乳腺癌(breast cancer,BC)是发病率最高的女性恶性肿瘤,且发病率增长速度居高不下。70%以上BC患者为Luminal A(ER+、PR+)型BC患者,在使用内分泌治疗最常用药物——他莫昔芬(tamoxifen,TAM)治疗后预后较好,但TAM耐药型乳腺癌及三阴型乳腺癌(Triple Negative Breast Cancer,TNBC)具有预后不良的特点。癌症的发展进程中会伴随miRNA的表达变化,已证实miRNA-216b与恶性程度较高的癌症分型有关且表达水平变化会在BC中发挥抑癌或促癌作用。但目前关于miRNA-216b在BC发展进程与BC患者预后及临床指标的关系研究尚不充分。目的:本研究通过检测不同类型BC患者中miRNA-216b表达水平与临床指标之间的关联,结合miRNA-216b在不同类型细胞中的功能并筛选其可能的靶基因,为miRNA-216b能否成为BC患者潜在诊断及预后标志物提供理论依据。方法:使用TCGA数据库和Kaplan-Meier plotter数据库明确miRNA-216b在BC患者中的表达水平及其与不同类型BC患者生存的关系。RT-qPCR技术明确miRNA-216b在不同BC细胞系中的表达水平。分别采用MTS法进行细胞增殖实验、wound healing细胞划痕实验、小室穿孔实验和流式细胞术明确miRNA-216b对MCF7、LCC2、MDA-MB-231细胞生物学功能的影响。使用R语言4.0.3进行差异表达基因分析(Differentially Expressed Genes,DEGs)。通过Taeget Scan、miRbase、mi-RDB三个数据库预测miRNA-216b的靶基因并与DEGs分析结果取交集得到差异表达的靶基因。对具有表达差异的靶基因进行GO富集分析以及KEGG通路分析。将与研究目的相关的通路上的基因进行提取并在TCGA数据库中对差异表达的靶基因在不同BC分型人群中的差异表达及生存进行分析。结果:1.miRNA-216b与乳腺癌患者预后的关系通过Kaplan-Meier plotter数据库进行生存分析结果:在总体BC患者和ER+型乳腺癌患者中miRNA-216b高表达者总生存(Overall survival,OS)时间短[BC:HR=1.86(1.34-2.59),P=0.00019;ER+型乳腺癌:HR=7.45(2.78-19.97),P<0.001],miRNA-216b与HER2阳性型BC患者生存关系不具有显著性(P=0.1),在TNBC患者中miRNA-216b高表达者OS时间长(TNBC:HR=0.21(0.07-0.64),P=0.0025)2BYL719纯度.miRNA-216b对ER+型乳腺癌和TNBC型细胞功能的影响细胞功能实验结果表明:在MCF7细胞中,经miRNA-216b mimic转染后,与mimic NC组相比,细胞增殖、迁移、侵袭能力增加(P<0.01),而细胞凋亡受到抑制(P<0.001);经miRNA-216b inhibitor转染后,与inhibitor NC组相比,细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.01),而细胞凋亡增加(P<0.01)。在LCC2和MDA-MB-231细胞中经miRNA-216b mimic转染后,与mimic oncology staffNC组相比,细胞增殖、迁移、侵袭能力受到抑制(P<0.05),而细胞凋亡增加(P<0.001);经miRNA-216b inhibitor转染后,与inhibitor NC组相比,细胞增殖、迁移、侵袭能力增加(P<0.01),而细胞凋亡受到抑制(P<0.01)。可以证明miRNA-216b在非TAM耐药型细胞中发挥促癌作用,在TAM耐药型和TNBC细胞中发挥抑癌作用。3.miRNA-216b在乳腺癌患者中的表达差异通过TCGA数据库分析表达水平差异,结果显示miRNA-216b在乳腺癌组织中的表达高于非癌组织,且差异具有统计学意点击此处义(P=0.011)。4.miRNA-216b靶基因的预测筛选利用Taeget Scan、miRbase、mi-RDB分别对靶基因进行预测,分别得到可能的靶基因:4333个、15142个、593个,将以上三个数据库预测结果取交集最终获得靶基因242个。利用TCGA数据库:筛选乳腺癌组织与对照样本组织间差异表达的基因,获得下调DEGs 2913个,上调DEGs 1935个。将靶基因预测结果与差异基因取交集,最终获得差异表达靶基因233个,对以上基因进行KEGG通路分析和GO富集分析。KEGG通路分析结果为预测出的靶基因富集的主要通路为Hippo信号通路,GO富集分析发现主要富集的生物学作用为蛋白质磷酸化和金属离子结合。分析靶基因在不同类型乳腺癌患者中的表达水平并进行生存分析,结果发现SRPK3在ER+、PR+型乳腺癌患者中低表达,ER+、PR-型及TNBC患者中高表达。即作为非TAM耐药型乳腺癌患者的保护因素,TAM耐药型乳腺癌和TNBC患者的危险因素,SRPK3可能为miRNA-216b的靶基因。结论:1.miR-216b表达水平越高,ER+型乳腺癌患者预后越差,而TNBC型患者预后越好。2.miR-216b在乳腺癌组织中的表达水平高于癌旁组织。3.miR-216b在ER+乳腺癌细胞中的表达水平高于TNBC和TAM耐药型乳腺癌细胞。4.在TAM耐药型乳腺癌和TNBC中,miR-216b高表达能够抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力,并促进细胞凋亡;在ER+乳腺癌细胞中,miR-216b高表达能够促进肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力,并抑制细胞凋亡。5.SRPK3在ER+乳腺癌患者中低表达,表达水平越高患者预后越好;在TAM耐药型乳腺癌和TNBC患者中高表达,表达水平越高患者预后越差。