MAPK信号通路

研究背景及目的:人类乙型肝炎病毒(HBV)能够感染人类宿主并引发慢性持续感染,可能导致感染者出现肝炎、肝硬化、肝细胞癌,严重威胁人类生命健康。HBV基因组编码的乙肝病毒X蛋白(HBx),是一种具有多种调节功能的蛋白,参与宿主信号转导调节、基因转录、蛋白质降解等过程,在HBV高效复制、基因组整合、逃逸宿主免疫反应中发挥重要生物学功能,对HBV感染、疾病慢性化以及肿瘤的发生有重要意义。I型长弥散核元件(LINE-1)是人体细胞中唯一已知具有自主转座活性的非LTR逆转录元件,在基因组进化、基因组稳定性以及宿主天然免疫反应中均具有重要生物学意义。有关HBV与逆转录元件之间是否存在直接相互作用,目前仍缺乏广泛的证据。LINE-1在复制过程中可以破坏DNA的稳定性并激活干扰素信号系统,两者均可对HBV的感染复制及整合过程产生负面影响。作为应对措施,HBV可能会利用自身蛋白来抑制LINE-1的逆转座活性。HBx作为一种多功能调节因子,其C端功能区更是具有结合RNA、DNA能力,提示HBx蛋白作为HBV的重要组成成分,极有可能对LINE-1的活性存在调控作用,相关研究成果对深入考察HBV、LINE-1、天然免疫系统三者之间的关系将产生明确的指导作用。本研究拟聚焦HBx与LINE-1,围绕HBx是否影响LINE-1活性展开研究,逐步探讨HBx蛋白与LINE-1之间的相互作用、可能机制及其生物学意义。研究方法:1、考察HBx蛋白对LINE-1逆转座活性的影响:采用学术界广泛使用的、依赖报告基因表达的LINE-1逆转座活性实验,通过流式细胞学检测、Western blotting等实验方法,考察HBx是否影响LINE-1的活性。2、探索HBx蛋白调控LINE-1活性的分子机制:LINE-1的复制分为RNA转录、蛋白表达、RNP组装、TPRT及整合五大步骤。因此,通过Western blotting、Luciferase、co-IP、qRT-PCR等实验方法,分别考察HBx是否对LINE-1 5’-UTR启动子活性,LINE-1RNA稳定性、LINE-1蛋白ORF1p和ORF2p的表达及稳定性、LINE-1 RNP的组装及功能以及LINE-1的整合能力产生影响,探究HBx调控LINE-1活性的具体机制。3、鉴定HBx蛋白影响LINE-1活性的关键功能区:构建HBx的不同截短体或突变体,通过上述实验考察HBx影响LINE-1活性的关键功能区,并对HBx调控LINE-1活性的分子机制进行反向验证。4、解析HBx蛋白影响LINE-1活性的生物学意义:通过Luciferase、ELISA、qRT-PCR等实验方法考察HBx、LINE-1、干扰素三者之间作用关系;通过彗星实验方法考察HBx对LINE-1破坏基因组(或ds DNA)稳定性这一功能的影响。研究结果:1、HBx蛋白具有抑制LINE-1活性的功能通过LINE-1逆转录转座试验考察HBx对LINE-1逆转录转座活性的影响,结果发现:HBx蛋白可以有效抑制LINE-1的逆转座活性,且在一定程度内,这种抑制作用具有剂量依赖性。2、HBx结合并破坏LINE-1 RNA的稳定性对HBx蛋白抑制LINE-1活性的机制研究提示:HBx蛋白不影响LINE-1 5’-UTR的启动子活性;而是通过结合LINE-1 RNA,破坏LINE-1 RNA稳定性,从而下调LINE-1ORF1p和ORF2p蛋白的表达并发挥限制LINE-1活性的作用。3、HBx 120-141片段对HBx下调LINE-1逆转座活性十分重要实验结果表明,HBxΔ120-141不再能够有效结合并下调LINE-1 RNA,在对LINE-1活性抑制上也表现出功能性缺陷。4、HBx蛋白抑制LINE-1活性的现象具有潜在的生物学意义彗星实验结果表明,HBx在抑制LINE-1活性的同时,可以使基因组免于LINE-1复制过程中所产生的破坏;对细胞内干扰素表达水平的考察结果也证实,HBx可以下调LINE-1selleck产品对先天免疫系统的活化selleck合成能力。