乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,其中三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)在所有乳腺癌亚型中恶性程度高,预后差,对常见的内分泌治疗药物和靶向治疗药物不敏感,只能使用化疗药物进行治疗。目前临床用药指南上建议TNBC患者在手术前接受新辅助治疗,常用的化疗药物是吡柔比星(Pirarubicin,THP)等蒽环类化疗药物。然而,化疗药物治疗TNBC患者的疗效有限且副作用较强,因此迫切需要寻找新的治疗TNBC的药物靶点。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类由前体m RNA通过反向剪接机制形成的共价闭合环状内源性RNA分子,在生物体内可以通过参与基因表达调控发挥生物学作用。越来越多的研究证明,circRNA在癌症诊断、治疗和预后等方面发挥重要作用,然而circRNA在TNBC中发挥怎样的作用,以及TCH-223191HP与circRNA之间的关系还需探索。外泌体是细胞分泌的一种膜性囊泡,广泛分布在体液中,可以携带和传递包括circRNA在内的多种生物分子,从而发挥生物学作用,充当癌症诊断或预后生物标志物Colforsin体内实验剂量。患者血浆外泌体中circRNA是否具有作为TNBC诊断和预后生物标志物的潜在价值,也需进行研究。本研究旨在筛选与TNBC组织和THP治疗相关的目标circRNAs,通过体外实验和临床分析,运用多种实验方法,探讨circSTIL介导吡柔比星抑制三阴性乳腺癌恶性表型及其临床意义,以期为TNBC提供新的治疗靶点及诊断和预后生物标志物。本研究分为以下3个研究部分:(1)circRNA基因芯片生物信息学分析以及circSTIL的表达和分子特征鉴定本研究通过对课题组前期构建的THP干预MDA-MB-231细胞circRNA芯片与公共数据库中TNBC组织circRNA测序结果取交集,最终筛选得到在THP干预的MDA-MB-231细胞中显著下调,且在TNBC组织中显著高表达的circSTIL作为研究对象。在细胞水平上,发现ICU acquired InfectionTHP干预MDA-MB-231细胞后,circSTIL表达量显著下调,与THP干预MDA-MB-231细胞芯片结果一致;circSTIL在TNBC细胞中特异性高表达。在患者组织中,证实circSTIL在TNBC组织中高表达,与TNBC组织测序结果一致;circSTIL在TNBC组织中特异性高表达。Sanger测序、琼脂糖凝胶电泳、Rnase R酶实验和放线菌素D实验均验证circSTIL具有反向剪接成环的结构且稳定性高。核质分离实验证明circSTIL主要分布在细胞质中,提示它可能在细胞质中发挥作用。(2)circSTIL在THP抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭并促进细胞凋亡中的作用研究过表达circSTIL可以促进MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡;敲降circSTIL则起相反的作用。THP可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭并促进细胞凋亡;而circSTIL的过表达则可以一定程度上逆转THP的上述作用。说明THP抑制MDA-MB-231细胞恶性表型是通过下调circSTIL介导的。(3)circSTIL在乳腺癌患者血浆外泌体中的表达及作为TNBC潜在生物标志物的探讨收集不同乳腺癌患者的血浆,提取并鉴定患者血浆外泌体;circSTIL在TNBC患者血浆外泌体中高表达;在接受蒽环类药物为主的NAC的TNBC患者外泌体血浆中,circSTIL的表达量下调。绘制ROC曲线发现,在TNBC患者血浆外泌体中,circSTIL具有区分TNBC患者的诊断价值;生存分析显示,circSTIL的高表达与患者较差的DFS相关。表明circSTIL可以作为TNBC潜在的诊断和预后生物标志物。综上所述,可以得出以下结论:(1)通过对THP干预MDA-MB-231细胞基因芯片和TNBC组织基因芯片(GSE101123)进行生物信息学分析,筛选得到circSTIL(hsa＿circ＿0000069)并验证,同时发现其在TNBC细胞系和组织中特异性高表达。(2)体外研究证实,过表达circSTIL可以促进MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭并抑制细胞凋亡,而敲降circSTIL的结果则相反。(3)THP抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭并促进凋亡,其作用是通过circSTIL介导的。(4)circSTIL在TNBC患者血浆外泌体中高表达,且具有区分TNBC和non-TNBC患者的诊断价值;circSTIL与TNBC患者较差的预后相关。