MAPK信号通路

目的：基于药物分子分析对茯苓-白术-桂枝药对治疗类风湿关节炎的作用机制进行分析探究。方法：通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）采集茯苓-白术-桂枝主要化学成分及作用的靶点，通过GeneCardKD025小鼠s、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、DisGeNET三个疾病基因数据库收集类风湿关节炎相关作用靶点，取茯苓-白术-桂枝与类风湿关节炎相融合的作用靶点，在线绘制韦恩图。通过STRING数据库对共同作用靶点进行筛选，进而导入Cytoscape 3.7.1软件构建药物-活性成分-核心靶点网络。基于David网站对核心靶点进行基因本体论（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，利用微生信在线绘图工具对GO、KEGG富集分析数据进行多维网络图形绘制。利用Schrodinger 2022.2软件中的Glide模块进行分子对接。结果：获得茯苓-白术-桂枝药对有效活性成分29个、靶点53个，类风湿关节炎相关疾病靶点3394个，治疗类风湿关节炎的靶点有30个，其中β-谷甾醇、花旗松素、儿茶酚、豆甾醇等主要活性成分通过作用于前列腺素内过氧化物合成酶2（Prostaglandin-endopplant virologyeroxide synthase，PTGS2）、JUN原癌基因（Jun Proto-Oncogene，JUN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine Aspartate Proteinase 3，CASP3）、一氧化氮合酶3（Nitric Oxide Synthase 3，NOS3）、过氧化氢酶等关键靶点，参与肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor， TNF）信号通路、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物（Advanced Glycation End Product，AGE）-晚期糖基化终末产物受体（Receptor of AGE， RAGE）信号通路、肿瘤抑制蛋白（Tumor protein p53，TP53）等多购买Alpelisib种信号通路起到治疗类风湿关节炎的作用。分子对接结果显示β-谷甾醇、儿茶酚与CASP3有较稳定的结合力。结论：本研究证实茯苓-白术-桂枝是通过多成分基于多靶点作用与多通路对类风湿关节炎起到治疗作用。

目的 探讨脓毒症患者血清核因子E2相关因子2(nuclea factor erythroid-2-related factor2,NRF2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)水平变化及对并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的预测价值。方法 选取2017年4月—2023年4月南京中医药大学附属南京医院脓毒症患者132例为研究组，选取同期年龄、性别匹配的健康体检者132例为对照组。2组均检测血清NRF2、HO-1水平。统计研究组入院1周并发AKI情况，分析脓毒Panobinostat IC50症患者并发AKPatent and proprietary medicine vendorsI的影响因素，构建脓毒症患者并发AKI的列线图预测GW4869作用模型并进行决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)。结果 研究组血清NRF2(t=30.537,P<0.001)、HO-1(t=29.302,P<0.001)水平高于对照组；研究组132例脓毒症患者入院1周AKI发生率为45.45%(60/132)；随着NRF2、HO-1水平升高，患者并发AKI发生率呈降低趋势(χ~2=35.636,28.514，均P<0.001);Logistic多因素回归分析提示NRF2(OR=0.104,95%CI:0.023～0.471,P=0.003)、HO-1(OR=0.341,95%CI:0.168～0.691,P=0.003)是脓毒症患者并发AKI的独立保护因素，脓毒症相关性器官功能衰竭评价评分(OR=1.493,95%CI:1.128～1.976,P=0.005)、降钙素原(OR=1.277,95%CI:1.070～1.523,P=0.007)、白细胞计数(OR=3.030,95%CI:1.550～5.921,P=0.001)是脓毒症患者并发AKI的独立危险因素；列线图预测模型显示NRF2、HO-1对脓毒症患者并发AKI具有较高预测价值，一致性指数分别为0.769、0.751;DCA显示在阈值0.20～0.78，联合评估脓毒症患者并发AKI的净受益率优于NRF2、HO-1单独检测。结论 脓毒症患者血清NRF2、HO-1水平升高，联合检测二者水平有助于判断AKI发生风险。

[目的] Vg1作为Nodal信号通路SBE-β-CD小鼠的重要配体之一参与了早期胚胎发育过程中的背腹分化调控及左右不对称模式的建立.构建Vg1转基因文昌鱼品系以研究其在文昌鱼胚胎Alisertib采购不同发育阶段的功能.[方法]结合Tol2转座子转基因系统和热敏启动子Hsp70构建文昌鱼BbHsp70-BfVg1稳定转基因品系；并用热激实验、表型统计和原位杂交等手段对该转基因品系的有效性进行评估.[结果]热激结果显示，在囊胚晚期热激处理Vg1转基因文昌鱼导致胚胎背腹轴形成异常；在原肠胚中期热激处理Vg1转基因文昌鱼导致胚胎原本左右不对称的器官变为对称分布.基因表达分析结果显示，在囊胚晚期热激F1代胚胎中有部分比例胚胎的Vg1呈现全身性表达，背部中胚层标记基因Gsc表达扩张，腹部标记基因Evx表达下调，神经标记基因SoxB1a向腹侧蔓延；在原肠胚中期热激F1代胚胎中有部分比例胚胎的左侧特异基因Pitx呈现两侧对称表达，左侧口前窝标记基因Pit呈现两侧对称表达.[结论]初步构建了一个能够实现实时热激活Vg1的文昌鱼稳定转基因品系，并为后续在文昌鱼中进行基Fine needle aspiration biopsy因功能研究提供了一个新手段.

