MAPK信号通路

目的 探讨小剂量肝素治疗儿童重症水痘并脓毒症的临床疗效和安全性。方法 选取2019年1月至2022年12月收治的51例重症水痘并脓毒症患儿的临床资料，根据是否使用小剂量肝素治疗分为研究组28例与对照组23例，入院后两组患儿均予针对病因、脏器支持等综合治疗，研究组同时加用小剂量肝素辅助治疗，比较两组小儿危重症评分(PCIS)、凝血功能指标、PLT水平、弥散性血管内凝血(DIC)和多脏器功能障碍(MOselleck化学DS)的发生率以及住院时间。结果 治疗后研究组与对照组ZD1839比较，D-二聚体水平显著下降，APTT、PT显著缩短，PLT水平显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05);研究组FIB高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05);研究组DIC和MODS发生率分别为17.9%和14.3%,明显低于对照组的43.4%和39.1%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);研究组住院时间短于对照组，PCIS评分高于对照组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05或0.001)。结论 儿童antitumor immunity重症水痘并脓毒症伴有凝血功能障碍时应用小剂量肝素治疗，可改善凝血功能，保护脏器功能，降低DIC及MODS的发生率，缩短住院时间，改善临床预后，且不增加出血风险，值得临床推广应用。

目的 观察替格瑞洛联合阿司匹林治疗急性心肌Rapamycin供应商梗死(AMI)的效果及对心功能的影响。方法 选取2021年6月—2Spinal infection022年6月南华大学附属长沙中心医院收治的AMI患者74例为研究对象，根据随机数字表法分为对照组与研究组，各37例。对照组服用阿司匹林肠溶片，研究组在服用阿司匹林肠溶片的基础上加用替格瑞洛片，2组均连续用药3个月。比较2组临床疗效，心肌梗死发作次数、持续时间，用药前后心功能与心肌微循环指标[左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室射血分JNJ-42756493细胞培养数(LVEF)、冠状动脉血流储备分数(CFR)、血小板聚集率、微循环抵抗指数(IMR)],不良反应。结果 研究组总有效率为94.59%,高于对照组的78.38%(χ~2=4.163,P=0.041)。研究组心肌梗死发作次数少于对照组，持续时间短于对照组(P<0.01)。用药3个月后，2组LVEDD、LVESD小于用药前，LVEF、CFR高于用药前，血小板聚集率、IMR低于用药前，且研究组降低/升高幅度大于对照组(P<0.05或P<0.01)。对照组与研究组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(21.62%vs. 10.81%,χ~2=1.591,P=0.207)。结论 替格瑞洛联合阿司匹林治疗AMI的效果确切，可有效控制患者的临床症状，改善患者心功能及心肌微循环，且安全性较高。

