MAPK信号通路

为了探究铁死亡对颗粒细胞超微结构的影响，采用高压冷冻-冷冻替代法(high pressure freezing-freezing substitution,HPF-FS)和常规化学固定法(chemical fixation, CF)对Erastin诱导处理的牛颗粒细胞和猪颗粒细胞超微结构进行研究。结果发现，与对照组相比，经Erastin诱导处理48 h的牛颗粒细胞和猪颗粒细胞的增殖受到显著抑制Medical mediation，ATP含量显著降低，ROS水平显著升高，指示颗粒细胞出现了铁死亡；电镜观察发现两个处理组的细胞均出现空泡化，线粒体变小，嵴断裂甚至消失，且对照组猪颗粒细胞的内质网比处理组的结构更丰富。与CF处理相比，HPF-NaporafenibFS技术对细胞超微结构的保存具有显著优势，胞质均匀、细胞膜界限清晰，线粒体、高尔基复合体、自噬泡、细胞核等结构清晰完整，更加接近于细胞瞬时生理状态。结果表明，利用HPF-FS技术能更加真实、全面地展现细胞的超微结构，为进一步研究颗粒细胞的凋亡调ZD1839分子量控机制及介导卵泡发育等相关研究提供参考。

目的 筛选与预后有关的程序性细胞死亡（programmed cell death,PCD）相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)并以此构建肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的预后风险评估列线图。方法 将从癌症基因组图谱中选择的HCC患者按1∶1随机抽样分为训练集和验证集。采用Pearson相关性分析筛选PCD相关lncRNAs，再用单因素Cox比例风险回归（简称“Cox回归”）模型分析筛选与训练集中的总生存时间有关的PCD相关lncRNAs，然后进一步采用多因素Cox回归模型分析影响HCC患者的预后风险因素，并建立判断HCC患者的风险评分函数模型。根据训练集中HCC患者的中位风险评分将各集中的HCC患者分为高风险和低风险，然后采用Kaplan-Meier法绘制总生存曲线并采用log-rank检验比较高风Alisertib溶解度险和低风险HCC患者总生存情况的差异；同时采用时间相关受试者操作特征曲线下面积（area under receiver operating characteristic curve,AUC）评估风险评分函数模型预测训练集、验证集及整体集中HCC患者1、3、5年总生存率的价值；然后再使用风险评分函数模型结合临床病理特征构建列线图并评估它对HCC患者预后的预测能力。结果 从TCGA中下载了374例HCC样品，其中有342例HCC患者的临床病理资料完整，其中训练集171例E-616452体外，验证集171例。最终筛选出8个与预后有关的PCD相关lncRNAs (AC099850.3、LINC00942、AC040970.1、AC022613.1、AC009403.1、AL355974.2、AC015908.3、 AC009283.1)，以此建立的预后风险评分函数模型为“exp_1×β_1+exp_2×β_2…+exp_i×β_i”（其中expi表示目标PCD相关lncRNA的表达水平，βi是目标PCD相关lncRNA多因素Cox回归分析的偏回归系数）。根据此预后风险评分函数模型得到的中位风险评分为0.89分，低风险和高风险患者在训练集中分别为86和85例、在验证集中分别为86和85例，在整体集中分别为172和170例，训练集、验证集及整体集中KaplanMeier法绘制的生存曲线比较结果均发现低风险HCC患者的总生存情况优于高风险患者（P<0.001），此模型在训练集中预测1、3、5年总生存率的AUC值分别为0.814、0.768、0.811，在验证集中分别为0.799、0.684、0.748，在整体集中分别为0.807、0.732、0.784，并且多因素Cox回归分析显示此模型是影响HCC患者总生存时间的风险因素[风险评分≥0.89分/<0.89分，RR=1.217,95%CI(1.151,1.286),P<0.001]，它预测HCC患者累积总生存率的AUC(95%CI)为0.822(0.796,0.873)。构建的列线图预测1、3和5年总生存率的AUC值分别为0.843、0.839和0.834；训练集内列线图预测的1、3和5年总生存率校准曲线与理想曲线均比较靠近，提示列线图预测的总生存率与实际的总生存率较为一致。结论 本研究中筛选出的8个PCD相关的lncRNAs构建的预后风险评分函数模型可能是HCC预后的潜在标志物，以此构建的列线图Immuno-chromatographic test预测HCC患者预后（总生存率）效能较好。

