MAPK信号通路

研究背景传统产前遗传学诊断获取胎儿DNA的侵入性方法存在一定的感染或流产的风险。经宫颈获取的胎盘脱落的滋养层细胞具有完整的胎儿基因组信息,此方法不受孕妇年龄、孕周、产次、体重等因素的影响,从而成为近年来无创产前检测的研究热点。已有研究利用经宫颈获取的细胞(transcervical cell,TCC)样本中分离的滋养层细胞检测常见的胎儿染色体非整倍体、通过测序分析诊断脊髓性肌萎缩和囊性纤维化等单基因病。但DecitabineTCC样本中存在大量的母源细胞背景,对TCC样本中滋养层细胞进行有效分离是进行PORCN抑制剂下游检测分析的重要前提,但目前仍缺乏快速、有效且重复性高的方法。近年来单基因病无创产前检测技术有了飞速发展,对于TCC样本中分离的滋养层细胞进行单基因遗传病检测的研究尚属于探索阶段,仍有许多难点。研究目的本研究的主要目的有以下三个方面:(1)建立快速有效、重复性好的TCC样本滋养层细胞富集方法,为下游检测分析提供足量的细胞;(2)建立对富集分离的脱落滋养层细胞的胎儿源性鉴定方法,为下游检测分析奠定重要基础;(3)以富集分离的脱落滋养层细胞为材料,探索基于胎儿源性细胞的单基因遗传病无创产前检测的可行性。方法(1)查阅既往文献报道的女性生殖道细胞表面标记物,通过流式染色鉴定其在宫颈上皮细胞系、JEG3细胞系及TCC样本的表达情况,筛选母源细胞特异标志物。(2)通过RNA-seq技术对宫颈上皮细胞系、JEG3细胞系进行高通量测序分析,以转录组学测序分析结果为基础,综合差异表达基因组间差异倍数、具有的功能,我们按照细胞膜表达、表达丰度相对高、有商品化抗体的原则,初步筛选有潜力的宫颈上皮细胞标志物,经流式染色筛选特异标志物。(3)基于筛选的母源细胞特异标志物及绒毛外滋养层细胞(extravillous trophoblast,EVT)特异标志物HLA-G建立基于负筛+正筛的单克隆抗体的磁激活细胞分选法(combining negative and positive selection,CNPS),利用JEG3细胞系+TCT掺入样本初步鉴定CNPS的富集效率。(4)收集3例正常单胎妊娠男胎孕妇的TCC样本,经CNPS富集后的候选EVT细胞经流式单细胞分选,然后将分选得到的所有单细胞进行全基因组扩增(whole genome amplification,WGA),对WGA产物进行低覆盖度测序分析,根据测序结果鉴定男性胎儿源性细胞。(5)将低覆盖度测序分析为高质量的胎儿源性EVT细胞及脐血gDNA进行深度全基因组测序(whole genome sequencing,WGS),评估其在全基因组水平上的覆盖度、单核苷酸变异(single nucleotide variant,SNV)、插入缺失(insertion and deletion,InDel)变异的检Trace biological evidence测能力,探讨其单基因遗传病无创产前检测的可能性。结果(1)流式结果显示白细胞表面共同抗原CD45在宫颈上皮细胞系、JEG3细胞系表面的表达为0.01%、0.0%,在TCC样本中的表达为13.1%。而Syndecan-1、ER、PR在HcerEpic宫颈上皮细胞系、JEG3细胞系均有表达。因此纳入CD45作为TCC样本中白细胞阴性筛选的标志物。(2)基于转录组学结果共筛选到7556个基因在宫颈上皮细胞系和JEG3细胞系之间呈现差异性表达,其中有3757个基因显著上调表达和3799个基因显著下调表达。按照细胞膜表达、表达丰度相对高、有商品化抗体的原则,综合差异表达基因具有的功能,初步筛选出了 CD44、CD227、CD82、CD9、CD49c、CD58、HLA-A共7个有潜力的宫颈上皮细胞标志物。经流式鉴定CD44、CD227在宫颈上皮细胞系及TCC样本中表达明显升高,在JEG3细胞系中无表达或表达很低,符合我们阴性选择母源宫颈上皮细胞的要求。(3)制备细胞比例为0.1%的JEG3细胞+TCT掺入样本,利用负筛+正筛的单克隆抗体的磁珠分选法可将JEG3细胞的比例提高至8.2%,明显高于单纯用耦联有HLA-G抗体阳性选择的磁珠富集效率(0.3%)。