牛奶中的β-乳球蛋白是引起肠道炎症的主要过敏原。大量研究表明,益Lorlatinib MW生菌具有抗过敏和抗炎作用。本文选取了前期从湖南山区牧场牛乳中筛选得到的具有潜在抗过敏活性的鼠李糖乳杆菌LZ260E,研究其对β-乳球蛋白诱导的牛奶过敏小鼠模型的免疫调节功能和肠道微生物群的影响。采用ELISA法、Q-PCR法检测血MG132小鼠清中IgE、组胺、细胞因子及Th1/Th2型细胞因子的含量。结果表明口服LZ260E,可以显著降低小鼠血清中组胺、IgE、IL-4、MCP-1的含量,上调IFN-γ、IL-10、TNF-α和TGF-β的表达。通过对结肠组织进Bioavailable concentration行HE染色观察发现,LZ260E对过敏引起的肠粘膜结构的破坏具有保护作用。采用16S rRNA基因高通量测序技术分析发现LZ260E对小鼠肠道菌群结构有明显的影响,能够有效增加有益菌群丰度。这些结果表明,鼠李糖乳杆菌LZ260E通过调节肠道微生物群和Th1/Th2免疫平衡而具有抗过敏特性,可为进一步开发、利用湖南主要的山区牧场乳酸菌资源打下基础,同时为工业化利用这LZ260E提供参考依据。

背景：白藜芦醇是从植物中提取而来的天然抗氧化剂，其改善运动性疲劳的机制主要集中在氧化应激和炎症反应的保护作用上，此次研究主要从糖异生角度探讨其对运动性疲劳的保护机制。目的：探讨白藜芦醇对运动性疲劳大鼠糖异生的影响。方法：SD雄性大鼠适应性训练1周后随机分为4组，即空白对照组、白藜芦醇组、运动组、白藜芦醇+运动组，每组12只。空白对照组和白藜芦醇组正常饲养，不进行游泳训练；白藜芦醇+运动组和运动组采用负重游泳训练模拟长时间中高强度运动，每天负重5%游泳1 h后，分别灌胃50 mg/kg的白藜芦醇溶液或等体积的二甲基亚砜溶剂，每周6 d，共6周。末确认细节次运动后24 h取材，试剂盒检测尿素氮、肌酸激酶、血糖、肝糖原以及肝脏组织中乳酸health resort medical rehabilitation、丙酮酸水平；微量法检测磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性，酶联免疫吸附法检测葡萄糖-6-磷酸酶活性；RT-PCR检测SIRT1、CREB和PGC-1α的基因表达水平。结果与结论：(1)运动组大鼠血浆尿素氮和肌酸激酶水平明显升高(均P <0.05)，肝脏乳酸、丙酮酸水平和乳酸/丙酮酸比值明显升高(均P <0.01)，血糖和肝糖原水平明显降低(均P <0.01)；补充白藜芦醇可有效改善以上情况；(2)运动使selleck NMR大鼠肝脏组织糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶和葡萄糖-6-磷酸酶的活性明显降低(P <0.01,P <0.05)，补充白藜芦醇可明显提高磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶活性(P <0.01)；(3)运动组肝脏组织SIRT1、CREB和PGC-1α的mRNA表达水平明显降低(均P <0.01)，补充白藜芦醇可使该通路基因表达水平明显升高；(4)提示白藜芦醇能缓解长时间中高强度运动导致的运动性疲劳，其机制可能与上调糖异生调控通路、提高限速酶活性、促进肝脏糖异生、升高血糖和肝糖原水平有关。

目的：分析急性髓系白血病（bioelectrochemical resource recoveryAML）患者血小板输注疗效不佳及短期死亡的危险因素。方法：将2019年4月至2021年1月期间南部战区总医院收治的97例AML患者作为研究对象，在常规化疗的基础上，所有患者均进行血小板输注治疗。将血小板输注24 h后血小板计数增加指数<4.5视为输注疗效不佳，反之则为输注疗效良好。随访1年，根据短期预后的不同将患者分为死亡组和生存组。采用单因素和购买BYL719多因素Logistic分析AML患者血小板输注疗效不佳及短期死亡的危险因素。结果：97例AML患者中，疗效良好的患者65例，疗效不佳的患者32例，根据血液输注疗效将患者分为疗效不佳组（n=32）和疗效良好组（n=65）。