MAPK信号通路

造血作用(Haematopoiesis)是不同类型血细胞在造血组织中增殖、分化并释放的复杂过程。血淋巴细胞是无脊椎动物主要的免疫细胞,其增殖和分化是机体免疫防御的核心LXH254体内实验剂量基础,也是维持免疫稳态的关键。造血组织是重要的免疫器官之一,其能够为血细胞活动提供环境。目前为止,对于长牡蛎机体内造血作用相关的研究较少,其造血作用发生位点尚不明确,造血作用调控机制仍不清晰,这严重限制了对长牡蛎免疫、造血作用研究,并进一步影响到病害防控相关工作的展开。本研究采用生物信息学、分子生物学、细胞生物学和免疫学等技术方法对长牡蛎(Crmedieval Londonassostrea gigas)造血位点进行鉴定并对其造血作用调控机制进行深入研究,明确了长牡蛎造血作用相关分子特征及功能,初步鉴定了长牡蛎造血作用相关位点,并探究了血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)对长牡蛎造血过程的调控作用,取得如下结果:1.确认了长牡蛎造血作用相关分子特征其在血淋巴细胞增殖中的调节作用在长牡蛎中鉴定得到增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),ATP结合盒转运蛋白G2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2),血管内皮生长因子VEGF及其受体VEGFR的同源分子,上述分子均含有保守的功能结构域。Cg PCNA和Cg ABCG2在长牡蛎鳃组织和性腺中表达水平较高,分别分布于血淋巴细胞的细胞核内和细胞膜上。Cg VEGF和Cg VEGFR在鳃组织和血淋巴细胞中均有较高水平表达,分别分布于血淋巴细胞的细胞质中和细胞膜上。造血相关细胞因子r Cg Astakine刺激后,长牡蛎无粒细胞及鳃组织内Cg PCNA表达水平显著上升,且鳃组织内Cg PCNA与Ed U标记在细胞核中可以共定位分布。采用RNAi技术抑制Cg ABCG2表达,发现Ed U阳性细胞占总血淋巴细胞比例降低,且处于S期的血淋巴细胞比例显著下降。注射r Cg VEGF后,血淋巴细胞和鳃组织中Ed U阳性细胞数量均显著增多。灿AZD1152-HQPA体内实验剂量烂弧菌刺激后,长牡蛎血淋巴细胞中Cg PCNA、Cg ABCG2、Cg VEGF和Cg VEGFR的m RNA表达水平均显著上升。结果表明上述分子可能参与长牡蛎血淋巴细胞增殖过程。2.发现了靠近绞合区鳃丝基部是长牡蛎造血位点将长牡蛎鳃组织分为8个不同区域,利用q RT-PCR技术检测造血相关转录因子、细胞周期相关分子以及免疫效应分子等在不同区域鳃组织中表达情况。结果显示,造血相关转录因子(Cg GATA,Cg SCL,Cg Runx)、细胞增殖相关细胞因子(Cg Astakine)、细胞周期相关分子(Cg PCNA,Cg CDK2)以及潜在干祖细胞标记分子(Cg SOX_2,Cg ABCG2)在靠近绞合区的鳃组织中表达水平高于其他区域,而免疫效应分子防御素(Cgdefensin-1,Cgdefensin-2,Cg Bigdefensin)及细胞因子(Cg IL17-3,Cg IL17-6)等在靠近绞合区的鳃组织中表达水平低于其他区域。组织化学染色检测结果显示靠近绞合区的鳃组织中部分细胞的细胞核呈近圆形,具有核质比较大的特征。且该区域存在大量Ed U阳性细胞,这类细胞主要富集于内鳃瓣普通鳃丝顶端。通过Ed U滞留标记方法检测到该区域内少量细胞在标记后较长时间仍可被Ed U染色,且呈干细胞标记(Cg SOX_2)阳性。结果表明靠近绞合区鳃丝基部是长牡蛎造血位点,Cg SOX_2阳性细胞可能是干祖细胞样细胞。3.明确了VEGF-VEGFR-MAPK通路在造血位点细胞增殖和迁移中发挥调控作用灿烂弧菌刺激后,造血位点内Cg VEGF和Cg VEGFR的m RNA表达水平显著上升。采用RNAi技术抑制Cg VEGFR表达后使用r Cg VEGF刺激,循环血淋巴细胞中细胞周期相关分子(Cg PCNA,Cg CDK2)及造血相关转录因子(Cg GATA,Cg Runx)表达水平显著下降,且循环血淋巴细胞中Ed U阳性细胞所占比例显著下降。同时,造血位点内Ed U阳性细胞聚集且数量上升。造血位点内MAPK通路中关键激酶Erk和p38的磷酸化水平显著下降,且造血相关转录因子(Cg SCL,Cg Runx)及细胞迁移相关基质金属蛋白酶(Cg MMP)表达水平显著下降,基质金属蛋白酶抑制剂(Cg TIMP)表达水平显著上升。采用RNAi技术抑制Cg VEGFR表达后使用VEGFR激动剂牛磺胆酸钠刺激,检测到循环血淋巴细胞中细胞周期相关分子、造血相关转录因子以及循环血淋巴细胞中Ed U阳性细胞所占比例下降。造血位点内Ed U阳性细胞聚集,MAPK通路中关键激酶Erk和p38的磷酸化水平显著下降,造血相关转录因子及细胞迁移相关分子表达变化。注射Brivanib或Semaxanib抑制Cg VEGFR磷酸化抑制剂后使用r Cg VEGF刺激,同样检测到循环血淋巴细胞及造血位点内相应变化。上述结果表明,Cg VEGF与受体结合后介导MAPK通路的激活并调节下游造血相关转录因子及细胞迁移相关基质金属蛋白酶表达,参与调控长牡蛎造血位点内细胞增殖及迁移。综上所述,Cg PCNA、Cg ABCG2、Cg VEGF和Cg VEGFR进化保守并参与长牡蛎细胞增殖的调节,长牡蛎造血位点位于靠近绞合区鳃丝基部,且VEGF-VEGFR-MAPK通路参与调控造血位点中细胞增殖和迁移过程。本研究为深入研究血淋巴细胞的发生发育过程及其在贝类免疫防御中的作用奠定了重要基础,并为水产动物疾病防控相关研究提供理论支持。

