MAPK信号通路

研究背景与目的:乳腺癌在女性肿瘤中发病率第一,病死率位居第二,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)属于乳腺癌众多分型中难治的类型,TNBC因缺乏雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,Her2),所以对经典的内分泌治疗和Her2靶向药物治疗无效,一旦发生远处转移、化疗药耐药或抵抗,可LY2157299化学结构供选择的治疗方案十分有限,中位生存期不足18个月,严重威胁患者生命。虽然近年来免疫检查点抑制剂的治疗,使得部分肿瘤患者从中获益,但根据多中心随机对照试验显示,TNBC患者对PD-1抗体的治疗效果难以令人满意,所以目前临床中TNBC仍以化疗和手术治疗为主。近年来,随着单细胞测序技术的开展及针对肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)的深入研究,人们逐渐发现TNBC难治除了与肿瘤细胞自身特性相关之外,还与TME中复杂细胞组分相互串扰有关。TNBC的TME细胞组分包括:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)、癌症相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAFs)、内皮细胞和构成肿瘤脉管系统的周细胞、炎症细胞及骨髓衍生细胞等,其中TAMs和CAFs是TME的主要组成。TAMs通过刺激血管生成、释放促炎细胞因子、抑制细胞毒性T细胞反应及重塑细胞外基质(extracellular matrix,ECM)参与化疗抵抗和癌症的发展。CAFs在TME中可产生胶原,构建起物理屏障,保护肿瘤细胞免受药物杀伤。α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)是CAFs活化标志物之一,在乳腺癌中α-SMA阳性细胞在肿瘤基质区域的高表达,往往提示与预后不良相关。令人意外的是,在胰腺导管癌模型中,靶向α-SMA~+CAFs表现出免疫抑制性、肿瘤呈低分化性和小鼠生存期缩短。因此充分的了解肿瘤细胞和相关基质之间的双向通讯,才能有望提升肿瘤治疗敏感性和改善患者预后。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是由SPP1基因编码的一种多功能磷酸糖蛋白,可由T细胞、B细胞、NK细胞、髓细胞、成骨细胞、骨细胞、上皮细胞和神经元等多种细胞产生,广泛参与人体生理与病理过程。OPN在多种癌症中均有过度表达,包括肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌和肝癌。既往研究表明,OPN可通过与整合素和/或CD44受体结合后,具有维持肿瘤细胞干性、招募巨噬细胞浸润、重编程正常成纤维细胞向CAFs分化和促进肿瘤远处转移等作用。但在免疫系统健全的TNBC模型中,肿瘤细胞来源OPN对CAFs的调控,是否完全依赖于整合素或CD44?OPN除了与成纤维细胞的直接作用,是否还通过其他信号通路或介体参与CAFs的活化?靶向肿瘤细胞OPN是否能够缓解肿瘤基质纤维化程度,同时增加肿瘤对化疗药的敏感性?这些问题尚不十分清楚,还需进一步探索。因此本研究旨在通过构建敲除OPN的TNBC细胞株,探索肿瘤细胞来源OPN与肿瘤基质纤维化间的调控机制,并通过体内实验验证OPN与CAFs的串扰对化疗药抵抗的影响,从而为未来靶向肿瘤基质纤维化的新药开发或治疗方案提供策略支持。研究方法:1、根据肿瘤纤维化程度的差异,选取四种小鼠肿瘤细胞系进行转录组测序分析,结合Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)数据库中人类乳腺癌数据结果,明确OPN与肿瘤纤维化间的相关性。2、利用CRISPR-Cas9系统构建稳定敲除OPN的小鼠TNBC细胞系,并通过体外实验观察敲除OPN对4T1肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。3、利用慢病毒构建稳定过表达OPN的小鼠黑色素细胞瘤B16-F0细胞株,并通过体外实验评价过表达OPN对B16-F0细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。4、建立小鼠4T1和B16-F0模型,通过流式细胞术及免疫组化染色检测,观察敲除或过表达肿瘤细胞OPN对TAMs比例和肿瘤基质纤维化的影响,同时分析荷瘤小鼠脾脏巨噬细胞及外周血中单核细胞比例。5、通过巨噬细胞耗竭动物模型,利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光及免疫组化染色等检测方法,探索肿瘤细胞来源OPN和TAMs对肿瘤基质纤维化的调控关系。6、利用流式分选仪分选出小鼠4T1-WT肿瘤中TAMs(CD45~+CD11b~+F4/80~+)和CAFs(CD45~-CD90.2~+),探索TAMs对CAFs活化及迁移的作用机制,并通过蛋白质免疫印迹实验进行验证,最后通过体外凋亡实验和体内实验观察4T1-WT及4T1-SPP1-KO肿瘤对多西他赛的敏感性。研究结SBE-β-CD体外果:1、在4种小鼠肿瘤中,4T1细胞OPN表达量最高且肿瘤基质纤维化程度最重,与人TNBC样本中OPN与CAFs生物标志物(ACTA2、S100A4和FAP)表达趋势吻合,证明可用4T1模型研究OPN与肿瘤基质纤维化间的关系。2、利用CRISPR-Cas9成功构建4T1-SPP1-KO细胞株,敲除OPN不影响4T1细胞体外增殖速度和总凋亡比例,但4T1-SPP1-KO细胞迁移能力较4T1-WT细胞减低。3、利用慢病毒构建稳定过表达OPN的B16-SPP1-OE细胞株,过表达OPN未增加B16-F0细胞的体外增殖、总凋亡比例及迁移能力。4、在4T1模型中,4T1-SPP1-KO相对4T1-WT肿瘤中TAMs比例明显减少,同时肿瘤基质纤维化程度得到显著缓解。在B16-F0模型中,B16-SPP1-OE较B16-EV肿瘤内TAMs比例增加,且肿瘤基质纤维化程度加重。5、利用Clodronate-Liposomes清除小鼠体内巨噬细胞后,可显著抑制4T1-WT体内肿瘤生长速度、降低TAMs比例,并缓解肿瘤基质纤维化程度,但体内巨噬细胞耗竭,并不能进一步减低4T1-SPP1-KO荷瘤小鼠肿瘤内TAMs比例及肿瘤基质纤维化程度,说明肿瘤细胞来源OPNhepatocyte size是4T1肿瘤促进TAMs浸润的主要因素,且OPN对肿瘤基质纤维化的调控是通过TAMs介导的间接作用。6、通过迁移实验发现TAMs可通过CCL5-CCR5信号轴招募CAFs迁移,通过蛋白质免疫印迹明确TAMs通过TGF-β1/c-Rel信号刺激CAFs中α-SMA、成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)和平足蛋白(PDPN)的表达上调;体外CAFs和肿瘤细胞共培养后对多西他赛诱导的凋亡存在抵抗,体内实验发现敲除肿瘤细胞OPN可提高4T1肿瘤对多西他赛的敏感性。研究结论:本研究通过构建4T1-SPP1-KO细胞株发现,敲除肿瘤细胞OPN可显著减慢肿瘤生长速度、降低TAMs比例及缓解肿瘤纤维化程度,并通过耗竭荷瘤小鼠巨噬细胞的体内实验证实,肿瘤细胞来源OPN是促进TAMs浸润的主要因素,TAMs可通过CCL5-CCR5信号轴招募CAFs迁移,同时TAMs在OPN的作用下通过TGF-β1/c-Rel信号通路刺激CAFs过表达α-SMA、FSP1和PDPN,继而促进4T1肿瘤对多西他赛产生凋亡抵抗。综上,在TME中这些复杂的信号串扰共同造成TNBC病情进展。

