Author: admin

目的 筛选柴胡纳米乳的处方和制备方法，并对其进行质量评价和退热药效作用的研究。方法 对乳化剂和助乳化剂Hp infection进行初步筛选，再通过伪三元相图筛选处方，并对制备的柴胡纳米乳的外观性状、粒径分布、结Torin 1说明书构类型、稳定性及含量进行质量评价。进一步将Wistar大鼠随机分成空白对照组，模型对照组，阳性对照组(阿司匹林组)，柴胡纳米乳高、中、低剂量组(18.00,9.00,3.00 g·kg~(-1))；除空白对照组外，其余各组大鼠制备发热大鼠病理模型。按照预定的实验要求分别给予相应的药物，于0.5,1,1.5,2,3 h记录各组大鼠的体温变化情况，观察柴胡纳米乳的退热作用。结果 柴胡纳米乳的最佳处方为吐温-80 6 g与正丁醇3 g，柴胡提取物溶于纯水为水相20 mL，柴胡油为油相2 g。室温下制剂为黄褐色澄清透明液体，水包油型纳米乳，平均粒径为(77.21±3.66)nm，多分散系数为0.28±0.04,Zeta电位为(–18.81±1.42)mV，所含柴胡皂苷为3.071 mg·mL~(-1)，具备良好的稳定性。动物实验中，与模型对照组比较，阿司匹林组、柴胡纳米乳高剂量组首次给药后的各时间段肛温明显降低(P<0.01)，柴胡纳米乳中剂量组首次给药2,3 h后肛温明显降低(P<0.BI 10773分子量01)。结论 所制备的柴胡纳米乳外观透明，稳定性好，并且对发热大鼠模型具有较好的解热作用。

目的 分析人文关怀联合亲情护理应用于小儿免疫性血小板减少性紫癜（ITP）中的应用价值。方法 选取我院2Enasidenib半抑制浓度020年1月至2021年12月诊治的免疫性血小板减少性紫癜患儿88例为研究对象，按随机数字表法分为两组，对照组给予常规护理措施，观察组给予人文关怀联合亲情护理，对比两组患儿的治疗依从性、血小板计数达标时间、再次出血情况等。结果 观察组患儿的治疗依从性高于对照组，且干预1个月后的CDI评分、SAS评分均低于对照组（P <0.05）；观察组干预3个月后的血小板计数高于对照组，血小板计数达标时间、临床症状控制时间、住院时间以及再次出血发生率均短于或低于对照组（P <0role in oncology care.05）；CHIR-99021供应商观察组干预3个月后的生活质量量表（NHP）中的5个维度评分均低于对照组（P <0.05）。结论 人文关怀联合亲情护理在小儿ITP治疗中应用效果肯定，有助于促进血小板计数的升高，提高治疗依从性，促进患儿负性情绪缓解，提高生活质量。

目的 系统评价使用曼月乐对乳腺癌术后口服他莫昔芬内分泌治疗的患者进行保护子宫内膜的临床疗效和安全性。方法 通过计算机检索Pub Med(1966年1月至2021年10月)，Cochrane临床对照试验注册资料库、EMbase，中国知网数据库，收集乳腺癌术后长期口服他莫昔芬的患者，同时使用曼月乐进行子宫内膜保护的临床随机对照试验（RCT）。采用Rev Man 5.4软件分析子宫内膜息肉发生率、子宫内膜增生发生率、子宫内膜癌发生率、子宫肌瘤发生率、异常子宫出血发生率、乳腺digenetic trematodes癌复发发生率、乳腺癌相关病死率等相关指标。结果 最终6篇文献被纳入本研究，包含629例乳腺癌患者。Meta分析结果显示：(1)使用曼月乐明显降低了子宫内膜息肉发生率[OR=0.22,95%CI(0.14～0.36),P <0.00001]。同时，曼月乐降低了子宫内膜增生的发生率[OR=0.13,95%CI(0.03～0.67),P <0.00001]。而曼月乐+他莫昔芬组与他莫昔芬组两组之间的肌瘤发病率几乎没有差异[OR=0.56,95%CI(0.19～1.63),P=0.29]。(2)曼月乐增加了异常子宫出血的发生率[OR=5.07,95%CI(2.71～9.52),P <0.00001]。两组之间的KPT-330浓度乳腺癌复发率及乳腺癌相关的病死率无显著差异[复发率OR=1.74,95%CI(0.64～4.74),P=0.28；病死率OR=1.02,95%CI(0.36～2.84),P=0.97]。结论曼月乐对长期口服他莫西芬治疗的乳腺癌患者的子宫内膜良性病变有保护作用。能降低了子宫内膜息肉、子宫内膜增生的发生率，但放置曼月乐1年内增加了异常子宫出血的发生率，尚不明确其对于子宫肌瘤发PD-0332991病率、乳腺癌的复发率及病死率的影响。

