MAPK信号通路

目的:探讨血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素蛋点击此处白8(Betatrophin)与老年非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者发病的关系。方法:选取2019年4月至2021年4月来我院就诊的216例老年人为研究样本，经临床诊断、腹部B超检查结果分为NAFLD组(110例)与对照组(肝脏脂肪含量<9.15%的健康者，106例),收集2组人员的ACE、Betatrophin、血脂、血糖、肝功能等生化指标，分析老年NAFLD患者发病的影响因素及ACE、Betatrophin与各生化指标的相关性。结果:与对照组相比较，NAFLD组患者的ACE、Betatrophin、TG、TC、LDL-C、ALT明显升高(P<0.05),而HDL-C明显下降(P<0.05)。回归分析显示，ACE、Betatrophin、TG、ALP是老年患者NAFLD发生的独立危险因素(OR分别bioanalytical accuracy and precision为2.305、3.111、6.841、2.214,均P<0.05)。Pearson相关分析显示，ACE分别与TG、FBG、HbA1c、ALP呈正相关(r分别为0.525购买Alisertib、0.373、0.312、0.498,均P<0.05);Betatrophin仅与TG呈正相关(r=0.594,P<0.05);ACE与Betatrophin成弱正相关(r=0.293,P=0.048)。结论:ACE、Betatrophin在老年NAFLD患者中均明显升高，二者均是老年NAFLD发病机制的主要因素。

目的:探讨达格列净在棕榈酸诱导肾小球足细胞MPC5的细胞模型中Captisol IC50细胞焦亡的作用及机制。方法:通过不同浓度PA诱导细胞高脂模型,Western blot检测NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白水平的变化;将细胞分为Con、Con+Dapa、PA、PA+Dapa组,Western blot检测加入达格列净处理后,NLRP3ribosome biogenesis、Caspase-1、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白水平及m RNA水平的变化;将细胞分为Con、Con+HO-1、PA、PA+HO-1组,向MPC5细胞中转染过表达质粒载体p CDNA3.1-ho-1:t2a:egf进行处理,Western blot检测相关蛋白如NLRP3、GSDMD、Caspase-1、HO-1等蛋白及m RNA水平变化。结果:建立PA诱导的细胞高脂模型,Western blot检测出NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ASC等蛋白表达在PA诱导下表达上调,在PA0.2 m M浓度时达到高峰;当加入Dapa进行处理时,与PA组相比,NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白表达及m RNA水平显著下调,HO-1蛋白表达及mGDC-0068 RNA明显上调;在转染过表达HO-1后,与对照组相比,Western blot检测出NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ASC等焦亡相关因子表达上调,而HO-1蛋白表达下调,q RT-PCR结果与其结果一致。与PA组相比,NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白表达及m RNA水平显著下调,HO-1蛋白表达及m RNA明显上调。结论:PA诱导细胞焦亡,加入达格列净处理后抑制焦亡相关因子的表达,减轻细胞焦亡;过表达HO-1抑制PA诱导MCP5细胞焦亡相关因子的表达也减轻焦亡;达格列净可能是通过介导HO-1表达抑制细胞焦亡。

