MAPK信号通路

目的：通过调查分析干式荧光免疫分析仪在检测幽门螺杆菌感染与慢性萎缩性胃炎患者血清中胃泌素-17及胃蛋白酶原的应用价值。方法：选Rapamycin小鼠择2020年6月～2021年5月中南大学湘雅二院桂林医院消化内科住院的100例慢性萎缩性胃炎患者作为此次实验研究的对象，分别采用干式荧光免疫分析仪（观察组）和尿素呼气试验检测（对照组）患者幽门螺杆菌感染情况，统计检测情况以及两种方式下检测结果的准确性、相关性等情况。结果：通过对患者进行病理学和诊断结果证明100例中，有41例患者感染幽门螺杆菌，感染率MLN4924研究购买达41%，其中，尿素呼气试验检测（对照组）检出37例，干式荧光免疫分析仪检出40例。在干式荧光免疫分析仪检测下，感染幽门螺杆菌的慢性萎缩性胃炎患者胃泌素17和胃蛋白酶原水平明显上升，而未感染幽门螺旋杆菌的慢性萎缩性胃炎患者，胃泌素17和胃蛋白酶原水平下降。观察组干式荧光免疫分析仪检测结果和对照组尿素呼气试验检测结果一致。结论：干式荧光免疫分析仪具有携带方便、操作简单、结果准确、特别适用于批量样本及入户走访现场进行胃泌素-17及胃蛋白酶原检测，进而为临床上诊断幽门螺杆菌与慢off-label medications性萎缩性胃炎提供依据。

突触是神经元之间或神经元与效应器细胞之间信息传递的基本单位,了解突触的形成机制和功能对于理解神经系统疾病至关重要。胆固醇作为膜的主要结构成分之一和化学信使的前体物质,影响着突触的发育和功能,而神经元中胆固醇如何影响突触发育是研究较少的。秀丽线虫是研究突MK-1775 IC50触发育的模式生物,我们的研究发现,高浓度胆固醇饮食增加秀丽线虫突触的数量。通过相关的分子筛选确定了ncr-1介导了高胆固醇饮食增加突触的作用。NCR-1是NPC1的同源蛋白,NPC1是一个约150k D位于溶酶体膜上的跨膜蛋白,主要功能是将溶酶体内游离胆固醇转运到细胞质内,NPC1功能异常会导致尼曼-匹克C型(Niemann–Pick type C,NPC)疾病,这是一种溶酶体内胆固醇输出障碍造成的神经性疾病。秀丽线虫存在NPC1的两个同源基因ncr-1Site of infection和ncr-2。我们发现,与野生型相比,ncr-1(0)秀丽线虫突触面积变小、荧光强度变暗,而ncr-2(0)秀丽线虫突触面积和荧光强度与野生型Pevonedistat体内实验剂量相当。有意思的是,ncr-1(0);ncr-2(0)双突变体突触的大小和荧光强度也与野生型相当,ncr-1和ncr-2在调节突触发育的过程中起着不同的作用。我们用CRSIPR/KI的方法构建了GFP标记内源NCR-1和NCR-2的秀丽线虫株,发现NCR-1和NCR-2表达在不同的组织和细胞中,并且在低胆固醇培养下,NCR-1在头部的表达显著上调,而2个XXX细胞均表达NCR-2的秀丽线虫比例明显升高,提示NCR-1和NCR-2参与胆固醇稳态调控。我们的研究初步揭示了溶酶体胆固醇转运蛋白在突触发育过程中的复杂调控作用。

目的：利用网络药理学平台整合分析牛膝-杜仲-桑寄生治疗膝骨关节炎(KOA)的分子机制，为药组的使用提供理论依据。方法：通过TCMSP平台筛选药组有效成分及靶点，与KOA靶点取交集制作韦恩图，构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络图，筛选关键成分和核心基因，对核genetic nurturance心靶点进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果：筛选出药组有效成分41种，作用靶点239个；主要有槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、黄芩素、汉黄芩素、β-胡萝卜素等关键成分；磷酸激酶B1(AKT1)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)STM2457 molecular weight、血管内皮生长因子(VEGF)等核心基因。关键信号通路有晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)通路、TNF通路、脂肪与动脉粥样硬化通路、磷脂酰肌醇3-激酶/磷酸激酶B(PI3K/Akt)通路等，分子对接结果显示活性成分与核心基因结合能力较强。结论：牛膝-杜仲-桑寄生药组可以通过多靶点、多通路发挥抗炎selleck、抗氧化、调控细胞凋亡及稳定关节内环境的作用，达到治疗膝骨关节炎的目的。