目的：探究血清半乳糖凝集素3(galeImmune Tolerancectin 3,Gal-3)水平与狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)疾病活动和病理活动指数的相关性。方法：收集大连大学附属中山医院收治的83例LN患者，其中活动型LN患者42例，病情稳定型41例，另40例健康受试者作为健康对照。收集受试者空腹外周血，检测血清Gal-3、抗双链DNA(double-stranded DNA,ds-DNA)抗体、补体3(complement 3,C3)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleJNJ-42756493ukin 1β,IL-1β)水平，分析血清Gal-3水平分别与抗ds-DNA抗体、C3、活动指数(activity index,AI)及血清TNF-α、IL-1β水平的相关性；取肾活检组织，采用蛋白质印迹法和免疫组织化学法检测各组受试者肾组织Gal-3表达情况；免疫荧光检测肾组织Gal-3与肾组织巨噬细胞分布情况。结果：相比于健康受试者，LN患者血清Gal-3、TNF-α及IL-1β水平显著升高，且活动型LN患者上述因子水平显著高于病情稳定点击此处型LN患者(P<0.05)；血清Gal-3水平分别与AI、抗ds-DNA抗体及TNF-α、IL-1β水平呈正相关，与补体C3呈负相关；活动型LN患者肾脏组织中Gal-3表达水平显著高于病情稳定型LN患者。结论：活动型LN患者血清Gal-3与LN病理活动指数呈正相关，Gal-3可能通过调控炎症反应介导LN发展。