目的:探讨达格列净在棕榈酸诱导肾小球足细胞MPC5的细胞模型中Captisol IC50细胞焦亡的作用及机制。方法:通过不同浓度PA诱导细胞高脂模型,Western blot检测NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白水平的变化;将细胞分为Con、Con+Dapa、PA、PA+Dapa组,Western blot检测加入达格列净处理后,NLRP3ribosome biogenesis、Caspase-1、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白水平及m RNA水平的变化;将细胞分为Con、Con+HO-1、PA、PA+HO-1组,向MPC5细胞中转染过表达质粒载体p CDNA3.1-ho-1:t2a:egf进行处理,Western blot检测相关蛋白如NLRP3、GSDMD、Caspase-1、HO-1等蛋白及m RNA水平变化。结果:建立PA诱导的细胞高脂模型,Western blot检测出NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ASC等蛋白表达在PA诱导下表达上调,在PA0.2 m M浓度时达到高峰;当加入Dapa进行处理时,与PA组相比,NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白表达及m RNA水平显著下调,HO-1蛋白表达及mGDC-0068 RNA明显上调;在转染过表达HO-1后,与对照组相比,Western blot检测出NLRP3、Caspase-1、IL-1β、ASC等焦亡相关因子表达上调,而HO-1蛋白表达下调,q RT-PCR结果与其结果一致。与PA组相比,NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-18、IL-1β、ASC等焦亡相关蛋白表达及m RNA水平显著下调,HO-1蛋白表达及m RNA明显上调。结论:PA诱导细胞焦亡,加入达格列净处理后抑制焦亡相关因子的表达,减轻细胞焦亡;过表达HO-1抑制PA诱导MCP5细胞焦亡相关因子的表达也减轻焦亡;达格列净可能是通过介导HO-1表达抑制细胞焦亡。

目的：研究青少年特发性脊柱侧凸(ad购买Liraglutideolescent idiopathic scoliosis, AGSK1349572化学结构IS)患者椎旁肌病理改变，并进一步探讨抗肌萎缩蛋白(Dystrophin)在该病中的表达情况及其与病因的关系。方法：收集2018年11月至2019年8月于北京大学第三医院诊断为AIS并接受后路侧弯矫形手术，术中行凹侧顶椎椎旁肌活检患者18例。对肌肉活检组织进行规范化处理并切片进行常规苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、多种组织化学染色以及抗肌萎缩蛋白各亚型、肌球蛋白、主要组织相容性复合体1(major histocompatibility complex 1,MHC-1)、CD4、CD8、CD20、CD68抗体的免疫组织化学染色及结果判读分析。此外，根据Cobb角大小(≥55°或<55°)和Nash-Moe分类将活检标本分为不同组别，进行相应病理改变的组间差异统计学比较。结果：18例患者中，重度AIS组(Cobb角≥55°)8例，轻度AIS组(Cobb角<55°)10例，两组患者椎旁肌均出现不同程度萎缩、变性，Dystrophin-3的免疫组织化学染色均不同程度缺失且表达模式异常。两组活检肌纤维的Dystrophin-2的免疫组织化学染色切片中的表达模式存在显著差异，重度AIS组的Dystrophin-2表达异常或缺失更显著。根据Nash-Moe分型分组，患者椎旁肌的Dystrophin-2表达模式也有显著差异，表现为侧凸程度越重，Dystrophin-2表达异常越显著。此外，椎旁肌肉组织的肌肉和肌腱中存在CD4~+细胞和CD8~+细胞的浸润，而CD20~+细胞为阴性。全部患者椎旁肌均有部分肌纤维呈MHC-1肌膜阳性表达。结论：AIS患者椎旁肌活检的组织学具有相似的特征性改变，抗肌萎缩蛋白的表达不同程度降低或缺失，并且与脊柱侧凸程度有一定相关性，提示抗肌萎缩蛋白功能障碍在脊柱侧凸的发生和发展中具有一定的意义。同时，AIS的炎症改变以T细胞浸润为主要Redox mediator表现，炎症细胞浸润、MHC-1表达与抗肌萎缩蛋白异常表达之间似有一定的相关性。沿此结果进一步的研究可能为AIS的诊断和针对椎旁肌病变的治疗开辟新的思路。