目的 运用网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗糖尿病肾病(DKD)的潜在作用机制。方法 通过检索多个数据库筛选出鸡血Rapamycin molecular weight藤活性成分和核心靶点，借助Drugbank、TTD、OMIM、Genecard、PharmGkb数据库收集DKD作用靶点，运用Venny 2.1.0获取鸡血藤与DKD的交集靶点基因。使用STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络，并使用Cytoscape软件和CytoNCA插件进行分析筛选出核心靶点。然后进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。最后，使用AutoDock Tools软件通过分子对接技术验证活性化合物与核心靶点的结合能力。结果 挖掘出24种鸡Blebbistatin血藤的关键活性成分，DKD靶点12 818个，有48个二者的交集靶点基因。筛选出鸡血藤活性成分3种(芦荟大黄素、木犀草素、甘草查尔酮a),核心靶点基因4种[热休克蛋白90 Alpha家族A级成员1(HSP90AA1)、MYC原癌基因(MYC)、肿瘤蛋Recurrent hepatitis C白p53(TP53)、信号传感器和转录激活剂3(STAT3)]。GO功能共富集498个条目，KEGG通路共富集61个条目。分子对接技术验证了3种活性化合物与其作用的关键靶点具有可靠的亲和力。结论 推测鸡血藤治疗DKD具有多成分-多靶点-多途径的特点，为进一步研究鸡血藤治疗DKD的分子机制提供了新的思路。

目的:观察健脾理气解毒法在幽门螺杆菌根除中的临床疗效,为中医药根除幽门螺杆菌提供理论依据Baf-A1浓度。方法:将2022年1月-2023年1月于湖北省襄阳市中医医院脾胃风湿病科门诊就诊的符合诊断标准的60例患者随机分为铋剂四联组(阿莫西林胶囊1g日2次,克拉霉素胶囊0.5g日2次,枸橼酸铋钾颗粒220mg日2次,奥美拉唑肠溶胶囊20mg日2次)和中药组(枳实消痞丸,水煎取400ml,分早晚两次服用),每组各30人,两组疗程均为14天,治疗结束后从症状、幽门螺杆菌根除情况、不良反应、herpes virus infection胃肠道症状改善情况等多方面评估临床疗效。结果:中药组的根除率为63.33%,铋剂四联组的根除率为86.67%,铋剂四联组的根除率显著高于中药组,差异具有统计学有意义(P<0.05);根除治疗后两组的胃肠道症状均得到不同程度改善,与根除前比较差异具有统计学意义(P<0.05);根除后中药组胃肠道症状改善情况明显优于铋剂四联组(P<0.05);治疗途中中药ABT-199使用方法组的不良反应发生率为6.67%,铋剂四联组为26.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:中药组对幽门螺杆菌的根除率较铋剂四联组低,并且低于80%,为不可接受范围,在临床中不推荐单独用于根除幽门螺杆菌;中药组可明显改善患者的胃肠道症状,减轻患者痛苦,提高生命质量;在不良反应发生上中药组显著低于铋剂四联组,在一定程度上可提高患者依从性,有助提高幽门螺杆菌的根除率。

目的:通过生物信息学方法分析IgA肾病患者肾组Bio-imaging application织的核心基因和免疫细胞浸润特点，探索IgA肾病的发病机制。方法:从GEO数据库下载GSE104948、GSE104954、GSE37460和GSE35487的基因表达矩阵，运用R语言筛选差异表达基因，利用STRING数据点击此处库和Cytoscape软件构建蛋白互作网络，并计算核心基因。运用CIBERSORTx数据库分析不同组别的免疫细胞浸润特点。结果:共获得218个差异表达基因，筛选出22个核心基因，如C1QA、C1QB、CD48、CD53、CSF1R等。与正常组相比，IgA肾病患者肾组织中初始B细胞、记忆CD~+_4T细胞、树突状细胞、活化肥大细胞和中性粒细胞水平降低；M0型巨噬细胞、M1型巨噬细胞和MVorinostat NMR2型巨噬细胞、NK细胞、单核细胞、静息肥大细胞水平增高。结论:IgA肾病肾组织免疫细胞以巨噬细胞浸润为主要特点，其核心基因主要与炎性反应和免疫调节紊乱有关。

