MAPK信号通路

野生二粒小麦是栽培四倍体及六倍体小麦的野生祖先种,因其具有籽粒大、蛋白含量高、耐逆性强等优良特性,一直是小麦遗传改良的重要的二级种质库。RNA的N~6-腺嘌呤甲基化修饰,简称为m~6A,是生物体中最保守和最广泛存在的一种RNA修饰方式,在植物器官建成、生长发育、逆境响应等方面均发挥着重要调控作用。但目前,有关野生二粒小麦m~6A相关基因的报道,尤其是参与调控盐胁迫响应的研究还比较少。鉴于此,本研究利用生信分析方法,在全基因组水平鉴定、分析了野生二粒小麦中m~6A调控家族成员;结合其在盐胁迫下的表达特性,构建了共表达网络,鉴定、发掘参与盐胁迫响应的7个耐盐共表达模块和9个核心m~6A调控基因;对关键候选基因TdFIP37功能缺失性突变体的耐盐性进行了鉴定,结合RNA-seq分析,初步明确了其生物学功能;此外,还基于direct RNA sequencing技术分析了盐胁迫下的表达谱和转录特征,初步分析了野生二粒小麦在盐胁迫下的m~6A甲基化特征,为深入揭示m~6A调控野生二粒小麦耐盐性的分子机制奠定了基础。主要研究结果如下:1)野生二粒小麦m~6A调控基因家族的全基因组鉴定。利用HMM search和BLASTP工具在全基因组水平对野生二粒小麦m~6A调控机器的编码器(writer)、读码器(reader)以及解码器(eraser)家族进行了系统鉴定。通过分析,共鉴定到了64个候选基因,包括21个writer,17个eraser和26个reader;系统进化分析可将它们分为3个亚群,每个亚群具有相似的蛋白质结构域和保守基序组成;共线性分析表明,片段重复和多倍体化引起m~6A基因在野生二粒小麦基因组中显著扩增;顺式元件预测发现,MBS、LTR、ABRE等参与响应胁迫和激素调节的顺式作用元件在其启动子大量存在,暗示其可能参与调控了野生二粒小麦逆境响应和生长发育;最后,利用重测序数据,对m~6A基因在四倍体小麦群体中的遗传变异和分化进行分析,其在野生二粒小麦和栽培二粒小麦群体的Pi分别为4.18E-06和3.77E-06,遗传分化指数为0.262,表明在二粒小麦驯化过程中,m~6A基因发生了明显的遗传瓶颈效应。2)盐胁迫相关m~6A调控基因的发掘及其调控网络分析。基于耐盐品系A5和盐敏感品系C2在正常和盐胁迫条件下不同时间点的54个RNA-seq数据集,对上述所鉴定的m~6A基因的在盐胁迫下的表达谱进行了分析,通过时空序列分析,筛选得到13个盐胁迫下差异表达m~6A基因,其中9个上调表达,4个下调表达,初步获得了盐胁迫响应相关的m~6A基因;进一步基于RNA-seq数据构建了共表达调控网络,结合功能富集分析,筛选了7个盐胁迫显著相关的关键共表达模块,挖掘了9个响应盐胁迫关键候选m~6A调控基因,得到了m~6A参与介导的盐胁迫响应相关调控网络。3)Tdfip37的耐盐性鉴定和转录组分析。从四倍体EMS突变体库中筛选到了关键候选基因FIP37的功能缺失性突变体,对其耐盐性进行鉴定,发现相比于野生型,突变体对盐胁迫敏感,耐盐性显著降低;利用RNA-seq对其盐胁迫和正常条件下的表达谱进行分析,发现盐胁迫处理后,Tdfip37突变体的基因表达水平较WT变化更大,共5910个差异表达基因,其中3691个上调DEGs,2219个下调DEGs,且富集到大physical medicine量酶活性、氨基酸代谢、激素响应等参与调控盐胁迫的功能。4)野生二粒小麦在盐胁迫下的m~6A及转录特征分析。利用Nanopore的RNA Direct Sequencing技术,对B5品系响应盐胁迫的m~6A位点及表达谱进行了分析,共鉴定m~6A位点46009个,分布于野生二粒小麦的14条染色体上,其中染色体5A最多,为3918,其次是5B,为3842,其特征基序是ATCTC,发生m~6A甲基化的转录本显著富集到大量响应盐胁迫的通路与功能条目,如植物激素信号转导、高渗盐度反应、钾离子跨膜转运等。同时,还鉴定到了m~5C修饰位点1849585个。关联转录本表达量及m~6A甲基化状态,鉴定得到3356个差异表达转录本经盐胁迫处理后发生甲基化,结合同源基因功能注释筛选响应盐胁迫的关键差异表达转录本68个,并构建蛋白质互作网络。