研究结论:本研究发现HBx蛋白可以识别LINE-1 RNA上的ORF1和ORF2区域,从而结合并破坏LINE-1 RNA的稳定性,进而下调LINE-1蛋白的表达,最后实现对LINE-1活性的抑制;HBx 120-141区域是HBx抑制LINE-1活性的关键功能区,缺失这一区域后,HBxΔ120-141不再能够实现对LINE-1 RNA的识别与结合;通过对LINE-1活性的抑制,HBx可以保护基因组(或其它双链DNA)的稳定性免受破坏,也可以在HBV复制期间降低细胞内的干扰素水平;本研究揭示了HBx具有调控LINE-1活性的全新功能与相关分子机制,解析了这一现象的潜在生物学意义,并讨论了其对HBV感染复制的可能影响,这是本研究的创新点。后续研究将进一步解析HBx在HBV感染复制过程中的作用与机制,从而为靶向HBx的药物设计,优化抗HBV治疗策略提供sexual transmitted infection更新的角度和更有效的参考。

精神分裂症(schizophrenia,SZ)是一种慢性重性精神疾病,其特征在于一系列可共存的不同症状,包括幻觉、妄想、情感平淡、社交退缩和认知障碍等。目前精神分裂症的发病机制尚不十分明确,治疗手段亦有限,因此,探索精神分裂症的深层机制、寻找其治疗靶点意义深远。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是一类非编码RNA,通过序列特异性碱基配对与靶信使RNA(messenger RNA,mRNA)的3’端非编码区(3’UTR)相互作用以降解靶mRNA或抑制翻译,从而下调(沉默)目的基因的表达。每个miRNA都可能调节数百个靶基因的表达,因而miRNAs的功能失调,特别是这种失调发生在中枢神经系统时,临床意义是重大的,对研究疾病潜在的分子机制和开发有效的治疗方法而言都是巨大的挑战。充分证据表明miRNAs在精神分裂症的发生发展中发挥重要作用。miR-144/451是一个双顺反子miRNA基因位点,编码miR-144和miR-451两种miRNAs。大量数据表明,miR-144/451参与调控多种神经精神类疾病如抑郁症、自闭症、阿尔茨海默病、帕金森病等,但其对精神分裂症是否有调控作用未见相关研究。基于以上背景,本研究旨在明确miR-144/451是否对精神分裂症有调控作用,并探讨可能的分子机制,为精神分裂症提供新的miRNA靶点的思路,分为以下3个部分:第一部分:miR-144/451敲除对精神分裂症小鼠模型表型的调控作用目的:通过遗传学方法繁殖小鼠获得同窝野生型(WT)小鼠和miR-144/451基因敲除(KO)小鼠并建立精神分裂症小鼠模型,明确miR-144/451敲除对精神分裂症表型是否有调控作用。方法:1.分别将同窝WT和KO小鼠随机分为conWT组、SZWT组和conKO组、SZKO组。通过连续腹腔注射14天(+)-MK-801建立精神分裂症小鼠模型,注射剂量为0.2mg/kg,以等量生理盐水为对照。2.评估小鼠精神分裂症症状:利用旷场实验检测小鼠genetic phenomena自发活动度(阳性症状),利用前脉冲抑制实验检测小鼠感觉门控selleckchem功能状态,利用筑巢实验检测认知功能,利用强迫游泳实验检测焦虑抑郁程度(阴性症状)。3.采用原位杂交法检测conWT组和SZWT组海马区miR-144和miR-451的mRNA水平。4.应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测各组小鼠前额叶皮质和纹状体中多巴胺含量。结果:1.旷场实验中,conWT和conKO小鼠的活动路程和平均速度无显著差异(P均>0.05),腹腔注射MK-801能显著增加SZWT和SZKO小鼠的活动路程和平均速度即小鼠自发活动过度(P均<0.05),而SZKO小鼠的自发活动较SZWT小鼠显著减少(P<0.05)。前脉冲抑制实验中,conKO小鼠较conWT小鼠的PPI%显著降低(P均<0.05)。