目的:在本次研究中,我们使用了从GEO(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中查找获得的膜性肾病(membranous nephropathy,MN)的基因表达微阵列数据集,然后应用生物信息学方法分析确定M2巨噬细胞相关的关键基因,并对其诊断价值进行验证。最后,通过分析各关键基因的生物学功能,探索MN发病机制研究和诊治的新的思路。方法:从GEO数据库中下载微阵列数据集GSE104948和GSE108109,其中GSE108109作为验证数据集。使用R软件(4.1.1版本)中的limma软件包对MN组和正常对照组进行差异表达分析,利用在线数据库Metascape对上述获得的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进Recipient-derived Immune Effector Cells行GO功能分析和KEGG信号通路分析。同时使用CIBERSORT算法对MN组和正常对照组进行免疫浸润分析,发现M2巨噬细胞在MN组和正常对照组之间显著不同。以M2巨噬细胞作为表型进行加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA),筛选M2巨噬细胞相关的枢纽(Hub)基因。使用Metascape对Hub基因进行富集分析,方法与上述差异表达基因的富集分析一致。差异表达基因和Hub基因取交集确定潜在关键基因,通过在数据集GSE108109中验证潜在关键基因的表达水平,确定关键基因。通过ROC曲线分析评估其诊断价值。最后,基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)用于探索这些关键基因所涉及的生物学功能。结果:通过limma软件包筛选出5Nirogacestat细胞培养67个DEGs,其中297个上调基因,270个下调基因。通路和功能富集分析显示上调的差异表达基因主要与机体对外界刺激的反应以及免疫系统相关,而下调差异表达基因主要与分子代谢相关。免疫细胞浸润分析表明与正常对照组相比,6种免疫细胞浸润水平显著差异表达,其中活化自然杀伤细胞和单核细胞在膜性肾病组中浸润水平较高,而M2巨噬细胞、活化Adavosertib体外树突状细胞、初始B细胞和中性粒细胞在MN样本中的浸润水平较低。以M2巨噬细胞作为WGCNA的表型,共筛选出38个Hub基因。GO功能分析显示,Hub基因主要富集于“小分子分解代谢过程、氧化还原酶活性、细胞对氧化应激的反应、细胞对化学应激的反应”等,KEGG富集分析显示Hub基因富集于“化学致癌-活性氧”信号通路。然后,差异表达基因和Hub基因取交集获得9个潜在关键基因。在数据集GSE108109中验证潜在关键基因的表达水平,最终得到6个关键基因:HLF、PPARGC1A、ESRRG、HGD、KCNJ16和SULT1C2。通过ROC曲线分析评估其诊断价值,6个基因AUC值均大于0.85,具有较高的诊断价值。GSEA分析显示这些关键基因变化可以引起精氨酸和脯氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,脂肪酸代谢,补体和凝血级联反应,过氧化物酶体,PPAR信号通路等通路上调。同时,这些关键基因也使抗原处理和呈递、FCγR介导的吞噬作用、自然杀伤细胞介导的细胞毒性等通路下调。结论:本研究表明PPARGC1A、ESRRG、KCNJ16、HLF、HGD和SULT1C2为MN中M2巨噬细胞相关的关键基因,这一发现可能为M2巨噬细胞对MN的影响提供了新的见解。

目的：研究小梁切除术后眼压失控的原发性闭角型青光眼（PACG）行白内障超声乳化联合房角分离术治疗的安全性和有效性。方法：纳入2015年5月-2020年10月收治的小梁切除术后眼压失控的PACG患者41例（43眼）作为研究对象，对所有病例采取白内障超声乳化联合房角分离术，术后随访6月，观察术前及术后1周，1、3、6月眼压、最佳矫正视力(BCVA)、中央前房深度、房角粘连性关闭（PAS）范围变化，术前和术后6月角膜内皮细胞计数，记录术中、术后并发症情况。结果：（1）Fulvestrant作用眼压变化：术前眼压（29.83±5.98）mm Hg，术后1天，1周，1、3、6月眼压分别为（12.18±3.86）mm Hg、（13.02±4.29）mm Hg、（15.18±6.87）mm Hg、（15.03±5.98）mm Hg、（15.37±4.79）mm Hg，术后眼压下降明显，差异有统计学意义（F=31.412,P<0.01）;(2)BCVA变化：术前与术后BCVA总体分布，差异有统计学意义（F=62.014,P<0.001）;(3)PAS范围变化：术后各时间点PAS范围均明显小于术前（t=60.4Acute respiratory infection02,P<0.001）;(4)角膜内皮细胞计数变化：术后6月角膜内皮细胞计数与术前比较无明显变化，差异无统计学意义（t=1.321,TofacitinibP=0.113）;(5)前房深度变化：术后1、6月中央前房深度分别为（4.03±0.33）mm、（4.01±0.36）mm，较术前(1.82±0.29) mm均有明显增加，差异有统计学意义（F=1068.542,P<0.01）。（6）并发症：术后角膜水肿5眼，前房炎症反应伴纤维性渗出2眼，前房出血1眼，经治疗均在1周内消退。无后囊破裂、无虹膜损伤及恶性青光眼等并发症发生。结论：对小梁切除术后眼压失控合并白内障的PACG，采取白内障超声乳化联合房角分离手术治疗是一种安全、有效的方法，值得临床推广。