目的 探讨MTHFR基因多态性对骨肉瘤患者首次应用大剂量甲氨蝶呤（HD-MTX）后不良反应的影响。方法 采用前瞻性研究方法。选择东部战区总医院53例首次入院进行HD-MTX治疗的骨肉瘤患者，根据其人口学因素及MTHFR基因中rs1801133位点的基因多态性确定HD-MTX给药剂量并进行全程化药学监护，收集第1获悉更多个化疗周期后该药的肝、肾、血液毒性和胃肠道反应数据。采用单因素分析和二元Logistic回归分析对MTX给药剂量、24 h血药浓度、rs1801133位点基因型与上述4种不良反应之间的相关性进行分析。结果 CC野生型患者的MTX给药剂量显著高于TT突变型患者（7.97 g/m2 vs. 6.98 g/m2,P=0.030），但这种差异不影响MTX的0 h和24 h血药浓度。上述4种不良反应与MTX的给药剂量无相关性。二元Logistic回归分析结果显示，每携带一个T等位social medicine基因，患者发生血液学毒性的风险会升高4.13倍（95%置信区间为1.35～12.62,P=0.013）。当MTX 24 h血药浓度阈值设定为2.65μmol/L时，肝功能损害预测的灵敏度为53.33%，特异性为86.96%；当该阈值设定为7.28μmol/L时，肾功能损害预测的灵敏度为100%，特异性为81.63%。结论 MTHFR基因中rs1801133位点的基因多态性与MTX的血液学毒性相关；首次应用HD-MTX并且Gefitinib-based PROTAC 3 NMR携带T等位基因的患者，其血液学毒性风险较高。MTX 24 h血药浓度与该药的肝、肾毒性相关，监测患者的MTX 24 h血药浓度可以预测肝、肾毒性并及早采取干预措施。

目的 分析松脂醇二葡萄糖苷（Pinoresinol diglucoside,PD）改善骨质疏松的作用机制。方法 微型CT分析小鼠小梁骨体积/总体积（bone volume/total volume,BV/TV）、平均小梁厚度（average trabecular thickness,Tb.Th）、平均小梁数目（average number of trabeculae,Tb.N）和平均小梁间距（average trabecular spacing,Tb.Sp）;HE染色检测骨组织损伤；TRAP染色分析成骨细胞数量/骨周长（number of bone cells/bone circumference,N.Ob/B.Pm）、空泡率以及破骨细胞表面/骨表面百分比（osteoclast surface/bone surface,Ocs/BS）;ELISA检测碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrateresistant acid phosphatase,TRAP）相对活性，超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（Malondialdehyde,MDA）和谷胱甘肽Lorlatinib体内实验剂量（glutathione,PidnarulexGSH）含量；Wb检测核转录因子红细胞系2相关因子2(Nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)和HO-1表达。结果 与假手术组相比，模型组小鼠骨丢失量增加，BV/TV、Tb.Th、Tb.N、N.Ob/B.Pm、ALP相对活性、SOD、GSH、Nrf2和HO-1表达水平明显下降Biological life support，Tb.Sp、空泡率、Ocs/BS、TRAP相对活性和MDA水平明显上升（P<0.05）;E2组和PD组小鼠与模型组小鼠变化趋势完全相反（P<0.05）,PD组和E2组小鼠上述指标无显著差异（P>0.05）。结论 PD可通过激活Nrf2信号通路改善小鼠骨质疏松症状。