为了解广西北海大风江水域环境对养殖香港牡蛎（Crassostrea hongkongensis）健康状况的影响，在2023年9-10月进行了3次调查研究，并对水体理化环境因子、浮游微藻种类、细菌丰度、香港牡蛎能量储备和氧化应激等指标进行了检测和分析。结果Medical necessity表明：9月河口水域，温度为28.1℃，盐度为20.89，水体中总细菌和弧菌丰度分别为7.22×10~(8)cells/L和1.49×10~(7)cells/L，硅藻丰度较高（约为1.3×10~(7)cells/L），优势种为中肋骨条藻（Skeletonema costatum），养殖香港牡蛎鳃组织中MDA含量为9.60 nmol/mIDN-6556小鼠g prot，闭壳肌中糖原和葡萄糖含量分别为6.18 mg/g和2.59 μmol/g；而10月河口水域，温度下降而盐度上升，水体总细菌和弧菌丰度下降，BMS-354825分别为4.97×10~(7) cells/L和1.40×10~(4) cells/L，硅藻丰度下降至4.3×10~(5)cells/L，养殖香港牡蛎鳃组织MDA含量为1.02 nmol/mg prot，闭壳肌糖原和葡萄糖含量降低至2.49 mg/g和1.94 μmol/g；10月河口上游水域，温度和水体总细菌丰度与同期河口水域相近，但盐度和弧菌丰度均相对较低，硅藻丰度升高，养殖香港牡蛎的闭壳肌糖原和葡萄糖含量升高。研究表明，9月大风江河口水域养殖的香港牡蛎处于较高的氧化应激状态，可能与高温、高细菌和弧菌丰度等多重环境压力相关；10月河口水域养殖牡蛎的环境胁迫压力和氧化应激状态有所改善，但饵料藻类丰度的降低导致其糖原含量下降，应对环境变化的抵抗力减弱；10月大风江河口上游水域盐度低、饵料藻丰度高，养殖香港牡蛎处于相对健康状态。

研究目的:肥胖机体常伴随下丘脑瘦素抵抗,减轻瘦素抵抗可恢复下丘脑对能量平衡的调控,改善肥胖。内质网应激是导致下丘脑瘦素抵抗和能量平衡紊乱的主要机制之一。蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)通路是内质网应激的重要下游通路,参与多种慢性代谢性疾病的发生发展。有氧运动可改善瘦素抵抗、减轻肥胖,但其机制尚未完全阐明。PERK通路是否在有氧运动改善肥胖机体下丘脑瘦素抵抗中发挥作用?值得研究。本研究采用动物和细胞实验,结合运动或药物干预,旨在探讨内质网应激PERK通路在有氧运动改善肥胖机体下丘脑瘦素抵抗中的作用。研究方法:动物实验:72只SPF级6周龄C57BL/6J雄性小鼠适应1周后随机分成两组,分别进行普通饮食(n=12)和高脂饮食(n=60)喂养,喂养16周后将高脂饮食中符合肥胖模型条件的48只小鼠随机分为4组,分别是高脂组(HFD)、高脂加运动组(HFD+E)、高脂加安慰剂组(HFD+P)和高脂加PERK抑制剂组(HFD+G),每组各12只;造模成功后普通饮食小鼠作为安静对照组(NC)预方式不变。HFD+E组小鼠进行10周中等强度的有氧运动干预;HFD+G组小鼠进行5周PERK抑制剂干预。运动和药物干预结束后,各组小鼠放入代谢笼检测其腹腔注射瘦素前后的能量代谢相关指标;尾部取血检测血糖浓度。每组随机选取4只小鼠进行腹腔注射瘦素,30分钟后立即取组织样本;ELISA检测血清瘦素浓度、肝脏H&E染色和油红O染色观察肝脏病理变化、附睾脂肪H&E染色观察脂肪细胞形态变化。Western blot检测下丘脑瘦素信号转导相关蛋白(STAT3、P-STAT3),以及下丘脑内质网应激相关蛋白(GRP78、P-PERK、PERK、P-e IF2α、e IF2α、CHOP、IRE1α、ATF6)表达水平。细胞实验:选取胚胎小鼠下丘脑细胞系N43/5(mouse hypothalam确认细节us cell line N43/5)进行体外实验,分为对照组(N43)、造模组(N43+PA)和抑制剂组(N43+PA+GSK);组内设置了PBS对照组与瘦素激活组。造模组通过棕榈酸(PA)诱导瘦素抵抗模型;抑制剂组在PA基础上予以PERK抑制剂干预,以探讨PERK通路在瘦素抵抗中的作用。Western blot检测下丘脑细胞瘦素信号转导相关蛋白(STAT3、P-STAT3)表达水平,以及内质网应激PERK通路相关蛋白(P-PERK、PERK、P-e IF2α、e IF2α、CHOP)表达水平。采用Graph Pad Prism9.0图表绘制,SPSS26.0对数据进行统计学分析,两组间采用独立样本T检验,多组间采用单因素方差分析,组间前后测采用配对T检验。研究结果:1.有氧运动减轻高脂饮食诱导的肥胖小鼠的肥胖表型并增强其能量代谢:与NC组相比,HFD组小鼠体重、肝重、附睾脂肪量、血糖、血清瘦素浓度、能量消耗、能量摄入显著增加,呼吸商、自发性体力活动、单位能量消耗、单位能量摄入显著减少;与HFD组相比,HFD+E组小鼠体重、血糖、血清瘦素浓度显著降低,自发性体力活动显著增多;与NC组相比,HFD组小鼠肝脏脂质堆积明显增多、脂肪变性;与HFD组相比,HFD+E组小鼠肝脏脂质聚集较少、附睾脂肪细胞体积减小。2.