目的 对较为罕见的妊娠相关子宫炎性肌纤维母细胞瘤(uIMT)临床特点、病理形态学特征、免疫组化、分子病理特征、鉴别诊断及相关治疗等方面进行归纳总结，以期提高对该肿瘤的认知。方法 以“炎性肌纤维母细胞瘤、子宫、妊娠、胎盘”为中文关键词，以“inflammatory myofibroblastic tumor, uterus,FUT-175体内 pregnancy, placenta”为英文关键词，检索PubMed和中国知网数据库1998-09-01-2022-11-30相关文献。纳入标准：(1)妊娠相关uIMT相关研究；(2)胎盘炎性肌纤维母细胞瘤(IMT)相关研究。occult HBV infection排除标准：(1)与本研究相关性较小及质量较低的研究；(2)内容相似或重复的文献。最终纳入28篇文献(中文2篇，英文26篇)。结果 妊娠相关uIMT临床症状不明显，确诊和鉴别诊断需依据组织病理学、免疫组化及分子检测。治疗方式尚未达成共识，妊娠期可严密随访观察，妊娠后再行手术治疗。若妊娠期症状明显，应及时终止妊娠。有生育需求的患者，若肿块娩出后未发现残留，密切随访后可再次妊娠。该病预后良好。结论 妊娠相关uIMT是一种罕见的间叶性肿瘤，深入了解其临床特征、组织病理表现、免疫组化和分子病理特点，有助于提高对该肿瘤的诊断及鉴别诊断水平。此类疾病的诊治规https://www.selleck.cn/products/lee011.html范需更深入的探讨。

目的:肾损害为多发Entinostat说明书性骨髓瘤的严重并发症,部分患者于多发性骨髓瘤初诊时就出现肾脏受累。肾功能衰竭的出现严重影响多发性骨髓瘤患者的预后,因此早期发现,早期预防,明确患者肾脏损害程度及个体化治疗尤为重要immunity to protozoa。通过前期研究筛选出的2种miRNA分别为miRNA-155、miRNA-483。对比多发性骨髓瘤不同程度肾脏损伤组与健康对照组的差异表达。分析两者的表达水平与多发性骨髓瘤患者的临床特征的相关性。研究血清miRNA-155和miRNA-483表达水平对多发性骨髓瘤合并不同程度肾损害的诊断价值,预测多发性骨髓瘤合并不同程肾脏损害进展速度,为精确的临床诊断以及个体化治疗提供理论依据。方法:该研究纳入2021年7月至2022年11月就诊于济宁市第一人民医院血液内科、肾内科、重症医学科、急诊科的新确诊多发性骨髓瘤患者39例,根据肾功能情况分为肾功能正常组、轻至中度肾损害组、中至重度(包括重度)肾损害组,选取同期于我院体检的17例健康者作为正常对照组。收集健康对照组及病例组清晨空腹静脉血,离心后保留上层血清,实时荧光定量聚合酶链反应用于检测上述miRNA,计算Ct值,结合本研究所纳入的病例组临床资料及实验室检查进行统计学分析。结果:1、表达差异:miRNA-155在病例组三组中有上调趋势;miRNA-483在MM合并中至重度(包括重度)组中明显上调,而在其他三组中的表达无显著性差异。2、相关性分析:miRNA-155相对表达量与血尿素、血尿酸、羟丁酸脱氢酶、乳酸脱氢酶水平呈正相关;miRNA-483相对表达量与血尿素、血尿酸水平呈正相关。3、Logistic回归分析:血清miRNA-155表达水平对MM合并肾损害程度的影响显著,其表达水平越高MM肾合并损害程度加重一个等级的概率也越大。4、敏感性和特异GDC-0973细胞培养性:miRNA-155、miRNA-483诊断MM合并中至重度(包括重度)肾损害的曲线下面积分别为0.759、0.733,miRNA-155诊断MM合并轻至中度肾损害的曲线下面积为0.800。5、联合指标对MM合并不同程度肾损害的诊断:当miRNA-155、血β_2微球蛋白两指标联合时对MM合并轻至中度肾损害诊断的敏感性及特异性高于两者的单独诊断;当miRNA-155、miRNA-483、血尿素三个指标联合对MM合并中度至重度(包括重度)诊断的敏感性及特异性高于三者单独诊断。结论:血清miRNA-155、miRNA-483有可能是诊断MM合并不同程度肾脏损害的潜在生物标志物,且两者联合β_2微球蛋白或血尿素有更高的诊断效能。

