MAPK信号通路

各种原因引起的睡眠时间减少已成为生活常态，睡眠剥夺会降低机体的学习记忆能力，影响生活质量。该研究对C57BL/6J小鼠进行21 d睡眠剥夺（sleep deprivation， SD）Oxidative stress biomarker，同时每天对小鼠灌胃壳三糖（chitotriose， COS3）和壳五糖（chitopentaose， COS5），通过体重、新物体识别实验、病理学染色、氧化应激和凋亡相关蛋白表达评估COS3和COS5的保护作用。结果显示，COS3和COS5干预能够缓解小鼠体质量selleck NMR下降和海马神经细胞坏死变selleck MK-1775形，显著提高海马组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase， SOD）水平和总抗氧化能力（total antioxidant capacity， T-AOC），显著降低海马丙二醛（malondialdehyde， MDA）含量。COS3和COS5干预能够显著提升海马p-PI3K（phospho-phosphotylinosital 3 kinase）和p-Akt（phospho-protein kinase B）蛋白的相对表达量，激活PI3K（phosphotylinosital 3 kinase）/Akt（protein kinase B）信号通路，缓解神经细胞凋亡。研究表明，COS3和COS5能够明显改善睡眠剥夺引起的学习记忆能力下降，其机制可能与COS3和COS5能够缓解海马组织氧化应激和神经细胞凋亡有关，其中COS3的效果优于COS5。

目的：探讨血清视黄醇结合蛋白（RBP）、α1微球蛋白（α1-MG）和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、尿微量白蛋白（U-mAlb）联合检测对急性肾损伤的诊断价值。方法：选择2021年1月至2022年12月来我院进行治疗的急性肾损伤（AKI）患者116例作为研究对象。根据AKI分期标准，将患者分为AKI 1期（研究组A 40例），AKI 2期（研究组B 39例）及AKI 3期（研究组C 37例）。并选择同期来我院体检的健康者116例作为对照组。比较研究组与对照组患者的血清selleckchemRBP、α1-MG和尿NGAL、U-mAlb水平的差异，不同疾病分期患者血清RBP、α1-MG和尿NGAL、U-mAlb水平的差异，以及四种指标单独检测及联合检测的诊断效能。结果：研究组患者血清RBP、α1-MG和尿NGAL、U-mAlb水平均显著高于对照组（P<0.05），差异具有统计学意义；不同功能分期AKI患者血清RBP、α1-MG和尿NGAL、U-mAlb水平差异具有统计学意义（P<0.05）;Spearman相关性分析显示，RBP、α1-MG、NGAL及U-mAlb水平与AKI病情呈正相关；联合诊断较RBP、α1-MG、NGAL及U-mAlb单项检测，灵敏度Torin 1 molecular weight降低，特异度提高，阳性预测值增加，阴性预测值降低，准确度提高，降Angiogenic biomarkers低误诊率。结论：AKI患者血清RBP、α1-MG和尿NGAL、U-mAlb水平与肾损伤呈正相关，且四项指标联合检测能够有效提高诊断的准确度，降低AKI的误诊率。

目的观察紫菀散对慢性支气管炎气道炎症的干预作用，并基于TollCH-223191分子式样受体4(TAdenovirus infectionoll-like receptors 4,TLR4）/髓分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88）/核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB）信号通路探讨其作用机制。方法60只健康成年雄性SD大鼠随机分为6组，每组10只，除正常组外均采用气管内滴注脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）的方法建立慢性支气管炎模型。醋酸地塞米松组给予0.075 mg·kg~(-1)醋酸地塞米松灌胃，每天1次；紫菀散低、中、高剂量组分别给予1.5、3.0、6.0 g·kg~(-1)紫菀散灌胃，每天1次；模型组、正常组给予等量生理盐水灌胃。采用ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中转化生长GSI-IX分子量因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1）、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β）、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6）水平，采用细胞计数板法计数BALF中白细胞数量，采用HE染色、AB-PAS染色观察肺组织病理改变，采用免疫组化法检测肺组织TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达。