MAPK信号通路

抗生素滥用导致的细菌耐药性已成为全球范围内严重的生态问题,寻找有效的抗生素替代品迫在眉睫。乳铁蛋白肽(LFcinB,FKCRR WQWRM KKLGA PSITC VRRAF)是由牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLF)经消化酶水解产生的一类具有广谱抑菌活性的两亲性阳离子短肽,具有杀菌快速、不易产生抗药性、热稳定性及水溶性好等优点。本文以LFcinB为模板,以提高抗菌肽活性及稳定性为目标,借助生物信息学工具,以提高其电荷量、疏水性为原则,设计出新型高抗菌活性的衍生肽LFcinB-L1(LFcinB-L1,WKWRR WQWRW KLXH254体外KLGA PSITC VRRAF)。利用毕赤酵母GS115分泌性表达衍生肽LFcinB-L1,对发酵液进行LY294002分离纯化后检测衍生肽LFcinB-L1的体内外抑菌活性,并初步探究其抑菌机制。本课题主要研究内容和结果如下:(1)本文引入色氨酸(Trp)对LFcinB不同位点的氨基酸进行替换得到了5条衍生肽序列。利用蛋白分析工具对母肽及其衍生肽的理化参数、不同形式二级结构占比及分布和空间结构进行了模拟与分析;使用抗菌肽预测工具CAMP对衍生肽进行了抗菌活性预测,表明了衍生肽的设计在理论上的合理性。一系列生物信息学工具显示,衍生肽LFcinB-L1综合平分最高,其疏水性残基的比例提高到56%,电荷数为+8,具有与母肽相近的二级结构及空间结构,因此,本文选择衍生肽LFcinB-L1合成基因并构建表达载体。(2)使用Snapgene软件数据库中毕赤酵母密码子优化表对衍生肽LFcinB-L1基因的密码子进行优化,使其适应于酵母GS115菌株表达。利用T4-DNA连接酶将经人工优化且成功合成的LFcinB-L1基因片段与线性化的p PIC9K载体连接成为分泌型表达重组载体p PIC9K-LFcinB-L1。基因测序结果表明长度为75 bp的LFcinB-L1基因成功克隆至质粒p PIC9K,重组载体构建成功。(3)利用限制性内切酶Sac I-HF对重组载体p PIC9K-LFcinB-L1单酶切,使其线性化,然后转化至酵母GS115宿主菌,使用甲醇进行诱导发酵,分泌性表达出衍生肽LFcinB-L1。探究和优化发酵条件,得其最适发酵条件为诱导时间:72 h,甲醇浓度:2%。使用琼脂板扩散法对比分析衍生肽LFcinB-L1与母肽LFcinB的抗菌活性,结果显示LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抗菌活性比母肽LFcinB高约2倍。(4)使用400 m L发酵上清液制备的冻干粉质量为8.59 g。使用福林酚法检测冻干粉中衍生肽含量,测得多肽在冻干粉中含量占比约为37.19%。(5)检测衍生肽LFcinB-L1对不同菌种的抑菌作用,结果表明LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌(G~+)、大肠杆菌(G~-)和枯草芽孢杆菌(G~+)均具有良好的抑菌效果。(6)利用Ecc15感染模式生物黑腹果蝇构建果蝇结肠炎模型,该果蝇模型肠道屏障功能受损、肠道缩短、寿命缩短,肠道内ROS升高,抗氧化相关基因的m RNA水平和抗氧化相关蛋白酶活性升高。在食物中添加衍生肽LFcinB-L1及母肽LFcinB,能减少果蝇结肠炎模型体内载菌量、降低细菌活力,降低过量的ROS,回调果蝇结肠炎模型体内抗氧化相关蛋白酶活性,进而修复肠道屏障功能、维持果蝇肠道形态,延长受感染果蝇的寿命,并且衍生肽LFcinB-L1在体内表现出比LFcinB更好的抗感染活性。(7)初步探究衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抑菌机制,其最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC)分别为2 mg/m L和5 mg/m L。检测衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的细胞表面疏水性、培养液中胞外碱性磷酸酶活性、β-D-半乳糖苷酶活性和核酸分子的影响。实验结果表明,LFcinB-L1降低菌体细胞表面疏水性,增加细胞壁和细胞膜的通透性,破坏菌体细胞膜的完整性,导致胞内的β-D-半乳糖苷酶及核酸大分子物质的泄漏;此外,衍生肽LFcinB-L1不影响金黄色葡萄球菌基因组稳定性,但会导致胞内蛋白含量显著降低,且出现部分蛋白的缺失,并且,衍生肽LFcinB-L1对金黄色葡萄球菌的抑菌效果显著强于母肽。综low-density bioinks上,本文以LFcinB为模板,设计改造出衍生肽LFcinB-L1,在酵母中分泌性表达并纯化,该衍生肽在体外可抑制革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌生长,且抑菌活性比母肽高两倍以上;在肠道内可抑制病原菌生长,从而减轻由ECC15感染的果蝇结肠炎模型的一系列疾病表型。此外,探究其对金黄色葡萄球菌的抑菌机制表明该衍生肽通过破坏细胞膜及抑制蛋白表达抑制细菌生长。本研究设计、改造并获得具有高抗菌活性的抗菌肽,优化发酵条件及多肽纯化条件,并初步探究其抗菌机制,为开发高产、高效并且作用机制明确的新型抗菌肽提供理论依据,对将来人类的卫生健康和畜牧行业的稳定发展具有重要的应用指导意义。