随访结束时，97例AML患者中，有21例患者病死，病死率为21.65%。将病死的患者纳为死亡组（n=21），存活的患者纳为生存组（n=76）。AML患者血小板输注疗效不佳与白细胞计数（WBC）、输注次数、出血量、脾脏大小、感染发热、血小板种类有关（P<0.05），而与性别、年龄、血型、疾病类型、降钙素原（PCT）、血红蛋白（Hb）、乙肝表面抗原无关（P>0.05）。AML患者血小板输注疗效不佳的多因素Logistic分析结果表明：WBC>50×109/L、输注次数≥7次、出血量≥400 m L、脾大、感染发热、血小板种类为冰冻是AML患者血小板输注疗效不佳的危险因素（P<0.05）。AML患者短期死亡与弥散性血管内凝血、感染发热、血小板抗体、应用烷化剂化疗药物、脾脏大小有关（P<0.05）,AML患者短期死亡的多因素Logistic分析结果表明：血小板抗体阳性、感染发热、脾大、弥散性血管内凝血是AML患者短期死亡的危险因素（P<0.05）。结论：AML患者血小板输注疗效不佳受到WBC、输注次数、出血量、脾脏大小、感染发热、血小板种类等因素的影响。此外，感染发热、弥散性血管内凝血、血小板抗体、脾脏大小等是AML患者血小板输注后短期预后的影selleck化学响因素。

目的:分析评估Brucacute genital gonococcal infectionh膜开口-最小盘沿宽度(BMO-MRW)、视网膜神经纤维层(RNFL)厚度与其它视盘参数对近视患者早期青光眼的诊断价值。方法:本研究对2021年1月至2022年12月期间在山西省眼科医院门诊确诊患近视(近视对照组,14人,27眼)和近视合并青光眼(近视青光眼组,10人,20眼)的患者进行系统专科检查和评估。两组患者均行视力、眼压测量、眼底裂隙灯检查、验光、中央角膜厚度(CCT)测量以及视野检查。采用Spectralis OCT测量所有患者的BMO-MRW、RNFL厚度,Optovue OCT测量视盘参数。对比分析两组患者的平均和各区域BMO-MRW、RNFL和视盘参数的差异,PF-02341066采购并计算分析受试者工作特征曲线(ROC)下的面积(AUC)的差异。结果:1.两组患者BMO-MRW比较:近视青光眼组平均及各区域BMO-MRW值均低于近视对照MC3细胞培养组,其中平均、颞上、颞下、鼻下、鼻上区域BMO-MRW差异显著(P<0.001),颞侧区域及鼻侧区域BMO-MRW差异有统计学意义(P<0.05)。2.两组患者RNFL厚度比较:近视青光眼组平均及各区域RNFL厚度均低于近视对照组,其中平均、颞下、鼻上RNFL厚度差异显著(P<0.001),颞上、鼻下及鼻侧区域两组间差异有统计学意义(P<0.05),而颞侧区域RNFL厚度差异无统计学意义(P>0.05)。3.两组患者视盘参数比较:两组患者杯盘面积比、垂直杯盘比、盘沿面积及视杯体积之间差异有统计学意义(P<0.05),而盘沿面积差异最显著(P<0.001)。4.ROC曲线下面积(AUC)分析:平均BMO-MRW的AUC为0.856,颞上区域BMO-MRW的AUC值最大,为0.861,平均RNFL厚度的AUC值最大,为0.943,颞下区域的RNFL厚度AUC为0.916。在局部区域诊断价值分析中,BMO-MRW在颞上(AUC=0.861)、颞侧(AUC=0.753)、鼻下(AUC=0.815)、鼻侧(AUC=0.749)区域的AUC大于RNFL厚度的相应区域,其中颞上区域二者间差异有统计学意义(P=0.013)。盘沿面积的AUC值最大,为0.875,其次是杯盘面积比的(AUC=0.775)和垂直杯盘比(AUC=0.766)。结论:在近视青光眼早期诊断中平均RNFL厚度略优于平均BMO-MRW和盘沿面积,但区域BMO-MRW的敏感性高于区域RNFL。因此,对于早期近视青光眼的诊断区域BMO-MRW更有优势。