MK-801注射能显著降低SZWT小鼠的PPI%(P均<0.01),而在前脉冲刺激为80dB和85dB时显著升高SZKO小鼠的PPI%(P均<0.05)。SZKO小鼠的PPI%较SZWT小鼠显著升高(P均<0.05)。筑巢实验中,conWT和conKO小鼠的筑巢评分无显著差异(P>0.05)。MK-801注射能显著降低SZWT小鼠筑巢评分(P<0.001),而SZKO小鼠评分较SZWT小鼠显著升高(P<0.01)。强迫游泳实验中,conWT和conKO小鼠的不动时间无显著差异(P>0.05)。MK-801注射显著延长SZWT和SZKO小鼠的不动时间(P均<0.001),而SZKO小鼠的不动时间较SZWT小鼠显著缩短(P<0.001)。2.MK-801注射显著增加SZWT小鼠海马区miR-144和miR-451 mRNA水平(P均<0.001)。3.conWT和conKO小鼠前额叶皮质和纹状体中的多巴胺含量无显著差异(P均>0.05)。MK-801注射显著降低SZWT和SZKO小鼠前额叶皮质中多巴胺含量而显著升高纹状体中多巴胺含量(P均<0.001)。SZKO小鼠前额叶皮质中多巴胺含量的降低程度和ABT-263生产商纹状体中多巴胺含量的升高程度均显著弱于SZWT小鼠(P均<0.01)。结论:miR-144/451基因敲除后小鼠精神分裂症症状及多巴胺失调明显改善,提示其对精神分裂症有明显调控作用,同时发现腹腔注射MK-801后SZWT小鼠海马区miR-144/451 表达增加。第二部分:脑内miR-144/451过表达对精神分裂症小鼠模型表型的调控作用目的:明确脑内过表达miR-144/451对精神分裂症表型的调控作用。方法:1.将WT小鼠随机分为con组,ago组,SZ组和SZago组,通过脑立体定位注射miR-144-3p和miR-451a agomir混合物实现miR-144/451的脑内过表达,以等量miR-NC为对照。连续腹腔注射14天(+)-MK-801诱发精神分裂症症状,注射剂量为0.2mg/kg,以等量生理盐水为对照。2.利用旷场实验检测小鼠自发活动度(阳性症状),利用筑巢实验检测小鼠认知功能。3.应用ELISA法检测小鼠前额叶皮质和纹状体中的多巴胺含量。结果:1.旷场实验中con组与ago组小鼠活动路程和平均速度无显著差异(P均>0.05)。SZago组小鼠活动路程和平均速度较SZ组小鼠显著增加(P均<0.05)。筑巢实验中con组和ago组筑巢得分无显著差异(P>0.05),SZago组和SZ组相比筑巢得分无显著差异(P>0.05)。2.con组和ago组前额叶皮质及纹状体中多巴胺含量均无显著差异(P均>0.05)。SZago组前额叶皮质中多巴胺含量较SZ组显著减少(P<0.001),纹状体中多巴胺含量较SZ组显著增多(P<0.001)。结论:脑内miR-144/451过表达加重精神分裂症症状和多巴胺失调,再次提示miR-144/451参与调控精神分裂症。第三部分:miR-144/451对精神分裂症小鼠模型脑内氧化应激和神经炎症的调控作用目的:利用自第一部分收集的前额叶皮质样本和制作的冰冻切片探讨miR-144/451 是否对精神分裂症小鼠模型脑内氧化应激和神经炎症有调控作用。方法:1.应用试剂盒检测各组小鼠前额叶皮质中丙二醛(MDA)、还原性谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和三磷酸腺苷(ATP)的含量,进一步应用实时荧光定量PCR检测各组小鼠前额叶皮质中抗氧化酶包括NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)、超氧化物歧化酶1(Sod1)、超氧化物歧化酶2(Sod2)、谷胱甘肽过氧化物酶(Gpx1)、过氧化氢酶(Cat)的mRNA相对表达量。2.采用免疫印迹实验检测细胞凋亡相关蛋白B-细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(Bad)及小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)的蛋白表达量。