(4)本研究中3例样本均为单胎妊娠男胎,我们利用GM12878女性细胞系与GM50166男性细胞系的WGA产物进行低覆盖度测序,根据低覆盖度测序分析结果设置RsrPKMy的阈值来区分性别差异。当RsrPKMy值>10且覆盖度＞30%时我们可以将候选EVT细胞鉴定为男性胎儿源性,男胎鉴定符合率达100%。(5)我们将低覆盖度测序分析unique map ratio>30%且覆盖度>30%的男性胎儿源性细胞定义为高质量的细胞,3例样本分别筛选出7个、7个、6个数据质量较高的细胞用于后续WGS。研究发现EVT细胞WGA-WGS覆盖度最高达为94.15%,3例样本的单细胞在各条染色体上reads的分布情况与对应的脐血gDNA WGS测序结果相比较显示出相似的分布趋势,而且与脐血gDNA在全基因组水平上对SNVs、InDels的检测能力相似,表明经TCC分离的EVT细胞尽可能的复原了胎儿基因组信息。结论我们初步建立的CNPS富集方法可为下游检测提供足量的EVT细胞,基于RsrPKMy的阈值鉴定男性胎儿源性细胞的符合率可达100%。通过对分离的高质量EVT细胞WGA扩增产物进行深度测序分析,其基因组相对完整且覆盖度高,与脐血gDNA在全基因组水平上对SNVs、InDels的检测能力相似,初步表明TCC样本中分离的EVT细胞对单基因疾病的无创产前检测有潜在的临床应用价值。

骨髓抑制主要是由化学药物产生的一种造血功能毒性,与血细胞生成功能障碍有关,通常出现在化疗之后,是具有细胞毒性的化疗药物不可避免的不良反应之一。当前癌症发病率很高,化疗作为恶性肿瘤的首要治疗方式,具有很多无法避免的不良反应。骨髓抑制属于较为严重的毒性反应,其主要症状为全身血细胞的减少,其中包括白细胞(White blood cell,WBC)、红细胞(Red blood cell,RBC)和血小板。骨髓抑制的产生是由骨髓中前体血细胞受到损伤,其活性被抑制而导致的。骨髓中干细胞通过持续分化来保持血细胞的动态平衡,如果其受到抑制将无法维持此平衡,破坏造血稳态;还会对免疫功能造成损伤,导致免疫抑制,使机体抗感染能力降低。骨髓抑制不仅减缓化疗的进程,对癌症治疗效果也产生较大影响,严重时还会引起各种并发症,对患者的生命造成威胁。目前骨髓抑制的治疗方法主要是药物治疗、成分输血及造血干细胞移植。药物治疗一般使用集落刺激因子、白细胞介素(Interleukin,IL)、促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO)及促血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)等。但以上方法存在局限性,都存在一些不可避免的不良反应,还有因费用高而导致很多患者无法承担等问题。临床上需要价格适当、能有效缓解骨髓抑制且不良反应较轻的药物,为寻找这种药物,我们对水解蛋白注射液(Protein hydrolysate injection,PH)进行了研究。PH是一种水解蛋白和山梨醇的无菌溶液,主要成分是氨基酸和多肽genetic recombination,分子量分布在185.0-622.0 g/mol。PH在临床上主要用来治疗手术或其他原因引起的严重创伤、大面积烧伤造成的严重氨基酸缺乏症和各种疾病引发的低蛋白血症等,属于营养药物。本文主要对PH是否能作为抗肿瘤辅助药物缓解化疗导致的造血功能障碍进行了探究。本文通过K562细胞和环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)诱导的造血功能障碍小鼠模型研究了PH的促造血功能。首先采用腹腔注射CTX建立造血功能障碍模型,PH给药后根据小鼠体重及脏器指数、外周血检测、流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)、苏木精-伊红AZD9291供应商(Hematoxylin-Eosin,H&E)染色、免疫组织化学染色法(Immunohistochemistry,IHC)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)及Western Blot(WB)的结果分析PH对小鼠骨髓造血功能的改善作用。