目的 探讨血清腺苷脱氨酶（ADA）、铁蛋白、β_(2-)微球蛋白（β_(2-)MG）对淋巴瘤患者病情严重程度判断及相关Compound 3性分析。方法 选取2022年1月至2022年6月江西省肿瘤医院收治的60例淋巴瘤患者作为观察组，选取60名同期于江西省肿瘤医院进行健康体检且体检结果正常者作为对照组，针对淋巴瘤患者与正常者的血清腺苷脱氨酶（ADA）、铁蛋白、β_(2-)微球蛋白（β_(2-)MG）进行分析，探究其与淋巴瘤之间的相关性。结果 观察组的铁蛋白、血清β_(2-)MG、血清Trichostatin A溶解度ADA水平均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。Ⅰ～Ⅳ期患者机体铁蛋白、血清β_(2-)MG、血清ADA水平呈现随病程分期逐渐递增的趋势，Ⅳ期最高，差异有统计学意义Median speed（P<0.05）。Spearman双变量分析结果显示铁蛋白、血清β_(2-)MG、血清ADA均与淋巴瘤病情严重程度关系密切，三种因素均与淋巴病情严重程度呈正相关，即铁蛋白、血清β_(2-)MG、血清ADA指标越高，淋巴瘤病情越严重，患者的健康情况越差。结论 淋巴瘤患者病情越严重，机体铁蛋白、血清β_(2-)MG、血清ADA指标越高，并且该种因素与病情之间存在正相关，能够辅助进行淋巴瘤病情严重程度的诊断，基于其指标水平变化明确患者的预后情况，具有显著的应用价值。

目的:探讨CT影像组学预测弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)一线化疗疗效的潜在价值。方法:收集2013年1月至2018Canagliflozin使用方法年5月在山西省肿瘤医院诊治的DLBCL患者的治疗前CT图像和临床资料,根据Lugano 2014疗效评价标准,分为难治性患者(73例)和非难治性患者(57例)。基于患者化疗前的CT图像,每例患者提取850个CT影像组学特征。采用最小绝对收缩与选择算法、单因素和多因素logistic回归分析筛选出与DLBCL一线化疗疗效相关的临床因素和CT影像组学特征,分别建立影像组学模型和列线图模型。采用受试者工作特征曲线(ROC)、校准曲线和临床决策曲线评价模型预测DLBCL一线化疗疗效的临床价值。结果:基于患者化疗前CT图像,每例患者各提取850个CT影像组学特征,筛选出6个与DLBCLBerzosertib供应商一线化疗疗效高度相关的CT影像组学特征,其中一阶特征1个、灰度共生矩阵特征1个、灰度依赖矩阵特征3个、邻域灰度差矩阵特征1个,建立相应的影像组学模型,其在训练集和验证集中的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.82和0.73。联合有效临床因素(Ann Arbor分期、血清LDH)和影像组学评分建立列线图模型,其ROC曲线在训练集和验证集中的AUC分别为0.95和0.91。校准曲线Membrane-aerated biofilter和临床决策曲线显示,列线图模型具有良好的一致性且在DLBCL的疗效评估方面具有较高的临床价值。结论:基于临床因素和影像组学特征建立的列线图模型在预测DLBCL一线化疗疗效方面具有潜在的临床价值。

研究背景食管癌(esophageal carcinoma,EC)是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率分别排第七和第六名。食管癌有两种常见的组织学类型,分别为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)和食管腺癌(esophaselleck合成geal adenocarcinoma,EAC),在中国主要发病类型为ESCC。目前放疗依然是ESCC的主要治疗方式,并取得了较为显著的治疗效果。但是,部分患者因为放疗反应性低而导致治疗失败,进而出现肿瘤局部复发和远处转移。因此,在深入探索影响放疗疗效的分子机制基础上,积极寻求潜在的增敏靶点和协同治疗剂等,都是国内外关注的热点和难点问题。