目的 medical staff分析贝伐珠单抗联合盐酸埃克替尼对表皮生长因子受体（EGFR）突变型非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效，为临床提供参考。方法 选取2018年2月至2020年2月惠州市第三人民医院收治的110例EGFR突变型NSCLC患者为研究对象，按照随机数字表法分为对照组和观察组，各55例。对照组患者仅使用盐酸埃克替尼进行治疗，观察组患者在对照组的基础上联用贝伐珠单抗进行治疗。比较两组患者临床疗效、简明健康状况调查问卷（SF-36）评分及肿瘤标记物[癌胚抗原（CEA）、糖类抗原12Endocrinology & Hormones抑制剂5(CA125)和细胞角蛋白19片段（CYFRA21-1）]水平。结果 观察组患者整体临床疗效优于对照组（P<0.05）。治疗后，两组患者各项SF-36评分较治疗前升高，且观察组高于对照组（P<0.05）。治疗后，两组患者CEA、CA125及CYFRA21-1水平较治疗前降低，且观察组低于对照组（P<0.05）。结论 在盐酸埃克替尼的基础上使用贝伐珠单抗对EGFR突变型NSCLC具有良好的治疗效果，能够抑制癌细胞生长，降低肿瘤标记物水平，延缓肿瘤进展，提高患者生活质量，值BMN 673供应商得临床应用。

研究背景:头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)是最常见的肿瘤之一,是全球发病率第六高的癌症。具有高增殖、局部淋巴结转移、预后差等特点。早期以手术治疗为主,晚期以铂类药物为基础的综合序列治疗。顺铂(CDDP)是头颈部鳞状细胞癌最常用的化疗药物之一;它与RNA、DNA和蛋白质结合形成不同类型的加合物,从而破坏其结构;诱导线粒体依赖的活性氧(ROS)形成,造成细胞内氧化还原失衡;由于细胞内谷胱甘肽(GSH)的存在,缓解了细胞内氧化还原失衡,增加了癌细胞对顺铂的AZD1152-HQPA临床试验耐药性,从而限制了 CDDP作为一种抗癌治疗手段的临床实用性。因此,通过消耗细胞内GSH破坏氧化还原平衡来放大细胞内的氧化应激是治疗癌症的一种有效方法。研究目的:GSH对癌细胞内氧化还原平衡状态的维持作用,是导致癌细胞对顺铂的耐药性增强的重要原因之一,故可以通过抑制GSH的合成来增强顺铂对HNSCC的化疗效果。因此,本文提出一种由透明质酸(HA)包被的介孔二氧化硅(MS)纳米载药系统,以共递送GSH合成抑制剂L-丁硫氨酸亚砜胺(BSO)和顺铂前药(DSCP)(定义为Pt/BSO-MS-HA)。探究该系统对头颈部鳞状细胞癌的治疗作用。研究方法:1、构建合成纳米载药系统Pt/BSO-MS-HA,对Pt/BSO-MS-HA的粒径、形貌、药物释放、顺铂负载率等材料学性能进行检测。2、Pt/BSO-MS-HA的体外实验:(1)利用 CAL-27 细胞系,采用 MTT 法检测 Pt、Pt/BSO、Pt/BSO-MS和Pt/BSO-MS-HA的细胞毒性;(2)利用流式细胞术及荧光染色激光共聚焦扫描显微镜成像分析检测CAL-27细胞对Pt/BSO-MS-HA的摄取能力;(3)检selleck产品测细胞内ROS的水平;(4)检测细胞内GSH的水平。3、Pt/BSO-MS-HA的体内实验:(1)利用CAL-27细胞系构建荷瘤鼠模型;(2)利用荧光成像检测Pt/BSO-MS和Pt/BSO-MS-HA在肿瘤和各个器官中的分布情况;(3)通过检测荷瘤鼠体重及肿瘤大小研究Pt/BSO-MS-HA的抗肿瘤作用。