目selleck HPLC的 观察乳康饮对乳腺癌化疗患者αβT、γδT细胞和生活质量的影响，探讨中药调控细胞免疫提高生活质量的作用。方法 选取2019年1月—2019年12月期间山东第一医科大学第二附属医院乳腺外科收治的乳腺癌化疗患者128例，抽签法随机分为观察组86例，对照组42例，所有患者采用AC-T方案化疗8个周期。观察组化疗同步给予乳康饮冲服，1剂/d,连服10 d。检测化疗前、后外周血αβT、γδT细胞，Karnofsky评分及PSQI指数的变化。结果 两组患者化疗前后αβT、γδT细胞均有不同程度的改变，但观察组化疗前后比较，差异无统计学意义(P>0.05),对照组化疗后CD3~+、CD4~+、γδT细胞较化疗前下降，差异有统计学意义(P<0.05);化疗后对照组CD3~+、γδT细胞较观察组下降，差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后两组患者karnofasky(卡式，KPS)评分及匹兹堡睡眠质量指数(Pittsbuigh Sleep Quality Indes, PSQI)的7个selleck HPLC维度化疗前后均出现变化，观察组化疗后PSQI的睡眠质量、睡眠时间、睡眠障碍3个维度评分较治疗前升高，差异有统计学意义(P<0.05);对照组化疗后睡眠质量、睡眠时间、入睡时间、睡眠效率、催眠药物、睡眠障碍、日间功能7个维度评分较治疗前升高，差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);化疗后对照组与观察组比较，睡眠时间、入睡时间、睡眠效率、催眠药物、睡眠障碍5个维度的评分升高，差异有统计学意义medical region(P<0.01),睡眠质量、日间功能2个维度的评分升高，但差异无统计学意义(P>0.05)。观察组化疗前后KPS评分比较，差异无统计学意义(P>0.05),对照组化疗后KPS评分较化疗前下降，差异有统计学意义(P<0.01),对照组化疗后KPS评分较观察组下降，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 乳康饮显著拮抗化疗对乳腺癌患者部分αβT细胞和γδΤ细胞的损害，改善患者体质和睡眠，提高患者的生活质量。

本文以蛋壳膜为研究对象，采用挤压膨化协同酶解工艺制备壳膜多肽。以总氮回收率、D-葡萄糖醛酸提取量及抗氧化性为指标，确定最佳工艺条件为：挤压膨化温度140℃，螺杆转速100 r/min，水分含量20%，酶解时间6 h，加酶selleck GW4869量12000 U/g，温度55℃。在该条件下总氮回收率达60.8%,D-葡萄糖醛酸提取量达12.4 mg/g，壳膜多肽的ABTS自由基清除率为29.46%(0.1 mg/mL),OH自由基清除率为26.58%(5 mg/mL),Fe~(2+)螯合能力为50.25%(0.4 mg/mL)，细胞抗氧化活性达65%(10μg/mL)。相对分子质量分布结果表明壳膜多肽中主要成分为低聚肽（252～2435 Da），占81.8%。氨基酸组成分析结果表明壳膜肽中Asp和Glu含量较高，与抗氧化selleck HPLC活性有关的氨基酸含量为44.70 g/100 g蛋白。因此，蛋壳膜多肽有潜genetic structure力作为天然抗氧化剂应用于食品、保健品或化妆品领域。