有氧运动改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠下丘脑瘦素抵抗:与腹腔注射瘦素前相比,NC组和HFD+E组小鼠腹腔注射瘦素后12小时的能量摄入显著减少,HFD组小鼠无此变化;与HFD组相比,HFD+E组小鼠腹腔注射瘦素后12小时的能量摄入显著减少。腹腔注射瘦素诱导NC组和HFD+E组小鼠下丘脑P-STAT3/STAT3表达显著上调,但HFD组小鼠无此现象。3.有氧运动缓解高脂饮食诱导的肥胖小鼠下丘脑内质网应激:与NC组相比,HFD组小鼠内质网应激相关蛋白P-PERK、P-e IF2α、CHOP、IRE1α表达水平显著升高,P-PERK/PERK和P-e IF2α/e IF2α比例显著增加;与HFD组相比,HFD+E组小鼠P-PERK、P-e IF2α、CHOP、IRE1α表达水平显著降低,P-PERK/PERK、P-e IF2α/e IF2α比例显著减低。4.PERK抑制剂改善高脂饮食诱导的肥胖小鼠下丘脑瘦素抵抗及肥胖表型:与HFD+P组相比,HFD+G组小鼠体重、附睾脂肪量、血清瘦素浓度、能量摄入、单位能量摄入显著减少,自发性体力活动、单位能量消耗显著增加;与HFD+P组相比,HFD+G组小鼠肝脏脂质聚集减少、附睾脂肪细胞体积减小。与HFD+P组相比,HFD+G组小鼠腹腔注射瘦素后12小时的能量摄入显点击此处著性减低。与HFD+P组相比,HFD+G组小鼠腹腔注射瘦素后P-STAT3/STAT3表达显著增加。与HFD+P组比,HFD+G组小鼠P-PERK、PERK、P-e IF2α、e IF2α、IRE1α、CHOP蛋白表达水平及P-e IF2α/e IF2α比例显著减少。5.抑制PERK改善棕榈酸诱导的胚胎小鼠下丘脑细胞瘦素抵抗:用瘦素激活后,对照组和抑制剂组P-STAT3/STAT3比例显著增加,造模组P-STAT3/STAT3比例显著减少;与造模组相比,瘦素激活后抑制剂组P-STAT3/STAT3比例显著增加。此外,与对照组相比,造模组P-PERK、PERK、P-e IF2α、e IF2α、CHOP蛋白比例显著增加;与造模组相比,抑制剂组P-PERK、PERK、P-e IF2α、e IF2α、CHOP蛋白表达显著减低。结论exercise is medicine:1.有氧运动可以抑制肥胖小鼠内质网应激PERK通路,并改善下丘脑瘦素抵抗;PERK通路抑制剂也具有与有氧运动类似的作用。2.有氧运动改善肥胖小鼠下丘脑瘦素抵抗的作用可能与其抑制内质网应激PERK通路有关。

目的 探讨白芍总苷(TGP)基于Janus激酶/信号转导子及转录激活AZD1152-HQPA子(Jak/stat3)信号通路对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞增殖、凋亡的影响。方法 ARPE-19细胞暴露于高糖环境，建立细胞损伤模型。ARPE-19细胞分为正常组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(50 mmol/L葡萄糖)、TGP低、中、高浓度组(50 mmol/L葡萄糖+2.5、5.0、10.0μg/ml TGP)和TGP高浓度+IGF-1组(10μg/ml TGP+20μmol/L Jak/stat3通路激活剂IGF-1)。细selleckchem PF-07321332胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组ARPE-19细胞的生存能力；流式细胞术检测各组ARPE-19细胞的凋亡能力；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组ARPE-19细胞中促炎因子[白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8]水平；2,7-二氯二醋酸荧光素(DCFH-DA)流式细胞术检测各组ARPE-19细胞内活性氧(ROS)水平；Western印迹检测ARPE-19细胞内增殖蛋白[细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21]、凋亡蛋白[B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Pro-半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、活化型(Cleaved)-caspase-3]及Jak/stat3信号通路相关蛋白表达。结果 与正常组相比，高糖组细胞活性及CyclinD1表达明显减小，p21表达明显增加，凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值明显增加，Bcl-2表达明显减小，IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度明显增加(均P<0.05)。