背景：半月板损伤是骨科最常见的疾病之一，不同年龄阶段半月板损伤的病理特征和症状差异明显，目前研究发现其与铁死亡的发生、发展密切相关，但具体作用靶点及调控机制尚不清楚。目的：确定不同年龄阶段半月板损伤的重要铁死亡相关生物标志物和免疫浸润研究。方法：（1）从GEO数据库中获得训练数据集，使用GSE191157基因芯片表达矩阵分析数据，同时，从铁死亡官方下载相关基因进行进一步分析。（2）使用“limma”包对半月板损伤的老年患者和年轻患者进行差异表达基因分析，对RP56976抑制剂GSE191157基因芯片的所有基因进行WGCNA分析。（3）选取2个与半月板损伤疾病最相关的颜色PEG300试剂模块，再将相关模块的基因与铁死亡相关基因取交集。（4）随后将交集基因进行本体（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）分析。（5）通过机器学习LASSO回归对不同年龄半月板损伤铁死亡交集基因进行分析，提取核心基因。（6）最后进行基因集富集分析（GSEA）、SSGEVA免疫浸润等功能分析，确定核心基因与半月板损伤铁死亡确有相关性。结果：共鉴定出2517个差异基因，与铁死亡相关基因取交集得到61个基因，经WGCNA分析后得到与疾病相关性最高的青色和黄色模块，与之取交集得到46个交集基因；通过机器学习LASSO回归筛选出4个核心基因BEX1、MMP13、PTPN18和SLC38A1；GSEA分析结果提示半月板损伤铁死亡主要与Toll样受体信号通路、RNA转录与剪接、mTOR信号通路和ECM-受体相互作用有关；免疫细胞浸润分析显示出核心基因表达与免疫细胞浸润之间具有明显相关性，MMP13在效应记忆CD8 T细胞、CD56dim自然杀伤细胞、中央记忆CD4 T细胞中呈现accident and emergency medicine负相关，而SLC38A1、BEX1、PTPN18三个核心基因呈正相关。结论：该研究共筛选出4个与不同年龄阶段半月板损伤的铁死亡相关关键基因，分别为BEX1、MMP13、PTPN18和SLC38A1；免疫细胞浸润分析显示出核心基因表达与免疫细胞浸润之间具有明显相关性。

目的 探Liproxstatin-1化学结构讨激活大麻素Ⅱ型受体(CB2受体)对右旋糖酐铁处理的铁过载模型小鼠脾脏铁代谢的影响。方法 将18只9周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、右旋糖酐铁组、JWH133(CB2受体激动剂)+右旋糖酐铁组。应用铁检测试剂盒(比色法)检测各组小鼠脾脏铁水平，采用Western blot法检测脾脏转铁蛋白受体1(TFR1)和铁转运蛋白1(FPN1)的表达。结果 与对照组相比MG132 NMR，右旋糖酐铁组小鼠脾脏总铁含量和Fe~(3+)含量明显升高(F=12.710、8.352,q=6.980、5.698,P<0.01),Fe~(2+)含量有增高趋势，但差异无统计学意义；JWH133预处理抑制右旋糖酐铁造成的总铁含量和Fe~(3+)含量的升高(q=4.747、3.687,P<0.05)。与对照组相比，右旋糖酐铁组小鼠脾脏TFR1表达显著升高(F=12.090,q=6.859,P<0.01);JWH133预处理抑制右旋糖酐铁引起的TFR1蛋白表达上调(q=4.419,P<0.05)。3组小鼠脾脏FPN1表达比较差异无显著性(F=1.152,P>0.05)。结论 激活CB2受体可以抑制Prebiotic activity右旋糖酐铁引起的小鼠脾脏铁水平增高以及TFR1蛋白表达上调，CB2受体可能通过调节TFR1蛋白表达介导小鼠脾脏铁的聚集。

目的 建立小鼠自体动静脉内瘘模型，并对造模效果进行评价。方法 采用麻醉后颈外静脉-颈总动脉端侧吻合的方式，将10只8周龄雄性C57BL/6小鼠的左侧颈外静脉及颈总动脉分离并进行自体动静脉thoracic oncology端侧吻合手术，右侧仅进行颈外静脉暴露而未行缝合（作为对照），从而建立自体动静脉内瘘动物模型。通过多普勒超声、HE和Masson染色以及免疫组织化学染色观察动静脉内瘘流出段静脉与对侧对照静脉的血流动力学、内膜增生和平滑肌细胞增殖相关蛋白表达情况，评估模型构建效果。结果 本研究使用10只小鼠，完成造模9只，成功率为90%。手术当天以及术后7 d、14 d的超声检查结果显示，吻合口附近血液流速与管径大小成线性关系，流速越高提示管径越大，峰值速度和管腔外径之间存在正相关性（P=0.000 6,R2=0.831 7）。术后14 d的HE染色结果显示，自体动静脉内瘘造模后流出段静脉的平均管腔面积显著减少（P<0.00selleckchem MLN82370 1），内膜面积显著增加（P<0.000 1），内膜中膜面积比及内膜细胞密度均显著提升（P<0.000 1）;Masson染色结果显示，动静脉内瘘术侧的胶原沉积明显增加，平均染色阳性区域占比显著提升（P<0.000 1）。免疫组织化学染色结果显示动静脉内瘘术侧胶原蛋白1 (Collagen 1)阳性区域占比明显上调（P<0.000 1）,α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）阳性区域大量增加（P<0.000 1）并集中于新生的内膜区域，增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）阳性细胞明显增多（P<0.000 1），提示局部细胞增殖水平增加。结论 小鼠自体动静脉内瘘造模具有成功率高、稳定性好、实验成本低等优势，该selleck NVP-TNKS656模型为探寻动静脉内瘘内膜增生的生物学机制提供了良好的载体。

