MAPK信号通路

目的 分析在精神科临床工作中应用团体心理的效果。方法 选取2020年7月～2022年7月，在本院精神科治疗的96例患者，利用信封法分为两组，每组48例。两组均予以常规药物治疗方案，在此基础上对照组行常规心理干预，观STM2457配制察组在对照组基础上增加团体心理干预措施。比较两组治疗前后的简明精神病评定量表（BPRS）评分、住院精神病患者社会功能评定量表（SSSI）、社会功能缺陷筛选量表（SDSS）评分以及健康调查简表（SF-36）评分。正态计量资料采用t检验。结果 干预前，两组BPRS评分无显著差异（P>0.05），干预后两组干预后BPRS评分均显著低于干预前，观察组BPRS评分显著低于对照组（P<0.05）；干预前两组SSSI、SDSS评分干预前对比无显著差异（P>0.05），两干预后组SSSI、SDSS评分均较干预前显著改善，观察组的SSSI评分较对照组显著更高，SDSS评分较对照组显著更低（P<0.05）；干预前两组SF-36评分对比无显著差异（P>0.05），干预后两组SF-3let-7 biogenesis6评分均较干预前显著提高，观察组SF-36各维度评分均较对照组显著更高（P<0.05）。结论 对精神科患者应用团体CHIR-99021小鼠心理干预有助于缓解其精神症状，同时可促进其社会功能恢复，改善患者生活质量。

陕西省独特的地理气候特点、历史渊源和勤劳的人民共同造就了体型外ocular pathology貌和生产性状各异的山羊品种。本研究以陕北白绒山羊、关中奶山羊和陕南selleck激酶抑制剂白山羊这三个陕西省宝贵的山羊品种为研究核心,并联合12个其它家山羊品种及山羊属内的野山羊共计288个重测序数据,利用群体遗传学等多种分析方法对山羊品种资源进行遗传多样性评价和进化潜力评估,并训练出品种识别模型以及构建了陕西省遗传资源数据库,从而为之后采取更有效的保护措施以及健康可持续的利用这些资源奠定了基础。主要研究内容和结果如下:(1)本研究样本平均测序深度为14.64×,共检测出29422980个SNP。通过群体遗传结构分析,发现陕北白绒山羊与辽宁绒山羊聚为一支,情况符合辽宁绒山羊为陕北白绒山羊父本的选育历史;关中奶山羊与萨能山羊、吐根堡山羊和唐山奶山羊形成一个大的聚类;陕南白山羊品种分化度相对于其它山羊品种较高。通过期望杂合度(He)、连锁不平衡(LD)、观察杂合度(Ho)、核苷酸多样性(Pi)、纯合性片段(ROH)和基于ROH的近交系数分析,结果显示陕北白绒山羊相比其它山羊品种观察杂合度更高;关中奶山羊群体的一致性较好,并且有较高的杂合度;陕南白山羊长ROH片段数量多,近交系数高,这提示对陕南白山羊的保护工作还需不断加强。(2)利用目标品种与非目标品种频率初步筛选品种高频位点,通过随机森林(RF)对位点进行重要程度可视化,最后使用支持向量机(SVM)开发品种识别模型,验证方法使用五折交叉验证,模型评价指标使用准确率(AccuraCL13900cy)、精确率(Precision)、召回率(Recall)。结果显示,开发的模型可有效实现目标品种和非目标品种的区分。(3)基于LAMP(Linux操作系统、Apache网络服务器、My SQL数据库、PHP编程语言)架构搭建陕西省遗传资源数据库。数据库中除了包含以上三个山羊品种之外,还纳入了秦川牛、关中驴、略阳鸡和榆林地区中华蜜蜂这四个遗传资源。数据库提供变异和选择信号信息检索以及品种信息、基因组组装情况展示等,其中交互式表格通过Data Tables插件实现,地图以及数据映射通过Echarts插件实现。变异数据检索结果包括次等位基因频率、位点注释信息和各个品种和群体的频率分布情况,选择信号模块用户可以在检索页面选择不同的检测方法例如Tajima’D、Hp、Pi ratio等,结果主要以曼哈顿图和表格的形式展示。本研究构建的陕西省遗传资源数据库为用户了解陕西省重要的遗传资源提供了窗口,同时也为研究人员挖掘与经济性状相关的功能位点和候选基因提供了便捷工具。链接为http://animal.omics.pro/code/index.php/Shaanxi/。综上,本研究从全基因组水平上系统的分析了陕北白绒山羊、关中奶山羊、陕南白山羊的群体遗传结构和遗传多样性情况,并利用机器学习等多种方法开发出品种识别模型,具有较好的应用价值,同时构建了陕西省遗传资源数据库,为进一步加强遗传资源的保护工作和科学合理育种提供了参考。