与高Disaster medical assistance team糖组比较，TGP低、中、高浓度组细胞活性及CyclinD1表达升高，p21表达降低，凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值下降，Bcl-2表达升高，IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度减小，有统计学差异(均P<0.05)。ARPE-19细胞内添加IGF-1上调Jak、stat3磷酸化水平后，细胞活性及CyclinD1表达显著降低，p21表达显著增加，凋亡率及Bax表达、Cleaved/Pro-Caspase-3比值显著增加，Bcl-2表达明显下降，IL-1β、IL-6、IL-8含量及ROS荧光强度显著上升(均P<0.05)。结论 TPG通过阻断Jak/stat3信号通路，抑制高糖诱导的RPE细胞凋亡和炎症损伤并促进增殖。

目的 观察匹多莫德对支原体感染（MPI）小鼠肺功能损伤的保护作用，并探讨其可能机制。方法 MPI小鼠随机分为MPI组和实验A、B、C组，每组10只；另取10只健康小鼠设为正常组。实验A、B、C组分别灌胃匹多莫德颗粒100、200和400 mg/kg，正常组、MPI组灌胃等量生理盐水，1次/d，持续3 d。采用小动物呼吸机检测肺功能，紫外分光光度法和细胞色素C还原法检测血清氧化应激指标，酶联免疫吸附试验检测血清免疫指标，苏木精-伊红染色观察肺组织病理变化，Western blotting检测肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达。结果 与正常组比较，MPI组每分钟通气量（MV）、潮气量（TV）、最大呼气量（MEV）均减少（P <0.05），血清谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、γ干扰素（IFN-γ）水平均降低（P <0.05），血清白细胞介素-4(IL-4)水平升高（P <0.05）；与MPI组比较，实验A、B、C组MV、TV、MEV均增加（P <0.05）,GSH-Px、SOD活性均增强（P <0.05）,IFN-γ水平升高（P <0.05）,Hepatitis AIL-4水平降低（P <0.SBE-β-CD05）；与实验A组比较，实验B、C组MV、TV、MEV均增加（P <0.05）,GSH-Px、SOD活性均增强（P <0.05）,IFN-selleck化学γ水平升高（P <0.05）,IL-4水平降低（P <0.05）；与实验B组比较，实验C组MV、TV、MEV均增加（P <0.05）,GSH-Px、SOD活性均增强（P <0.05）,IFN-γ水平升高（P <0.05）,IL-4水平降低（P <0.05）。与正常组比较，MPI组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均降低（P <0.05）；与MPI组比较，实验A、B、C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高（P <0.05）；与实验A组比较，实验B、C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高（P <0.05）；与实验B组比较，实验C组肺组织Nrf2、HO-1蛋白相对表达量均升高（P <0.05）。结论 匹多莫德可能通过调节Nrf2/HO-1信号通路，改善MPI小鼠肺功能和免疫功能，减轻氧化应激损伤。

背景：研究发现激活Nrf2/HO-1通路可减轻脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激，但人骨髓间充质干细胞(humanbonemarrow mesenchymal stem cells,hBMSC)是否可激活Nrf2/HO-1通路减轻脑缺血再灌注损伤目前尚缺乏相关研究。目的：探讨颅内移植hBMSC是否通过激活Nrf2/HO-ICI 46474细胞培养1途径减轻脑缺血再灌注模型大鼠的氧化应激损伤。方法：40只雄性SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、hBMSC移植组、hBMSC+溶剂组和hBMSC+Nrf2抑制剂组，每组8只。模型组、hBMSC移植组通过线栓法制备大脑中动脉栓塞模型，1h后取出线栓，将30μL PBS或培养至5代以后的hBMSC注入大鼠右侧皮质及纹状体内；hBMSC+Nrf2抑制剂组和hBMSC+溶剂组在造模前24 h于左侧脑室分别注射Nrf2抑制剂Brusatol或其溶剂二甲基亚砜，然后制备大脑中动脉栓塞模型，注射hBMSC。移植后3 d进行相关指标检测。