研究结果:1、通过对Pt/BSO-MS-HA的各项材料学性能检测发现,Pt/BSO-MS-HA纳米颗粒的形貌与MS纳米颗粒相似,HA修饰对MS大小无显著影响,包封率为39%,载铂率为1 8.1%,GSH的存在显著加快了 Pt的释放。2、通过Pt/BSO-MS-HA的体外实验发现:1)Pt/BSO-MS-HA具有更强的癌细胞杀伤作用;2)HA的靶向作用使Pt/BSO-MS-HA更容易被CAL-27细胞摄取;3)BSO是降低CAL-27细胞中GSH的理想药剂。3、通过Pt/BSO-MS-HA的体内实验发现:Pt/BSO-MS-HA具有较小的毒性和优异的体内抗肿瘤作用。研究结论:本文构建合成了一种以MS为载体,表面以HA修饰的共递送抗癌药物DSCP和BSO的纳米载药颗粒并命名为Pt/BProtein CharacterizationSO-MS-HA,以改善细胞内药物递送并增强肿瘤抑制作用。体内外实验表明,Pt/BSO-MS-HA能显著抑制头颈部鳞状细胞癌进展,且系统细胞毒性较小,是一种新的、有潜力的癌症治疗方法,在未来可能有许多重要的生物医学应用。

葡萄(Vitis vinifera L.)是我国主要栽植的果树,鲜食葡萄栽培面积占85%,四川省已成为中国葡萄产业的重要地区。四川盆地弱光、高温、多湿的不利气候条件限制不利于葡萄种植的提质增效。本试验以8年生‘夏黑’葡萄(Vitis Vinifera ‘Summer Black’)为试材,在葡萄果实开始转色时(花后45 d和52 d),分别对‘夏黑’葡萄果穗和叶面用不同浓度的茉莉酸甲酯(Me JA):50 mg·L~(-1)(M50)、100mg·L~(-1)(M100)和150 mg·L~(-1)(M150)进行喷施,同时以等量清水(CK)为对照。研究不同浓度茉莉酸甲酯对‘夏黑’葡萄果实发育过程中果实外观品质、糖酸组分、酚类物质及总花色苷含量的动态变化规律;通过转录组测序和权重基因共表达网络分析来探究了茉莉酸甲酯调控‘夏黑’葡萄生长发育的关键代谢通路和关键基因,分析了茉莉酸甲酯对‘夏黑’葡萄花色苷合成相关基因的影响。以上研究为茉莉酸甲酯在‘夏黑’葡萄的合理使用和后续深入研究提供了理论支撑。主要研究结果如下:(1)三种浓购买PD0325901度的茉莉酸甲酯均能显著改善‘夏黑’葡萄的果实品质。Me JA处理能在一定程度上提升果实的单果重,其中M100在花后73 d时单果重较对照增加10.31%。在果实成熟期时,M50具有最高的可溶性固形物含量,达到17.51%,较对照高出15.20%。‘夏黑’葡萄果皮和果肉中糖组分主要为葡萄糖和果糖,两种糖的含量接近。在成熟时期时,M50中糖组分含量水平最高,果肉中葡萄糖和果糖含量分别较对照高24.67%和18.16%。‘夏黑’葡萄中酸主要成分按含量依次为苹果酸、酒石酸和柠檬酸,且果皮中酸含量较果肉高。在处理组中观察到苹果酸和酒石酸含量出现不同程度的降低,而柠檬酸的含量显著提升。相较于对照,M50果肉酒石酸含量降低21.02%,苹果酸含量降低36.91%,柠檬酸含量提高38.82%。‘夏黑’葡萄果实中的酚类物质主要集中在果皮上,在从转色到成熟的过程中含量缓慢降低。成熟时处理组果皮中的总酚、总黄酮和总黄酮醇含量都较对照高,M50在成熟时总黄酮含量高于对照19.36%。(2)茉莉酸甲酯能提升‘夏黑’葡萄的着色效果,提高总花色苷的含量selleck化学。随着‘夏黑’葡萄果实逐渐成熟,果面的颜色从青色变为深紫黑色。成熟时M50组的果实果面颜色较深,亮度L*值和红色饱和度a*更低,黄色饱和度b*更高。在这一时期,果皮中总花色苷含量依次为M50>M100>M150>CK,其中M50中总花色苷含量为2307.43 mg·kg~(-1),较对照高28.32%。