1.研究背景抑郁症(Major depressive disorder,MDD)在是一种常见的精神疾病,青少年抑郁症有复发率高,功能预后差等特点。因此,进一步探索青少年抑郁症的发病机制和治疗靶点具有重要的理论和现实意义。早期生活压力(应激)可引起表观遗传的改变,是构成抑郁症的主要发病机制之一。动物实验和临床研究均发现,抑郁症的发生与特定的DNA甲基化修饰密切相关。脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)是存在于中枢神经系统的生长因子。BDNF对神经系统的发生发育、功能维持有重要作用,而其功能障碍则参与了抑郁症的发病过程。在人类和啮齿类动物中,BDNF启动子Ⅳ显著促进BDNF活性依赖性转录,且研究提示,BDNF启动子Ⅳ甲基化水平的变化与抑郁症的发生密切相关。DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,DNMTs)与DNA去甲基化相关酶共同维持正常的甲基化水平。DNMTs与BDNF启动子Ⅳ的甲基化及BDNF的表达密切相关。5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2′-deoxycytidine,5-AzaD)一种 DNMT 抑制剂,可直接抑制DNA甲基化,并可在多种抑郁样动物模型中诱导快速和持续的抗抑郁作用。BDNF启动子Ⅳ区的高甲基化可以影响BDNF的转录过程,进而影响BDNF的表达。青少年期的应激是否引起NSC 127716BDNF启动子Ⅳ甲基化发生短期和长期的变化,这一变化在青少年抑郁症发病机制中的作用如何尚不十分清楚。本研究采用慢性不可预知性温和应激(Chronic unpredictable mild stress,CUMS)制作动物模型,探讨特定年龄阶段的慢性应激是否影响小鼠行为及BDNF启动子Ⅳ,DNMTs与DNA去甲基化相关酶的表达,以及是否对小鼠前额叶皮层(Prefrontal cortex,PFC)和海马(Hippocampus,HIP)中BDNF的表达及神经发育产生影响。同时Hydration biomarkers,使用5-AzaD是否对上述改变具有调节作用,从而阐明BDNF启动子Ⅳ的甲基化在青少年抑郁障碍的发生中的作用,为抑郁症的早期治疗提供了理论依据。2.研究目的2.1.1考察CUMS对青少年期小鼠抑郁样行为、前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的甲基化、甲基转移酶和去甲基化相关酶、BDNF表达和海马神经发生的短期及长期影响。2.1.2探讨5-AzaD对经历CUMS的青少年小鼠在成年后的抑郁样行为、前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的甲基化、甲基转移酶和去甲基化相关酶、BDNF表达和神经发育的影响,以明确BDNF启动子Ⅳ的甲基化在抑郁症中的作用。3.材料与方法3.1 CUMS对青少年期小鼠行为、前额叶皮层和海马BDNF启动selleckchem PLX3397子Ⅳ甲基化和海马神经发生的短期和长期的影响。3.1.1实验动物与分组60只雄性C57小鼠(21日龄)分为四组:青少年对照组(AdoC)、青少年CUMS组(AdoS)、成年对照组(AduC)和成年CUMS组(AduS)。7天的适应性喂养后对照组小鼠不给予刺激,而应激组小鼠接受21天的慢性应激。造模后,青少年组小鼠进行行为测试,测试后的第二天处死;在70天时对成年小鼠进行行为测试,在行为测试之后的第二天被处死。3.1.2实验方法(1)连续三周的慢性不可预知性温和应激。(2)造模结束,依次进行行为学实验对青年和成年小鼠的抑郁样行为和空间学习记忆能力进行评估。(3)采用DNA甲基化分析检测青年和成年小鼠前额叶皮层和海马BDNF启动子Ⅳ的甲基化水平。(4)采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,qPCR)检测青年和成年小鼠前额叶皮层和海马甲基转移酶和去甲基化相关酶表达量。