【研究背景】传统杂交育种方法培育小麦品种需时较长,而单倍体育种可以缩短育种周期。小麦单倍体诱导基本采用花药培养和小麦与玉米远缘杂交途径,存在程序繁琐、操作复杂、周期长、诱导效率低、基因型依赖性强等问题。课题组在前期研究工作中,通过编辑小麦Ta MTL基因,创制了小麦单倍体诱导系,以该诱导系作为父本能够诱导母本产生20%左右的单倍体籽粒。然而,利用诱导系作为LGX818细胞培养父本的杂交当代中的单倍体籽粒和二倍体籽粒在形态上难以区分,需要进行繁琐的细胞学和DNA鉴定,延后了单倍体的加倍时间,降低了加倍效果和工作效率。【材料与方法】该研究利用小麦单倍体诱导系(mtl突变体)与表达花青素基因ZmC1(胚芽鞘呈现紫色)的转基因小麦杂交,同时,比较了多个谷类作物种子特异性启动子调控2个花青素基因ZmC1和Zm R在小麦胚中的表型。此外利用细胞学和流式细胞仪等方法,并结合植株表型对杂交F1代籽粒倍性进行了鉴定。【结果与分析】通过杂交获得了携带ZmC1基因的小麦单倍体诱导系HIPC(胚芽鞘呈现紫色)。以oncology medicinesHIPC为父本与其他小麦材料杂交,杂交F1代籽粒萌发后胚芽鞘呈现白色的为单倍体,呈现紫色的为二倍体,进一步验证发现根据胚芽鞘的颜色直观鉴定小麦杂交后代中单倍体籽粒的准确率为96.7%。同时,研究发现p BD68双向启动子调控2个花青素基因(ZmC1和Zm R)的转基因植株(TRC)的幼胚和成熟胚完全紫色。进一步将TRC纯合株系与小麦单倍体诱导系杂交,创制了携带2个花青素基因的小麦单倍体诱导系HIPE。以HIPE作为父本与其他小麦材料杂交,杂交F1代籽粒中表现紫色胚的为二倍体,白色胚的为单倍体。经过染色体计数、保卫细胞长度鉴定和DNA含量测定等验证,根据胚的颜色标记直观鉴定小麦杂交后代中单倍体籽粒的准确率几乎为100%,这大大减轻了鉴定单倍体的工作量,提高了鉴定的准确性和效率,可以批量进行单倍体的诱导、鉴定和加Lapatinib溶解度倍,将显著促进小麦单倍体育种和基因定位及克隆工作高效开展。【结论】本研究开发了结合TaMTL突变体和具有胚特异性花青素标记的HIPE单倍体诱导系。在以HIPE为父本的F1代杂交种中,单倍体籽粒的胚都是白色的,而二倍体籽粒的胚都是紫色的,可以在籽粒期对单倍体进行筛选。该技术可用于小麦的大规模高效单倍体育种,也有可能用于其他作物的单倍体育种。