目的 比较乳腺改良根治术和保乳手术治疗早期乳腺癌的效果。方法 选取2018年6月至2020年7月光山县人民医院收治的120例早期乳腺癌患者的临床资料，采用随机数字表法分为对照组与研究组，每组60例。对照组采用乳腺Lorlatinib molecular weight改良根治术治疗，研究组采用保乳手术治疗。对比两组围术期情况、视觉模拟评分法(VAS)评分、并发症发生率、乳房美学满意度和预后情况。结果 与对照组比较，研究组手术时间短、切口长度短，术后出血量和总引流量少，且研究组住院时间短(P <0.05)。术后12 h、24 h、48 h，研究组VAS评分比对照组低(P <0.05)。研究组并发症发生率[5.00%(3/60)]比对照组[18.33%(11/60)]低(P <0.05)。研究组乳房美学满意度[94.83%(55/58)]比对照组[83.05%(49/59)]高(P <0.05)。研究组远处转移率[13.79%(8/58)]、局部复发率[8.62%(5/58)]与对照Endocrinology & Hormones抑制剂组[8.47%(5/59)、5.08%(3/59)]比较，差异未见统计学意义(P> 0.05)。结论 与乳non-alcoholic steatohepatitis腺改良根治术相比，早期乳腺癌患者采用保乳手术治疗，不仅可改善手术情况，还能减轻疼痛，减少术后并发症，满足患者乳房美学需求，且预后效果良好。

应用网络药理学和分子对接研究方法探讨昆明山海棠治疗糖尿病肾病的作用机制。利用TCSMP数据库搜集昆明山海棠的有效成分和靶点，通过GeneCards、GAD、OMIM、TTD等数据库查找糖尿病肾病相关的靶点，采PD0325901小鼠用STRING平台构建PPI网络，应用Cytoscape软件对昆明山海棠治疗糖尿病肾病的作用靶点与有效成分构建可视化“药物-活性成分-靶点-通路-疾病”网络模型，预测昆明山海棠治疗糖尿病肾病的潜在靶标，通过DAVID数据库对关键靶点进行GO及KEGG分析，利用Autodock软件对网络药理学结果进行初步验证。从数据库中筛选出昆明山海棠有效成分15个，相对应的有效靶点123个；筛选出糖尿病肾病相关靶点11 119个。昆明山海genetic drift棠有效成分作用靶点与糖尿病肾病靶点存在65个共有靶点分子，GO分析结果表明，昆明山海棠主要通过RNA聚合酶Ⅱ转录因子、类固醇激素受体、雄激素受体等生物学功能特性治疗DKD。KEGG富集分析结果显示，昆明山海棠的药理作用与mTOR信号通路、癌症通路、神经活性配体受体相互作用、叶酸一碳库、抗叶酸抗性、化学致癌-受体激活等信号通路等有关。分子对接结果表明，昆明山海棠中关键性化合物(如山海棠二萜内酯A、雷公藤红素等)的潜在靶标可能是SOAT1、DHFR等。其中SOAT1与山海棠二萜内酯A具有最高的结合能，可能在治疗中起重要作用。昆明山海棠可能通过Enasidenib核磁调控SOAT1、DHFR靶点直接或间接参与调节细胞免疫、炎症、细胞凋亡等作用机制，对糖尿病肾病有潜在的治疗作用。

