H_2O_2诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁死亡模型的构建

目的 genetic test构建并鉴定H_2O_2诱导小鼠睾丸间质TM3细胞铁MAPK抑制剂死亡模型。方法 常规培养TM3细胞,采用MTS法选择H_2O_2的处理浓度,设置TM3细胞常规培养组(T组)、2 mmol·L-1H_2O_2处理TM3细胞1 h组(H_2O_2-T组)、1μmol·L-1GSH过氧化物酶4抑制剂(RSL3)处理TM3细胞1 h组(RSL3-T组)和3μmol·L-1i FSP1处理TM3细胞24 h组(i FSP1-T组);采用流式细胞术检测活性氧(ROS)水平;检测试剂盒检测细胞的丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和脂质过氧化物(LPO)含量,Phen-Green-SK荧光探针经激光共聚焦显微镜检测Fe2+含量;采用透射电镜观察线粒体形态结构。结果 根据MTS法选择2 mmol·L-1H_2O_2处理TM3细胞;与T组相比,H_2O_2-T组ROS水平、MDA和LPO含量均上升(P均<0.001)、SOD活性下降(P <0.001);细胞内Fe2+含量上升(P<0.01),与RSL3-T组和i FSP1-T组相比,H_2O_2-T组细胞内LPO、Fe2+含量差异均无统计学意义(P均>0PR-171.05);透射电镜结果显示,H_2O_2-T组细胞线粒体变小皱缩,嵴减少,外膜破裂,与RSL3-T组和i FSP1-T组相似。结论 H_2O_2可诱导小鼠睾丸间质细胞TM3细胞发生铁死亡。