结果与正常组比较，模型组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均升高（P<0.01），白细胞总数和各种白细胞数量均增加（P<0.01），肺组织呈病理改变且气道杯状细胞增生评分升高（P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高（P<0.01）；与模型组比较，醋酸地塞米松组及紫菀散各剂量组TGF-β1、IL-1β、IL-6水平均降低（P<0.05或P<0.01），白细胞总数和各种白细胞数量均降低（P<0.01），肺组织病理改变均减轻，气道杯状细胞增生评分均降低（P<0.05或P<0.01),TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均减少（P<0.05或P<0.01）；与醋酸地塞米松组比较，紫菀散中、高剂量组TGF-β1水平均降低（P<0.05或P<0.01），紫菀散低剂量组白细胞总数和各种白细胞数量均增加（P<0.01），紫菀散中剂量组中性粒细胞数量、嗜酸性粒细胞数量均增加（P<0.01），紫菀散高剂量组淋巴细胞数量减少（P<0.01），紫菀散低、中剂量组肺组织病理改变均加重，紫菀散低剂量组气道杯状细胞增生评分升高（P<0.05），紫菀散低剂量组TLR4、My D88、NF-κB蛋白表达均升高（P<0.05）。结论紫菀散可能通过抑制TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥抗慢性支气管炎气道炎症的作用。

第一章 肾小球Exostosin表达与Ⅴ型狼疮肾炎临床病理和预后相关性的研究目的研究发现Ⅴ型狼疮肾炎(LN)肾小球Exostosin(EXT)表达阳性率高,本文探讨V型LN肾小球EXT表达及其与临床病理特征、预后及病理转型间的相关性。方法纳入165例临床和肾活检病理确诊的Ⅴ型 LN,免疫组化检测肾小球EXT表达,应用计算机图像分析进行定量测定EXT表达强度。比较EXT阳性和EXT阴性Ⅴ型LN临床、病理skimmed milk powder特征和预后的差别;分析47例重复肾活检患者病理改变与肾小球EXT变化的联系。结果在165例Ⅴ型LN中发现75例(45.5%)EXT-表达阳性。9.1%混合型LN(Ⅴ+Ⅲ/Ⅳ)EXT表达阳性。在61例其他继发性MN中,仅3例(4.9%)EXT阳性。EXT表达与蛋白尿的有密切相关性:EXT阳性率随着尿蛋白增加而增加(P=0.001)。EXT阳性Ⅴ型LN的EXT表达强度与尿蛋白定量呈正相关(r=0.534,P<0.001)。与EXT阴性组相比,EXT阳性Ⅴ型LN患者蛋白尿水平较高(P<0.001),肾脏活动指数(AI)较低(P=0.001),慢性指数(CI)较低(P=0.015),肾小管萎缩积分较低(P=0.008)。EXT阳性和EXT阴性V型LN患者的到达肾脏终点累积发生率无显著差异(P=0.64)。在47例因复发或治疗无效而再次行活检的Ⅴ型LN中,EXT阴性患者病理转型率显著高于 EXT 阳性(58.6%vs 22.2%,PFG-4592=0.033)。结论V型LN患者肾组织EXT阳性率高,EXT阳性V型LN较EXT阴性患者蛋白尿更多,病理转型率更低,EXT阳性和EXT阴性Ⅴ型LN患者的长期肾脏预后无差异。EXT为Ⅴ型LN活动和亚型的新标志物之一。第二章 Ⅴ型狼疮肾炎其它相关抗原及其临床病理和预后相关性的研究目的Ⅴ型LN相关抗原EXT的阳性率不足50%,本研究增加Ⅴ型LN样本量,探讨其它可能与Ⅴ型LN相关抗原的分布及其与临床病理和预后的相关性。方法纳入184例经临床和肾活检确诊的Ⅴ型LN患者,免疫组化或免疫荧光检测肾小球EXT、神经细胞粘附分子-1(NCAM1)、磷脂酶A2受体(PLA2R)和α-烯醇化酶(ENO1)的表达,分析4种抗原阳性患者间临床病理特征和预后的差异。结果在184例V型LN肾组织中共发现102例(55.4%)染色阳性,82例(44.6%)染色阴性。阳性中61例(33.2%)EXT阳性,17例(9.2%)NCAM1/EXT双阳性,17例(9.2%)NCAM1阳性,7例(3.8%)PLA2R阳性。ENO1染色均阴性。与EXT阳性、未分类组比较,NCAM1组(包括NCAM1阳性和NCAM1/EXT双阳性)患者尿蛋白水平(p=0.009)、肾病综合征(p=0.005)和中枢神经系统(CNS)受损比例(p=0.007)显著增高。与NCAM1组、未分类组相比,EXT阳性组CNS受损比例最低。与EXT阳性、NCAM1组相比,未分类组抗C1q抗体阳性率(p=0.007)和AI(p=0.012)较高。7例PLA2R阳性患者年龄大,7例中5例检测血清抗PLA2R抗体,4例阳性,1例阴性;这7例均有基底膜增厚和肾小球上皮侧嗜复红更多物沉积;PLA2R均阳性,颗粒状沉积在基底膜。结论本研究首次发现半数以上Ⅴ型LN的相关抗原为EXT和NCAM1,少部分PLA2R阳性;不同抗原表达患者的临床和病理存在差异,NCAM1阳性和NCAM1/EXT双阳性患者蛋白尿更多,NCAM1及NCAM1/EXT阳性患者CNS受损比例更高。