用巨噬细胞集落刺激因子(Macrophage colony stimulating factor,M-CSF)si RNA(Small interfering RNA)转染K562细胞,PH给药处理后,利用WB观察PH对K562细胞中造血相关蛋白表达的影响。在造血功能障碍小鼠中,PH缓解了小鼠体重减轻的现象,上调了骨髓中造血干/祖细胞(Hematopoietic stem and progenitor cells,HSPCs)、B淋巴细胞、巨噬细胞及粒细胞(Granulocytes,GRA)的数量,恢复了外周血细胞数量,恢复了造血功能障碍小鼠脾脏、胸骨及股骨髁的组织结构,调节了小鼠血清、脾脏、股骨髁和胸骨中M-CSF、IL-2及几种造血相关因子的水平。在K562细胞中,PH能上调细胞中M-CSF、磷酸化(P)-核糖体蛋白S6激酶(Ribosomal protein s6kinases,RSK)1-p90、P-细胞外调节蛋白激酶(Extracellular regulated pwww.selleck.cn/products/gefitinib-based-protac-3rotein kinases,ERK)1/2和c-Myc的表达;用si RNA抑制细胞中M-CSF的表达,PH引起的以上几种蛋白表达上调也被抑制。综上,PH能够缓解由CTX引起的各种造血功能相关生理指标异常。PH可以通过调节M-CSF的表达从而改变其他相关指标,结果表明了PH在治疗化疗引起的造血功能障碍中能起到一定的作用,并且其促造血功能与M-CSF相关,这能为日后研究及开发骨髓抑制的治疗药物提供实验基础。

目的 研究乳腺癌组织中程序性死亡受体配体-1(PD-L1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、胰岛素样生长因子Ⅱm RNA结合蛋白3(IMP3)表达水平与患者病理分期、组织学分级及预后的关系。方法 选取2016年7月-2021年7月天津市西青医院收治的60例乳腺癌患者为研究对象，对其术后病理组织行免疫组化检测，观察组织中PD-L1、MMP-9、IMP3的表达情况，并分析其与病理分期、组织学分级及预后的关系。结果Bone morphogenetic protein 三阴性乳腺癌患者PD-L1、MMP-9、IMP3阳性率高于非三阴性乳腺癌（P<0.05）；不同病理分期的患者PD-L1、MMP-9、IMP3阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.05），其阳性表达率由高至低依次为Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅱ期>Ⅰ期；不同组织学分级患者的PD-L1、MMP-9、IMP3阳性表达率比较，差异有统计学意义（P<0.05），其阳性表达率由高至低依次为3级>2级>1级；PD-L1、MMP-9、IMP3阳性患者的乳腺癌预后指数selleck合成（BCPI）评分高于阴性患者（P<0.05）;PD-L1、MMP-9、IMP3阳性表达与病理分期、组织学分级及BCPI评分均呈正相关（P<0.05）。结论 PD-L1、MMP-GW4869纯度9、IMP3在三阴性乳腺癌组织中呈高表达，其阳性表达与患者病理分期、组织学分级呈正相关，对患者预后生存具有一定预测价值。