结果与结论：(1)脑CT和TTC染色显示脑梗死灶面积和体积一致：模型组> hBMSC+NrfMedical hydrology2抑制剂组> hBMSC+溶剂组> hBMSC移植组>假手术组；(2)苏木精-伊红染色和尼氏染色显示，假手术组缺血侧脑组织形态完好和神经元正常；模型组神经元排列结构紊乱和神经元损害严重；与模型组相比，hBMSC移植组、hBMSC+溶剂组病理形态和神经元损伤有较大的改善；与hBMSC+溶剂组相比，hBMSC+Nrf2抑制剂组病理形态和神经元损伤更严重；(3)Western blot和氧化应激指标检测结果显示，与假手术组相比，模型组Nrf2和HO-1蛋白表达降低(均P <0.05)，丙二醛升高而超氧化物歧化酶降低(均P <0.05)；与模型组相比，h BMSC移植组和h BMSC+溶剂组Nrf2、HO-1蛋白表达升高(均P <0.05)，丙二醛降低而超氧化物歧化酶升高(均P <0.05)；与hBMSC+溶剂组相比，hBMSC+Nrf2抑制剂组Nrf2和HO-1蛋白表达降低(均P <0.05)，丙二醛升高而超氧化物歧化酶降低(均P <0.05)；(4)上述结果表明，hBMSC可能通过激活Nrf2/HO-1途径Ceralasertib说明书减轻脑缺血再灌注氧化应激损伤。

高血压肾病(hypertensive nephropathy,HN)已成为全球慢性肾病(CKD)死亡的第二大原因,目前用于预防或延缓肾功能恶化的药物仍然很少。高血压肾病是长期高血压状态,引起肾内小动脉及细小动脉病变,导致动脉管腔的狭窄,继发缺血性肾实质损害,并造成肾小球硬化,小管萎缩及间质纤维化。高血压肾病的发病机制复杂,已报道多种因素参与了高血压肾病的发生进展,如肾素血管紧张素醛固酮系统(RAAS)的激活;内皮功能障碍;氧化应激;免疫系统的激活,等等。目前治疗高血压肾病的药物主要包括,血管紧张素受体阻滞剂(ARB)和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI),直接肾素抑制剂(阿利吉伦),醛固酮受体拮抗剂(MRA),利尿剂,钙通道阻滞剂(CCB),β受体阻滞剂,α受体阻滞剂。还有一些药物具有一定降压作用并对肾脏有保护作用,包括钠-葡萄糖协同转运蛋白2(sodium-glucose co-transporter 2,SGLT2)抑制剂和血管紧张素受体脑啡肽酶抑制剂(angiotensin receptor neprilysin inhibitor,ARNI)。研究表明经SGLT2抑制剂干预治疗,即使初始治疗阶段可能会短暂降低估算的肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,e GFR),但长期干预均有肾脏和心血管的获益。其他治疗干预措施包括,控制血压,以及控制体质量及合理饮食、科学运动等生活方式管理。然而,高血压肾病目前的治疗方法只能延缓,不能逆转或阻止疾病的进展。为进一步探索高血压肾损害可能的机制及卡格列净(Cana)的作用机制,我们用8%高盐喂养Dahl盐敏感(Dahl salt-sensitive,Dahl SS)大鼠诱导高血压肾损害,并同时予Cana干预治疗12周,观察Cana对大鼠血压及肾损害的影响,探索该药发挥肾脏保护作用可能的机制。同时比较了Cana与厄贝沙坦(Irb)的降压及肾脏保护作用。此外,补体系统异常激活也被认为是高血压肾损害发生发展的危险因素。我们收集原发性高血压伴肾功能损害的临床病例资料来进一步探索补体在高血压肾损害发生发展中的作用,为高血压肾病的临床诊治提供新靶点。第一部分高血压肾损害模型的建立和评价目的:8%高盐诱导Dahl SS大鼠12周,建立高血压慢性肾损害模型,同时给予Cana,Irb及Cana+Irb药物干预,并评价三组药物干预的效果。方法:1.30只6-7周龄Dahl SS雄性大鼠,自由饮食,食物为Ain-76a纯化啮齿动物饲料(0.3%氯化钠)进行10天适应性喂养,随后分为5组,每组6只大鼠,组1为对照组(Con):0.3%低盐饮食(low-salt diet),并给予0.5%羟丙基甲基纤维素(药物溶剂)灌胃,作为空白对照组;组2为高盐喂养组(HSD):用8%高盐饮食(high-salt diet,HSD)喂养建立高血压肾损害模型,并给予0.5%羟丙基甲基纤维素(药物溶剂)灌胃,不给予任何药物干预;组3(HSD+Cana):8%HSD同时联合Cana 30mg/kg/d灌胃干预治疗组;组4(HSD+Irb):8%HSD同时联合厄贝沙坦30mg/kg/d灌胃干预治疗组;组5(HSD+Cana+Irb):8%HSD同时联合卡格列净30mg/kg/d及厄贝沙坦30mg/kg/d灌胃干预治疗组。2.喂养Dahl SS大鼠12周,并监测大鼠的精神状态、外貌体征等一般情况及血压、体重、24 h进水量、24h进食量、24 h尿量。3.腹主动脉取血,收集大鼠血清,使用自动生化分析仪检测血清中肌酐、尿素氮、尿酸、血糖、白蛋白、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血钠。收集大鼠随机尿,检测尿糖、尿钠。4.使用商业试剂盒测定随机尿中胱氨酸抑素C(Cyc-C)、肾损伤分子-1(KIM-1)、和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的含量。5.分别进行H&E、PAS、Masson染色,分析五组大鼠肾小球及肾小管受损情况和肾脏纤维化面积。结果:1.与对照组相比,HSD组收缩压(SBP)明显升高。在给予Cana、Irb或Cana+Irb后,HSD+Cana组、HSD+Irb组和HSD+Cana+Irb组大鼠的收缩压较HSD组明显下降。