目的阐明目前已知抗氧化活性最强大的药食同源天然产物之一的番茄红素对皮肤癌的化学预防作用及其作用机制。方法建立二甲苯并蒽(DMBA)及12-O-十四烷基-佛波酯-13-乙酸酯(TPA)化学诱导皮肤癌小鼠模型,体内检测番茄红素对皮肤Infected wounds癌发生发展的作用。综合利用药效团模型、分子对接模型、网络拓扑学分析、基因富集分析、基因芯片数据分析、蛋白质间相互作用分析等生物信息学手段,分析番茄红素预防皮肤癌发生发展的关键靶标,挖掘潜在的分子机制。在上皮细胞模型JB6P+细胞里,通过实时荧光定量PCR、Western印迹、免疫组化和免疫荧光等方法,体外检测番茄红素对Nrf2信号通路的影响,进行药效学评价。并利用RNA干扰技术,对Nrf2和p62进行敲减,验证其在番茄红素干预皮肤癌病变过程中的关键作用。结果每天外用涂抹番茄红素8μmol显著降低DMBA/TPA诱变皮肤癌小鼠模型的发生率及肿瘤的体积。其作用机制是通过上调自噬蛋白p62,诱导KeaY-27632p1降解,激活转录因子Nrf2,促进下游抗氧化酶系统SOD,CAT,GPx和GR的表达,从而干预DMBA/TPA对上皮细胞氧化应激失衡造成的增殖。结论番茄红素在体内、体外对皮肤肿瘤发生发展的促进阶段有显著的化学预防ABT-199抑制剂效应。

壳聚糖是一种天然、无毒且具有可生物降解及优异成膜性的碱性多糖,lower respiratory infection作为新的可食用包装材料在食品工业中具有广阔的发展前景。但单一壳聚糖膜存在阻湿性差、透气性小、机械性能弱等不足,难以满足采后新鲜果蔬保鲜的综合需求。板栗果实具有独特的风味和营养价值,但板栗含水量高、呼吸作用旺盛,在贮藏过程中易出现失水、腐烂等品质劣变现象。因此本文根据板栗的贮藏特性,以水蒸气透过率和气体透过率为核心指标,并结合机械性能指标的测定,通过添加不同类型的天然产物筛选具有阻湿、透气性能的壳聚糖复合膜。在此基础上,添加天然抗菌物质,制备同时具有更多阻湿、透气性能和抗菌活性的多功能壳聚糖复合膜;进一步评价多功能壳聚糖复合膜对板栗的防腐保鲜效果。主要结果如下:(1)阻湿、透气壳聚糖膜的制备。将不同浓度的壳聚糖溶液涂膜板栗,以失重率、腐烂率为考察对象,筛选出壳聚糖浓度为1.75%时对板栗的防腐保鲜效果最佳。进一步筛选了30余种不同类型的物质,通过研究其对1.75%浓度的壳聚糖膜水蒸气透过率和气体透过率的影响,发现肉桂醛可显著降低1.75%壳聚糖膜的水蒸气透过率,并在一定程度上提高1.75%壳聚糖膜的氧气和二氧化碳透过率;进一步研究发现,在肉桂醛-1.75%壳聚糖复合膜中添加松香可进一步提高复合膜的氧气和二氧化碳透过率。(2)肉桂醛和松香对壳聚糖膜性能的影响。通过研究不同浓度的肉桂醛对1.75%壳聚糖膜的性能影响,发现肉桂醛的添加能够在一定程度上改善单一壳聚糖膜的综合性能;当肉桂醛的添加量为0.8%时,复合膜的综合性能较好,水蒸气透过率为612.67 g/(m~2·day),氧气、二氧化碳透过率分别为46.62和195.34 c m3/m2·24h·0.1 MPa,抗拉强度达到35.51 MPa,断裂伸长率为17.31%。进一步研究了添加不同浓度松香对肉桂醛-壳聚糖复合膜的性能影响,发现当松香浓度为1%,复合膜的综合性能最好,水蒸气透过率最低达到544.18 g/(m~2·day),极大提高了壳聚糖膜的阻湿性能。此外,氧气和二氧化碳透过率也有了极大的提高,分别达到141.71和1341.26 cm3/m2·24h·0.1MPa,抗拉强度和断裂伸长率分别为37.09 MPa和25%,进一步提高了复合膜的机械性能。壳聚糖复合膜的超微结构观察结果表明,加入肉桂醛后,壳聚糖膜原本光滑致密的结构变得粗糙,出现油状液滴;进一步添加松香后,复合膜表面则出现凹凸不平的状态。因此,肉桂醛和松香的添加通过改变1.75%壳聚糖膜的结构进而影响其性能。(3)天然抗菌物质的筛选和多功能壳聚糖复合膜的制备。通过研究白花蛇舌草、老鹰茶、杜仲叶、杨树芽等天然物质的提取物对板栗优势致腐菌的抑菌效果,发现1%的杨树芽提取物(Poplar Bud Extract,PBE)的抑菌效果最好。因此在复合膜最佳配比的基础上添加1%天然抗菌物质PBE,分别探究了壳聚糖膜、肉桂醛-壳聚糖复合膜、肉桂醛-松香-壳聚糖复合膜和肉桂醛-松香-PBE-壳聚糖复合膜对板栗采后优势致病菌亚洲镰孢菌和小新壳梭孢菌的抑菌效果。结果表明:四种复合膜对两种致病菌均有不同的抑制作用,其中肉桂醛-松香-PBE-壳聚糖复合膜对两种致病菌的抑制率最大,分别为75.96%和77.78%。(4)多功能壳聚糖复合膜对板栗采后防腐保鲜效果评价。通过研究多功能壳聚糖复合涂膜处理对常温及低温贮藏条件下板栗微生物指标、表观指标、品质指标以及生理指标的影响。发现多功能壳聚糖复合膜处理能够有效降低板栗的腐烂率,常温与低温贮藏条件下腐烂抑制率分别达37.53%和60.18%,能够降低板栗的失重率,保持板栗亮度及还原糖、淀粉、可溶性蛋白、可滴定酸、可溶性固形物等品质指标的含量。此外,在常温及低温贮藏条件下,多功能壳聚糖复合膜不仅有效抑制了板栗贮藏过程中致腐菌的生长,还能够抑制板栗呼吸作用,抑制率分别达到30.00%和35.05%,同时提高了板栗多酚氧化酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性。因此,多功能壳聚糖复合Belnacasan膜在有效降低板栗贮藏过程中的腐烂,保持板栗品质方面具有潜在应用价值。