利用网络药理学和体外实验探讨野蚕豆根抗氧化活性物质基础及作用机制。首先，采用DPPH法、ABTS法、清除羟自由基法对野蚕豆根进行体外抗氧化实验验证；通过TCMSP数据库和文献搜索筛选出野蚕豆根中的活性物质，同时收集其作用靶点；借助OMIM、GeneCards数据库获得氧化应激相关疾病靶点；将野蚕豆根成分靶点与氧化应激靶点取交集，Classical chinese medicine通过STRINGPR-171研究购买数据库构建蛋白互作网络(protein-protein interaction networks, PPI);利用R语言对交集靶点进行基因本体(GO,Gene Ontology)富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)富集分析；借助AutoDock 1.5.7软件对核心成分及关键靶点基因进行分子对接，通过Pymol进行可视化操作；利用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测进行机制验证。结果显示，野蚕豆根提取物对DPPH自由基、ABTS自由基和羟基自由基有一定的清除能力，其半数抑制浓度(IC_(50))分别为0.166、0.054和0.180 mg/mL;从野蚕豆根中共筛选出22个活性成分，86个成分靶点以及84个交集靶点，其中包括STAT3、HSP90AA1、HDAC1等23个核心靶点；GO富集分析共得到了3 386个条目，主要包括碳水化合物结合、核受体活性等分子功能。KEGG富集分析共得到了211个条目，主要包括PI3K-Akt信号通路、化学致癌-受体激活等通路；分子对接结果显示，野蚕豆根中活性成分与核心靶点间结selleck抑制剂合效应较强，结合能均小于-1.2 kcal/mol; Western blot结果表明，野蚕豆根提取物能明显上调p-PI3K蛋白及p-Akt蛋白的表达。本研究初步表明野蚕豆根提取物可通过激活PI3K-Akt信号通路从而发挥抗氧化作用，为后期野蚕豆根抗氧化活性的研究与应用提供理论依据及参考。

目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1 (Keap1)、核因子E2相关因子2 (Nrf2)蛋白表达水平，分析其与临床病理Microlagae biorefinery参数、氧化应激指标的相关性，为临床治疗提供潜在靶点。方法 选取2017年4月至2020年4月郑州市第三人民医院收治的100例NSCLC患者为研究对象，免疫组化法检测并比较癌组织、癌旁组织中Keap1、Nrf2蛋白表达水平；比较不同临床病理参数患者Keap1、Nrf2蛋白表达水平；比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者血清超氧化物歧化酶(SOD)、诱导型一氧化氮Dibutyryl-cAMP体内实验剂量合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平，并采用Spearman法分析SOD、i NOS、MDA与临床病理参数的相关性，采用Pearson法分析SOD、iNOS、MDA与Keap1、Nrf2蛋白水平的的相关性；比较不同Keap1、Nrf2蛋白表达患者的生存率。结果 癌组织、癌旁组织Keap1蛋白阳性率分别为77.00%、53.00%,Nrf2蛋白阳性率分别为74.00%、45.00%,Keap1蛋白OD值分别为0.41±0.07、0.33±0.05,Nrf2蛋白OD值分别为0.39±0.06、0.31±0.06，癌组织Keap1、Nrf2蛋白阳性率及OD值明显高于癌旁组织，差异均有统计学意义(P<0.05);Keap1蛋白阳性表达与病理AY-22989临床试验分级、T分期呈正相关(r=0.569、0.574,P<0.01),Nrf2蛋白阳性表达与病理分级、T分期呈正相关(r=0.527、0.539,P<0.01);Keap1蛋白阳性者、阴性者的血清SOD水平分别为(86.78±9.14) U/m L、(115.07±12.13) U/m L,MDA水平分别为(4.42±0.82) mmol/L、(3.24±0.56) mmol/L,i NOS水平分别为(22.74±4.31) U/m L、(15.59±3.02) U/mL,Nrf2蛋白阳性者、阴性者血清SOD水平分别为(84.94±9.12) U/mL、(117.06±12.37) U/mL,MDA水平分别为(4.48±0.85) mmol/L、(3.21±0.52) mmol/L,iNOS水平分别为(23.02±4.28) U/mL、(15.64±3.10) U/mL,Keap1、Nrf2蛋白阳性者血清SOD水平明显低于阴性者，MDA、iNOS水平明显高于阴性者，差异均有统计学意义(P<0.05);Keap1、Nrf2蛋白表达与SOD呈负相关(r=-0.612、-0.614,P<0.01)，与MDA、iNOS呈正相关(rKeap1=0.609、0.614,P<0.01;rNrf2=0.610、0.608,P<0.01);Keap1、Nrf2蛋白阳性表达者3年生存率为85.71%、83.78%，明显低于阴性表达者的95.65%、100.00%，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 NSCLC组织中Keap1、Nrf2蛋白表达水平升高，且与病理分级、T分期密切相关，该信号通路活化可参与氧化应激反应过程，且对预判患者预后具有一定临床意义。