背景:缺血后处理可缓解心肌缺血再灌注损伤,但是其具体机制尚不清楚。目的:探讨lncRNA MALAT1在缺血后处理所引起衰老心肌自噬水平降低中的作用。方法:(1)27只22-24月龄SD大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组和缺血后处理组,每组9只,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化;(2)体外使用8 mg/mL D-半乳糖诱导大鼠心肌(H9C2)细胞9 d后,分为正常氧组、缺氧复氧组和缺氧后处理组。Western blot检测衰老心肌组织及衰老心肌细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达;采用qRT-PCR检测衰老心肌组织和衰老心肌细胞中MALAT1相对表达;转染自噬双标腺病毒(RFP-GFP-LC3)观察衰老心肌细胞自噬流的变化;衰老心肌细胞转染MALAT1干扰片段和过表达质粒,Western blot检测各组细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ和p62蛋白的表达。结果与结论:(1)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组心肌组织结构基本清晰,细胞核完整,心肌组织间蓝色胶原纤维沉积减少;(2)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低且p62表达增高(P <0.05);(3)与缺氧复氧组比较,缺氧后处理组LCAlpelisib细胞培养3Ⅱ/Ⅰ表达降低(P <0.01)且p62表达增加(P <0.05),细胞内自噬体和自噬溶酶体数量均减AG-221少(P <0.01);(4)与缺血再灌注组比较,缺血后处理组衰老心肌组织的MALAT1表达降低(P <0.01);与缺氧复氧组比较,缺氧后处理组衰老心肌细胞的MALAT1表达降低(P <0.01);(5)衰老心肌细胞infections: pneumonia转染MALAT1干扰片段和过表达质粒后,与缺氧复氧+si-NC组比较,缺氧复氧+si-MALAT1组LC3Ⅱ/Ⅰ表达降低且p62表达增加(P <0.01);与缺氧后处理+ad-NC组比较,缺氧后处理+ad-MALAT1组LC3Ⅱ/Ⅰ表达增加且p62表达降低(P <0.01);(6)结果表明:lncRNA MALAT1介导的自噬水平降低是衰老大鼠心肌缺血后处理发挥保护作用的重要机制。

目的：基于miR-199a/NF-κB信号通路探讨益气活血方(YQHX)抑制异位子宫内膜干细JNJ-42756493配制胞(Endometrial Stromal Cells, ESCs)侵袭黏附的分子机制。方法：将25只雌性SD大鼠随机分为YQHX低、中、高剂量组，孕三烯酮组，生理盐水组，手术建立大鼠子宫内膜异位症模型，给药4周后制备含药血清。根据ESCs中miR-199a含量，挑选最佳YQHX实验血清。随后另将ESCs分为生理盐水组，YQHX组，YQHX+miR199a抑制剂组。通过CCK-8法测定细胞活力；Transwell检测细胞侵袭；qPCR法检测侵袭黏附相关基因表达；免疫印迹法检测IKKβ/p-IκBα/NF-κB P65蛋白表达。结果：选出YQHX高剂量组作为最佳含药血清；对比生理盐水组，YQHX组ESCs活性明显下降(P<0.01),而与YQHX组对比，YQHX+miR-1immune regulation99a抑制剂组ESCs活性明显上升(P<0.01);与生理盐水组对比，YQHX组通过调控侵袭黏附相关基因抑制ESCs进展(P<0.01),而与YQHX组对比，YQHX+miR-199a组抑制侵袭黏附能力明显下降(P<0.05);对比生理盐水组，YQHX组能够有效抑制IKKβ/p-IκBα/NF-κB P65蛋白表达(P<0.05),而与YQHX组对比，YQHX+miR-199a抑制剂组的NF-κB通路抑制作用Y-27632体外明显降低(P<0.05)。结论：益气活血方可能通过调控miR-199a/NF-κB轴抑制子宫内膜异位症的侵袭与黏附。