细胞焦亡是一种依赖于 Caspase(cysteinyl aspartate specific proteinase)和 Gasdermin家族蛋白的程序性细胞死亡方式,表现为细胞不断胀大直至细胞膜破裂,通过释放诸多细胞因子,继而激活免疫系统,导致免疫炎性反应,并参与肿瘤的发生与发展过程。发生细胞焦亡的肿瘤细胞能够增强肿瘤相关巨噬细胞的吞噬作用以及肿瘤浸润NK和CD8+T淋巴细胞的数量和功能。经典的细胞焦亡途径有炎性小体参与,伴有Gasdermin D(GSDMD)裂解和IL-1β、IL-18的释放。在非经典细胞焦亡途径中,Caspase-4/5/11的上游感知复合物缺失,这些Caspase可以不需要其他保内受体,直接与细胞内脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)结合,从而被激活。激活的 Caspase-4/5/11 也可以裂解 GSDMD,进而发生寡聚化并由细胞内转移到细胞膜上,并最终形成质膜孔。除了以上两种细胞焦亡机制外,最近有研究发现了一种新的通过GSDME介导的细胞焦亡途径:特定的刺激导致Caspase-3的激活,而之前Caspase-3通常被认作是参与凋亡的底物,活化的Caspase-3诱导Gasdermin E(GSDME)的裂解,具有打孔活性的GSDME-N端参与质膜孔的形成,也可导致细胞焦亡。X射线可以导致DNA双链断裂并导致细胞死亡,包括凋亡、坏死、自噬性死亡等。但是,细胞焦亡在ESCC放疗中的作用目前尚未有报道,是有必要进行研究的重要方向之一。安罗替尼作为我国新自主研发的一种小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI),对血管内皮细胞生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)、血小板衍生生长因子受体(platelet derived growth factor receptor,PDGFR)、成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor,FGFR)、c-Kit 等靶点有着良好的抑制效果,并具有抑制肿瘤生长发展以及抗肿瘤血管生成的多重作用。安罗替尼单药在ESCC二线及以上治疗中保持Ⅱ级推荐2A类证据。同时,一项单臂、多中心探索性临床研究(ALTER-E002)数据显示,安罗替尼联合顺铂和紫杉醇的方案可以使晚期ESCC患者获益。然而,安罗替尼联合X射线在ESCC治疗中的研究较少。TKI可以使肿瘤血管正常化,改善肿瘤放疗后乏氧微环境并增加肿瘤细胞死亡。细胞焦亡作为免疫原性细胞死亡方式,发生细胞焦亡的肿瘤细胞可以促进CD8+T细胞的募集,我们通过对TCGA数据库中ESCC的RNA-seq数据分析发现,在ESCC中VEGF、FGF、PDGF的表达与Cbioactive glassD8+T细胞的浸润程度呈负相关,而安罗替尼是VEGFR、FGFR、PDGFR的多靶点抑制剂,通过阻断上述信号通路可能起到增强细胞焦亡,从而提高ESCC治疗效果的作用。根据上述理论的数据分析结果,我们推测安罗替尼联合X射线也可能具有协同治疗ESCC的作用,或者通过药物的联合应用,降低X射线的剂量,继而减少放射抵抗和副作用。本研究重点探究了细胞焦亡介导X射线或安罗替尼治疗ESCC的作用与机制,以及安罗替尼通过增强细胞焦亡发挥协同X射线治疗ESCC的作用,并取得了预期的研究结果。方法1.探究ESCC中X射线与细胞焦亡的关系及作用机制1.1 检测X射线能否引起细胞焦亡:光学显微镜观察时间梯度和剂量梯度下,X射线照射后对细胞焦亡的影响,流式细胞术和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测进细胞焦亡相关指标。利用透射电镜检测X射线照射后细胞膜打孔情况。1.2 检测GSDMs的基础表达和X射线照射后的活化:利用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库检索Gasdermin家族蛋白在食管癌组织中的表达,并用Western blot检测ESCC细胞系中表达。NSC 125973 MWWestern blot检测ESCC细胞X射线照射后GSDMD和GSDME的活化。1.3 验证GSDME对X射线照射后细胞焦亡的影响:构建GSDME过表达和敲降细胞系,10 Gy X射线照射后利用Western blot和光学显微镜检测GSDME表达水平对ESCC细胞焦亡的影响。