目的 探讨高脂饮食(high fat diet,HFD)引起的肥胖与低剂量持久性有机污染物——2,3,7,8-四氯二苯并二噁英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, TCDD)联合作用对肝脏脂质代谢的影响。方法 采用2×2析因设计,研究HFD与低剂量TCDD(10 ng·kg~(-1)·d~(-1))联合作用对10周龄肥胖易感(obesity-prone,OPgenetically edited food)雌性大鼠肝脏脂质代谢的影响。4组实验动物分别为:普通饮食无TCDD处理组(Cont+TCDD 0)、普通饮食低剂量TCDD处理组(Cont+TCDD 10)、高脂饮食无TCDD处理组(HFD+TCDD 0)及高脂饮食低剂量TCDD处理组(HFD+TCDD 10)。油红O染色观察肝脏脂肪沉积,酶法测定肝脏超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence qu确认细节antitative polymerase chain reaction, RT-q PCR)法检测肝脏脂质代谢相关基因m RNA表达。结果 Cont+TCDD 0组、Cont+TCDD 10组、HFD+TCDD 0组及HFD+TCDD 10组大鼠体质量分别为(301.29±18.47) g、(312.16±20.45) g、(358.20±27.11)g及(373.83±26.50)g (F=7.43,P<0.01);肝脏油红O阳性区域比值分别为(1.26±0.16)%、(1.66±0.50)%,(9.06±1.54)%、(32.56±2.66)%(F=11.32,P<0.01),肝脏SOD酶活性分别为:(1.54±0.06)U/mg、(1.41±0.15)U/mg、(1.25±0.08)U/mg及(0.76±0.11) U/mg(F=4.31,P<0.05);肝脏GPX酶活性分别为:(1 511.00±69.30)U/mg、(1 409.00±60.81)U/mg、(1 232.00±65.05)U/mg及(965.00±83.44)U/mg(F=3.91,P<0.05)。对上述指标进行交互作用分析显示,高脂饮食与低剂量TCDD联合作用使肥胖易感的雌性SD大鼠体质量(F=6.33,P<0.05)及肝脏脂肪积聚(F=12.51,P<0.01)出现协同增加,肝脏抗氧化酶类SOD酶活性(F=4.15,P<0.05)和GPX酶活selleckchem GSK1120212性(F=3.97,P<0.05)协同降低。对12种肝脏脂质代谢相关基因m RNA表达水平检测发现,高脂饮食与低剂量TCDD联合作用增加三酰甘油脂肪酶的限速酶(adipose triglyceride lipase,ATGL)(F=3.69,P<0.05)及脂肪酸转位酶(cluster of differentiation 36,CD36)的m RNA表达(F=5.58,P<0.01),抑制激素敏感脂肪酶(hormone-sensitive lipase,HSL)的m RNA表达(F=4.01,P<0.05),其余9种基因表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 高脂饮食与低剂量TCDD联合作用可能协同增加肥胖诱导雌性大鼠肝脏脂质代谢异常。

目的:探讨田蓟苷(TIL)对脑出血(ICH)大鼠认知功能、神经元损伤及腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/沉默调节蛋白1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC1α)信号通路的影响。方法:采用Ⅳ型胶原酶注射法构建ICH大鼠模型，将造模成功的ICH大鼠随机分为模型组(ICH组)、TIL组(16 mg/kg)、AMPK抑制剂组(Compound C组，250μg/kg)、TIL+AMPK抑制剂组(TIL+Compound C组),另设假手术组(Sham组),每组12只。采用改良的Garcia JH法、Morris水迷宫实验和敞箱实Transfusion-transmissible infections验评价大鼠的神经功能和认知功能；苏木素-伊红(HE)和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法行脑组织病理学和神经元凋亡观察；蛋白质印迹法(Western Blot)检测AMPK/SIRT1/PGC1α通路蛋白表达。