积烧伤患者治疗中的局部使用，可大大降低治疗费用。

高血压是一种常见的慢性疾病,血管紧张素转换酶(Angiotensin Converting Enzyme,ACE)抑制剂可以起到一定预防和治疗高血压的作用。化学合成的ACE抑制剂容易对人体产生不良反应,而许多动植物蛋白来源多肽对ACE具有较好的抑制作用,且安全性高,现已成为研究热点。西藏林芝地区野生桃分布广泛,桃仁资源丰富。桃仁脱除油脂后所剩物质中含有50%以上的蛋白质。因此,研究桃仁多肽的ACE抑制活Emricasan性具有重要的现实意义。本课题以西藏野桃仁为原料,通过不同酶解工艺对桃仁中不同蛋白质组分进行酶解,比较所得酶解多肽的ACE抑制活性,并对具有较高ACE抑制活性的多肽进行分离纯化和结构鉴定,同时对其胃肠消化稳定性和产品应用进行研究。主要研究内容和结果如下:(1)脱脂桃仁提取分离获得清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,分别用风味蛋白酶、中性蛋白酶和碱性蛋白酶对其酶解,筛选ACE抑制活性最强多肽。结果表明,清蛋白用中性蛋白酶酶解4h时产物(AN4)、球蛋白用碱性蛋白酶酶解6h时产物(BA6)、谷蛋genetic transformation白用中性蛋白酶酶解6h时产物(CN6)的ACE抑制率最高,分别达到45%、58%和60%。AN4、BA6、CN6依次采用超滤和RP-HPLC分离纯化,发现BA6中的<1 kDa组分,且保留时间在14.2 min时组分(K2)对ACE的抑制能力最强,其IC50可达到0.78mg/ml。经过LC-MS鉴定发现,K2的主要成分是由Ala和His构成的二肽Alpelisib分子量(P1)。BIOPEP数据库检索发现P1为已知的ACE抑制肽。(2)AN4、BA6和CN6经过胃肠道消化后的ACE活性变化结果表明:与未消化相比,AN4、BA6和CN6经过模拟胃消化后的ACE抑制率均有显著增加(P<0.05),但经过模拟肠消化后的ACE抑制率却显著降低(P<0.05)。无论是在消化前,还是胃肠消化后,BA6和CN6的ACE抑制率均显著高于AN4(P<0.05),证明BA6和CN6具有更好的消化稳定性。AN4、BA6和CN6消化前后的结构表征表明,ACE抑制活性变化规律与其消化产物的荧光强弱、表面疏水性指数、二级结构含量、巯基和二硫键含量等的结构表征相符。(4)分别考察木糖醇、桃仁多肽、蜂蜜、柠檬酸和果胶等添加量对桃仁多肽口服液口感影响的基础上,采用Design Expert中的Box-Behnken对产品配方进行响应面优化。结果表明:口服液中添加4%的木糖醇,1.66%的桃仁多肽,3.07%的蜂蜜,0.16%的柠檬酸,0.61%的果胶,能获得酸甜适口,香味独特,颜色清亮的产品。同时,研究了不同巴氏杀菌条件对口服液ACE抑制活性的影响,实验证实:温度为85℃时杀菌25min,能保留较好的ACE抑制活性,同时又能杀灭其中的大肠菌群。

目的 探究下调miR-221诱导人胃癌细胞凋亡的机制，及其对胃癌细胞化疗敏感性的影响。方法 实时荧光定量PCR检测正常胃黏膜上皮细胞NGEC与4种胃癌细胞系(SGC-7901、BGC-823、MGC803、MKN-28)中miR-221表达水平;将SGC-7901细胞随机分为5组:空白对照组(常规培养)、Anti-miR-NC组(转染inhibitor control)、Anti-miR-221组(转染miR-221 inhibitor)、AntimiR-221Molecular phylogenetics+siRNA-NC组(转染miR-221 inhibitor后再转染siRNA阴性对照)、Anti-miR-221+siRNA-Parkin组(转染miR-221 inhibitor后再转染siRNA-Parkin),Lipofectamine 2000脂质体介导法转染SGC-7901细胞。MTT法检测细胞活性; JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;selleck化学 Western blot检测自噬相关蛋白的表达水平; Hoechst 33342染色和AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况。使用不同浓度奥沙利铂(2.5、5、10、20、40、80μg/m L)处理各组SGC-7901细胞48 h,MTT法检测细胞增殖抑制率，计算IC50。结果 4种胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MGC803、MKN-28的miR-221相对表达水平较正常胃黏膜上皮细胞NGEC升高(P <0.05)。与空白对照组比较，Anti-miR-221组SGC-7901细胞在转染24、48、72 h时活性下降，细胞线粒体膜电位下降，Pink1、Parkin蛋白表达水平升高，P62蛋白表达水平下降，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调，细胞核浓缩并有碎裂的蓝色凋亡体，细胞凋亡率升高，经过奥沙利铂处理后细胞增殖抑制率升高，IC50下降，差异均具有统计学意义(P <0.05)。与Anti-miR-221组比较，Anti-miR-221+siRNA-Parkin组SGC-7901细胞在转染48 h和72 h时活性升高，细胞线粒体膜电位升高，Pink1、Parkin蛋白表达水平下降，P62蛋白表达水平升高，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值下调，细胞核浓缩明显减少，细胞凋亡率降低，经过奥沙利铂处理后细胞增殖抑制率下降，IC50升高，差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论 下调miR-221表达可通过调节Parkin介导的线粒体Vorinostat体内实验剂量自噬途径诱导胃癌细胞发生凋亡，增加胃癌细胞对奥沙利铂的化疗敏感性。