此外,通过DRS测序,还发现了新基因2475个、新转录本26779个,预测到转录因子693个,应用CNCI分析、CPC2、pfam蛋白结构域分析三种方法预测到的共同lncRNA1318个;盐胁迫处理后,pNirogacestat IC50olyA尾长整体BMS-907351纯度水平变高,可变剪切事件数目增加。综上所述,本研究挖掘了野生二粒小麦m~6A调控基因和响应盐胁迫的关键基因模块和核心基因,为揭示m~6A调控野生二粒小麦耐盐性的作用机制,为四倍体小麦和普通小麦的耐盐性遗传改良提供了靶标基因。

列当属根寄生植物的种子在寄主分泌的萌发信号诱导下发芽,这使列当能够特异性地识别和寄生于寄主。在自然环境下,列当与其寄主植物协调生长;而在农田环境中,列当夺取农田作物营养成分,对作物造成严重损害。大多数列当属植物在萌发刺激物独脚金内酯(strigolactones,SLs)的作用下发芽,如弯管列当(Orobanche cernua)寄生于番茄等茄科作物,并对来自番茄根部的主要SLs——列当醇(orobancol,Oro)产生反应,而向日葵列当(Orobanche cumana)专性寄生向日葵(Helianthus annuus),只对其分泌的去氢木香内酯(dehydrocostus lactone,DCL)有反应。向日葵列当发芽后,产生吸器寄生到向日葵根部以汲取营养物质,使植株生长发育受到严重影响。由于列当与向日葵根部相连,导致除草剂防治效果甚微。因此,为了有效地防控列当,我们主要从三个方面来开展研究:列当萌发特异性的调控,向日葵与向日葵列当互作过程,以及油菜素内酯(BR)对列当侵染的缓解作用。取得的主要研究结果如下:1.利用遗传学和基因组学技术研究了KAI2d基因在弯管列当和向日葵列当的萌发特异性中的作用。我们测定了两种列当萌发前和萌发后这两个阶段的转录组,以鉴定与萌发刺激物感知有关的基因。弯管列当含有6个KAI2d基因(编号为Orce KAI2d1-6),而向日葵列当含有8个基因(Orcu KAI2d1-8)。随后对94个F2杂交系的DNA进行基因分型,鉴定KAI2d基因,并与发芽表型相关联。实验结果表明KAI2d基因是连锁的,而Orce KAI2d2可能是萌发刺激物Oro的受体,对去氢木香内酯(DCL)的反应与O.cumana KAI2d基因的遗传表达有关。将每个KAI2d基因在拟南芥kai2突变体中表达,并检测其在SLs(包括Oro、5-deoxystrigol和人工合成独脚金内酯类似物GR24)或DCL作用下恢复突变表型的能力。其中一个O.cernua基因Orce KAI2d2在这个系统中对全部SLs均有响应,但对DCL没有响应。O.cumana基因Orcu KAI2d5(Orce KAI2d2的同源基因)也对SLs有响应,但对DCL没有响应,且未发现特异性识别DCL的KAI2基因。综上所述,我们已鉴定出O.cernua中可能的SL受体,并发现KAI2d蛋白既不是DCL的受体,也没有参与其他相关的信号通路。2.对易感向日葵品种TK0409和抗性品种JY207与向日葵列当互作过程进行了研究。我们发现两品种向日葵分泌的萌发刺激物之间不存在差异,这表明向日葵的抗性可能来源于自身的防御反应。在感性互作过程中,向日葵列当与向日葵的维管系统建立了完整的连接,导致植物生长迟缓,而这在抗性互作过程中并未观察到。向日葵列当的成功侵染涉及一系列相互作用,包括降解酶破坏寄主细胞壁,通过利用寄生植物的转运蛋白和抑制向日葵中的营养同化和/或转运将寄主根从库转变成了为寄生植物提供营养的源,以及通过病程相关蛋白干扰寄主防御系统。相比之下,向日葵抗性品种则通过成功识别向日葵列当的效应子而产生防御反应。通过转录组测序PF-02341066生产商和分泌组预测的方法,我们从向日葵列当中成功克隆了28个候选效应子基因。然后借助基因瞬时表达技术,进一步筛选出了5个可以抑制植物防御反应的效应子基因,并成功对其中3个效应子基因进行了亚细胞定位,结果显示它们在细胞中的作用位点均为细胞核和质膜。本研究表明寄生互作期间防御系统激活的速度、程度和效率可能与向日葵抗性有关,为向日葵抗性育种和列当防治提供重要的遗传资源。