并利用Western blot进一步检测时间梯度和剂量梯度下,GSDME的活化。1.4 检测GSDME表达水平对ESCC放射敏感性的影响:基于剂量梯度下的克隆形成实验,利用单击多靶模型绘制生存曲线,检测GSDME对放射敏感性的影响。构建Ctrl-Eca109或shGSDME-Eca109裸鼠皮下移植瘤模型,相应组别给予X射线照射,计算肿瘤体积并绘制生长曲线;IHC检测Ki-67和DNA损伤指标γ-H2AX,在体内验证GSDME对放射敏感性的影响。1.5 临床病例组织和信息获取:收集不能耐受或者不愿选择化疗的晚期ESCC单纯放射治疗患者,治疗前的胃镜病理组织切片和临床病例相关资料。免疫组化(immunohistochemistry,IHC)评价GSDME的表达;检测ESCC患者接受单纯放射治疗3个月后的效果与GSDME表达的关系,用卡方检验来计算P值,;Kaplan-Meier曲线评估 GSDME 对 OS(Overall Survival,OS)和 PFS(Progression-free survival,PFS)的影响。1.6 鉴定GSDME上游Caspase:应用Caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK后,检测对细胞焦亡的影响,利用Western blot进一步检测Caspase蛋白家族的活化。根据Caspase蛋白的活化情况,构建Caspase-3敲降细胞系,X射线照射后利用Western blot和LDH检测进一步验证GSDME上游调控基因。2.探索细胞焦亡在介导X射线和安罗替尼协同治疗ESCC中的作用2.1 TCGA数据库分析安罗替尼治疗靶点相关因子:从TCGA数据获取ESCC的RNA-seq数据,单个相关性图通过R软件包ggstatsplot实现,使用Spearman的相关分析来描述相关性。2.2 检测安罗替尼对ESCC细胞生物学功能的影响:利用CCK-8细胞增殖曲线和EdU实验检测安罗替尼对ESCC细胞增殖的影响。Transwell实验用于检测ESCC细胞的迁移、Western blot 检测上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子表达,评估安罗替尼对ESCC细胞侵袭和迁移的影响。2.3 体外探索安罗替尼在ESCC中与X射线的协同作用:将ESCC细胞分为对照组、安罗替尼处理组、单纯X射线照射组和安罗替尼联合X射线照射组(以下简称联合治疗组)四组,分别给予不同处理后,克隆形成实验用于检测ESCC细胞的克隆形成能力,反映细胞增殖水平,免疫荧光和Western blot检测γ-H2AX和修复蛋白p-BRCA1。并根据克隆形成实验结果构建Bliss独立模型,评估安罗替尼在体外与X射线的协同作用。2.4 构建ESCC裸鼠皮下移植瘤模型:分别给予X射线照射和安罗替尼处理不同模式组合处理,根据肿瘤体积绘制移植瘤生长曲线,比较联合治疗组的治疗效果;IHC验证Ki-67和γ-H2AX的表达。并根据肿瘤生长情况构建Bliss模型,体内验证安罗替尼与X射线的协同作用。2.5 检测安罗替尼能否引起ESCC细胞焦亡:光学显微镜观察并记录安罗替尼处理后ESCC细胞焦亡典型特征,使用流式细胞术和透射电镜进一步验证。Western blot用于检测细胞焦亡相关指标的活化水平。2.6 检测安罗替尼联合X射线对细胞焦亡的影响:光学显微镜和流式细胞术检测联合治疗后ESCC细胞焦亡情况,Western blot进一步检测各组细胞焦亡相关指标的活化水平。2.7 临床病例组织和信息获取:收集ESCC原发患者的手术肿瘤组织标本,Western blot和IHC评估GSDME的表达;卡方检验用于分析GSDME表达与各临床特征之间的关系;生存曲线利用Kaplan-Meier法分析绘制,评估GSDME表达对OS的影响;单因素和多因素分析基于Cox比例风险模型进行,评估GSDME能够用于预测ESCC患者的预后。结果1.X射线对ESCC细胞焦亡的影响及作用机制1.1 X射线能够诱导ESCC细胞焦亡:在10 Gy X射线照射后96 h,ESCC细胞发生明显的吹泡现象,LDH释放增加,指示细胞焦亡的碘化丙啶(propidium iodide,PI)和膜联蛋白(Annexin V)双阳性的细胞逐渐增多,透射电镜显示细胞胀大,细胞膜完整性被破坏,细胞焦亡孔道形成。