(5)用免疫印迹法(Western blotting,WB)检测青年和成年小鼠前额叶皮层和海马BDNF表达水平。(6)采用免疫荧光检测青年和成年小鼠海马神经发生。3.2青少年期CUMS和5-AzaD对成年小鼠行为、前额叶皮层和海马BDNF启动子Ⅳ甲基化及神经发育的影响。3.2.1实验动物与分组雄性C57小鼠(21日龄)54只,分为三组即:对照组(C)、CUMS组(S)和CUMS+5-AzaD组(S+A)。一周的适应后,对照组小鼠不给予CUMS刺激,CUMS组小鼠经历21天的CUMS,CUMS+5-AzaD组小鼠经历21天刺激和5-AzaD治疗。3.2.2实验方法(1)采用与3.1.2相同的方法进行CUMS造模。(2)造模结束后,采用与3.1.2相同的方法进行行为学测试与评估。(3)采用DNA甲基化分析检测成年小鼠前额叶皮层和海马BDNF启动子Ⅳ的甲基化水平。(4)采用qPCR检测成年小鼠前额叶皮层和海马甲基转移酶和去甲基化相关酶表达水平。(5)采用WB检测成年小鼠前额叶皮层和海马BDNF表达水平。(6)采用免疫荧光和高尔基染色检测成年小鼠前额叶皮层和海马神经发育。4.实验结果4.1 CUMS对青少年期小鼠行为以及前额叶皮层和海马BDNF启动子Ⅳ甲基化和神经发育的短期和长期的影响。CUMS导致青年和成年小鼠的抑郁样行为和空间学习记忆能力损害,前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的甲基化和甲基转移酶表达增高,去甲基化相关的酶和BDNF表达减少以及海马神经发生障碍。4.2青少年期CUMS和5-AzaD对成年小鼠行为以及前额叶皮层和海马BDNF启动子Ⅳ甲基化和神经发育的影响。5-AzaD改善青少年期CUMS导致的成年小鼠的抑郁样行为和空间学习记忆能力的损害,降低前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的高甲基化水平和升高的甲基转移酶水平并且改善BDNF表达和神经发育障碍。5.结论5.1青少年期CUMS导致小鼠抑郁样行为以及前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的甲基化、甲基转移酶和去甲基化相关酶、BDNF表达和海马神经发生产生变化,且上述改变可持续至成年期。5.2 5-AzaD通过调节甲基转移酶的水平,降低前额叶皮层和海马中BDNF启动子Ⅳ的高甲基化,并且改善经历青少年期CUMS的成年小鼠的抑郁样行为、BDNF表达和神经发育。

目的 观察扩心方对阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心脏血管新生作用的影响。方法 应用腹腔注射阿Mindfulness-oriented meditation霉素诱导扩张型心肌病大鼠模型，60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、扩心方低[1.8 mg/(kg·d)]、中[3.6 mg/(kg·d)]、高剂量组[7.2 mg/(kg·d)]及卡托普利组[5 mg/(kg·d)]。各组分别给予药物或生理盐水灌胃4周。造模结束后采用超声心动图检测大鼠心脏功能；HE、Masson染色观察大鼠心肌组织病理学改变；免疫组化观察大鼠心肌组织VEGF、α-SMA、CD31、CD34表达情况；Western blot观察大鼠心肌组织VEGFR-2蛋白表达水平。结果 与正常组相比，模型组大鼠LVIDD及LVIDS值升高，EF及FPF-02341066配制S值降低(P<0.05),与模型组大鼠相比，扩心方高、中、低及卡托普利组大鼠LVIDD、LVIDS值降低，EF、FS值升高(P<0.05);与模型组相比，扩心方低、中、高剂量组及卡托普利组VEGF、CD31、CD34表达明显增加，且CD34表达呈剂量依赖性；扩心方高剂量组α-SMA较模型组表达增加明显；扩心方低、中、高剂量组及卡托普利组VEGFR-2蛋白表达较模型组均升高，其中扩心方低、中剂量组及卡托普利组升高显著(P<0.01)。结论 扩心方可通过上调促血管新生因子VEGFRBelumosudil-2表达，增加阿霉素诱导扩张型心肌病大鼠心肌微血管密度，促进血管生成。