3.采用免疫荧光双染法检测各组前额叶脑区Iba-1和神经元核抗原(NeuN)的原位表达量。4.采用原位末端标记(Tunel)法检测各组前额叶脑区细胞凋亡数。结果:1.MK-801注射可显著上调SZWT和SZKO小鼠前额叶皮质中MDA的含量(P均<0.001),SZWT小鼠较SZKO小鼠MDA含量显著增加(P<0.05);可显著下调前额叶皮质中GSH、SOD、ATP的含量及NQO1、Sod1、Sod2、Gpx1和Cat的mRNA相对表达量(P均<0.01),SZWT小鼠较SZKO小鼠显著减少(P均<0.001)。2.MK-801注射可显著上调SZWT和SZKO小鼠前额叶皮质中Iba-1蛋白的表达量及Iba-1阳性细胞数(P均<0.001),而SZWT小鼠较SZKO小鼠Iba-1蛋白表达量和Iba-1阳性细胞数显著增加(P均<0.001)。3.MK-801注射可显著下调SZWT和SZKO小鼠前额叶皮质Bcl-2蛋白的表达量而显著上调Bad蛋白的表达量(P均<0.001),可显著上调Tunel阳性细胞数(P均<0.001)。SZWT小鼠前额叶皮质Bcl-2蛋白表达量较SZKO小鼠显著减少,而Bad蛋白表达量和Tunel阳性细胞数较SZKO小鼠显著增多(P均<0.01)。结论:miR-144/451缺失可能通过发挥抗氧化应激、抗凋亡和抑制小胶质细胞激活的作用抑制精神分裂症的进展,改善精神分裂症症状。

目的 探究髓样细胞触发受体-1(TREM-1)在慢性间JNJ-42756493歇性低氧(CIH)诱发的动脉粥样硬化(AS)中作用。方法 将ApoE~(-/-)小鼠随机分为空白组、模型组和实验组获悉更多。模型组和实验组小鼠饲养于低氧环境，给予高脂饲料喂养；实验组小鼠高脂饲养4周后，腹腔注射TREM-1抑制剂LR12(5 mg/kg),连续干预8周。饲养12周后，检测血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、三酰甘油(TG)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1β)、白flow mediated dilatation细胞介素10(IL-10)水平；组织学分析主动脉TREM-1表达、斑块面积及巨噬细胞水平。结果 与空白组相比，模型组小鼠主动脉TREM-1表达量显著升高(P<0.05)。相比于模型组，实验组小鼠主动脉斑块显著减少，血清血脂(TC、LDL、TG)及炎性因子(TNF-α、IL-1β、IL-10)水平显著降低，主动脉斑块及斑块浸润巨噬细胞、TREM-1表达显著减少(P<0.05),且斑块中TREM-1表达与巨噬细胞为共定位。结论 TREM-1参与CIH诱发的AS发生发展，抑制TREM-1能够减轻CIH诱发的AS,其机制与抑制巨噬细胞活化有关。

杨梅(Morella rubra)是一种果实色泽变异较大的果树,营养丰富且具有重要的经济和药用价值。色泽是评价果实品质的关键性状之一,而花青苷含量是决定杨梅果实色泽的主要因素。近年来,有关杨梅果实花青苷调控研究集中在鉴别花青苷生物合成基因和转录因子上,但品种间果实色泽差异的内在机制缺乏深入研究。本文以多个果实色泽不同的杨梅品种为研究材料,探究MrMYB1/2基因簇成员的结构和表达特性、功能差异与调控机制,以及MrGST1在杨梅花青苷转运中的功能与机制。主要结果如下:1.鉴定了一个与花青苷积累相关的MrMYB1/2基因簇,包括4个成员:MrMYB1.1、MrMYB1.2、MrMYB1.3和MrMYB2。在4个果实颜色各异的主栽品种中克隆基因簇成员,发现每个成员有2–3个等位基因。其中MrMYB1.1在不同品种中的基因型与果实颜色紧密相关,共有2个等位基因:MrMYB1.1-1(MrMYB1.1~n)和MrMYB1.1-2(MrMYB1.1~d)。