目的:研究幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染成纤维细胞诱导丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员E1(Serpin family E member 1,Serpin E1)的表达与胃癌细胞之间的相互作用,探讨成纤维细胞来源的Serpin E1促进胃癌细胞生长和腹膜转移的机制。方法:(1)蛋白免疫印迹(Western bolt)检测2株胃上皮/癌细胞系(GES-1、AGS)、3株人原代胃癌细胞(GC-1、GC-2、GC-3)、1株胃纤维细胞系(Hs738)及3株人原代胃癌相关纤维细胞(CAF-1、CAF-2、CAF-3)中Serpin E1的表达。(2)以H.pylori感染复数(MOI)为50感染胃成纤维细胞,用Western bolt及免疫荧光(IF)检测Serpin E1表达,细胞因子芯片(含36种细胞因子)及酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测培养上清中Serpin E1水平。(3)用Transwell小室构建人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与成纤维细胞共培养模型,上室加入HUVECs,下室加入H.pylori感染或未感染的成纤维细胞及其来源的条件培养基,检测HUVECs迁移到下室面的细胞数,评价趋化作用。(4)用Transwell小室构建HUVECs(下室)与高表达Serpin E1cancer and oncology的Hs738细胞(Hs738 Serpin E1,加入上室)共培养模型,Western bolt、IF检测HUVECs中血管内皮生长因子a(VEGFa)的表达。(5)构建Hs738 Serpin E1与HUVECs直接与间接共培养模型,EILSA检测共培养上清中VEGFa的浓度。(6)4周龄雄性BALB/c裸鼠各5只,原代胃癌细胞和高表达Serpin E1 Hs738以4:1的比例混合皮下注射入裸鼠右侧腋,28天后麻醉处死小鼠,检测移植瘤的体积(V=1/2×长度×宽度2)和重量来评估肿瘤生长;以同样比例将混合细胞腹腔注射到裸鼠,28天后麻醉处死小鼠,计数裸鼠腹膜中肿瘤结节,取肿瘤结节制备组织切片,HE染色评价病理变化,免疫组织化学(IHC)检测Ki67、Serpin E1、CD31、VEGFa表达。(7)用外源性重组蛋白Serpin E1(recSerpin E1)处理HUVECs,Transwell实验检测recSerpin E1对HUVECs趋化作用,Western bolt、IF检测HUVECs 中 VEGFa表达,加入Serpin E1抗体,Western bolt检测HUVECs中VEGFa表达,小管形成实验检测HUVECs管状形成。(8)recSerpin E1、Serpin E1抗体及MAPK信号通路阻断剂(E)-Osmundacetone单独或共处理HUVECs,Western bolt检测P38、ERK1/2、JNK及其磷酸化蛋白和VEGFa的表达。(9)收集裸鼠腹膜转移的肿瘤结节,GC+Hs738 Serpin E1及GC+Hs738 NC组各3个,进行转录组学研究。以差异倍数>1.2及FDRS≤0.05为条件筛选差异表达基因(DEGs);进行GO、KEGG通路富集分析;利用GEPIA在线工具及胃腺癌TCGA数据库,分析Top15 DEGs在胃癌组织中的表达及生存分析。结果:(1)Serpin E1主要在胃成纤维细胞中表达。(2)H.pylori感染CAFs后Serpin E1的表达增加,培养上清液中Serpin E1水平增加。(3)H.pylori感染的CAFs和Hs738细胞及其来源的条件培养基增加了 HUVECs从Transwell上室迁移到Transw此网站ell下室的细胞数(p<0.05),促进HUVECs的趋化作用。(4)高表达Serpin E1的Hs738细胞促进HUVECs中VEGFa的表达与分泌(p<0.05)。(5)Hs738 Serpin E1与GC细胞共注射能促进裸鼠皮下移植瘤的生长,其瘤体体积及重量显著高于Hs738 NC与GC细胞共注射组(p<0.05);裸鼠腹腔注射实验显示:高表达Serpin E1的Hs738与GC细胞共注射能促进GC细胞在腹腔中扩散,腹腔中肿瘤结节数显著多于Hs738 NC+GC共注射组。HE染色显示:三组裸鼠腹腔肿瘤结节存在着局灶性坏死,但GC+Hs738 Serpin E1组与GC+Hs738 NC组中局灶性坏死显著减轻,尤其是GC+Hs738 Serpin E1组中局灶性坏死减轻最明显;IHC分析显示:肿瘤结节中VEGFa和CD31的表达随着Serpin E1表达增加而增加(p<0.05)。(6)与对照组比较,1ng/mL 与 10ng/mL recSerpin E1均增加了 HUVECs从Transwell上室到下室的迁移细胞数,1ng/mL recSerpin E1处理组中作用最强(p<0.05)。1ng/mL与5ng/mL recSerpin E1处理两株内皮细胞后VEGFa表达显著增加(p<0.05)。加入Serpin E1抗体(1μg/mL和2μg/mL)能抑制recSerpin E1诱MG132抑制剂导的VEGFa表达与管状形成,当Serpin E1抗体浓度达到2μg/mL时,VEGFa表达及管状形成抑制最明显(p<0.05)。(7)与对照组比较,recSerpin E1增强了 P38 MAPK的磷酸化及VEGFa表达,但对ERK1/2和JNK MAPK没有显着影响;加入Serpin E1抗体(2μg/mL)及入MAPK通路抑制剂(E)-Osmundacetone 能抑制了 recSerpin E1 介导的 P38 磷酸化和 VEGFa 表达(p<0.05)。(8)转录组学结果显示:GC+Hs738 Serpin E1 及 GC+Hs738 NC组内样本数据相对集中,有较好重复性;筛选出178个DEGs,其中39个基因上调,139个基因下调;DEGs主要参与细胞过程、生物调节及代谢过程等生物过程;参与细胞及细胞组分等细胞组成;参与结合及催化活性等分子功能;参与丁酸代谢、代谢途径及多种物质代谢等KEGG通路,这些信号通路与代谢通路与肿瘤的发生、发展密切相关。(9)Top15 DEGs中7个DEGs(CTSS、KRT80、PDZK1IP、SEMA3C、FSTL1、SLC27A2、LOX)在胃腺癌组织中的表达显著高于正常组织,FSTL1、LOX的表达与胃癌患者10年生存率负相关(p<0.05)。结论:(1)Serpin E1主要在胃成纤维细胞中表达。(2)H.pylori感染可诱导成纤维细胞表达Serpin E1,高表达Serpin E1的Hs738能促进GC细胞的裸鼠皮下生长和腹膜转移。(3)Serpin E1激活P38 MAPK-VEGFa信号参与GC生长。