目的:膀胱癌(bladder cancer,BC)是世界上第十常见的肿瘤,也是癌症死亡的第九大原因。每年新增病例超过57万例,新增死亡病例超过21万例。膀胱癌最常见的组织学类型是尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC),占所有膀胱癌的90%。根据肿瘤浸润深度又分为非肌层浸润性膀胱癌(non-muscular invasive bladder cancer,NMIBC)和肌层浸润性膀胱癌(muscular invasive selleck GSKJ4bladder cancer,MIBC)。NMIBC约占膀胱癌的75%,患者的生存率较高,但极易复发,需要终身随诊和外科治疗。MIBC约占膀胱癌的25%,肿瘤进展快,恶性程度高,易早期转移,也称为转移性膀胱癌,且复发率及病死率高。因此,本项研究旨在对转移性BC的细胞群体及其基因组信息进行分析,为转移性膀胱癌的精准诊疗提供理论基础。方法:3例患者的9个样本均取自于经医学影像和组织病理学检查诊断为肌层浸润性膀胱癌,且未进行术前化疗和放疗。在进行根治性膀胱切除和盆腔淋巴结清扫术后即刻获取每位病人匹配的膀胱癌原位肿瘤组织(primary tumor,PT),癌旁正常组织(paracancerous normal tissue,PNT)和转移的淋巴结(lymph node metastasis,LNM)。然后通过单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,sc RNA-seq)对所有样本进行细胞群体鉴定;进一步通过infer CNV,细胞拟时序,GSVA和nonviral hepatitis细胞通讯等分析方法,研究膀胱癌原位肿瘤与转移淋巴结之间细胞亚群和分子特征的异同性;TCGA数据库评估特异性基因的预后指数;免疫组织化学技术回顾性研究24例MIBC伴淋巴结转移患者的基因表达进行临床验证。结果:1.所有样本共检测到50158个有效细胞,并被鉴定出六种主要的细胞群体,分别是上皮细胞,内皮细胞,成纤维细胞,巨噬细胞,B淋巴细胞和T淋巴细胞。在PT中主要为上皮细胞,巨噬细胞和T淋巴细胞;PNT中主要为成纤维细胞,巨噬细胞和T淋巴细胞;LNM中主要为巨噬细胞和T淋巴细胞。2.接着我们对这些细胞群体进行亚群划分,其中PT中以肿瘤细胞,CD4+调节性T细胞(CD4+regulatory T cells,Treg),CD8+耗竭T细胞(CD8+exhausted T cells,Tex),CD8+驻留记忆T细胞(CD8+resident memory T cells,Trm),肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)和肿瘤相关肌成纤维细胞(Myo-cancerassociated fibroblast,Myo-CAF)为主。这些细胞亚群高表达与促癌相关的基因(SLITRK6,WNT5A,LYVE1和IDO1)。3.PNT中以炎症CAF(inflammatory CAF,i CAF),TAM,CD4+辅助T细胞(CD4+helper T cells,Th)和CD8+细胞毒性T细胞(CD8+cytotoxic T cells,CD8cyto)为主。这些细胞亚群高表达与Th和CD8cyto相关的抗肿瘤免疫应答基因(GZMA,IFNG),同时也高表达与i CAF和TAM相关的促进肿瘤进展基因(SFRP4,LYVE1和IDO1)。染色结果显示PNT中靠近肿瘤细胞区域存在TAM。4.LNM与PT的细胞亚群特征基本一致,但是肿瘤细胞存在差异性表达。通过细胞轨迹分析,PT和LNM分化出两种不同的亚群分支。PT中的亚群以SLITRK6高表达为主,LNM中的亚群以LMO3高表达为主。通过TCGA数据库发现相比SLITRK6,LMO3的高表达与更差的预后相关,提示转移癌细胞的恶性程度更高。染色结果显示PT和LNM中存在不同的肿瘤细胞亚群。5.除了肿瘤细胞,抑制性TTorin 1 NMR细胞亚群(Treg,Tex和Trm)也是PT和LNM的重要特征之一。