目的：探讨新媒体多形式健康教育对持续动态心电图监测老年冠心病患者的影响。方法：选取2019年1月1日～2020年1月1日收治的140例老年冠心病患者，按照随机数字表法分为对照组和研究组各70例，对照组给予常规健康教育，研究组在常规基础上给予新媒体多形式健康教育；比较两组心电图伪差、皮肤不适反应、心理状况[采用汉密顿焦虑量表(HAMA)、抑郁Torin 1自评量表(SDS)]、生活质量[采用生活质量综合评定量表(GQOLI-74)]。结果：研究组心电图Z-IETD-FMK体内实验剂量伪差发生率、皮肤不适反应发生率均低于对照组(P<0.05);干预后，研究组HAMA、SDS评分均低于对照组(P<0.01);研究组GQOLI-74评分高于Bioaccessibility test对照组(P<0.01)。结论：将新媒体多形式健康教育应用于持续动态心电图监测老年冠心病患者中，可减少心电图伪差、皮肤不适反应发生，调节其负性情绪，从而促进生活质量提高。

为深入探究鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesHepatic angiosarcomavirus 2, CyHV-2)在感染过程中的生物功能,构建了ORF66截短基因的原核表达质粒pET28a-tORF66,转化至BL21感受态细胞后利用IPTG(Isopropyl-beta-Dthiogalactopyranoside) 16℃诱导蛋白表达,经尿素溶解透析获得溶解的重组蛋白后免疫6周龄小鼠,制备鼠抗tORF66多克隆抗体。将纯化后重组蛋白进行噬菌体展示以此来筛选互作蛋白。经Western Blot检测显示,抗体能够识别感染鲫鳍条细胞系GICF细胞中的鲤疱PCI-32765疹病毒Ⅱ型,selleck Elexacaftor效价较高,特异性较好。噬菌体淘选结果通过生物信息学分析显示,得到一条出现频次最高的多肽N’-LHLHQNRMSLSR-C’。该多肽与金鱼基因组中的3个基因有较高的同源性,推断其可能与rORF66重组蛋白相互作用。这将为深入探究ORF66在CyHV-2病毒感染过程中的生物学功能、开发抗CyHV-2病毒新药物及寻找潜在的药物靶点提供新依据。

目的 探讨乳腺癌肿瘤全域的表观扩散系数(ADCGefitinib-based PROTAC 3研究购买)信号强度直方图与病理分期的关系及对复发的预测价值。方法 回顾性收集2016年6月-2020年7月于我院接受治疗的90例浸润性导管癌患者的临床、病理及影像学资料，患者均接受MRI检查，应用西门子相应工作站重建ADC图，提取3D感兴趣区(ROI)ADC最小值(ADC_(min))、ADC中位数(ADC_(median))、ADC平均值(ADCmean)、ADC众数(ADCmode)、ADC标准差(ADCstd)、ADC最大值(ADCmax)、第10百分位数(ADC10%)、第25百分位数(ADC25%)、第50百分位数(ADC50%)、第75百分位数(ADC75%)、第90百分位数(ADC90%)、Enasidenib溶解度偏度系数及峰度系数等参数，根据肿瘤病理类型及术后复发情况进行分组，对比组间差异，通过绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估ADC直方图参数的诊断和预测效能。结果 乳腺癌T_1～T_2期组ADC25%、ADC50%、ADC95%均显著低于T_3～T_4期组，而峰度系数则显著高于T_3～T_4期组，差异具有统计学意义(P<0.05)。ADC直方图中，ADC95%鉴别乳腺癌不同病理分期诊断效能最佳，以1.363×10~(-3)mm~2/s作为最佳诊断阈值时，其曲线下面积为0.869，对应的Youden指数、敏感度和特异度Biomedical image processing分别为0.741、88.50%和85.60%。与非复发组比较，复发乳腺癌患者ADC10%、ADC25%、ADC90%及峰度系数均显著降低，差异具有统计学意义(P<0.05)，且均对乳腺癌患者复发具有一定的预测价值，相比于单一预测指标，联合预测具有更高的准确性。结论 ADC25%、ADC50%、ADC95%及峰度系数均对乳腺癌病理分期有一定的诊断价值，ADC10%、ADC25%、ADC90%及峰度系数在预测乳腺癌患者复发方面具有一定的应用价值。