HSD+Cana+Irb组降低收缩压的效果明显优于HSD+Cana组和HSD+Irb组。HSD+Cana组和HSD+Irb组在降低收缩压方面无统计学差异。2.与对照组相比,HSD组舒张压(DBP)明显升高。在给予Cana、Irb或Cana+Irb后,HSD+Cana组、HSD+Irb组和HSD+Cana+Irb组大鼠的舒张压较HSD组明显下降。在接受相应药物治疗的第3周,HSD+Cana+Irb组降低DBP的效果明显优于HSD+Cana组和HSD+Irb组。但第6周开始,HSD+Cana组、HSD+Irb组和HSD+Cana+Irb组降低舒张压效果上无差异。3.HSD组和药物干预组(HSD+Cana、HSD+Irb、HSD+Cana+Irb)大鼠较对照组大鼠摄入了更多的水,进而相应的尿量也增加,尤其在HSD+Cana组和HSD+Cana+Irb组摄入水量和尿量增多的更为明显。与HSD组相比,HSD+Cana组和HSD+Cana+Irb组的食物摄入量明显增加,体重却明显下降。4.8%高盐喂养12周,我们发现HSD组大鼠尿蛋白/尿肌酐明显高于对照组,但在Cana联合Irb干预后,尿蛋白/尿肌酐明显低于HSD组。同样,HSD组大鼠尿Cyc-C、KIM-1、和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的含量较对照组明显升高,Cana单药干预和与Irb联合干预均显著降低尿Cyc-C、KIM-1和NGAL水平。HSD组尿钠排泄量明显高于对照组,Cana单药干预和与Irb联合干预均显著降低了尿钠排泄。HSD+Cana+Irb组和HSD+Cana组尿葡萄糖排泄量明显高于对照组和HSD组,且HSD+Cana+Irb组尿葡萄糖排泄量显著高于HSD+Cana组。与对照组相比,HSD组肾脏重量显著增加,Cana+Irb联合干预组可显著降低HSD大鼠的肾脏重量。此外,各组间血糖、TG、TC、LDL-C、HDL-C、血清白蛋白、血清钠、谷丙转氨酶、谷草转氨酶均无显著差异。5.对照组苏木精和伊红(H&E)染色显示肾脏组织正常。而在HSD组,观察到明显的肾小球萎缩,管状颗粒变性。与对照组比较,PAS染色显示HSD组肾小球系膜基质和基底膜均有明显的细胞增殖和浸润;肾小管蛋白质管型;玻璃样变性。此外,与对照组相比,Masson三色染色发现HSD组肾脏的肾小球和小管间质纤维化显著增加。而HSD+Cana组、HSD+Irb组和HSD+Cana+Irb组细胞增殖及肾小球系膜基质和基底膜浸润显著减少;肾小球萎缩、肾小管肿胀显著改善;肾间质纤维化面积显著减少。HSD+Cana组、HSD+Irb组和HSD+CaTaurine分子量na+Irb组在肾脏保护作用方面无统计学差异。小结:1.8%高盐诱导Dahl SS大鼠12周,建立高血压肾损害模型。2.Cana联合Irb较Cana或Irb单药干预降低收缩压的效果更显著。接受相应药物干预的第3周,Cana联合Irb降低舒张压的效果显著优于Cana或Irb单药干预,但随着药物干预时间的延长,Cana联合Irb,Cana或Irb单药干预降低舒张压效果相当,无统计学差异。3.Cana干预治疗可降低血压,同时还具有减轻体重、利尿的作用,但不影响大鼠正常的血糖、血钠水平。4.8%高盐诱导Dahl SS大鼠12周后,大鼠出现高血压肾损害及肾纤维化,而Cana可以改善上述改变。第二部分卡格列净对Dahl盐敏感大鼠肾脏上皮间充质转变(EMT)及氧化应激的影响目的:观察8%高盐饲料喂养Dahl SS大鼠12周后肾脏EMT及氧化应激相关指标的改变,并进一步分析及比较Cana,Irb,Cana联合Irb对Dahl SS大鼠肾脏EMT及氧化应激的影响。方法:1.用Western Blotting检测肾脏组织中SIRT3,上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin),波形蛋白(vimentin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达水平。2.用免疫组化染色进一步检测肾脏组织中SIRT3,E-cadhKD025erin,vimentin,α-SMA的蛋白表达。3.肾脏皮质中MDA,GSH含量用商业试剂盒采用除蛋白法测定。结果:1.Western Blotting、免疫组化结果显示HSD组大鼠肾脏中SIRT3,E-cadherin蛋白表达显著减少,vimentin及α-SMA蛋白表达显著增加,经Cana,Irb及Cana联合Irb干预12周后SIRT3、E-cadherin蛋白表达显著增加,vimentin及α-SMA蛋白表达显著减少,且有统计学差异。三组药物干预,对SIRT3、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达的改善效果无统计学差异,但Cana联合Irb干预对vimentin的蛋白表达的改善效果显著优于Cana及Irb干预组。2.HSD组大鼠肾脏MDA水平较对照组显著升高,而GSH水平较对照组显著降低,Cana、Irb及Cana联合Irb干预12周后MDA较HSD组显著降低,GSH显著升高,有统计学差异。