第一部分IFN-γ对食管鳞癌细胞生物学功能影响的研究目的:研究干扰素-γ(Interferon-γ,IFN-γ)对食管鳞状细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:1.体外进行食管鳞癌细胞株Eca9706、TE1和KYSE150细胞培养,分别用不同浓度IFN-γ作用各株细胞24h后,镜下观察各细胞细胞形态学变化。2.CCK-8实验检测各细胞的增殖能力。3.划痕实验和Transwell实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力。结果:1.与空白对照组(NC)相比较,接受IFN-γ作用24h后的Eca9706、TE1和KYSE150细胞形态均未发生改变,无明显差异。2.CCK8实验证实,IFN-γ作用后的Eca9706、TE1和KYSE150细胞PR-171化学结构的增殖能力均显著降低(均P<0.05)。3.划痕实验发现,与NC组相比较,IFN-γ使Eca9706、TE1和KYS E150细胞的迁移能力均显著下降(均P<0.01),且不同浓度IFN-γ之间存在差异(均P<0.01)。4.Transwell实验显示,与NC组相比较,IFN-γ作用后,Eca9706、T E1和KYSE150细胞的迁移和侵袭能力均受到明显抑制(均P<0.01),且不同浓度IFN-γ之间存在差异(均P<0.01)。第二部分IFN-γ对食管鳞癌细胞作用机制的研究目的:研究IFN-γ对食管鳞癌细胞生物学功能影响的作用机制。方法:1.体外进行Eca9706、TE1、KYSE150和KYSColforsin溶解度E30细胞培养。2.提取各细胞系总RNA,采用RT-PCR和Quantitative Real-time P CR方法检测细胞CXCL8 m RNA表达情况。3.体外培养TE1细胞,用不同浓度IFN-γ作用TE1细胞,24h后采用Quantitative Real-time PCR法检测趋化因子CXCL8和TNFSF14的表达效率;48h后采用ELISA实验检测TE1细胞CXCL8分泌量的变化,采用Western blot法检测细胞TNFSF14蛋白表达。结果:1.RT-PCR结果显示,Eca9706、TE1、KYSE150和KYSE30细胞均有CXCL8的表达,TE1细胞CXCL8的表达水平较高。Quantitative Real-time PCR法验证了上述结果。因此,选取TE1细胞进行后续的实验。2.Quantitative Real-time PCR结果显示,与NC组比较,接受不同浓度IFN-γ作用24h后,TE1细胞的CXCL8基因表达水平均显著下调(P<0.01);且不同浓度medical wasteIFN-γ之间存在差异(均P<0.01)。接受IFN-γ作用24h后,TE1细胞的TNFSF14基因表达水平显著升高(P<0.01)。3.ELISA实验结果显示,与NC组相比,接受不同浓度IFN-γ作用48h后,TE1细胞CXCL8分泌量均显著降低(P<0.01);且不同浓度IF N-γ之间存在差异(均P<0.01)。4.Western blot结果显示,接受IFN-γ作用48h后,TE1细胞的TNF SF14蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:四种食管癌鳞癌细胞系均表达CXCL8,IFN-γ可抑制食管鳞状细胞在体外的增殖、转移和迁移能力。IFN-γ对食管鳞癌细胞生物学功能的影响可能是通过下调CXCL8表达和上调TNFSF14表达相关。