前者是结构完整的R2R3型MYB基因,在果实紫黑色品种‘荸荠’中为纯合,后者因缺失一个碱基造成移码突变,转变为一个缺失R2和部分R3结构域的MYB基因,在果实白色品种‘水晶’中为纯合。MrMYB1.1~n/MrMYB1.1~d在果实红色品种‘东魁’和果实粉红色品种‘粉红’中为杂合。基于MrMYB1.1~n/MrMYB1.1~d基因型开发的CAPS标记能够准确并快速鉴别不同颜色果实的杨梅品种。MrMYB1.2、MrMYB1.3和MrMYB2的等位基因基因型与果实颜色之间没有相关性。MrMYB1.1、MrMYB1.2和MrMYB2在4个品种果实成熟过程中表达量逐渐升高且品种间差异较小。MrMYB1.3仅在果实紫黑色品种‘荸荠’中表达,且表达量与‘荸荠’果实成熟过程中的花青苷含量呈现一定的相关性。共线性分析表明,调控花青苷积累的MYB基因簇在部分双子叶植物的基因组具有高度保守性,可能在进化中具有独特的意义。2.烟草叶片瞬时表达分析发现MrMYB1.1~n和MrMYB1.3-1可以诱导花青苷积累,而MrMYB1.1~d、MrCP-456773分子式MYB1.2-1和MrMYB2-1不能诱导花青苷积累。MrMYB1.3-1在烟草中稳定转化使烟草的花和果皮花青苷含量显著升高。烟草双荧光素酶、酵母单杂交和凝胶电Alisertib核磁泳迁移试验表明,MrMYB1.1~n和MrMYB1.3-1可以直接结合并激活花青苷生物合成基因的启动子,而MrMYB1.1~d、MrMYB1.2-1和MrMYB2-1不能直接结合并激活花青苷生物合成基因的启动子。萤火虫comprehensive medication management荧光素酶互补成像和酵母双杂交试验表明,MrMYB1.1~n、MrMYB1.3-1和MrMYB2-1可以与MrbHLH1发生相互作用,而MrMYB1.1~d和MrMYB1.2-1不能与MrbHLH1发生相互作用。3.对杨梅GST基因家族进行分析,筛选到一个参与花青苷转运的候选基因MrGST1。MrGST1的表达量与‘荸荠’品种不同组织、不同发育阶段的果实和12个杨梅品种成熟果实中的花青苷含量呈显著正相关。对MrGST1进行拟南芥tt19突变体功能互补试验,发现MrGST1只负责花青苷的转运,而不负责原花青素的转运。烟草双荧光素酶和酵母单杂交试验表明,MrMYB1.1~n和MrMYB1.3-1可以直接结合并激活MrGST1启动子。顺式元件分析显示,MrGST1启动子有8个MYB结合位点。烟草双荧光素酶和酵母单杂交试验表明,MrMYB1.1~n通过识别起始密码子前第4个MYB结合位点激活MrGST1启动子。综上所述,本文系统探究了MrMYB1/2基因簇中4个成员的基因结构、表达特性、功能和调控机制差异,鉴定了调控杨梅果实花青苷积累的激活因子MrMYB1.1~n和MrMYB1.3。探明了杨梅品种间果实颜色差异是由于MrMYB1.1~n/MrMYB1.1~d基因型不同以及MrMYB1.3在特定品种表达所致。同时挖掘了参与杨梅果实花青苷转运的MrGST1并进行了功能鉴别。研究结果为花青苷生物合成和转运的调控机制提供新的理解,也为果实色泽品质的改良提供理论依据。

本研究通过谱效相关分析及活性验证探明百合地黄汤抗抑郁的药效成分。利用不同溶剂分次提取并结合HPLC和UHPLC-MS分析方法对百合地黄汤不同提取部位化学成分进行全面表征。动物实验方案经湖南中医medical dermatology药大学动物伦理委员会审查通过 (审查号为LLBH-202104270001)， 所有Baf-A1程序均严格按照动物使用和护理的伦理原则进行。采用旷场实验、悬尾实验、强迫游泳实验等经典行为学方法结合神经递质测定进行抗抑郁药效综合评价。整合三种相关分析方法进行谱效关联表征， 以三种关联分析所得药效成分的交集为潜Talazoparib分子量在药效成分， 并进行了体外细胞实验验证。研究发现， 王百合苷A、B、C、梓醇和异毛蕊花糖苷可能是百合地黄汤发挥抗抑郁作用的主要药效物质， 同时也提示， 多元化的谱效相关分析及活性验证有助于提升谱效相关分析结果的准确性。