目的：借助网络药理学手段探究复方双花片治疗流行性腮腺炎的主要活性成分和作用机制。方法：在中药系统药理学数据库和分析平台以及GeneCaselleckchemrds数据库分别获取复方双花片的化学成分及作用靶点和流行性腮腺炎的靶点后获得共同靶点。采用STRING软件构建共同靶点蛋白互作图后进行基因本体论功能富集分析和京都基因与基因组百科全书通路富集分析，并构建“药物-成分-靶点-通路”网络图，拓扑分析获得主要活性成分与关键靶点，进行分子对接。结果：获得活性成分包括槲皮素、毛地黄黄酮、山奈酚等11个黄酮类，荷包牡丹碱、清风藤碱、去氧喜树碱3个生物碱，β-谷甾醇和豆甾醇2个植物甾醇，牛蒡子苷、异落叶松脂素等4个木脂素类。关键靶点前列腺素内过氧化物合酶2(Prostaglandin-endoperoxide Synthase 2,PTGS2)、热休克蛋白90AB1(Heat Shock Protein 90 k Da Alpha,Class B member Crizotinib MW1,HSP90AB1)、肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor,TNF）等11个。主要富集在T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通nonviral hepatitis路、NF-κB信号通路等分子信号通路，主要涉及促进RNA聚合酶Ⅱ启动子转录、炎症反应及调节NO生物合成等生物过程。分子对接表明活性成分与关键靶点有一定的作用力。结论：复方双花片中的槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇等成分可能通过PTGS2、HSP90AB1、TNF等靶点和T细胞受体信号通路、Toll样受体信号通路等阻止病毒复制，降低炎性反应和提高机体免疫力而发挥治疗流行性腮腺炎的作用。

目的：观察预警式分级评分管理应用于冠心病重症监护病房（CCU）急性心肌梗死（AMI）合并心力衰竭患者护理中的效果。方法：回顾性分析郑州市金水区总医院2020年1月至2020年11月期间接受治疗的92例AMI合并心力衰竭患者资料，均入住CCU，依照入点击此处住时间分为对照组43例和观察组49例。对照组患者给予常规护理管理，观察组患者基于对照组基础给予预警式分级评分管理，比较两组患者住院时间（CCU住院时间、总住院时间）、护理不良事件发生率、护理人员护理质量、家属护理工作满意度。结果：观察组患者CCU住院时间、总住院时间明显短于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）；观察组患者护理不良事件发生率4.08%，明显低于对照NSC 125973组20.93%，差异具有统计学意义（P <0.05）；观察组护理人员预警评价、服务态度、应急处理、基础护理评分均高于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）；观察组患者对护理规范性、护理专业性、护理及时性、护理亲和度的评分均高于对照组，差异具有统计学意义（P <0.05）。结论：预警式分级评分管理应用于入住CCU的AMI合并心力衰竭患者护理中，可有效biotic stress提升护理质量，减少护理不良事件发生风险，缩短住院时间，提高家属护理工作满意度。