证实X射线能够诱导ESCC细胞焦亡,并呈时间依赖性和剂量依赖性,高剂量引起的细胞焦亡更明显。1.2 GSDME介导X射线引起的ESCC细胞焦亡:根据TCGA数据库和Western blot检测Gasdermin家族蛋白结果显示,GSDMD和GSDME在ESCC中表达。10 Gy X射线照射后96 h,GSDME明显活化。构建GSDME过表达和敲降细胞系,细胞形态和Western blot结果显示GSDME表达和ESCC细胞焦亡程度呈正相关。1.3 GSDME的表达水平与ESCC放射敏感性相关:基于梯度剂量X射线的照射下,进行克隆形成实验,构建单击多靶模型并绘制生存曲线结果显示,GSDME表达水平与放射敏感性呈正相关。体内实验证实,相比于对照组,GSDME敲降组X射线照射后移植瘤的生长速度更快,体积更大,并且Ki-67表达增多,γ-H2AX表达减少,敲降GSDME能够降低裸鼠移植瘤的放射敏感性。1.4 GSDME的表达水平与ESCC患者的放疗反应性和预后相关:疗效评估和生存分析结果显示,GSDME的表达影响ESCC单纯放疗患者的疗效和预后。1.5 X射线通过激活Caspase-3活化GSDME,介导ESCC细胞焦亡:应用Caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK结果显示GSDME的活化受抑制,提示GSDME的活化可能受上游Caspase-3的调控。Western blot结果显示,X射线照射后Caspase-3发生活化。对Caspase-3敲降后进行X射线照射,结果显示,X射线能够通过激活Caspase-3活化GSDME,介导ESCC细胞焦亡。2.细胞焦亡介导X射线和安罗替尼协同治疗ESCC的作用2.1 TCGA数据库分析安罗替尼治疗靶点相关因子:TCGARNA-seq数据分析结果显示,安罗替尼治疗靶点相关因子VEGF、FGF、PDGF的表达与CD8+T细胞浸润呈负相关。2.2 安罗替尼抑制ESCC恶性表型:CCK-8和EdU实验结果显示,安罗替尼可以抑制ESCC细胞增殖;transwell实验和Western blot检测EMT相关分子结果显示,应用安罗替尼后,ESCC细胞侵袭迁移能力减弱。2.3 体外探索安罗替尼在ESCC中与X射线的协同作用:克隆形成结果显示,与单用安罗替尼和X射线照射组相比,联合治疗组对ESCC细胞克隆形成能力抑制增加,反映细胞增殖能力降低。Bliss模型结果显示,安罗替尼与X射线在ESCC中存在协同作用。免疫荧光和Western blot检测γ-H2AX和p-BRCA1结果显示,联合治疗组DNA损伤增加,修复减少。上述结果显示安罗替尼能够在体外协同X射线增强ESCC的治疗效果。2.4 体内验证安罗替尼在ESCC中与X射线的协同作用:BALB/c裸鼠皮下成瘤实验结果显示,应用安罗替尼可以增强放疗反应性,移植瘤的生长速度减慢,体积减小。并且Ki-67阳性细胞减少、γ-H2AX表达增多。Bliss独立模型结果显示,安罗替尼能够在体内协同X射线增强ESCC的治疗效果。2.5 安罗替尼能够诱导ESCC细胞焦亡:光学显微镜观察、流式细胞术检测以及透射电镜结果显示,应用1 μM安罗替尼48 h后可以观察到细胞焦亡的发生。Western blot检测细胞焦亡相关蛋白结果显示安罗替尼能够导致GSDME的活化,诱导ESCC发生细胞焦亡。2.6 安罗替尼能够通过GSDME介导的细胞焦亡增强ESCC放疗反应性:细胞形态变化和流式细胞术结果显示,联合治疗组6 Gy/48 h的细胞焦亡即可明显增多。Western blot检测细胞焦亡相关蛋白显示,安罗替尼能够通过GSDME介导的细胞焦亡增强ESCC放疗反应性。2.7 GSDME的表达水平与ESCC患者的预后相关:ESCC患者的手术肿瘤组织切片的IHC染色结果显示,不同患者之间GSDME的表达存在差异,高表达组的病例数为68例,而低表达组的病例数为47例;Kaplan-Meier曲线显示GSDME高表达组的OS更好,单因素和多因素分析结果显示GSDME可以用于预测ESCC患者的预后。结论1.细胞焦亡是介导X射线、安罗替尼,或者两者协同作用的重要共性机制途径。2.X射线通过激活Caspase-3,继而活化GSDME介导ESCC的细胞焦亡。3.GSDME的表达水平影响ESCC放射敏感性,并与ESCC单纯放疗患者的疗效和预后呈正相关。4.安罗替尼抑制ESCC恶性表型,并与X射线在ESCC中发挥协同治疗作用。5.安罗替尼能够诱导细胞焦亡,并且能够通过GSDME介导的细胞焦亡增强ESCC的放疗反应性。6.GSDME低表达与ESCC患者的不良预后相关。