这些亚群高表达抑制性基因CTLA4,TIGIT和HAVCR2,与促进肿瘤增殖及失去抗肿瘤免疫应答作用相关。我们还发现一个小亚群CD4+细胞毒性T细胞(CD4+cytotoxic T cells,CD4cyto),同CD8cyto一样,其在PNT和恶性组织中出现两种不同的表型,在PNT中发挥正常的细胞杀伤性功能,而在恶性组织中则失去了细胞毒性功能,并参与促进肿瘤细胞的增殖。6.细胞通讯分析显示,CAF几乎涉及所有细胞亚群的信号转导途径,是参与促进肿瘤细胞增殖和抑制性免疫细胞形成的主要信号发出者。其中,i CAF和TAM是激活Tex的信号通路中心。两者通过直接向CD8cyto或者通过激活下游的Treg间接向CD8cyto传递信号,使其成为衰竭表型。该分析阐述了上述三组中出现细胞亚群的差异性分布特征的调控机制。结论:本项研究通过sc RNA-seq首次对转移性BC患者中匹配的PNT,PT和LNM三种样本的细胞群体和分子表达特征进行分析并绘制了单细胞转录组图谱。主要包括:1.PT和LNM的共同特征是存在肿瘤细胞和抑制性免疫细胞(Treg,Tex和Trm)。2.PT和LNM的不同之处是两者的肿瘤细胞存在不同的细胞亚群。相比在PT中高表达的SLITRK6的亚群,在LNM中高表达LMO3的亚群可能与更高恶性程度和更差的预后相关。3.PNT与PT及LNM的共同特征是存在高表达LYVE1和IDO1的TAM,其在PNT中表达可能与提高肿瘤的复发几率相关。我们从细胞群体和基因组层面揭示了三个组织来源的样本中存在的共同和差异性特征,为转移性BC的肿瘤生物信息学研究和今后的治疗方法提供了新的见解。

2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)和3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose,3-FL)是母乳中结构简单且分泌最丰富的中性母乳寡糖(Human milk oligosaccharides,HMOs)。因其具有维持肠道稳态、免https://www.selleck.cn/products/Vorinostat-saha.html疫调节、炎症抑制、抗病毒及促进婴儿大脑发育等多种生理功能而被广泛应用于婴幼儿配方奶粉、老年食品、功能性饮料及保健品等领域。目前,2’-FL和3-FL均已被美国食品药品管理局(FDA)批准为一般公认安全食品(GRAS),并被欧盟批准为新型食品(NF),且在商业化的岩藻糖基乳糖(FL)生产中主要使用大肠杆菌(Escherichia coli)为底盘宿主进行微生物合成。由于微生物合成法具有绿色高效、成本低廉等典型特征,现已逐渐成为FL工业化生产的主要策略。此外,应用于FL生产的岩藻糖基转移酶是代谢过程的主要限速酶,限速酶的性能提升对FL的高效合成至关重要。为此,本论文以具有高底物消耗率且生长迅速的大肠杆菌为宿主,使用代谢工程策略和工具构建了高效生产2’-FL和3-FL的质粒型微生物细胞工厂,通过操控微生物的遗传单元、重构细胞的生化网络,实现了胞内乳糖自合成的FL整合型无抗菌株的构建,同时基于酶工程技术筛选并改善了限速酶α-1,2-岩藻糖基转移酶的生产性能。主要研究内容和结果如下:(1)岩藻糖基乳糖大肠杆菌细胞工厂的构建与优化。以E.coli BL21(DE3)为出发菌株,异源表达从头合成FL的α-1,2/3-岩藻糖基转移酶基因,通过独立或组合过表达基因簇man C-man B和gmd-wca G探究对产物合成的影响,发现组合过表达最有利于FL的生产。不同细菌来源α-1,2/3-岩藻糖基转移酶的筛选表明,H.pylori ATCC 26695的Hpfut C和H.pylori NCTC 11639的七点突变体Hp M32生产FL的效VE-822核磁果最佳。基因lac Z和wca J的敲除结果表明,底物乳糖的利用率得到显著提高,关键前体GDP-L-岩藻糖的胞内积累得到明显改善。利用不同质粒拷贝数组合优化上游关键基因(模块一)和下游糖基转移酶(模块二)的表达水平,获得最佳质粒组合为p RSF-CBGW和p ET-Hpfut C/Hp M32。