获得高质量的DNA是分子试验的一个先决条件，常用的植物DNA提取过程及步骤繁杂，需要进行多次离心操作，所需时间较长，并且在DNA提取过程中会用到三氯甲烷和其他一些有毒试剂，对操作人员有Taurine核磁一定危害。为了筛选出高粱DNA的最优提取方法，进行基因定位等方面的研究，采用十二烷基硫酸钠(SDS)法、SDS+2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)法、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、CTAB+2%PVP法和磁珠法，提取高粱不同部位(嫩叶、老叶、根、茎、种子)的DNA,然后对其提取步骤、DNA浓度、吸光度、PCR扩增效果等进行比较。结果表明，磁珠法步骤简单、无毒、低成本，所需时间仅为其他几种方法的1/3,D_(260 nm)/D_(280 nm)为1.8～2.0,DNA的质量、纯度、浓度优于其他方法。各试验数据表明，磁珠法提取的DNA最适于分子生物学验，将其应用于高粱叶色性状基因的定位，可将紫色叶片基因Cell Cycle抑制剂PL1初步定位到4号染色体上，白条纹叶基因WSL10Allergen-specific immunotherapy(AIT)初步定位到10号染色体上。

孢子丝菌病是一种由申克孢子丝菌复合体引起的造成人BAY 73-4506采购和动物表皮和皮下组织慢性感染的真菌病,常表现为皮肤型、皮肤固定型和皮肤播散型。感染处呈溃疡结节样,严重时可危及生命。引起孢子丝菌病的申克孢子丝菌复合体中包含七种基因型孢子丝菌,其中狭义申克氏孢子丝菌、巴西孢子丝菌和球形孢子丝菌是该病的主要病原菌,孢子丝菌病在我国各个城市均有报道,主要集中在东三省。在我国东北部地区,主要的致病基因型为球形孢子丝菌,但该致病基因型是被低估和研究最差的孢子丝菌,到目前为止,涉及其基础研究和临床方面相关文献均较少。近年来,真菌侵袭性疾病的耐药性问题逐渐显现,孢子丝菌病也出现了耐药菌株,因此,寻找新的药物靶点迫在眉睫。基于以上背景,本研究针对孢子丝Cutimed® Sorbact®菌新靶点筛选出新的小分子药,并对其药效进行了检验,研究结果如下:1.以孢子丝菌致病关键蛋白AbaA蛋白为靶点,我们使用Robetta服务器预测AbaA的三维结构,通过生信分析找到AbaA蛋白的DNA结合域,截取模型质量最高的三维结构中的DNA结合域部分进行结合口袋预测,对预测到的结合口袋使用Auto Dock Vina在FDA获批的小分子数据库中进行批量分子对接,对接结果进行结合能、价格、药效、副作用综合分析,最终选取AS-1、AS-2、AS-3、AS-4四种小分子药作为候选药物。2.对四种小分子药物进行体外抗球形孢子丝菌试验,结果显示AS-1、AS-2两种小分子药物对球形孢子丝菌的生长及转相没有影响;而药物AS-3、AS-4明显地抑制了球形孢子丝菌的生长及转相。同时,为了验证其抑菌广谱性,我们又验证了狭义申克孢子丝菌对两种小分子药的敏感性,结果显示AS-3和AS-4也可以抑制狭义申克孢子丝菌的生长和转相。生长曲线测定结果同样显示,加入两种小分子药后,球形孢子丝菌及狭义申克孢子丝菌的生长被抑制。测定AS-3和AS-4抑制球形孢子丝菌及狭义申克孢子丝菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),结果表明,AS-3抑制球形孢子丝菌的MIC为25μg/m L,MBC为50μg/m L;抑制狭义申克孢子丝菌的MIC为6.25μg/m L,MBC为50μg/m L。AS-4抑制球形孢子丝菌的MIC为12.5μg/m L,MBC为25μg/m L;抑制狭义申克孢子丝菌的MIC为6.25μg/m L,MBC为25μg/m L。3.在动物水平验证AS-3、AS-4治疗孢子丝菌病药效。