背景:通过当前临床研究表示,传统双联抗血小板治疗(DAPT)仍有左心室血栓、再发心selleckchem梗等许多心血管不良事件发生,尤其是高危患者发生率显著增高,通过长期随访发现,其中近10%的最佳DAPT治疗患者仍然发生重大心血管事件,尤其是左心室血栓的发生率可高达15%,其中急性前壁心肌梗死患者的发病率高达34%-57%,虽在DAPT基础上联合利伐沙班等口服抗凝药物治疗,有效的降低左室血栓形成,但出血风险较DAPT增加3-4倍,相应临床研究表明,在三重抗栓治疗基础上,减少阿司匹林并没有导致Cell Cycle抑制剂缺血事件增加,而且显著降低了出血风险,目前的试验中,提示二联抗凝[维生素K拮抗剂(VKA)加氯吡格雷]治疗急性心肌梗死后的LVT优于阿司匹林三联抗栓治疗。相关研究证实,利伐沙班联合替格瑞洛的效果与DAPT相似,但出血风险较低。近期相关研究证实小剂量利伐沙班联合双联抗血小板药物治疗可有效预防急性前壁心肌梗死LVT的发生,同时没有明显增加出血风险,与此同时,发现临床净获益增加,但应用时间较短(1个月),停药后临床不良事件又发生逆转,此次研究拟评价长时间应用(3个月)替格瑞洛联合小剂量利伐沙班双通道疗法在急性前壁心肌梗死患者的治疗情况,但双通道治疗方案在应用于急性前壁心肌梗死急诊PCI术后患者的预防左心室血栓形成仍缺乏相应的有效性及安全性的证据。目的:本研究通过在行急诊PCI的急性前壁心肌梗死患者中,采用双通道治疗方法预防左心室血栓的形成,通过该前瞻性临床研究,采用随机对照的方法,明确双通道抗栓治疗方案在急性前壁心肌梗死中的应用对于预防左心室血栓形成的安全性和有效性。以及评估DAPT与替格瑞洛联合利伐沙班双通道治疗左心室血栓形成以及心血管MACCE事件影响率。方法:采用随机数字表法,将符合纳入标准的急性前壁心肌梗死急诊PCI的患者分为双通道组和对照组,两组符合纳入标准且不符合排除标准的患者,在入院后起始均给予传统双联抗血小板治疗,与此同时,根据患者血管病变情况,酌情考虑低分子肝素抗凝是否给予;之后双通道组:由于住院期间,部分患者仍需二次PCI处理,故该部分患者二次PCI术后停用低分子肝素抗凝治疗后(若不需二次PCI处理,停用低分子肝素治疗后更换双通道治疗;若术后未给予低分子肝素治疗,则可直接双通道治疗),采用利伐沙班(2.5mg 2/日)联合应用替格瑞洛(90mg 2/日),治疗三个月,再更换为双联抗血小板治疗九个月。对照组:住院期间采用双联抗血小板(阿司匹林100mg+替格瑞洛90mg)治疗1年。在院期间完善PCI术后1周心彩,同时通过微信随访群或电话等方式通知患者按时于术后一个月、三个月于心内科门诊进行定skin biopsy期术后随访,采用心彩观察左心室血栓是否形成,其中术后一个月、三个月随访还包括常规检查、死亡、卒中及TIA、再发心肌梗死、体循环栓塞、血栓不良事件、出血事件等。结果:双通道组与对照组的一般基本信息分析表明:两组患者在年龄、性别、身体质量指数、卒中及TIA病史、高血脂病史、心梗病史、糖尿病病史、高血压病史、吸烟史、Killip分级、PCI史以及其他相关心血管用药等方面差异并无统计学意义。而与对照组的患者相比,双通道治疗预防急性前壁心肌梗死急诊PCI术后发生左心室血栓的概率明显下降,血栓不良事件的发生率明显下降,联合终点事件(血栓栓塞不良事件和临床死亡)发生率明显下降,总体出血事件发生率无统计学意义。结论:1.双通道抗栓治疗能明显降低左心室血栓的形成率;2.双通道抗栓治疗能明显降低血栓不良事件的发生率;3.双通道抗栓治疗能明显降低联合终点事件(血栓栓塞不良事件和临床死亡)的发生率;4.血栓不良事件和临床死亡发生时与传统的双联抗血小板治疗相比总出血事件发生率并无统计学意义;综上所述,双通道抗栓治疗方案在急性前壁心肌梗死中的应用对于预防左心室血栓的形成是安全的且有效的。