在胞内建立NADPH和GTP再生系统,比较4组单基因和4组多基因过表达对菌株生产性能的影响,结果表明,含zwf和gsk的过表达菌株生产性能最好。此外,培养基和诱导条件的优化显示,在使用M9CA培养基、诱导温度为25°C,诱导浓度为0.3 m M的条件下,菌株的生长状态和产物合成的协同效果最佳,摇瓶水平下2’-FL和3-FL的产量提升至2.21±0.06 g/L和1.88±0.05 g/L。在3-L发酵罐中进行补料分批发酵,最终产生了24.4 g/L的2’-FL和18.89 g/L的3-FL。(2)基因编辑技术改造底盘微生物及限速酶的性能提升。以E.coli BL21(DE3)Δlac Z为出发菌株,通过一轮至四轮潜在竞争靶基因(nud D、nud K、wca J、lon、mtl D、pfk A、pfk B、fsa A和fas B)的筛选与迭代敲除,上调了三个关键中间体包括果糖-6-磷酸、GDP-D-甘露糖和GDP-L-岩藻糖的碳通量。显著地,lac Z、wca J、nud D、pfk A和lon基因缺失的BZWNDPAL菌株获得了最高生产水平,2’-FL和3-FL的产量分别为6.24±0.14 g/L和3.56±0.11 g/L。通过优化合成生物学元件(启动子、RBS、融合肽以及基因拷贝数)缓解了α-1,2/3-岩藻糖基转移酶低催化活力和低可溶性表达的瓶颈问题。结果显示,在T7启动子和RBS(BBa＿B0034)调控下,菌株产生了7.87±0.14 g/L的2’-FL和5.26±0.12 g/L的3-FL。融合肽ple B促进了岩藻糖基转移酶的可溶性表达。当质粒上串联二拷贝基因时,2’-FL和3-FL的产量进一步提高。通过单因素培养基成分的优化,2’-FL和3-FL的产量提升至9.82±0.16 g/L和6.68±0.14 g/L。最终,在3-L发酵罐的补料分批发酵中,重组菌获得了64.62 g/L的2’-FL和40.68 g/L的3-FL。(3)乳糖合成新途径设计与岩藻糖基乳糖无抗菌株的构建。以BZWNDPAL为出发菌株,敲除了葡萄糖特异性转运蛋白酶EⅡABC~(Glc)组件编码基因crr和pts G,并在该位点整合了糖外排转运蛋白基因set A和葡萄糖转运蛋白基因glf。强化了NPTS~(Glc)系统的菌株BP3的葡萄糖转运速率和细胞生物量相较于初始菌株得到了显著提升。筛选不同来源的β-1,4-Gal T并实现乳糖合成菌株的构建,将gal E基因整合至染色体的ugd位点,将优选的脑膜炎奈瑟球菌来源的Nmlgt B基因整合至glk位点。消除糖酵解模块副产物和阻遏蛋白的抑制并引入FL生物合成途径,在工程菌BP8-0和BP9-0染色体的ack A-pta,pfl B和ldh A位点进一步整合了man C-man B,gmd-wca G和man A表达盒,2’-FL和3-FL的胞外输出含量提升至3.34±0.11 g/L和2.78±0.09 g/L。为了进一步提高FL的产量,基因组上内源的GDP-L-岩藻糖模块关键基因(man A、man B、man C和gmd)的野生启动子被替换为更强的T7启动子,最终菌株BP10-3和BP10-3含有18个基因修饰,摇瓶检测2’-FL和3-FL的胞外输出产量为4.36±0.14 g/L和3.23±0.12 g/L。在3-L发酵罐的补料分批发酵中,菌株在甘油和葡萄糖混合培养中生产了40.44 g/L的2’-FL和30.42 g/L的3-FL。(4)α-1Anti-periodontopathic immunoglobulin G,2-岩藻糖基转移酶的分子改造与性质研究。通过多序列比对设计并建立了17个α-1,2-岩藻糖基转移酶的单双点饱和突变文库,酶法合成供体底物GDP-L-岩藻糖并在此基础上对小型突变库进行体内初筛和体外复筛,最终获得酶活力提升的6个单点突变体K102T、R105C、D115S、Y251F、A255G和K282E。对单点正向突变体进行有序叠加,获得了6个酶活力和可溶性表达同时提高的组合突变体。其中突变体V6的催化活力由野生酶的0.71 U/mg提升至1.62 U/mg。对野生Hpfut C和突变体进行酶学性质研究,结果显示,野生型Hpfut C的最适反应温度为37℃,最适p H为5.0,不属于金属依赖型酶,但Mn~(2+)对反应具有促进作用。突变体K102T、D115S、Y251F和K282E的热稳定性均有不同程度的改善。特别地,突变体V6对底物乳糖和GDP-L-岩藻糖的亲和力和催化速率得到大幅度提升,两种不同底物浓度下突变体V6的K_m值比野生酶分别低34.5%(乳糖)和25.0%(GDP-L-岩藻糖),而k_(cat)/K_m值分别高出1.20和1.25倍。应用Alpha Fold 2预测的结构模型进行分子对接和酶活提升机制分析,结果表明,高刚性结构、新氢键的形成、增加的疏水性氨基酸和有利的静电势可能对突变体的稳定性具有促进作用。