表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）是治疗EGFR基因突变的非小细胞肺癌（NSCLC）的靶向药物，因其具有精准、高效、安全和使用便捷等优点而备受瞩目。但是，EGFR基因复杂突变（主要包括EGFR基因复合突变与EGFR基因共突变）会影响NSCLC患者对EGFFusion biopsyR-TKI治疗的敏感selleck性。通过降低药物与肿瘤细胞之间的结合力或关键信号转导通路等多种作用途径，可影响NSCLC患者的近期疗效及预后。根据现有证据分析影响TKI治疗NSCLC疗效的EGFR基因复杂selleck VP-16突变类型的研究发现，大多数EGFR基因复杂突变能够导致TKI疗效不佳，其作用机制可能与突变类型本身对药物的敏感性、介导病理类型更加恶化或与导致DNA损伤修复障碍等作用相关。因此，提出多靶向药物联合治疗、EGFR-TKI联合化疗或联合血管靶向治疗等方案，为EGFR基因复杂突变的NSCLC患者提供了新的增强EGFR-TKI疗效的临床治疗策略。

目的：通过正常动物的降糖实验及高血糖模型动物降糖实验评价桑叶多肽维持血糖健康水平的功能。方法：选取健康成年小鼠40只，随机分为4组，正常对照组、桑叶多肽1组、桑叶多肽2组及桑叶多肽3组，每组10只。除正常对照组外其余各组给予桑叶多肽高剂量浓度受Decitabine分子式试样品，连续30 d,检测空腹血糖值；健康雄性SD大鼠，根据0 h和0.5 h的血糖值分为7组，分别为模型对照组，正常对照组，桑叶多肽1高、中、低剂量组，桑叶多肽2组和桑叶多肽3组，每组15只。采用高热能饲料喂养辅以四氧嘧啶腹腔注射，诱发实验性糖尿病大鼠模型，连续selleck合成给药33 d,检测空腹血糖、糖耐量及胆固醇、甘油三酯水平。结果：正常小鼠降血糖实验结果显示，给药30 d后，各给药组小鼠体质量与正常对照组相比无明显变化，桑叶多肽1、桑叶多肽2、桑叶多肽3组空腹血糖值较正常对照Immunohistochemistry Kits组有所下降，其中，桑叶多肽1组血糖值降低有统计学意义(P<0.05);高血糖模型大鼠降糖实验结果显示，正常对照组、模型对照组和各给药组0 h血糖值均在3.2～6.3 mmol/L,模型对照组较正常对照组血糖升高，差异有统计学意义(P<0.05),各给药组与模型对照组相比，无明显变化；给予葡萄糖0.5 h后，各组血糖均>10.0 mmol/L,桑叶多肽1低、中、高剂量组的血糖值均低于模型对照组，但差异不具有统计学意义；桑叶多肽2和桑叶多肽3组血糖值较模型对照组明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)。给予葡萄糖2 h后，各实验组2 h血糖值明显低于模型对照组，均具有统计学意义(P<0.05)。给药33 d后，各给药组与模型对照组相比，CHO、TG指标均无明显变化。结论：桑叶多肽1对正常动物血糖有一定降低作用，对于高血糖模型动物降血糖作用也较明显，桑叶多肽2、桑叶多肽3都具有维持血糖健康水平的作用。

目的 探讨瓜蒌宽肠胶囊联合西沙必利对妇科腹部术后胃肠功能的影响。方法 选取2018年1月—2020年1月收治的接受妇科腹部手术患者64例，按治疗方法分为观察组和对照组各32例。对照组在常规处理基础上采用西沙必利治疗，观察组在对照组基础上联合瓜蒌宽肠胶囊治疗，疗程均为7 d。比较2组临床疗效，治疗7 d后胃肠功能恢复时间，治疗1、7 d后胃肠激素BLZ945、血炎性指标水平，记录不良反应发生情况。结果 观察组总有效率高于对照Genetic-algorithm (GA)组(P<0.0PLX4032说明书5)。治疗7 d后，观察组肠鸣音恢复时间、首次排气时间、首次排便时间短于对照组，胃肠激素水平高于对照组，血C反应蛋白和白细胞介素-6水平低于对照组(P<0.01)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 瓜蒌宽肠胶囊联合西沙必利有助于妇科腹部术后患者胃肠功能的恢复，且安全性较高。