目medical terminologies的：利用网络药理学方法探讨半夏厚朴汤治疗咳嗽变异性哮喘（cough variant asthma,CVA）的作用机制。方法：通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)筛选出半夏厚朴汤中各味中药的活性成分及药物靶点；通过GeneCards数据库获取CVA相关基因，将药物靶点与疾病靶点取交集得到半夏厚朴汤治疗CVA的潜在作用靶点；利用Cytoscape软件建立药物-活性成分-CVA靶点网络图；利用STRING数据库和Ceralasertib说明书Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络(protein-protein interactions,PPI)；利用DAVID数据库对半夏厚朴汤治疗CVA的作用靶点进行基因本体论功能富集分析（gene ontology,GO）和KEGG富集分析（kyoDolutegravir分子式to encyclopedia of genes and genomes,KEGG）。结果：共筛选得到44个活性成分，97个半夏厚朴汤治疗CVA的潜在作用靶点，富集分析得到GO功能条目141个，KEGG通路97条。结论：半夏厚朴汤可通过多成分、多靶点治疗CVA。

为探究青蒿素工业提取废弃物丙酮层及其主要成分猫眼草黄素的抗肿瘤活性及对抗肿瘤药的增敏作用，采用细胞增殖与活性检测法(CCK-8),考察丙酮层及猫眼草黄素与青蒿素、青蒿琥酯、阳性抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶及甲氨蝶呤复配前后，对结肠癌细胞LS174T、肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549增殖的影响；采用Compusyn 1.0专业软件分析处理，得到各药物抑制肿瘤细胞增殖的效应值(fraction affected, Fa)与联合指数(combination index, CI)关系。www.selleck.cn/products/mln-4924结果表明：猫眼草黄素和丙酮层对LS174T、HepG2细胞均具有较强的抗肿瘤活性，且猫眼草黄素和丙酮层显著提高5-氟GDC-0068浓度尿嘧啶、甲氨蝶呤、青蒿素和青蒿琥酯抗肿瘤活性；在LS174T细胞模型上，猫眼草黄素-青蒿素、丙酮层-青蒿素、丙酮层-5-氟尿嘧啶、丙酮层-青蒿琥酯复配均存在协同作用；在HepG2细胞模型上，猫眼草黄素-青蒿素、猫眼草黄素-青蒿琥酯、丙酮层-5-氟尿嘧啶、丙酮层-青蒿素、丙酮层-青蒿琥酯复配亦存在增敏作用。综合而言，工业废弃物丙酮层及其主要成分猫眼草黄素，不仅其二者本身具有较好的抗肿瘤活性，可为临床上textual research on materiamedica提供潜在的天然小分子抗肿瘤部位或单体化合物，还可作为一种化疗增敏剂，增强潜在抗肿瘤药青蒿素衍生物及临床常用抗肿瘤药5-氟尿嘧啶的化疗敏感性，在为临床提供广谱抗肿瘤药和化疗增敏剂的同时，实现工业废弃物的循环利用。

目的：探讨鹿龙再生汤对肺癌裸鼠化疗骨髓抑制期骨髓的保护作用。方法：采用人肺鳞癌细胞株Eca109进行肺癌肿瘤造模，再腹腔注射环磷酰胺(CTX)进行肿瘤化疗骨髓移植造模。造模成功后分为4组。空白对照组10只，模型组、西药组、中药组各15只。西药组予利可君片灌胃，重组人粒细胞刺激因子一次性皮下注射；中药组予鹿龙再生汤灌胃，空白对照组和模型组不予药物干预。观察各组的白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HB)水平此网站和骨髓有核细胞数(BMNC);骨髓活检观察骨髓增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡，免疫组织化学技术检测细胞凋亡因子FAS抗体表达水平。结果：模型组、西药组、中药组WBC、PLT、RBC、HB水平及BMNC与空Protein Gel Electrophoresis白对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05);西药组、中药组给药3、5 d WBC、PLT、RBC水平及BMNC与模型组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。中药组较模型组显示出较好的骨髓增殖效果；中药组骨髓单个核细胞生存比例及FAS抗体表达水平较模型组升高。结论：鹿龙再生汤对肺癌裸鼠化疗骨髓抑制期骨髓粒细胞系统、巨噬细胞系统、红细胞系统抑制均有促进细胞增殖的作用，其作用机制可E7080体内实验剂量能与调控细胞凋亡因子FAS抗体表达有关。