目的 研讨新生血管性青光眼术后应用β阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂治疗对眼压、细胞因子的影响。方法 选择南阳市中心医院2021年6月至2022年6月收治的96例新生血管性青光眼患者，按随机数字表法分成两组，各48例(50眼)。对照组给予单Empirical antibiotic therapy一β阻滞剂治疗，观察组给予β阻滞剂、碳酸酐酶抑制剂治疗，比较两组临床疗效、眼压和细胞因子。结果 观察组治疗有效率(96.00%)高于对照组(84.00%)，差异有统计学意义(P <0.05)。观察组眼压峰值下降值、随机眼压下降值和24 h眼压下降值均大于对照组，2Dorsomorphin使用方法4 h眼压波动值小于对照组，差异有统计学意义(P <0.05)。治疗前，两组血清及房水色素上皮衍生因子(PEDF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素-6(IL-6)值比较，差异无统计学意义(P> 0.05)；治疗后，血清PEDF和房水PEDF值高于对照组，血清和房水VEGF、IL-6值均低于对照组，差异有统计学意义(P <0.05)。结论 新生血管性青光眼术后采用β阻滞剂联合碳酸酐酶抑制剂疗效显著，能降低眼压水平，对细胞3-Methyladenine因子的合成进行调节。

目的 对采自乌鲁木齐市的12种食用植物油（菜籽油、红花籽油、葵花籽油、玉米胚芽油、亚麻籽油、胡麻油CH-223191、南瓜籽油、桃仁油、巴旦木油、杏仁油、葡萄籽油、恰玛古籽油）中37种脂肪酸组成进行测定，并对其所含的各类脂肪酸的含量进行详细分析，以确定不同类型食用油的营养特征。方法 通过预处理与仪器方法的同步优化，以酯交换法对食用油样品进行甲酯化衍生确认细节化预处理，采用HP-88脂肪酸专用毛细管色谱柱对各脂肪酸组成进行分离和测定。结果 12类食用油所含的主要脂肪酸成分是棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等。在菜籽油、桃仁油、巴旦木油以及杏仁油中，单不饱和脂肪酸（monounsaturated fatty acids,MUFA）的含量占了绝大部分，质量分数均>57%；对于红花籽油、葵花籽油、玉米胚芽油、亚麻籽油、胡麻油、葡萄籽油和恰玛古籽油，多不饱和脂肪酸（polyunsaturated fatty acids,PUFA）占了大多数，质量分数均≥58%，油酸和亚油酸在本组试验测定的食用植物油中含量高；花生四烯酸在恰玛古籽油中含量（48.386 g/100 g）很高，本次试验样品中饱和脂肪酸（saturated fatty acids,SFA）:MUFA均<1,SFA:PUFA均<1。结论 12种食用植物油均具有较高的营养价值与较好的保健功效，同时也具有较好的稳定性和安全性，科学按需按比的摄入食用油有助于更好的达到脂肪酸膳食营non-viral infections养平衡和有效保健。