目的 探讨SMRACAD1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及作用机制。方法对癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中373个胃癌组织和32个正常组织的SMRACAD1表达进行差异分析及京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）富集分析，采用蛋白印迹法（Western blot,WB）和实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chauto-immune responseain reaction,qPCR）检测SMRACAD1在人正常胃黏膜上皮细胞（GES-1）、人胃癌细胞（HGC-27）和人胃腺癌细胞（AGS）的表达。构建AGS细胞下调SMRACAD1表达和空白对照模型，平板克隆和CCK-8实验检测AGS细胞的增殖能力，划痕实验检测迁移能力，Transwell实验检测迁移和侵袭能力。WB检测SMRACAD1下调后对上皮-间充质转化（epithelial-mesenchyPR-171分子式mal transition,EMT）相关蛋白表达（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PD-0332991试剂Snail）及PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。结果 SMRACAD1在胃癌组织和AGS细胞中高表达。下调SMRACAD1表达抑制了AGS细胞增殖、侵袭和迁移能力（P <0.05），抑制了AGS细胞EMT过程和PI3K/AKT/mTOR信号通路的激活。结论SMARCDA1在胃癌组织和胃癌细胞系中表达上调，通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路激活下调SMRACAD1表达可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT。

目的 研究肠道微生态干预制剂治疗幽门螺杆菌（Helicobacter pylori）相关慢性更多胃炎的临床价值。方法 选择2022年1-10月本院收治的Hp相关慢性胃炎患者94例为研究对象，随机PLX5622体内实验剂量分为两组，其中对照组采取标准四联方案，而观察组在此基础上，再联合肠道微生态干预制剂进行治疗，比较两组治疗效果。结果Pathology clinical 干预前，两组症状评分比较无差异（P>0.05）；干预后，观察组的食欲差、恶心呕吐、胃灼热感以及上腹部不适等各项评分均低于对照组（P<0.05）；与对照组比较，观察组治疗有效率高，组间对比差异明显（P<0.05）；观察组Hp根治率比对照组高（P<0.05）；同时，两组外周血T淋巴细胞亚群水平比较有统计学意义（P<0.05）。结论 临床上运用肠道微生态干预制剂对Hp相关慢性胃炎患者进行治疗，能够提高Hp根除率，调节细胞免疫状态，减轻症状，从而提高治疗效果。