3.明确了外源BR预处理对列当侵染下向日葵植株的生长及生理生化的调控作用。向日葵被列当寄生后,株高和生物量显著下降,ROS和MDA积累增加,酶活性也相应发生改变,叶肉和根尖细胞结构均遭到严重损伤。用0、1、10和100 n M BR浸种预处理后,与单独列当寄生相比,外源施加BR向日葵生物量显著增大,而列当寄生数Inflammation and immune dysfunction目、鲜重、干重分别显著减少77.8%、90.8%和74.2%。向日葵中GSH含量、GR活性和GSH/GSSG比值也显著提高;同时,MDA含量和ROS水平显著降低,SOD和POD活性显著增加,APX和CAT活性KPT-330浓度降低。透射电镜(TEM)观察向日葵细胞超微结构,结果显示单独列当寄生下向日葵叶肉细胞叶绿体膨胀变形、淀粉粒增加,根尖细胞膜通透性变大、细胞核解体;而BR预处理改善了列当侵染后的向日葵细胞超微结构。同时对相关基因进行qRT-PCR分析发现,与单独列当侵染相比,10n M BR处理后BRI1、BR6OX2、BAK1、BSK1、BSK2等油菜素内酯的响应基因表达量显著上调。这些结果表明BR通过提高抗氧化酶活性、降低ROS积累、改善细胞超微结构和调控相关基因的表达,进而减轻向日葵列当侵染对向日葵的危害,为寄生杂草的防控提供了新的思路。

目的 探讨龙眼蛋白对C57BL/6小鼠及RAW264.7巨噬细胞的炎症因子影响及作用机制。方法 采用反向色谱-质谱法(reverse-phase liquid chromatography-mass spectrometry,RPLC-MS)鉴定龙眼蛋白的组成。采用100 mg/(kg·d)和200 mg/(kg·d)龙眼蛋Bio-active comounds白腹腔注射C57BL/6小鼠,酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)SCH727965细胞培养测定小鼠血液炎症因子的表达,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法染色分析肺部炎症病理反应;用0.2、0.4、0.6 mg/mL龙眼蛋白处理小鼠RAW264.7巨噬细胞,噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]法测定细胞活力,实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)和ELLorlatinib供应商ISA检测炎症因子表达,蛋白质免疫印迹法(western blot,WB)分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activatedprotein kinase,AMPK)/核因子κB (nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路相关蛋白表达情况。结果 通过RPLC-MS结合数据库检索,共鉴定到肽段覆盖率在30%以上的蛋白质25种。腹腔注射100 mg/(kg·d)龙眼蛋白使小鼠肺部产生炎症病理反应,小鼠血清中的炎症因子[血清淀粉样蛋白A (serum amyloid A,SSA)、超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein,hs-CRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)]均显著升高。0.2 mg/mL龙眼蛋白处理使RAW264.7细胞IL-6、白细胞介素-8 (interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor α,TNF-α)的m RNA和蛋白表达均呈剂量依赖式上升,AMPK磷酸化水平表达下调,p65磷酸化水平表达上调。结论 龙眼蛋白能够促进小鼠和RAW264.7巨噬细胞的炎症反应,其作用机制可能是龙眼蛋白促进了AMPK/NF-κB信号通路相关炎症因子的表达。