目的 使用癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库探讨跨膜蛋白65(TMEM65)在乳腺癌中的表达及意义。方法 使用Wilcoxon秩和检验方法对比TMEM65基因在乳腺癌和正常组织之间的表达差异，使用logistic回归分析评估乳腺癌患者TMEM65表达与临床特征之间的相关性，并使用Kaplan-Meier和Cox回归方法检测了TMEM65表达水平对selleck生存率的影响，最后根据TMEM65表达及临床特征构建列线图并进行验证。结果 乳腺癌患者的TMEM65表达水平高于正常组织，差异有统计学HCV hepatitis C virus意义（P <0.05）。TMEM65的表达与年龄、T分期、雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progesterone receptor,selleckchemPR）和HER2表达显著相关，差异有统计学意义（P <0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，与低表达TMEM65相比，TMEM65高表达的乳腺癌患者预后较差，差异有统计学意义（P <0.001）。多因素Cox回归分析显示，TMEM65高表达是乳腺癌患者总生存（overall survival,OS）率、无进展间隔期（progression free interval,PFI）、疾病特异性生存（disease-specific survival,DSS）的独立危险因素，差异有统计学意义（P <0.05）。本研究基于TMEM65基因表达和乳腺癌临床特征构建了列线图，使用C指数和校准曲线说明了该列线图模型预测效能很好。结论 TMEM65高表达可能是乳腺癌患者预后不良的独立预测因素。

利用光催化剂中产生的光生电荷活化过一硫酸盐(PMS)用于抗生素等污染物的去除，由于结合了光催化反应和PMS活化的独特优势，近年来引起了广泛的关注。然而，对于单一光催化剂，严重的光生电子空穴对的复合限制了其活化PMS的效率。于此，本文构建了CuWO_(4-x)/Bi_(12)O_(17)Cl_(2)光催化剂，通过梯型异质结促进电荷分离，实现高效PMS活化。通过X射线衍射仪技术(XRD)、高分辨透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和紫外-可见漫反射光谱(UV-Vis)等分析手段对所制备催化剂的形貌和结构进行了详细的表征。另外，通过在可见光照射下降解四环素(TC)，系统地研究了CuWO_(4-x)/Bi_(12)O_(17)Cl_(2)的催化活性。结果发现，与CuWO_(4-x)和Bi_(12)O寻找更多_(17)Cl_(2)相比，CuWO_(4-x)/Bi_(12)O_(17)Cl_(2)表现出了明显增强的四环素降解活性：在加入微量的PMS及可见光照射30分钟后，对四环素的降解效率达到了94.74%。X射线光电子能谱以及捕获实验结果表明，CuWO_(4-x)/Bgenetic approachesi_(12)O_(17)Cl_(2)复合材料遵循梯型异质结电荷迁移机制。得益于梯型异质结的构建，CuWO_(4-x)/Bi_(12)OLY2835219抑制剂_(17)Cl_(2)光催化剂中电子和空穴的传输与分离效率得到显著提高，同时还能保持复合材料最佳的氧化还原能力。此外，对比反应前后样品的X射线光电子能谱结果，发现铜离子和氧空位也参与PMS活化，这将促进反应中活性自由基的产生，从而进一步提高了TC的降解效率。本研究为合成可高效活化PMS和降解抗生素的梯型异质结光催化剂提供了新的思路。