三组药物干预效果无统计学差异。在HSD组肾脏中catalase蛋白表达水平较对照组显著降低,Cana、Irb及Cana联合Irb干预12周后较HSD显著升高,有统计学差异。三组药物干预效果无统计学差异。小结:1.EMT是肾脏纤维化的重要组成成分,表现为E-cadherin表达减少,vimentin及α-SMA表达增加。经8%高盐饲料喂养12周后的Dahl SS大鼠发生了EMT,Cana、Irb及Cana联合Irb干预均可通过减少EMT来改善肾脏损害。2.经8%高盐饲料喂养12周后的Dahl SS大鼠肾脏氧化应激指标MDA水平显著升高,而GSH水平显著降低,catalase蛋白表达显著降低;Cana、Irb及Cana联合Irb干预均可通过减少氧化应激来改善肾脏损害,三组药物干预效果无统计学差异。第三部分SIRT3介导了卡格列净对AngⅡ诱导的HK-2上皮间充质转化目的:评价Cana药物干预对细胞的安全性,探讨Cana对Ang-Ⅱ诱导HK-2的EMT的影响及机制。方法:1.HK-2以6×10~4 cells/well的密度接种于96孔板上,通过CCK-8筛选Ang-Ⅱ的浓度。2.通过CCK-8筛选Cana的浓度。3.合成siRNA-SIRT3,用q RT-PCR及Western Blotting检验SIRT3基因沉默成功与否。4.实验分为7组:Con(空白对照组)、AngⅡ组、AngⅡ+Cana 25、AngⅡ+siRNA SIRT3、AngⅡ+si-NC、AngⅡ+Cana25+siRNA SIRT3和AngⅡ+Cana25+si-NC组。5.各组细胞培养24h后,收集细胞,Western Blotting检测细胞中SIRT3、FOXO3a、catalase、E-cadherin、vimentin、α-SMA的蛋白表达水平。结果:1.HK-2以6×10~4 cells/well的密度接种于96孔板上,Ang-Ⅱ的浓度分别设定为10~(-8)M、10~(-7)M、10~(-6)M、10~(-5)M,通过CCK-8筛选Ang-Ⅱ的最佳浓度,最终选择10~(-6)M。2.HK-2以6×10~4 cells/well的密度接种于96孔板上,将Cana的浓度分别以5、10、15、20、25、30μM加入Ang-Ⅱ浓度为10~(-6)M的细胞培养基中,通过CCK-8筛选Cana的最佳浓度,最终选择25μM,此浓度即无细胞毒性,又发挥药物活性作用。3.siRNA转染HK-2细胞后,与si-NC对照组相比,si-SIRT3-1组和si-SIRT3-2组的SIRT3的m RNA和蛋白表达显著降低,si-SIRT3-1组与si-SIRT3-2组比较差异无统计学意义。4.Western Blotting结果显示与AngⅡ组相比,AngⅡ+Cana25组的SIRT3、FOXO3a、catalase、E-cadherin蛋白表达水平均显著升高而vimentin、α-SMA的蛋白表达水平均显著降低,且均有统计学差异。5.SIRT3基因沉默后,AngⅡ+Cana25+siRNA SIRT3组的SIRT3、FOXO3a、catalase、E-cadherin蛋白表达较AngⅡ+Cana25+si-NC组及AngⅡ+Cana25组明显减少,均有统计学差异。AngⅡ+Cana25+siRNA SIRT3组vimentin和α-SMA蛋白表达较AngⅡ+Cana25+si-NC组及AngⅡ+Cana25明显增加,均有统计学差异。小结:1.Western Blotting结果显示与AngⅡ组相比,Cana干预后SIRT3、FOXO3a、catalase、E-cadherin蛋白表达水平均显著升高及vimentin、α-SMA的蛋白表达水平均显著降低,且均有统计学差异。2.SIRT3基因沉默后,Cana干预后E-cadherin蛋白的增加在很大程度上被SIRT3的沉默而减弱,而vimentin和α-SMA蛋白的减少则被SIRT3的沉默显著消除。结果表明,Cana可能通过SIRT3依赖的途径抑制AngⅡ诱导的HK-2细胞EMT。3.SIRT3基因沉默后,Cana干预后FOXO3a,catalase蛋白的增加在很大程度上被SIRT3的沉默而减弱。结果提示,Cana可能通过SIRT3依赖的途径抑制AngⅡ诱导的HK-2细胞氧化应激。第四部分血清补体活化与高血压肾损害相关性研究目的:探讨补体C3,补体旁路途径活性(AP50)及补体调节因子H(CFH)在原发性高血压及高血压合并肾损害患者中的表达水平与高血压肾损害的相关性。方法:1.选取2022年5月至2023年12月在河北省人民医院慢性病体检和健康体检的183例受检者,其中包括健康人群、原发性高血压且不合并肾脏损害(e GFR≥90 ml/min/1.73 m~2)及原发性高血压合并肾脏损害(e GFR<60 ml/min/1.73 m~2)的患者。对所有纳入受试者进行一般临床情况采集,包括:身高、体重、年龄、性别、既往慢性病史、临床用药情况、吸烟史、饮酒史、血压情况、肾脏超声及临床相关化验指标。2.