[研究背景]多种慢性呼吸系统疾病的主要病理特征是肺组织重塑。肺组织重塑是多种细胞GSK1349572体内实验剂量命运改变的结果,而TGF-β细胞因子在多种呼吸系统相关细胞中均有受体,它可通过经典信号转导通路和非经典信号转导通路调节细胞的命运,从而参与肺组织重塑过程。课题组前期筛选出了一个与TGF-β 1强相关且在COPD中高表达的LncRNA,即HSALR1。研究结果表明HSALR1在人支气管成纤维细胞中依赖于TGF-β 1非经典信号转导通路中的AKT通路促进了minimal hepatic encephalopathy人支气管成纤维细胞的增殖,除此之外还发现HSALR1与调控众多激酶稳定性的HSP90AB1存在直接结合。因此,我们仍然想进一步了解受TGF-β1调控的HSALR1在其他呼吸系统相关细胞中是否也参与调节其非经典信号转导通路,进而影响细胞的生物学功能。[研究目的]本课题旨在探讨LncRNAHSALR1在不同细胞类型中如何参与调节TGF-β1非经典信号转导通路激活的过程。[研究方法]1、通过RT-qPCR的方法检测多种呼吸系统相关细胞在TGF-β 1刺激后HSALR1的转录水平。2、通过WB的方法检测多种呼吸系统相关细胞在TGF-β 1刺激后非经典信号转导通路蛋白(AKT、JNK、ERK1/2、P38)的磷酸化水平。3、在细胞模型中过表达和敲低HSALR1,通过WB的方法检测HSALR1是否参与激活TGF-β1非经典信号转导通路蛋白(AKT、JNK、ERK1/2、P38)。4、在高LEE011 molecular weight表达HSALR1的HBF细胞中,探究HSALR1参与激活AKT通路的机制:(1)在前期研究发现HSALR1与HSP90AB1存在直接结合的基础上,通过转染和加CHX蛋白合成抑制剂,探究HSALR1对HSP90AB1的调控作用。(2)通过co-ip和WB的方法探究HSALR1对HSP90AB1与p-AKT结合活性的影响。5、通过RIP实验探究哪些细胞存在HSALR1与HSP90AB1的结合。[研究结果]1、HSALR1的表达存在细胞特异性,且HSALR1在多种癌上皮细胞中高表达。2、TGF-β 1通过激活不同类型的非经典信号转导通路调控不同细胞的功能。3、高表达的HSALR1能增强TGF-β 1非经典信号转导通路蛋白的磷酸化活性:(1)在TGF-β 1能上调HSALR1的细胞模型中,HSALR1参与了 JNK、ERK1/2、P38通路蛋白的活化。(2)在TGF-β 1不上调HSALR1的细胞模型中,过表达的HSALR1促进了ERK1/2和P38的活化。4、在高表达HSALR1的HBF细胞中,HSALR1通过稳定HSP90AB1的活性参与AKT通路的激活:(1)HSALR1通过增强HSP90AB1的稳定性发挥作用,而非促进HSP90AB1的表达增加。(2)HSALR1可以增强HSP90AB1与p-AKT的结合。5、HSALR1与HSP90AB1的结合存在细胞特异性,且并非在TGF-β 1促进HSALR1表达上调的细胞中都存在HSALR1与HSP90AB1的结合。[实验结论]在转录水平上,TGF-β 1调控HSALR1的细胞特异性表达,且在多种癌上皮细胞中HSALR1转录增强。在转录后调控水平上,HSALR1通过调控HSP90AB1与激酶的结合活性参与调节不同的TGF-β1非经典信号转导通路。