相关性分析表明,总花色苷含量与葡萄糖、果糖和柠檬酸含量表现为极显著正相关关系,与苹果酸和酒石酸含量呈现负相关关系。(biocybernetic adaptation3)对‘夏黑’葡萄果实成熟过程中的果实样品进行转录组学分析,鉴定到了一系列受茉莉酸甲酯调控的差异表达基因及其富集通路。通过对这些差异表达基因进行GO功能富集和KEGG聚类分析后发现:它们首先富集在光合系统效率、植物激素信号转导、淀粉与蔗糖代谢以及类黄酮与黄酮醇的生物合成这些通路上;到成熟期时则更明显的富集于植物激素信号转导、苯丙素生物合成途径以及类黄酮和黄酮醇生物合成途径上。使用WGCNA分析方法,选取了8000个基因构建了13个共表达模块,用于检测其与测定表型指标的关联性。最终确定了同花色苷含量和苹果酸含量关联度极高的绿色、蓝色和棕色3个共表达模块。并通过使用Cytoscape软件,从这些模块中筛选出了关键基因HSP70(VIT＿09s0096g00090)、PSI-O(VIT＿06s0080g00920)和CHI(VIT＿13s0067g03820)。(4)茉莉酸甲酯通过调控‘夏黑’葡萄果实中类黄酮和黄酮醇生物合成代谢通路,从而调控花色苷的合成。经过结合转录组测序和实时荧光定量测定结果后发现,茉莉酸甲酯处理可以上调花色苷生物合成途径中的主要结构基因PAL、CHS、CHI、F3’H、ANS和UFGT,同时上游调控基因MYBA1、MYBA2和MYBA3的表达水平也出现明显上调。

背景与目的职业性三氯乙烯药疹样皮炎(OMDT)是工人职业性暴露于三氯乙烯(TCE)后出现的一种以大面积皮肤、黏膜过敏反应为特征,并伴有多脏器损害的职业性皮肤病。临床上根据病变类型和严重程度将OMDT分为剥脱性皮炎、多形红斑、Stevens-Johnson综合征和表皮坏死松解症四种类型。虽然在TCE职业暴露人群中,OMDT的发生率只有0.25-12.5%,但OMDT起病急、进展快、病死率高,有超过9%的患者死于继发性感染、多脏器衰竭或肝性脑病。我国是OMDT的高发区,已报道的病例数超过了全球病例总数的95%。这使得OMDT成为我国皮肤病和职业病领域的重点、难点问题之一。临床研究显示,除了皮肤黏膜损伤外,OMDT患者还常伴有多脏器损伤,包括免疫性肾损伤。此外,本课题组构建模拟OMDT患者状态的TCE经皮肤致敏小鼠模型结果显示,TCE致敏能引起小鼠肾脏免疫性损伤,致敏阳性小鼠肾小管上皮细胞(TECs)存在大量补体膜攻击复合物(MAC)C5b-9的沉积,提示C5b-9在TCE致敏性肾损伤中的重要作用。但C5b-9引起TCE致敏小鼠肾损伤的确切机制还不清楚。本研究拟通过动物实验结合体外细胞实验探讨C5b-9沉积在TCE致敏引起的TECs损伤中的作用及其机制。方法动物实验:选用6-8周龄BALB/c雌鼠构建TCE经皮肤致敏小鼠模型。适应性喂养一周后剃除小鼠背部被毛、裸露背部皮肤。根据体重将小鼠“S”型分为空白对照(Blank)组、溶剂对照(Vehicle)组和TCE处理组。第1天,各组小鼠分别背部皮下注射100 μl生理盐水(NS)、100 μl溶剂(丙酮:橄榄油:FCA=3:2:5,v-v-v)和 100μl 25%TCE(TCE:丙酮:橄榄油:FCA=5:3:2:10,v-v-v-v)。第4、7、10天为致敏阶段,各组小鼠每天背部皮肤分别涂抹100 μl NS、100 μl溶剂(丙酮:橄榄油=3:2,v-v)和 100 μl 50%TCE(TCE:丙酮:橄榄油=5:3:2,v-v-v)。第17、19天为激发阶段,各组小鼠每天背部皮肤分别涂抹100 μl NS、100 μl溶剂(丙酮:橄榄油=3:2,v-v)和 100 μl 30%TCE(TCE:丙酮:橄榄油=3:5:2,v-v-v)。