目的:通过对比系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者、狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者和健康对照者血清SVEP1蛋白的水平表达差异,分析SVEP1与疾病活动度的相关性,探究血清SVEP1蛋白作为LN生物学标志物的价值,为LN早期诊断、病情评估提供重要的科学依据。方法:(1)本实验共纳入2021年11月至2023年02月就诊于我院初次诊断为SLE的患者41例及同期健康体检者30例,采集清晨空腹外周静脉血,通过酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本血清SVEP1蛋白的含量。(2)收集SLE患者一般资料及实验室指标,患者疾病活动度分组依据为系统性红斑狼疮活动度指数2000(Systemic Lupus Erythematosus Disease Activity Ihepatic dysfunctionndex 2000,SLEDAI-2000)评分表~([1]):将评分在5-9分之间的9例患者纳入轻度活动组,评分在10-14分之间的13例患者纳入中度活动组,将评分≥15分的19例患者纳入重度活动组。根据2019年中国狼疮肾炎诊断和治疗指南~([2]),将SLE患者分别纳入狼疮性肾炎组和非狼疮性肾炎组。(3)比较SLE组与健康对照组之间、SLE不同疾病活动组之间、狼疮肾炎组与非狼疮肾炎组之Elexacaftor体内实验剂量间SVEP1蛋白水平,并分析SVEP1与其他临床指标的相关性,评估血清SVEP1在LN中的临床诊断价值。结果:(1)与健康对照组相比,SLE患者血清中SVEP1水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.001);(2)血清SVEP1表达水平在不同活动组、健康对照组间存在差异(P<0.001),重度活动组血清SVEP1水平高于轻度活动组(P<0.001)、中度活动组(P<0.05)和健康对照组(P<0.001),差异具有统计学意义;(3)血清SVEP1表达水平在LN组、非LNselleckchem Belnacasan组、健康对照组间存在差异(P<0.001),LN组血清SVEP1水平显著高于健康对照组(P<0.001)和非LN组(P<0.05),差异具有统计学意义;(4)LN患者血清中SVEP1蛋白水平与C3、C4呈显著负相关(r=-0.412,P=0.041;r=-0.402,P=0.047);与24小时蛋白尿、SLEDAI-2k评分、C反应蛋白、抗ds DNA抗体阳性率与抗Sm抗体阳性率呈显著正相关(r=0.41,P=0.042;r=0.481,P=0.015;r=0.623,P=0.001;r=0.433,P=0.031;r=0.485,P=0.014);血清中SVEP1水平与其它检验指标如血常规(红细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数)、血生化(肌酐、尿素氮、e GFR、血沉、血尿酸、谷丙转氨酶)无明显相关性(P>0.05);(5)血清SVEP1诊断LN的受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under curve,AUC)为0.933,截断值为699.319 pg/m L,其预测LN的敏感度为88.0%,特异度为99.9%(P<0.001)。结论:(1)血清SVEP1蛋白水平在狼疮性肾炎患者中表达明显增高,提示SVEP1在狼疮性肾炎发病过程中可能发挥一定作用。(2)SVEP1水平与C3、C4呈负相关,与24小时蛋白尿、SLEDAI评分、C反应蛋白、抗ds DNA抗体阳性率、抗Sm抗体阳性率呈正相关,提示血清SVEP1水平升高可能反映狼疮性肾炎疾病活动。

冰黄肤乐软膏是一种常见的皮肤科外用药，主要由大黄、姜黄、硫磺、黄芩、甘草、冰片、GSKJ4薄荷脑组成，具有清热燥湿、活血祛风、杀虫止痒等作用，现代药理研究表明，其能抗炎抗过敏、杀菌杀虫止痒，对绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌等多种致病菌具有良好的抗菌活性。冰黄肤乐软膏作为外用制剂，具有易洗涤、吸收快、直达病所、方便携带等优点，临床上应用范围较广，可用于湿疹、神selleck抑制剂经性皮炎、银屑病、丘疹性荨麻疹等多种皮肤病的治疗，同时适用于成人、儿童等不同人群和阴囊、肛周等特殊部位，有效率高，复发率低，起效时间短，未见皮肤萎缩变薄、毛细血管扩张等不良反应，安全性较好。但其效应机制缺乏足够的实验支持，如对炎症因子等的影响尚未完全明确，有待深入研究。本文对冰黄肤乐软膏治疗各种皮肤病的相关文献进行归纳总结，以期为进一步促进冰黄肤乐软膏quality control of Chinese medicine的临床合理应用提供参考。