羊草在我国内蒙古草原广泛分布，是重要的IACS-10759生产商乡土牧草，然而关于羊草矿质营养吸收的分子机制尚未受到广泛关注。关于ZIP家族在植物吸收和Gadolinium-based contrast medium转运必需微量元素和重金属过程中的作用，在模式植物和农作物中研究较多。本研究从羊草转录组数据库中筛选到一个与ZIP同源的基因Lc206852，发现其与拟南芥ZIP家族的Zn2+转运蛋白AtZIP1亲缘关系较近，因此将其命名为LcZIP1。利用TMHMM Server v. 2.0进行跨膜域分析发现，LcZIP1是一种跨膜蛋白，有9个跨膜域，与禾本科短柄草属植物ZIP亲缘关系最近。将LcZIP1-GFP瞬时转染烟草叶表皮细胞和羊草叶原生质体进行亚细胞定位，发现LcZIP1定位于内质网。通过实时荧光定量PCR分析发现，缺铁、高铁和高锌环境可诱导LcZIP1表达，表明LcZIP1参与环境中Zn和Fe营养水平的响应。GSI-IX价格最后通过酵母功能互补试验证明，LcZIP1在低铁条件下能够使低铁敏感酵母突变体（?fet3/?fet4）恢复生长，暗示LcZIP1具有Fe2+转运功能。以上结果对日后开发和利用微量元素强化农作物品质具有一定的参考价值。

目的 研究质子泵抑制剂（PPIs）的使用与重症缺血性脑卒中患者短期、长期死亡风险的关联。方法 基于美国重症监护医学信息数据库Ⅲ（MIMIC-Ⅲ），纳入年龄≥18岁、首次入住重症监护病房（ICU）并诊断为缺血性脑卒中的患者。根据住院期间是否使用过PPIs（泮托拉唑、兰索拉唑和奥美拉唑），将患PCI-32765半抑制浓度者分为PPIs组和非PPIs组。对比2组基线数据后，采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险回归模型分析使用PPIs与重症缺血性脑卒中患者ICU死亡风险、30 d死亡风险、90 d死亡风险的关联。结果 共纳入1 015例患者，其中PPIs组402例，非PPIs组613例。基Hospice and palliative medicine线资料显示，重症缺血性脑卒中患者的ICU死亡率、30 d死亡率、90 d死亡率分别为15.37%,13.60%,20.10%。Kaplan-Meier生存曲线表明，相对于非PPIs组，PPIs组的ICU死亡风险较低（P=0.002）。Cox比例风险回归模型在调整多个变量后的结果显示，PPIs组相对于非PPIs组的ICU死亡风险比为0.671 9 [95%CI(0.478 8,0.942 8),P=0.021]，但2组患者30 d和90 d的死亡风险差异均无统计学意义（P> 0.05）。结论 重症缺血性脑卒中患者中，使用PPIs可能会有效降低Imidazole ketone erastin患者的ICU死亡风险，但对患者的30 d死亡风险和90 d死亡风险没有改善作用。

蒙古栎(Quercus mongolica Fisch.ex Ledeb.)属于壳斗科(Fagaceae)栎属(Quercus)高大乔木,作为中国栎类树种中最抗旱树种,对蒙古栎抗旱方面的研究对中国高纬度地区保持森林面积及维护生态安全具有重大意义。本研究基于蒙古栎基因组数据,挖掘鉴定出蒙古栎R2R3-MYB转录因子家族,并以20%浓度的PEG6000溶液模拟干旱胁迫处理蒙古栎幼苗,探究蒙古栎R2R3-MYB转录因子家族中与抗旱Liraglutide浓度相关基因在干旱胁迫条件下的表达水平,选择干旱胁迫下与ABA诱导的气孔关闭相关基因Qm MYB6、Qm MYB23及Qm MYB41,构建了它们的植物重组表达载体,并在烟草中验证功能。