生姜是一种重要的香辛调味品，且有一定的药用价值。但由于长期采用无性繁殖和重茬种植，病原菌不断积累，严重影响了生姜的品质和产量。生姜茎基腐病是生姜严重的病害之一，目前对其致病菌的生物学特性研究较少，而且现有的防治措施多存在环境污染和食品安全方面的问题。基于此，本研究拟从莱芜染病生姜植株中分离筛选病原菌，明确其种属和致病性。同时，探究安石榴苷和类黄酮2种外源物质的抑菌效果和对生姜植株防御酶和防御基因的影响。结果表明：本研究共发现7株致病菌，分别为Fusarium verticillioides、Fusarium proliferatum、Penicillium oxalicum、Trichoderma longibrachiatum、NigrospoAlpelisib研究购买ra oryzae、Fusarium solani、Globisporangium spinosum;2种外源物质对病原菌均有抑菌效果，并且类黄酮的抑菌效果更加显著。20 g/L类黄酮对病原菌Globisporangium spinosum、Trichoderma longibrachiatum的抑制率可达100.0%，对病原菌Penicillium oxalicum、Fusarium proliferatum、Fusarium verticillioides、Fusarium solani、Nigrospora oryzae的抑制率分别为63.4%、64.0%、67.9%、70.8%、91.7%。20 g/L安石榴苷对病原菌Penicillium oxalicum、Fusarium pImmunoCAP inhibitionroliferatum、Globisporangium spinosum、Fusarium verticilSAG化学结构lioides、Trichoderma longibrachiatum、Fusarium solani、Nigrospora oryzae的抑制率分别为27.8%、43.8%、100.0%、30.0%、23.3%、62.5%、83.3%。外源物质类黄酮可明显增加生姜中防御酶（过氧化物酶和多酚氧化酶）活力和防御基因（PAL、GLU、ERF、HMGS、WRKY8）表达，在不同浓度（20、10 g/L）类黄酮处理48 h的生姜叶片中，过氧化物酶和多酚氧化酶活力增高，PAL、GLU、WRKY8防御基因的表达量增加。

目的 研究微拉激光治疗良性前列腺增生(BPH)及对前列腺功能、膀胱功能、激素水平的影响。方法 前瞻性选取2019年3月至2021年3月于沧州市人民医院治疗的BPH患者80例，按照随机数字表法分为激光组(n=40)、对照组(n=40)。激光组行微拉激光治疗，对照组行经尿道前列腺电切术(TURP)治疗。观察两组患者的术中出血量、手术时间、尿管留置时间、住院时间等围手术期指标；手术前及手术后7 d血清皮质醇结合球蛋白(CBG)、游离皮质醇(FC)、皮质醇、肾上腺皮质激Oxidative stress biomarker素(ACTH)等激素水平；手术前及手术后3个月的前列腺功能[国际前列腺症状评分(IPSS)及生活质量指数(IPSS-QOL)评分]和膀胱功能[膀胱顺应性(BC)、膀胱最大储尿量(VMCC)、最大尿流率(Qmax)、残余尿量(PVR)]和术后并发症。结果 激光组术中出血量、手术时间、尿管留置时间、住院时间分别为(2.07±0.24) mL、(48.20±5.03) min、(2.73±0.31) d、(3.23±0.35) d,均小于对照组[(93.62±9.57) mL、(60.49±6.34)min、(4.52±0.47) d、(7.48±0.97)d],差异均有统计学意义(P<0.05)。手术后7 d,激光组的血清CBG、FC、皮质醇及ACTH水平分别为(29.89±3.28)、(3.46±0.38)、(30LY2835219半抑制浓度.75±3.34)、(12.37±1.54)μg/dL,均低于对照组[(38.97±4.14)、(4.25±0.44)、(40.39±4.35)、(16.95±1.89)μg/dL],差异均有统计学意义(P<0.05)。手术后Staurosporine生产商3个月，两组IPSS评分、IPSS-QOL评分比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。手术后3个月，激光组BC、VMCC、Qmax分别为(35.85±3.82) mL/cmH_2O、(408.64±43.18) mL、(24.96±2.73) mL/s,均大于对照组[(29.92±3.15) mL/cmH_2O、(367.75±39.22)mL、(17.27±2.06) mL/s],PVR为(17.85±1.96) mL,小于对照组[(38.78±3.93)mL],差异均有统计学意义(P<0.05)。激光组术后并发症发生率为2.50%,低于对照组(20.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 微拉激光治疗BPH与TURP疗效一致，且具有创伤小，对膀胱、激素水平影响少，并发症发生率低，术后恢复快，安全性高等优势。