<正>近几年，器官移植学与肿瘤学在临床实践中不断交汇与融合，并催生了移植肿瘤学概念的确立与衍生~([1-5])。肝移植治疗肝细胞肝癌的成功实践与核心问题是移植肿瘤学的内在动力或原因。其成功实践，促使肝移植治疗各种难治性肝脏恶性肿瘤的移植肿瘤学技术改进。而核心问题——肿瘤复发，促使免疫抑制背景下肿瘤演进机制的移植肿瘤学的学术深化。实践证实，physical and rehabilitation medicine肝移植是治愈肝细胞癌的主要手段，肿瘤复发是影响肝癌肝移植远期疗效的首要原FG-4592化学结构因~([6-7])。探寻肿瘤复发高危因素预设肝移植遴选标准是当前改善肝癌BMN 673研究购买肝移植远期疗效的被动性策略，探索基于复发机制的有效干预措施是提升远期疗效的主动性目标。肝癌肝移植术后肿瘤复发缘于肿瘤学与非肿瘤学双元化成因，而调控可调变性成因无疑是减少减缓复发的基本方略~([8])。既往研究证实，以钙调磷酸酶抑制剂（calcineurin inhibitor,CNI）为基础的免疫抑制治疗可以促进移植受者的肿瘤复发或演进。

钙作为人体最丰富的矿物质元素,对维持骨骼结构和生理功能起着十分重要的作用。缺钙与许多疾病的发生有关,例如骨质疏松、动脉高血压、肾结石等。因此,研究能够被有效吸收的钙营养强化药物和食品引起学者们的广泛关注。近年来,肽钙螯合物由于其独特的螯合系统和转运机制,被证明更容易被肠道吸收利用,从而提高钙的生物利用度。鹿茸作为哺乳动物唯一可再生的器官,其生长速度十分迅速更多达到1.7cm/day,但其根部由于骨化严重未被充分利用,研究表明鹿茸根部无机元素、氨基酸和蛋白质的含量十分丰富,因此,鹿茸根部骨化组织被认为是良好的钙螯合肽来源。本研究以鹿茸根部骨化组织为原料,选取中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶制备钙螯合肽,以钙螯合率和水解度为指标,筛选最适蛋白酶;并采用酸溶法提取骨钙,选取苹果酸、柠檬酸和混合酸(苹果酸与柠檬酸1:1)制备骨钙,以骨钙含量为指标,筛选出最适酸,进一步通过单因素试验优化多肽酶解工艺及骨钙提取工艺,试验结果表明,多肽酶解的最佳条件为选用风味蛋白酶酶解,酶用量为7000U/g,底物浓度为10%,p H值为8.5,温度为50℃,酶解时间5h;骨钙提取的最佳条件为选用苹果酸提取,酸用量为10%,提取温度为50℃,提取时间1h。利用人肠道上皮细胞检测不同浓度的肽对细胞活力的影响,评价多肽促进钙转运的效果,试验结果表明,在1000μg/m L时,细胞活力为1.29±0.02;与空白对照组(Ca Cl_2)相比,骨钙的钙转运量达到Ca Cl_2的近2倍,说明鹿茸根部骨化组织能够作为一种新的钙源;与骨钙组相比,多肽的加入能够明显促进骨钙的转运(P<0.05)。为进一步分离钙螯合肽中的特异性功能肽并解析肽-钙的结合机制,本研究通过羟基磷灰石层析色谱、凝胶过滤色谱和CL 318952 MW反相高效液相色谱分离纯化,LC-MS/MS鉴定肽序列,利用傅里叶变换红外光谱、紫外可见分光光谱、X-射线衍射图谱及分子动力学模拟的方法进一步解析其螯合机制。结果表明,分离后得到的肽序列为TKLGTQLQL、LETVILGLLKT和KMVFLMDLLK,其钙螯合能力分别为87.68±2.86%、80.72±0.93%和67.97±0.98%。红外光谱、紫外光谱及X-射线衍射结果显示肽与钙结合位点可能涉及肽段侧链的羧基氧和氨基氮,分子动力模拟揭示了钙离子更倾向于与带负电荷的亮氨酸或苏氨酸的羧酸基团形成配合物。综上,本研究建立了鹿茸根部骨化组织多肽酶解工艺和骨钙提取工艺,在细胞水平验证了肽促进钙转运的效率,并通过层析色谱方法分离具有特异性钙亲和力的肽,其中TKLGTQLQL和LETVILGLLKT的钙螯合能力达到87.68±2.86%,80.72±0.93%。通过表征方法解析肽-钙螯合机制,推动了肽钙螯合物的研究进展,同时也证明鹿茸根部骨化组织可以作为肽钙螯合物的一个十分有forward genetic screen前景的来源,为其在功能性食品中的应用提供理论依据,该研究为提高鹿茸根部骨化组织的利用价值提供一种新的思路。