主要结果如下:(1)蒙古栎R2R3-MYB基因家族有76个成员,命名为Qm MYB1-Qm MYB76,其在蒙古栎12个染色体中均有分布;蒙古栎R2R3-MYB转录因子分为31个亚组;家族成员内含子、外显子和Motif的长度、位置及数目在不同成员之间存在差异,而R2和R3重复序列高度保守;76个蒙古栎R2R3-MYB基因上游发现14种顺式作用元件;在蒙古栎中发现30个R2R3-MYB基因重复对;Qm MYBCX-5461试剂s在不同组织存在差异表达,其中Qm MYB69在叶茎根中表达量均为极高;对Qm MYB3等12个基因在蒙古栎幼苗叶、茎和根响应干旱的表达模式进行分析,所有基因均为差异表达基因,但各个基因在不同部位、不同干旱时间表达量有差异,如Qm MYB3、Qm MYB15等基因在叶中上调,Qm MYB6和Qm MYB37在茎中上调,Qm MYB15、Qm MYB37及Qm MYB41在根中上调,大部分基因在干旱处理3h和6h后变化明显sleep medicine。(2)成功克隆了3个蒙古栎R2R3-MYB基因,即Qm MYB6,Qm MYB23及Qm MYB41基因,它们的开放阅读框全长分别为885bp、969bp和942bp,编码294、322和313个氨基酸,3个基因编码的蛋白均为亲水蛋白,均无跨膜结构。(3)用同源重组成功构建了p RI101-Qm MYB6-GFP、p RI101-Qm MYB23-GFP、p RI101-Qm MYB41-GFP植物表达载体。利用DAPI染色细胞核、农杆菌侵染烟草进行体内瞬时表达的方法进行烟草亚细胞定位分析,发现Qm MYB6、Qm MYB23及Qm MYB41都定位在细胞核中,与亚细胞定位预测结果一致。培育野生型拟南芥、atmyb44及atmyb60突变体拟南芥,并使用三引物法对其进行测定。用农杆菌介导花序侵染法侵染拟南芥,得到T0代转基因拟南芥种子。

近年来，中药抗肿瘤作用的研究呈现逐年增加的趋势Trichostatin A MW，无论是中药有效提取成分或是复方制剂在肿瘤治疗方面都具有显著的疗效及Chronic medical conditions优势。中药木香中的活性成分木香烃内酯是一种天然倍半萜内酯，具有多种药理作用，如抗氧化、抗炎、降血糖、抗微生物等。近年来，越来越多的体内外实验研究表明，该成分具有抗肿瘤活性，可抑制乳腺癌、胃癌、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、肝癌、肺癌、卵巢癌、食管GSK J4癌、结直肠癌、骨肉瘤等多种肿瘤的生长。其抗肿瘤的机制主要是通过调控PI3K/AKT/mTOR、AKT-MDM2-p53、ROS-AKT/GSK3β、Bcr/Abl和Stat5等信号通路，影响活性氧、细胞凋亡相关蛋白和自噬相关蛋白、细胞周期蛋白等方面，从而诱导细胞凋亡、介导自噬及导致细胞周期阻滞在G2/M期、G1期、S期。此外，木香烃内酯与伊马替尼、阿霉素联用可以起到减毒增效、增强抗肿瘤作用，并且还能逆转肿瘤耐药。笔者通过查阅和整理国内外相关研究文献，对木香烃内酯抗肿瘤作用及机制、联合用药、逆转肿瘤耐药的研究进展进行综述，以期为该成分新药开发与利用提供理论依据。

帕金森氏病(Parkinson’s disease,PD)作为一种神经系统退行性疾病,主要表现为运动症状(Motor_1symptoms,MS)和非运动症状(Non-motor_1symptoms,NMS)两大类,其中疼痛作为非运动症状中影响患者的BI 10773抑制剂主要因素之一,对患者的生活造成了严重影响。帕金森氏病的主要病理特征就是中脑黑质(Substantia_1nigra,SN)多巴胺神经元变性死亡,从而引起纹状体神经元的多巴胺受体亚型含量和功能改变。多巴胺D2受体(Dopamine_1D2_1receptor,DRD2)参与调节帕金森氏病患者各种症状,但是DRD2在帕金森氏病理性疼痛中的发生机制尚不明确。因此,我们通过使用DRD2激动剂普拉克索(Pramipexole,PPX)探讨DRD2参与帕金森氏病理性疼痛的调控机制,为多巴胺受体在帕金森氏病理性疼痛中的研究提供理论和实践依据,为治疗帕金森氏病理疼痛的预防及干预手段提供方向和理论支撑。_1主要结果如下:1.多巴胺受体激动剂普拉克索可以改善帕金森氏病模型小鼠运动造模两周之后,转棒实验结果显示帕金森氏病模型小鼠相比较于正常组小鼠在棒时间显著减少(P<0.001),此实验提示,帕金森氏病造模成功。_1通过旷场、弗莱毛测痛、热刺痛等行为学实验结果显示,帕金森氏病模型小鼠的疼痛耐受值开始下降,并显著低于(P<0.001)正常组小鼠。