末次激发24h后根据皮肤是否出现红斑、水肿等过敏反应将TCE组小鼠分为TCE致敏阴性(TCE-)组和TCE致敏阳性(TCE+)组。第21天收集小鼠尿液、血清和肾脏组织。动物实验包括两部分。第一部分:用TCE联合铁死亡抑制剂(Fer-1)处理小鼠。根据TCE致敏模型加设TCE+Fer-1(Fer-1)组,在初次激发和末次激发前腹腔注射Fer-1(5 mg/kg)。internet of medical things根据处理和皮肤过敏反应将小鼠分为Blank、Vehicle、TCE-、TCE+、TCE+Fer-1 致敏阴性(Fer-1-)和 TCE+Fer-1 致敏阳性(Fer-1+)组,研究TECs铁死亡在TCE致敏性肾损伤中的作用。第二部分:用TCE联合补体调节蛋白CD59处理小鼠。根据TCE致敏模型加设TCE+CD59(CD59)组,在初次激发和末次激发前腹腔注射CD59(1.25 mg/kg)。根据处理和皮肤过敏反应将小鼠分为Blank、Vehicle、TCE-、TCE+、TCE+CD59致敏阴性(CD59-)和TCE+CD59致敏阳性(CD59+)组,探讨C5b-9在TCE致敏引起TECs铁死亡中的作用。细胞实验:用补体C5b6作为底物和来源于正常人血清(NHS)中的补体C7、C8和C9在人TECs(HK-2)膜上组装成C5b-9,探讨C5b-9在引起TECs铁死亡的机制。细胞实验包括五个部分。第一部分:用不同浓度C5b6(0、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 μg/ml)和10%NHS处理HK-2细胞,探讨C5b6最适处理浓度并建立C5b-9攻击HK-2细胞模型;第二部分,用C5b6和NHS联合1 μM铁死亡抑制剂Fer-1处理HK-2细胞,探讨C5b-9是否可以引起HK-2细胞铁死亡;第三部分:用C5b6和NHS联合IP3R小干扰RNA(siR)处理细胞,探讨C5b-9引起HK-2细胞细胞质Ca2+超载的原因;第四部分:用C5b6和NHS联合2 μM细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM处理细胞,探讨胞质Ca2+超载在C5b-9引起HK-2细胞线粒体紊乱和铁死亡中的作用;第五部分:用C5b6和NHS联合10 nM线粒体膜转运孔(mPTP)抑制剂环孢素A(CsA)处理细胞,探讨mPTP开放在C5b-9引起HK-2细胞铁死亡中的作用。结果通过皮肤过敏反应评分发现,Blank和Vehicle组小鼠背部皮肤未观察到明显红斑和水肿,致敏率为0。TCE、Fer-1和CD59组各有11、10和8只小鼠背部皮肤出现不同程度水肿或红斑,致敏率分别为45.83%(11/24)、43.47%(10/23)和42.11%(8/19),各组之间致敏率差异无统计学意义。对TCE致敏小鼠肾皮质研究发现,TCE致敏显著升高小鼠肾小管中与脂质过氧化有关的酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(ACSL4)和环氧合酶(COX2)的表达水平,而降低谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和谷胱甘肽(GSH)水平。同样地,TCE致敏阳性小鼠肾脏非血红素铁水平、ROS及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(4HNE)水平显著升高,且4HNE主要表达于TCE致敏阳性小鼠肾小管。电镜观察发现TCE致敏阳性小鼠TECs线粒体嵴减少甚至消失、线粒体出现空泡样变性。