依据纳入标准分为:原发性高血合并肾脏损害(RD)组、原发性高血压无肾脏损害(NRD)组及健康对照组(Normal),收集受试者血清样本,测定血清中补体成分C3、补体系统的旁路途径活性(AP50)及补体调节因子H(CFH)含量。3.采用SPSS 25.0软件进行数据分析,正态分布的计量资料用(均数±标准差)表示,多组间比较采用单因素方差分析。非正态分布的计量资料用中位数(四分位数间距)[M(Q1,Q3)]表示,多组间比较采用Kruskal-Wallis H秩和检验。计数资料以频数和百分率表示,采用χ~2检验和Fisher精确概率法。分析C3、AP50、CFH与高血压肾损害指标的相关性采用Spearman相关性分析。多因素logistic回归分析与高血压及高血压肾损害相关的影响因素。以P<0.05时视为差异有统计学意义。结果:1.三组受试者在性别、年龄、身高、吸烟史、饮酒史均无统计学差异。NRD组与健康对照组间e GFR无显著差异。年龄、性别、身高、吸烟史、饮酒史、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。NRD组与RD组两组e GFR有显著差异(P<0.001),收缩压和舒张压差异无统计学意义(分别为P<0.001,P=0.002)。2.三组间年龄、性别、身高、吸烟史、饮酒史、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、空腹血糖、谷丙转氨酶、谷草转氨酶组间比较差异无统计学意义(均P>0.05)。健康对照组血清C3水平为(152.15±17.80)mg/d L,NRD组为(166.71±21.31)mg/d L,RD组为(178.52±18.82)mg/d L,各组间差异有统计学意义(均P<0.05),AP50分别为18.27(17.16,19.03)U/ml、19.20(18.59,20.50)U/ml、20.97(20.22,22.14)U/ml,三组之间存在统计学差异(均P<0.05)。CFH分别为319.36(292.69,353.07)μg/L、269.23(239.43,292.21)μg/LMining remediation、239.78(212.93,255.50)μg/L,三组之间均存在统计学差异(均P<0.05)。3.Spearman相关性分析:血清补体C3、AP50分别与e GFR呈显著负相关,血清补体CFH与e GFR呈显著正相关,血清补体C3、AP50与血清肌酐呈显著正相关,血清补体CFH与血清肌酐呈负相关。4.分别以健康人群是否发生高血压为因变量,进行二元logistic回归分析,结果显示血清C3增加、CFH减少及SBP升高是高血压的独立危险因素;以高血压患者是否发生高血压肾损害为因变量,进行二元logistic回归分析,显示AP的激活、CFH的减少及BMI增加是高血压向高血压肾损害进展的独立危险因素;以健康人群是否发生高血压肾损害为因变量,进行二元logistic回归分析,结果显示血清C3增加、AP激活、CFH减少及SBP升高是高血压肾损害的独立危险因素。小结:补体激活、特别是补体旁路的异常激活,可能是高血压肾损害发生发展的重要危险因素之一。

目的 基于网络药理学分析黄柏治疗肝损伤的作用及分子机制,并通过KD025分子式小鼠体内实验验证相关预测靶点及黄柏提取物-黄柏多糖对免疫性肝损伤的保护作用。方法 利用TCMSP和Swiss target prediction数据库检索并筛选黄柏的有效成分及作用靶点,然后在GeneCards和OMIM网站获得疾病相关靶点,取化合物与疾病交集靶点做蛋白互作分析、GO生物功能和KEGG信号途径富集分析,接着对化合物及关键靶点蛋白进行分子对接,最后建立刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠肝损伤模型探讨黄柏提取物治疗肝损伤的作用机制。结果 黄柏中共筛选出37个有效成分,其治疗关键靶点为肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1 (AKT1)、信号转导与转录激活因子3 (STAT3)、表皮生长因子受体(EGFselleck HPLCR)和半胱天蛋白酶3(CASP3)等,富集分析显示黄柏可能通过MAPK级联反应的正向调控、氧化应激反应等分子机制及调控PI3K-Akt信号通路、脂质和动脉粥样硬化等通路发挥对肝脏的保护作用。动物实验发现黄柏多糖灌胃处理可提高肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性,降低血清碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织丙二醛(MDA)水平,调控血清炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)的表达,并降低肝组织中TNF-αmRNA表达。结论 黄柏可通过作用于role in oncology careTNF-α、AKT1、STAT3、EGFR和CASP3等靶点,干预脂质和动脉粥样硬化通路来减轻氧化应激反应和炎症反应,达到保肝作用。