以沙棘优良品种 ‘实优1号’ 为材料，对其叶片进行转录组测序，利用MISA和Primer 3（version Bafilomycin A1临床试验2.3.4）对获得的序列进行SSR位点挖掘和引物设计，以收集的42份沙棘品种为研selleckchem GDC-0973究材料，开展PCR和毛细管电泳检测，旨在开发一套多态性高、稳定性好、通用性强的EST-SSR引物，构建沙棘指纹图谱，从而实现沙棘品种的快速准确鉴定，并进行沙棘品种间亲缘关系分析。‘实优1号’ 转录组测序共获得6，196个SSR位点，其中，重复基元类型为182种，SSR基序长度主要分布在10～21 bp，占全部SSR的81.58%，主要SSR重复类型为单核苷酸重复（48.72%）、二核苷酸重复（22.68%）和三核苷酸重复（18.85%）。筛选出的28对引物在42份品种中共检测出193个等位基因，等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、观测杂合度（Ho）、期望杂合度（He）、多态信息含量（PIC）、Shannon信息指数（I）等遗传多样性参数的均值分别为6.964、3.495、0.617、0.671、0.623、1.384。UPGMA聚类分析表明，42份沙棘品种间的遗传相似系数为0.601～0.990，当相似系数为0.694时，品种分为2组；当相似系数约为0.7402时，品种分为3组。优选6对引物构建的指纹图谱，可以实现沙棘品种的快速准确鉴定。本研究为沙棘的良种鉴定、指纹图谱构建、遗传多样性及亲缘关系分析等方面提供分子水平的理论基reactor microbiota础和数据支撑。

目的 评估数字减影血管造影术（DSA）后经椎动脉灌冲常温生理盐水（IVNI）的可行性和安全性，为IVNI用于后循环脑梗死患者提供研究基础。方法 对接受脑动脉DSA的14例非脑卒中受试者进行IVNI（流速30～50 mL/mINCB018424体内实验剂量in，持续6～10 min），期间监测受试者各项生genetic marker理指标并记录患者主观症状。使用selleck HPLCDSA或经颅多普勒超声（TCD）检测脑动脉血流速度，评估血管痉挛情况。结果 14例受试者均成功完成IVNI，其中7例（50%）受试者在IVNI期间出现短暂的头晕、头面肢体麻木无力或高血压，1例患者在IVNI后即刻的DSA中发现脑血管痉挛。IVNI后平均动脉压、心率和呼吸节律与基线相比均出现显著变化，但均在正常范围。IVNI后TCD检查发现基底动脉血流速度减慢，但未发现神经功能缺损和意识程度改变。结论 经椎动脉灌冲常温生理盐水安全可行，有望成为后循环缺血性脑卒中患者超早期神经保护的新方法。

姜黄素类似物是一类以天然多酚类物质的姜黄素为基础而合成的化学小分子,因其具有抗炎、抗肿瘤以及抗病毒等功效而广泛受到关注。5-双(2-氟苯基)亚甲基-4-哌啶酮(分子式:C_(19)H_(15)F_2NO;分子量:311;缩写为EF-24)是一https://www.selleck.cn/products/XL184.html种姜黄素类似物,已鉴定发现其具有多样化的药理功能。在此基础上,本课题继续研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖作用以及抗鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)的复制。乳腺癌已成为全球女性肿瘤死亡的主要因素,目前已超肺癌成为世界第一大癌症,其治疗手段多样但效果不佳,开发更多具有肿瘤细胞抑KD025制效应和影响肿瘤发生的化合物成为关注热点。