目的：探讨IL-22/IL-22受体A1(IL-22RA1)通路在口腔鳞状细胞癌（OSCC）恶性进展中的作用及其机制。方法：利用GEO数据库和免疫组化法分析IL-22RA1在OSCC组织及配对癌旁组织中的表达水平，采用组织芯片免疫组化法检测并分析IL-22RA1表达水平与OSCC患者临床病理特征的关系，通过EBI ArrayExpress数据库分析IL-更多22RA1表达水平与患者预后的关系。采用免疫荧光法检测IL-22和IL-22RA1在OSCC组织中表达水平并分析两者间的相关性。用RNA干扰技术敲减OSCC细胞WSU-HN4和CAL27的IL-22RA1表达，用q PCR法验证敲减效率。采eye drop medication用克隆形成实验、Transwell小室法分别检测IL-22对阴性对照（si NC）组和IL-22RA1敲减（siIL-22RA1）组OSCC细胞克隆形成及迁移能力的影响，WB法检测IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达水平及STAT1、STAT3和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果：OSCC组织中IL-22RA1 mRNA的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.05）。IL-22RA1表达水平与OSCC患者的肿瘤大小（P<0.05）、淋巴结转移（P<0.01）及预后不良（P<0.05）有关联。O确认细节SCC组织中的IL-22和IL-22RA1表达水平无明显关联，IL-22对OSCC细胞IL-22RA1表达无影响（均P>0.05）。IL-22可显著增强OSCC细胞的克隆形成和迁移能力（均P<0.01），并可激活OSCC细胞的STAT1、STAT3及ERK1/2信号分子；敲减OSCC细胞的IL-22RA1后，IL-22则无法发挥上述作用。结论：IL-22/IL-22RA1可通过调控细胞增殖和迁移促进OSCC的生长和转移，其下游机制可能是激活ERK1/2-STAT1/3信号通路。

目的 探讨石榴皮提取物(pomegranate peel extract, PPE)对溃疡性结肠炎(ulcerativABT-199e colitis, UC)的治疗作用及机制。方法 采用分光光度法测定PPE中总酚含量，高效液相色谱法分析PPE中主要成分。将24只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组：正常组、模型组、PPE低剂量组和PPE高剂量组，每组6只。除正常组外，其他3组小鼠连续7 d给予含3%的葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)饮用水诱导UC模型。从DSS造模给药第1天起，正常组和模型组每日以蒸馏水灌胃，PPE各组分别给予200 mg/kg和400 mg/kg的PPE灌胃，1次/d,连续10 d。通过记录体质量、疾病活动指数(DAI)、结肠长度和结肠组织病理学变化评估UC的严重程度。采用实时定量PCR(real-time quantitative, RT-qPCR)检测小鼠结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素17A(IL-17A)、干扰素γ(IFN-γ)的mRNA相对表达水平，试剂盒法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性。结果 PPE中总酚含量为(295.76±3.15)mg/g,主要成分为没食子酸、安石榴苷及鞣花酸。与正常组比较，模型组小鼠的体质量降低、结肠缩短、DAI指数和组织病理评分增加(P<0.01),TNF-α、IL-17A、IFN-γ和MDA的表达水平增加(P<0.05),SOD和GPX活性降低(P<0.01)。与模型组比较，PPE低剂量组和高剂量组小鼠的体质量和结肠长度增加、DAI指数和组织病理评分降低(P<0.05),小鼠结肠组织中T获悉更多NF-α、IL-17A、IFN-γ和MDA的表达水平降低(P<0.05),GPX活性增加(P<0.05),SOD差异无统Medullary infarct计学意义(P>0.05)。结论 PPE可以通过抗炎和抗氧化活性改善DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎。

本研究旨在探究药用植物五味子中的生物活性物戈米辛J对超负荷运动引起的肌肉损伤的影响及其机制。通过对超负荷运LEE011动诱导的骨骼肌损伤模型进行实验，研究发现戈米辛J能够显著减轻肌肉损伤程度。机制研究表明，戈米辛J具有抗氧化和抗炎作用，能够提高骨骼肌中抗氧化酶的水平，减少氧自由基的产生，降低氧化应激损Vastus medialis obliquus伤。此外，戈米辛selleck NMRJ还通过抑制炎症信号通路的活化，减少炎性因子的释放，抑制骨骼肌的炎症反应。同时，戈米辛J还能够改善线粒体功能，促进线粒体呼吸链复合物的活性，从而加速肌肉损伤的修复过程。综上所述，戈米辛J作为五味子中的活性成分，通过抗氧化、抗炎和改善线粒体功能等多种途径，对超负荷运动引起的肌肉损伤具有保护作用。本研究结果为进一步探索五味子的临床应用提供了重要的理论依据。