通过皮内注射孢子丝菌孢子悬液的方式对小鼠腹Elexacaftor作用部进行孢子丝菌病造模,造模成功后通过灌胃给药的方式使用两种小分子药进行治疗,选用伊曲康唑作为阳性对照。给药结束后,对小鼠皮损进行HE染色观察其炎症浸润情况和形成肉芽肿情况。结果显示与对照组相比,给药组和阳性对照组的炎症浸润情况均较轻,并且肉芽肿均小于对照组,对照组肉芽肿宽度和炎症细胞浸润情况与给药组均有统计学差异。综合以上实验结果,我们得出结论:小分子药物AS-3和AS-4在体外和小鼠体内实验具有抑制孢子丝菌和治疗孢子丝菌病的能力,因此具有开发成为治疗孢子丝菌病药物的潜力,本研究成功筛选出了两种针对孢子丝菌的新药,同时也为开发其它抗真菌小分子药提供了新的思路。

目的:本课题通过对重症肌无力复发的相关因素和中医证候分型特点进行分析,探讨出重症肌无力LY2835219复发的危险因素和中医证候分型的分布规律,为临床医生判断患者的预后提供帮助,以期指导临床实践。方法:本研究回顾性分析了2017年06月-2022年12月期间就诊于长春中医药大学附属医院门诊及疗区符合纳排标准的227例重症肌无力患者的临床资料。根据患者是否复发,将患者分为复发组和未复发组,分析两组间患者的临床特征。通过SPSS26.0软件进行统计学分析,先采用卡方检验、秩和检验等统计学方法分析两组间变量的关系,其次采用二元Logistic回归分析患者复发的影响因素,以(P<0.05)判定为有统计学意义。结果:(1)本研genetic linkage map究共纳入227例患者,其中未复发组194例,占总人数85.5%;复发组33例,占总人数14.5%。(2)单因素分析结果:两组在年龄、低频重复神经电刺激、有免疫抑制剂用药史、情绪异常、感染史、不当用药、中医证候分型等方面存在统计学差异(P<0.05),而性别、抗Ach R抗体阳性、胸腺异常、合并免疫病、手术史、MGFA分型等方面不存在统计学差异(P>0.05)。(3)多因素回归分析结果:将单因素结果(P<0.05)的变量纳入多因素分析中,其中年龄、低频重复神经电刺激、情绪异常、感染史、不当用药、中医证候分型等存在统计学差异(P<0.05)。(4)对纳入的227例重症肌无力患者进行中医辨证分型,其中脾胃虚损证68例,占比30.0%;脾肾两虚证91例,占比40.1%;气阴两虚证25例,占比11.0%;湿邪困脾证43例,占比18.9%。复发组脾胃虚损证5例,占比15.2%;脾肾两虚证23例,占比69.7%;气阴两虚证2例selleck合成,占比6.1%;湿邪困脾证3例,占比9.1%。未复发组脾胃虚损证63例,占未复发组总体人数的32.5%;脾肾两虚证68例,占比35.1%;气阴两虚证23例,占比11.9%;湿邪困脾证40例,占比20.6%。结论:研究发现低频重复神经电刺激阳性、情绪异常、感染史、不当用药是重症肌无力复发的危险因素;重症肌无力老年患者相对于青年患者更容易复发;脾肾两虚证患者相对于脾胃虚损证患者更容易复发;本研究中重症肌无力患者以脾肾两虚证最为常见;中医证候分型频次由高到低依次为脾肾两虚证91例(40.1%)>脾胃虚损证68例(30.0%)>湿邪困脾证43例(18.9%)>气阴两虚证25例(11.0%)。

随着经济社会的高速发展,抑郁症成为了一种现代性症候。据世界卫生组织的调查数据显示,30年来,世界范围内的抑郁症患病率暴增了10至20倍,使得抑郁症成为全球四大疾病之一。新冠肺炎疫情的暴发进一步催化了抑郁症的蔓延,当下,应对精神卫生问题成为了一场全人类都别无选择的战役。然而,与抑郁症大范围流行相对应的是其就诊率与识别率的低下,这与公众对精神障碍类疾病的认知匮乏以及社会对其严重的污名化紧密相关。在自上而下的话语模式中,媒体耸人听闻的报道框架塑造了抑郁症患者的“他者”形象。新媒体时代的到来为弱势群体提供了表达平台与互动空间,不仅有利于打破社会对抑郁症患者的刻板印象,更有利于患者获取社会支持,从而建构身份认同。