结果:与Sham组相比，ICH组大鼠脑组织出现细胞核皱缩、排列紊乱等损伤，神经功能评分、穿越平台次数、垂直活动得分和水平活动得分、磷酸化AMPK(p-AMPK)/AMPK、SIRT1、PGC1α蛋白水平均明显下确认细节降(P<0.05),找寻平台时间、神经元凋亡率、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平均明显增加(P<0.05);与ICH组相比，TIL组大鼠脑组selleck HPLC织损伤减轻，神经功能评分、穿越平台次数、垂直活动得分和水平活动得分、p-AMPK/AMPK、SIRT1、PGC1α蛋白水平均明显增加(P<0.05),找寻平台时间、神经元凋亡率、Caspase-3、Bcl-2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);而Compound C组大鼠以上指标呈现相反的趋势。且TIL对ICH大鼠脑组织及认知功能的保护作用均被AMPK抑制剂Compound C减弱(P<0.05)。结论:TIL可能通过激活AMPK/SIRT1/PGC1α通路，改善ICH大鼠认知功能，减轻神经元损伤。

目的 探讨组蛋白赖氨酸甲基转移酶2(SMYD2)介导体外高糖环境下小鼠肾成纤维细胞（NRK-49F）活化的可能机制。方法 复制糖尿病（DM）小鼠模型，经全自动生化分析仪检测各组小鼠血糖（BG）、血肌酐（Scr）水平，经苏木精-伊红、Masson染色观察小鼠肾组织病理改变，经Western blotting检测各组小鼠肾组织纤维连接蛋白（Fibronectiselleckchem GSI-IXn）、Ⅰ型胶原蛋白（CollagenⅠ）、α-平滑肌肌in vivo infection动蛋白（α-SMA）、组蛋白H3赖氨酸4三甲基化（H3K4me3）、SMYD2、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)及磷酸化NF-κB p65(NF-κB p-p65)蛋白表达，经免疫荧光检测各组小鼠肾组织α-SMA及SMYD2表达。复制体外DM细胞模型，使用正常糖（含5.5mmol/L葡萄糖）或高糖（含30.0 mmol/L葡萄糖）处理NRK-49F细胞，经Western blotting检测SMYD2、α-SMA及细胞外基质（ECM）成分蛋白表达；经CCKErastin化学结构-8法检测SMYD2特异性抑制剂AZ505的细胞毒性；在AZ505处理/不处理的条件下，经Western blotting检测SMYD2、α-SMA、H3K4me3、Fibronectin、CollagenⅠ、NF-κB p65、NF-κB p-p65蛋白表达，经免疫荧光检测α-SMA、SMYD2及NF-κB p-p65在细胞中的表达及空间定位情况。结果 DM组血清BG、Scr水平高于NC组（P <0.05）。DM组肾组织α-SMA、Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2、H3K4me3、NF-κB p-p65蛋白相对表达量高于NC组（P <0.05），两组NF-κB p65蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。HG刺激不同时间点NRK-49F细胞α-SMA、Collagen I、Fibronectin、SMYD2蛋白相对表达量比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。40μmol/L组、60μmol/L组NRK-49F细胞存活率较0μmol/L组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505(20μmol/L)组较HG组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞Fibronectin、CollagenⅠ、α-SMA、H3K4me3、SMYD2蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505组较HG组低（P <0.05）。HG组NRK-49F细胞NF-κB p-p65蛋白相对表达量较NG组高（P <0.05）,HG+AZ505组较HG组低（P <0.05），各组小鼠NRK-49F细胞NF-κB p65蛋白相对表达量比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论SMYD2可介导高糖诱导的NRK-49F细胞活化，其机制可能与激活NF-κB细胞信号通路有关。