抗生素与消毒剂普遍存在于水环境中，极易影响生物生存。该文以抗生素硫酸巴龙霉素(PAR)和 2 种消毒剂次氯酸钙(CAL)与邻苯二甲醛(OPA)为目标污染物，运用时间毒性微板分析法(t-MTA)系统测定 3 种污染物及其混合物对淡水发光菌青海湖菌Q67的毒性，应用浓度加和(CA)与绝对残差(dCA)2种模型对毒性相互作用进行定性分析和定量表征。结果表明：Weibull函数对3种污染物及其混合物对Q67的毒性数据拟Conus medullaris合效此网站果理想(R>0.9,RMSBelnacasan供应商E<0.1)，且3种污染物对Q67的抑制率均具有浓度依赖性和时间依赖性；通过半数浓度效应(EC_(50))的负对数(pEC_(50))值评判 3 种污染物的毒性大小顺序：PAR(pEC_(50)=5.75)>OPA(pEC_(50)=3.61)>CAL(pEC_(50)=3.08),CAL和OPA具有明显急性毒性，而PAR无明显急性毒性；除二元混合体系中少部分射线呈部分加和作用，其余二元和三元混合射线均呈现出时间依赖性拮抗作用；依据d CA值热图，二元和三元混合体系的拮抗强度均受组分、暴露时间和混合物浓度比的影响，在二元混合体系中，CAL-PAR-R5射线在暴露时间为12 h的拮抗作用最明显；在三元混合体系中，CAL-OPA-PAR-U5射线在暴露时间为12 h时的拮抗作用最明显。

目的 探讨乳腺癌术后放疗患者应用早期肢体功能训练的临床效果。方法 60例乳Cell Cycle抑制剂腺癌术后放疗患者,随机分为对照组和试验组,各30例。对照组采取常规康复方法 ,试验组在常规康复基础上采取早期肢体功能训练。比较两组患者焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评分及生活质量评分。结果 试验组患者SAS评分(40.50±2.21)分、SDS评分(42.96±2.16)JQ1分均低于对照组的(52.80±2.18)、(51.71±2.19)分,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组患者生理功能、心理功能、躯体疼痛、社会功能、情绪功能评分分别为(25.10±2.31)、(32.41±3.01)、(37.31±4.00)、(36.22±3.12)、(38.31±2.69)分,均高于对照组的(20.14±2.20)、(29.41effective medium approximation±3.12)、(24.01±3.14)、(30.01±3.15)、(34.01±2.14)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 对乳腺癌术后放疗患者采取早期肢体功能训练,可有效改善患者心理状态,明显提升生活质量,值得推广。

目的 系统评价中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征。方法 计算机检索中国知网、万方、中国维普、中国生物医学文献服务系统等数据库，搜Clostridioides difficile infection (CDI)集关于中国狂犬病暴露人群的流行病学与临床防治特征的横断面研究，检索时限为2011年1月—2020年12月。由2位研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后，采用R软件进行Meta分析。结果 共纳入42个研究，包括2 032 341例狂犬病暴露患者。Meta分析结果：狂犬病暴露患者24 h内完成就诊和主动免疫率为87%[95%CI（83%,90%）]；狂犬KPT-330病暴露后规范化处置率为72%[95%CI（58%,86%）]；Ⅲ级暴露患者被动免疫制剂使用率为36%[95%CI（29%,44%）]；致伤动物疫苗接种率为Gefitinib-based PROTAC 318%[95%CI（10%,27%）]。结论 中国狂犬病暴露人群呈逐年上升趋势，以接种狂犬病疫苗为主要干预方式的主动免疫发挥了重要作用，同时加强规范化处置、抗体检测和致伤动物的疫苗接种率至关重要。受纳入研究数量和质量限制，本研究结果尚需高质量的研究数据进一步佐证。