通过检测分析可知,经过造模之后帕金森氏病模型小鼠相比较于正常小鼠其运动能力有所下降,并且接受疼痛测验时,发现帕金森氏病模型小鼠的痛阈降低,表明普拉克索可以有效的治疗帕金森氏病理性疼痛。_12.普拉克索可以较好的改善帕金森氏病模型小鼠的痛阈_1通过实验验证了普拉克索可以有效改善帕金森氏病理性疼痛,但是不同程度的普拉克索对帕金森氏病理疼痛的改善程度有差异,实验结果发现中剂量(1 mg_1/kg)的普拉克索对疼痛的治疗效果较好(P<0.001),其次是高剂量(3 mg/kg)的普拉克索次之,_1低剂量(0.5 mg/kg)可能由于浓度较低,从而不能Fulvestrant说明书有效的改善,但是也具有一定的作用。3.普拉克索对纹状体和黑质的DRD2、细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3基因m RNA的表达经荧光定量PCR结果检测,多巴胺受体激动剂普拉克索可以通过DRD2途径改善帕金森氏病模型小鼠的疼痛行为。经检测,造模之后,由于帕金森氏病模型小鼠的中存在细胞凋亡,因此凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的含量均有所改变,细胞凋亡相关因子Bcl-2相比较于正常组小鼠显著降低(P<0.05),而Bcl-2和Bax在组织中的含量显著上升(P<0.05)。经多巴胺受体激动剂治疗之后可以较好地改善细胞凋亡相关因子,从而阻止小鼠体内的细胞凋亡。4.小鼠纹状体和黑质的DRD2及TH蛋白表达量经过蛋白表达测定之后得出,造模之后,帕金森氏病模型小鼠纹状体和黑质中DRD2蛋白相对表达含量会发生变化,但是通过药物治疗之后可以显著降低(P<0.001)帕金森氏病模型小鼠黑质中DRD2蛋白相对表达含量。并且从实验结果General psychopathology factor可以看出,造模之后,帕金森氏病模型小鼠黑质中TH受体蛋白相对表达含量会发生变化,通过药物治疗之后也可以显著降低(P<0.001)帕金森氏病模型小鼠黑质中TH受体蛋白相对表达含量。综上所述,多巴胺受体激动剂普拉克索通过DRD2途径可以改善帕金森氏病理性疼痛,并且对组织中细胞凋亡相关因子有所改善,从而缓解帕金森氏病患者的病理性疼痛。

目的 探究麦角新碱联合欣母沛对瘢痕子宫再次剖宫产患者产后凝血功能的影响。方法 选取2020年1月至2022年5月我院收治的80例瘢痕子宫再次剖宫产患者，采用随机数字表法分为对照组和观察组各40例。对照组采用欣母沛治疗，观察组采用麦角新碱联合欣母沛治疗。比较两组产后出血量、产后恢复情况、凝血功能及不良反应发生率。结果 观察组产后2 h出血量、产后24 h出血量低于对照组，恶露持selleck续时间、首次排气时间、住院时间短于对照组（P<0.05）。术后24 h，两组活化部分凝血活酶时间（APPF-07321332TT）、D-二Preformed Metal Crown聚体（D-D）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶原时间（PT）均低于治疗前，且观察组低于对照组（P<0.05）。两组不良反应比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论 麦角新碱联合欣母沛可减少瘢痕子宫再次剖宫产患者产后出血量，促进其产后恢复，改善其凝血功能，且不增加不良反应，安全性较好。