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种常见的神经退行性疾病,其主要的病理学特点是黑质中多巴胺能神经元的丢失,以及路易小体的形成。路易小体的主要成分为α-突触核蛋白。目前治疗PD的方法主要为药物治疗,主要使用的药物为多巴胺类似物、多巴胺能受体激动剂、神经保护剂、单胺氧化酶-B(MAO-B)抑制剂等。然而,大多数治疗PD的药物都有一定毒性,所以,寻找一种安全性高且疗效好的药物便成为对PD进行治疗的当务之急。根据现LY-188011体内实验剂量有研究,对于PD模型来说,虽然去亚甲基小檗碱(demethyleneberberine,DMB)具有一定的保护作用,但其实现保护作用的机制尚不清楚。因此,本实验应用SH-SY5Y细胞系建立PD细胞模型,采用分子生物学等研究方法,对DMB在PD中的保护作用进行探讨,并分析其可能的机制。在实验时采用已被证实具有神经保护作用的DMB的前体——黄连素(小檗碱,berberine,BBR)以及同样被证明具有神经保护作用、和DMB同为MAO-B抑制剂的司来吉兰(Selegiline)与DMB对比形成阳性对照。实验结果如下:1.不同浓度的DMB(0、10~(-5)、10~(-4)、10~(-3)、10~(-2)、10~(-1)、1、10、100μM)处理SH-SY5Y细胞24 h,各浓度药物对细胞存活率均无明显影响。1 m M MPP~+处理24 h,细胞存活率降低至37%(P<0.001)。10~(-5)-100μM的DMB与MPP~+共处理可显著提高细胞存活率。其中,10~(-3)μM的DMB与MPP~+共处理组的SH-SY5Y细胞存活率最高(P<0.001)。因此,选择10~(-3)μM的DMB作为最佳浓度进行后续实验。2.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,Δψm)水平显著降低,活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平显著升高。与MPP~+处理组相比,DMB抑制了Δψm的降低(P<0.001)和ROS的增加(P<0.001)。三种药物处理对medium entropy alloyΔψm和ROS的作用效果均无明显差异(P>0.05,P>0.05)。3.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞bcl-2/bax比值下降。DMB处理抑制了bcl-2/bax比值的下降(P<0.001)。三种药物处理组之间相比,司来吉兰的作用效果要强于BBR和DMB(P<0.05,P<0.05)。4.与对照组相比,MPP~+处理组细胞的cleaved caspase-3蛋白表达上调。DMB处理抑制了cleaved caspase-3蛋白表达的上调(P<0.001)。三种药物处理的效果并无明显差异(P>0.05)。5.与对照组相比,MPP~+处理组selleck激酶抑制剂的细胞酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达显著降低(P<0.001)。DMB处理可显著抑制TH表达的降低(P<0.001)。三种药物处理的效果并无明显差异(P>0.05)。6.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞磷酸化Akt蛋白的表达显著降低(P<0.001)。DMB处理可抑制磷酸化Akt蛋白表达降低(P<0.001)。三种药物处理组之间相比,司来吉兰和DMB的作用效果均强于BBR(P<0.001,P<0.001),且司来吉兰的作用效果也强于DMB(P<0.001)。不同处理组之间Akt总蛋白的表达无明显差异(P>0.05)。7.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞磷酸化AMPK蛋白的表达增加(P<0.05)。DMB处理后AMPK磷酸化水平进一步增加且高于MPP~+处理组(P<0.001)。三种药物处理组之间相比,司来吉兰和DMB的作用效果均强于BBR(P<0.001,P<0.001)。不同处理组之间AMPK总蛋白的表达无明显差异(P>0.05)。8.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞p62蛋白的水平升高(P<0.001)。DMB处理可以促进p62蛋白的降解(P<0.001)。三种药物处理组之间相比,BBR作用效果要强于司来吉兰(P<0.01)。9.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞cleaved caspase-8的表达水平显著升高(P<0.001)。DMB处理可以抑制cleaved caspase-8的表达升高(P<0.001)。三种药物处理组之间相比,司来吉兰的作用效果要强于BBR(P<0.05)。10.与对照组相比,MPP~+处理组的细胞MAO-B水平显著升高。DMB处理可以抑制MAO-B水平的升高(P<0.01)。三种药物处理组之间相比,司来吉兰的作用效果强于BBR(P<0.05)。以上结果表明,在MPP~+诱导的SH-SY5Y细胞中,DMB可以维持线粒体膜电位,并降低ROS水平,抑制TH蛋白表达的降低;亦可以抑制线粒体相关的caspase依赖性凋亡通路。DMB可以激活细胞Akt、AMPK信号通路,并促进p62降解,进而维持细胞线粒体稳态,并抑制caspase-8凋亡通路。DMB可以降低细胞中MAO-B的水平,抑制多巴胺氧化脱氨,并促进线粒体稳态的维持。提示DMB的保护作用可能是通过与线粒体相关的多种途径实现的。