目的：基于药物分子分析对茯苓-白术-桂枝药对治疗类风湿关节炎的作用机制进行分析探究。方法：通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）采集茯苓-白术-桂枝主要化学成分及作用的靶点，通过GeneCardKD025小鼠s、在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、DisGeNET三个疾病基因数据库收集类风湿关节炎相关作用靶点，取茯苓-白术-桂枝与类风湿关节炎相融合的作用靶点，在线绘制韦恩图。通过STRING数据库对共同作用靶点进行筛选，进而导入Cytoscape 3.7.1软件构建药物-活性成分-核心靶点网络。基于David网站对核心靶点进行基因本体论（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析，利用微生信在线绘图工具对GO、KEGG富集分析数据进行多维网络图形绘制。利用Schrodinger 2022.2软件中的Glide模块进行分子对接。结果：获得茯苓-白术-桂枝药对有效活性成分29个、靶点53个，类风湿关节炎相关疾病靶点3394个，治疗类风湿关节炎的靶点有30个，其中β-谷甾醇、花旗松素、儿茶酚、豆甾醇等主要活性成分通过作用于前列腺素内过氧化物合成酶2（Prostaglandin-endopplant virologyeroxide synthase，PTGS2）、JUN原癌基因（Jun Proto-Oncogene，JUN）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine Aspartate Proteinase 3，CASP3）、一氧化氮合酶3（Nitric Oxide Synthase 3，NOS3）、过氧化氢酶等关键靶点，参与肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor， TNF）信号通路、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物（Advanced Glycation End Product，AGE）-晚期糖基化终末产物受体（Receptor of AGE， RAGE）信号通路、肿瘤抑制蛋白（Tumor protein p53，TP53）等多购买Alpelisib种信号通路起到治疗类风湿关节炎的作用。分子对接结果显示β-谷甾醇、儿茶酚与CASP3有较稳定的结合力。结论：本研究证实茯苓-白术-桂枝是通过多成分基于多靶点作用与多通路对类风湿关节炎起到治疗作用。

目的 探讨脓毒症患者血清核因子E2相关因子2(nuclea factor erythroid-2-related factor2,NRF2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)水平变化及对并发急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的预测价值。方法 选取2017年4月—2023年4月南京中医药大学附属南京医院脓毒症患者132例为研究组，选取同期年龄、性别匹配的健康体检者132例为对照组。2组均检测血清NRF2、HO-1水平。统计研究组入院1周并发AKI情况，分析脓毒Panobinostat IC50症患者并发AKPatent and proprietary medicine vendorsI的影响因素，构建脓毒症患者并发AKI的列线图预测GW4869作用模型并进行决策曲线分析(decision curve analysis,DCA)。结果 研究组血清NRF2(t=30.537,P<0.001)、HO-1(t=29.302,P<0.001)水平高于对照组；研究组132例脓毒症患者入院1周AKI发生率为45.45%(60/132)；随着NRF2、HO-1水平升高，患者并发AKI发生率呈降低趋势(χ~2=35.636,28.514，均P<0.001);Logistic多因素回归分析提示NRF2(OR=0.104,95%CI:0.023～0.471,P=0.003)、HO-1(OR=0.341,95%CI:0.168～0.691,P=0.003)是脓毒症患者并发AKI的独立保护因素，脓毒症相关性器官功能衰竭评价评分(OR=1.493,95%CI:1.128～1.976,P=0.005)、降钙素原(OR=1.277,95%CI:1.070～1.523,P=0.007)、白细胞计数(OR=3.030,95%CI:1.550～5.921,P=0.001)是脓毒症患者并发AKI的独立危险因素；列线图预测模型显示NRF2、HO-1对脓毒症患者并发AKI具有较高预测价值，一致性指数分别为0.769、0.751;DCA显示在阈值0.20～0.78，联合评估脓毒症患者并发AKI的净受益率优于NRF2、HO-1单独检测。结论 脓毒症患者血清NRF2、HO-1水平升高，联合检测二者水平有助于判断AKI发生风险。