研究表明皮肤组织中也存在着局部肾素-血管紧张素系统(RAS),参与到伤口愈合、炎症、银屑病、衰老等多种皮肤生理和病理活动调控中。血管紧张素转化酶(ACE)在RAS的调控中发挥核心作用,部分ACE抑制剂也被发现能够改善瘢痕、皮肤光老化等问题,但是这类药物合成的ACE抑制剂存在着较为严重的副反应。因此从食源蛋白质中开发天然ACE抑制肽,为ACE的抑制剂的应用提供了新的方向。本课题以螺旋藻蛋白为原料,通过蛋白酶水解制备螺旋藻ACE抑制肽,结合肽组学和计算模拟的方法,从中筛选具有ACE抑制活性的活性肽。以LGSK J4纯度929细胞为模型结合蛋白组学探究其生物活性。同时对所获得的ACE抑制肽的安全性与稳定性进行评价。具体的研究内容如下:(1)依据水解度、ACE抑制率以及DPPH清除率,从碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶四种不同来源的蛋白酶中筛选最佳的螺旋藻蛋白水解酶制备ACE抑制肽,结果表明碱性蛋白水解酶产物具有最高的水解度、ACE抑制率和DPPH清除率。LC-MS/MS并结合数据库对螺旋藻碱性蛋白酶水解液肽段进行分析,共鉴定出782条肽段。采用药效团模型和分子对接对进行分析,筛选出两种新型ACE抑制肽HIIARPH和LRLKE,IC_(50)分别为461.5μmol/L和155.8μmol/L。Lineweaver-Burk双倒数作图法表明HIIARPH和LRLKE的抑制类型皆为非竞争性抑制。(2)通过Western Blot确定Ha Ca T、NIH 3T3、L929细胞都能表达ACE,皮肤成纤维细胞L929表达量最高并被选为研究对象。采用MTT法对HIIARPH和LRLKE细胞毒性进行检测,在1.0 mmol/L浓度下,两种抑制肽对L929细胞无明显毒性。通过LPS刺激L929细胞建立炎性衰老模型,并采用RT-PCR对ACE和AT_1R的m RNA表达进行检测,采用Western Blot对ACE和Ang II的蛋白表达进行检测、采用ELISA对培养上清中的Ang II进行检测。结果表明LPS能够激活RAS,增加ACE/Ang II/AT_1R通路的m RNA和蛋白表达并确定LPS刺激细胞浓度为1.0μg/m L。分别用不同浓度HIIARPH、LRLKE的处理LPS刺激的L929细胞,并对细胞内SOD和CAT酶活性进行检测。结果表明HIIARPH和LRLKE都能提高抗氧化酶SOD和CAT的酶活性,且LRLKE的抗氧化能力优于HIIARPH。采用ELISA检测细胞衰老相关分泌表型(SASP)IL-6的分泌情况,发现HIIARPH和LRLKE能减少IL-6的分泌。采用1.0 mmol/L的HIIARPH和LRLKE分别处理细胞研究其对RAS的影响,并采用ELISA对培养上清中的ACE活性进行检测,采用RT-PCR对ACE、AT_1R以及AT_2R的m RNA表达进行检测,采用Western Blot对ACE和AT_1R的蛋白表达进行检测。结果表明,HIIARPH和LRLKE都能抑制胞外ACE的活性,抑制RAS中ACE/Ang II/AT_1R通路,而LRLKE能进一步激活AT_2R。(3)通过蛋白质组学进一步分析了LRLKE在LPS诱导的L929细胞中参与调控的蛋白差异表达情况。研究结果验证了LRLKE参与调控了L929多种信号通路如细胞衰老、p53、NF-κB、病毒感染、铁死亡、自噬等。同时根据蛋白富集分析等结果,通过Western Blot和ELISA对细胞衰老、细胞凋亡信号通路中的差异蛋白进行验证。实验证明蛋白组学数据可靠具有可参考价值,LRLKE通过ACE/AT_1R/NF-κBUighur Medicine/IL-6通路参与调控细胞炎性衰老,ACE/AT_1R/Bcl-2/Bax或selleckchem NSC 125973者ACE/AT_1R/Bid/Bax调控细胞凋亡过程。(4)对1.0 mmol/L的HIIARPH和LRLKE分别进行安全性测试。采用直接多肽反应(DPRA)对两种ACE抑制肽的致敏性进行测试;采用鸡胚绒毛尿囊膜实验(HET-CAM)和小鼠红细胞溶血对两种ACE抑制肽的刺激性进行测试;采用艾姆斯(Ames)实验对两种ACE抑制肽的致突变性进行测试;采用人体斑贴实验进行人体安全性测试。结果表明1.0 mmol/L浓度下的HIIARPH和LRLKE无刺激性、致敏性以及致突变性,对人体安全。(5)对HIIARPH和LRLKE的温度、p H以及存储稳定性进行测试,结果表明,LRLKE具有较好ACE抑制活性稳定性,温度以及p H的变化对其影响较小。而HIIARPH在温度>50℃以及p H<6时,活性显著降低。此外0℃和25℃条件下储存16天,对两种ACE抑制肽的抑制活性无显著影响。