目的 探讨百令胶囊对老年慢性肾小球肾炎患者的影响。方法 选取2021年6月至2022年6月贵州省人民otitis media医院收治的96例患者作为研究对象，按照随机数字表GSK1349572半抑制浓度法分为对照组（48例）和研究组（48例）。对照组采用缬沙坦治疗，研究组在对照组基础上加用百令胶囊治疗，对比两组临床疗效、可溶性血管内皮生长因子受体（s FIt-1）水平、白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C反应蛋白（CRP）、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、24 h尿蛋白定量（Upro）、T淋巴细胞亚群：CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和不良反应发生情况。结果 研究组总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗前，两组患者s FIt-1、炎症因子水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组患者s FIt-1、IL-1、TNF-α、CRP水平低于治疗前，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组患者肾功能指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组患者SCr、BUN、24 h Upro水平低于治疗前，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组免疫功能指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，两组CD4+、CD4+/CD8+高于治疗前，且研究组高于对照组；治疗后，两组CD8+低于治疗前，且研究组低于对照组，差异有统计学意义（Pselleck抑制剂<0.05）。两组患者不良反应总发生率比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 慢性肾小球肾炎患者应用百令胶囊治疗可有效降低s FIt-1水平和炎症因子水平，利于提升肾功能，增强机体免疫力，且不良反应较少。