因此,本研究首先通过MTT、细胞划痕以及transwell实验发现EF-24(5μM)对两株乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)均具有抗增殖和抗迁移活性。进一步通过吖啶橙染色检测到自噬小泡,透射电镜观察到自噬小体的双膜或多膜结构。同时,利用Western blot检测到自噬关键蛋白LC3和p62的上调表达。免疫荧光实验还发现EF-24能通过阻断自噬体与溶酶体的融合来抑制MCF-7细胞中自噬小体的降解。相反在MDA-MB-231细胞中,EF-24可以诱导自噬的启动,而不是阻止自噬小体的降解。为深入研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖的分子机制,通过Hoechst染色、流式细胞术和Western blot实验发现,EF-24(5μM)诱导了MCF-7和MDA-MB-231细胞的凋亡。自噬抑制剂3-MA能进一步增强EF-24诱HIV unexposed infected导的MCF-7细胞凋亡,而在MDA-MB-231细胞中,3-MA却缓解了EF-24诱导的细胞凋亡。此外,EF-24处理上调了MDA-MB-231细胞中Caspase-3和Caspase-9的酶活性,并诱导ROS积累,下调线粒体膜电位。这些结果证实EF-24激活了MDA-MB-231细胞线粒体凋亡途径。此外,进一步研究了EF-24抗病毒效应,本文以SCRV为研究对象,首先通过CPE观察、病毒滴度测定、RT-q PCR和Western blot实验发现EF-24与SCRV共孵育对子代病毒的抑制效果最佳。此外,流式细胞术实验发现EF-24能有效减少SCRV诱导的EPC细胞凋亡信号。进一步酶活检测发现,EF-24处理能够下调SCRV感染激起的Caspase-3和Caspase-9酶活性,初步证实EF-24通过影响线粒体凋亡途径达到抗SCRV的作用。综上,当前的研究证实了EF-24(5μM)具有抗乳腺癌细胞增殖和抗SCRV病毒复制的作用。为该化合物潜在的体内抗癌活性和抗病毒药物的开发提供了坚实的基础。

免疫检查点抑制剂的应用是癌症免疫疗法的热点之一,免疫检查点受体和配体的相互作用可以影响免疫系统的激活和抑制,而抗体药物的临床成功证明,阻断抑制性免疫检查点通路对于癌症免疫治疗是一种有前途的策略。B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)是JQ1化学结构一种类似于细胞毒性淋巴细胞抗4(CTLA-4)和程序性死亡受体1(PD-1)的抑制性受体,BTLA蛋白通过与其唯一配体疱疹病毒进入介质(HVEM)结合来调控T细胞的活化,而癌细胞通常过表达HVEM蛋白实现免疫逃逸现象。这一特征使其具备作为新型免疫疗法的靶标的潜力。在这里,我们利用噬菌体展示技术筛选出了四条多肽后,通过表面等离子体共振(SPR)测定多肽与HVEM间的结合,并用竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)测试了多肽抑制BTLA/HVEM复合物形成的能力。其中多肽P1(其序列为GCTCPRGWVCLAREPC)效果最佳。进一步对P1进行研究,发现P1的线性、P1-c_((1-3,2-4))和P1-c_((1-4,2-3))三种构型与HVEM均具有较高的结合亲和力,均能有效干扰BTLA/HVEM间相互作MK-4827 IC50用,其中P1-c_((1-4,2-3))与HVEM间亲和解离常数最低为1.46×10~(-7)M,但在竞争性抑制方面,P1-l更占据优势,在相同实验条件下,P1-l半抑制浓度为P1-c_((1-4,2-3))的1/5,我们认为线性多肽上游离的半胱氨酸对多肽与HVEM结合存在促进作用。P1对于人外周血单核细胞(PBMC)没有细胞毒性,同时不存在溶血性。此外,P1的三种构型均能够解除HVEM蛋bone biopsy白带来的免疫抑制现象,刺激PBMC的增殖和活化。综上,P1能够通过阻断BTLA/HVEM相互作用表现出解除免疫抑制的能力,释放免疫系统的功能,P1可作为癌症的免疫治疗的潜在药物前体。