而铁死亡抑制寻找更多剂Fer-1预处理能显著改善TCE致敏引起的这些改变。这些结果说明TCE致敏能引起小鼠肾小管铁死亡。对肾小管损伤指标的分析发现,Fer-1预处理能显著减轻TCE致敏引起的肾小管空泡样变性并降低TCE致敏阳性小鼠血清和尿液中α1-微球MK-2206分子式蛋白(α1-MG)、β2-MG、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)和肾损伤分子-1(Kim-1)的水平。这暗示肾小管铁死亡参与了 TCE致敏引起的小鼠肾小管损伤。本研究同样发现TCE致敏能引起补体膜攻击复合物C5b-9在肾小管特异性沉积,而用外源性补体调节蛋白CD59预处理干扰C5b-9在肾小管的合成后,TCE致敏引起的铁死亡相关指标ACSL4、COX2、GPX4、非血红素铁、GSH、MDA、ROS和4HNE改变及线粒体损伤都明显改善。同样地,CD59还减轻了 TCE致敏引起的肾小管结构和功能损伤。这暗示着肾小管特异性C5b-9沉积可能在TCE致敏引起的小鼠肾小管细胞铁死亡和小管损伤中起重要作用。此外,在体外用C5b-9处理HK-2细胞同样发现,C5b-9能引起HK-2细胞活力降低、GSH耗竭、脂质过氧化产物堆积和细胞内Fe2+水平升高。有趣地是,细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM预处理能显著改善C5b-9引起的HK-2细胞铁死亡。为探讨Ca2+在C5b-9引起肾小管铁死亡中的作用,我们检测了内质网Ca2+转运体IP3R的激活情况。结果发现,TCE致敏阳性小鼠肾脏IP3R被激活,而CD59预处理能阻断IP3R的激活。此外,在C5b-9处理的HK-2细胞中也同样发现了 IP3R水平的升高。深入研究发现,TCE致敏能引起胞质内Ca2+水平升高,激活线粒体Ca2+单向转运体MCU,导致线粒体膜电位去极化和线粒体氧化磷酸化相关蛋白(OXPHOS)水平的降低,而CD59预处理能减轻这些异常的改变。体外实验同样发现,C5b-9能引起HK-2细胞Ca2+超载并激活MCU,导致线粒体膜电位去极化和OXPHOS的降低。为研究IP3R在这系列反应中的作用,我们用siR干扰IP3R的表达。结果发现,IP3R siR预处理后,C5b-9引起的线粒体Ca2+超载和线粒体损伤都被减轻。此外,IP3R siR处理能减轻C5b-9引起的细胞活力的降低、GSH的耗竭、脂质过氧化物的堆积及细胞内Fe2+的升高。这说明IP3R激活引起的细胞内Ca2+超载和线粒体损伤在C5b-9介导的TCE致敏小鼠肾小管铁死亡中发挥重要作用。为进一步研究细胞质Ca2+超载是如何引起线粒体紊乱和铁死亡的,我们检测了线粒体mPTP的开放情况。结果发现,在TCE致敏阳性小鼠原代TECsmPTP被明显活化,而CD59预处理后mPTP活化情况被有效遏制。同样地,mPTP在C5b-9处理的HK-2细胞也明显被激活。此外,细胞内Ca2+螯合剂BAPTA-AM不仅能有效阻断C5b-9引起的mPTP活化,还能减轻C5b-9引起的线粒体去极化程度。进一步研究发现,mPTP活化被CsA抑制后,C5b-9引起的线粒体膜电位去极化和OXPHOS相关蛋白的降低也被显著减轻。此外,C5b-9引起的细胞活力的降低、GSH的耗竭、脂质过氧化物的堆积和游离Fe2+的升高也被CsA显著改善。这些结果说明mPTP的开放在C5b-9引起的线粒体紊乱和铁死亡中起重要作用。结论根据以上研究结果,本文得出以下结论:肾小管特异性C5b-9沉积通过激活内质网Ca2+转运体IP3R引起细胞内Ca2+超载、mPTP异常开放和线粒体损伤,最终介导TCE致敏小鼠TECs铁死亡和肾损伤。