本文以现身于新媒体平台的抑郁症患者为研究对象,以B站和豆瓣小组为主要观察阵地,通过文本分析、参与式观察、深度访谈的研究方法,结合自我认同、社会认同及传播学、心理学领域相关CHIR-99021理论,对新媒体语境下抑郁症患者的身份认同建构展开研究。研究发现,新媒体平台基于其匿名性、弱关系社交等特征为抑郁症患者的展演与互动带来了Open hepatectomy极大的安全感。患者通过对自身疾病经历和情绪情感的表selleck Puromycin露,感知自我身份;在疾病归因和抗争中进行省思;在新媒体平台内自塑理想形象。进而通过类化、认同与比较,在群体中建构了社会身份的认同。诚然,媒介技术的发展为抑郁症患者带来了诸多利好,但其背后的问题同样不容忽视。从抑郁症患者遭受的网络暴力、被迫贴上的新污名化标签,再到其在群体中个性化的压抑,以及同时游离于现实语境和虚拟空间的困境等,都值得我们去关注反思以及进一步探讨。

作为一种分子伴侣蛋白,Hypoxia up-regulated protein 1(HYOU1)参与维持和恢复细胞内环境的稳定。在癌细胞中,HYOU1基因可以通过内质网应激反应等途径激活表达,从而促进癌细胞的增殖、侵袭、转移和抗凋亡。G-四链体(G-quadruplex,G4)是一类由鸟嘌呤富集区域折叠形成的二级结构,该结构在基因组和RNA中存在,具有调控基因表达和RNA剪接等功能。研究表明,转录因子YDS-3201纯度in Yang 1(YY1)基因与HYOU1基因的表达有很强的正相关性。分析HYOU1基因启动子区域发现在HYOU1基因转录起始位点(transcription start sites,TSS)附近存在一段富含鸟嘌呤的区域。本研究预测HYOU1基因启动子区域能够形成G4结构,YY1可能通过结合这一结构调控HYOU1基因的表达。本研究以肝癌细胞为模型,对HYOU1基因启动子区域G4结构进行鉴定,并对其调控HYOU1基因表达的机制进行研究,获得以下结果:1.分析HYOU1基因启动子区域,发现在TSS上游附近存在富含鸟嘌呤的区域,并通过生物信息学方法预测该区域包含两段可能形成G4结构的序列,分别位于TSS上游序列-33至-55和-81至-100区域。2.根据HYOU1基因启动子中富含鸟嘌呤的区域合成了寡聚核苷酸链,通过圆二色性光谱分析实验、DMS footprinting实验和凝胶迁移实验证明了该区域能够形成G4结构。同时利用荧光素酶报告实验证明了HYOU1基因启动子区域的G4结构抑制基因表达。3.通过ENCODE数据库中数据的分析,本研究得出YY1和specificity protein 1(SP1)在肝癌细胞中处于高表达水平,并发现了HYOU1与YY1、SP1的表达都有着显著的正相关性。通过分析染色质免疫沉淀测序(Ch IP-seq)数据,发现了YY1和SP1在HYOU1基因启动子区域高度富集。除此之外,通过RT-q PCR实验分析表明,单独敲低内源性YY1和SP1可以显著降低内源性HYOU1基因的表达,表明YY1和SP1对HYOU1基因表达有正向调节作用。4.鉴于HYOU1基因的G4序列存在多个SP1结合位点,本研究根据HYOU1基因启动子的序列合成了SP1结合位点未突变和突变与G4未突变和突变相互组合的寡聚核苷酸链。通过圆3-Methyladenine分子量二色性光谱分析实验、DMS footprinting实验和凝胶迁移实验,发现SP1结合位点突变的寡聚核苷酸链可以形成G4结构。通过凝胶迁移实验证明了YY1和SP1能结合HYOU1启动子的G4结构。5.通过荧光素酶报告实验,发现YY1能够通过结合G4结构显著调控HYOU1基因表达。在G4结构突变后,SP1能够通过其结合位点调控HYOU1基因表达。综上所述,本研究发现了HYOU1基因启动子区域存在两段形成G4结构的序列,G4的形成能够抑制HYOU1基因表达。YY1和SP1plant synthetic biology能够调控HYOU1基因表达,其中YY1能够通过结合在G4结构上显著调控HYOU1的表达。而在G4结构被解旋后,SP1可以结合在序列上的结合位点,并在YY1的协助下调控HYOU1的表达。