多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua)是百合科黄精属的多年生草本植物,是药食两用植物,富含多糖、皂苷、黄酮等多种有效成分,有提高人体免疫力、滋阴润肺等功效。福建省土壤存在重金属(铅、镉等)超标现象,且多花黄精在不同地区发现有重金属(铅)超标;目前对福建省多花黄精重金属分析尚未报道。因此本研究对福建省不同地区多花黄精进行重金属含量进行分析,为福建省多花黄精的安全食用提供数据支撑。对不同浓度铅处理下多花黄精组培苗生长、生理指标等的测定,初步探究铅处理对多花黄精组培苗的影响;研究不同浓度褪黑素(Melatonin,MT)处理对铅胁迫下多花黄精组培苗的生长、生理指标等的最佳缓解浓度;同时对铅胁迫与褪黑素处理下的多花黄精进行转录组和代谢组差异分析,揭示褪黑素对多花黄精缓解铅胁迫的机制,并对多花黄精重金属相关的植物蛋白(Hwww.selleck.cn/products/byl719eavy metal-associated plant proteins,HIPPs/HPPs)基因家族鉴定及表达分析。旨在为深入探讨褪黑素对多花黄精铅胁迫的缓解作用以及调控机制提供理论依据。主要结果如下:(1)福建省不同地区多花黄精重金属含量分析本研究对福建省不同地区多花黄精进行重金属(镉、铜、砷、汞、铅)分析发现,五种重金属含量均在标准限制浓度范围内;为确定药物安全,对多花黄精进行安全风险评估,危害指数>1/暴露限值≤1的风险应予以关注,发现福建省多花黄精重金属含量处于安全范围,但是16个地点铅风险较高;除了邵武沿山野生、邵武沿山人工,其它14个地点汞风险较高;砷有6个地点风险较高,分别为宁化安远野生、德化赤水野生、长汀涂坊人工、长汀濯田人工、长汀梅迳人工、柘荣英山人工。(2)不同浓度铅处理对多花黄精组培苗的影响在重金属含量分析及风险评估中发现福建省多花黄精重金属铅的健康风险最高,因此以组培体系对多花黄精进行不同浓度氯化铅(Lead chloride,PbCl_2)处理,以探究对多花黄精组培苗的产生的影响。首先对多花黄精组培苗进行生长指标分析,发现在1 mM PbCl_2处理后PF-6463922体内实验剂量其叶片萎缩、枯黄严重、生物量下降。进一步对铅处理下多花黄精叶绿素含量、SOD、POD进行分析,发现1 mM PbCl_2处理下多花黄精叶绿素含量、SOD、POD显著下调。此外,对多花黄精组培苗中的多糖、类黄酮进行分析,发现铅处理可促进多花黄精的多糖积累,而在对类黄酮含量的影响较小。因此,1 mM PbCl_2对多花黄精组培苗生长、叶绿素含量、SOD和POD酶活性抑制最显著,对多花黄精组培苗造成胁迫。(3)不同浓度MT处理对多花黄精铅胁迫的缓解作用研究在对多花黄精组培苗进行不同浓度铅处理时发现,1 mM PbCl_2对多花黄精组培苗造成显著胁迫;因此,以1 mM PbCl_Electro-kinetic remediation2为基础,进一步在多花黄精继代培养基中添加不同浓度的褪黑素,研究缓解铅胁迫的最佳褪黑素浓度。结果表明,添加200μM的褪黑素处理后,多花黄精组培苗的萎蔫、叶片黄化、生物量等生长状态得到有效缓解。在对处理后多花黄精组培苗的叶绿素含量进行分析时发现,外施200μM的褪黑素可显著上调叶绿素含量;SOD和POD活性也显著提高。对多糖、类黄酮分析表明,添加200μM褪黑素处理后,多糖和类黄酮含量显著提高。因此,200μM的褪黑素对铅处理下多花黄精的生长、叶绿素含量、SOD、POD多糖、类黄酮的缓解作用最显著。(4)外源MT调控多花黄精缓解铅胁迫组学联合分析在对多花黄精组培苗进行不同天数核损伤观察时发现,在12 d中1 mM PbCl_2与200μM的褪黑素联合处理(MT4)减少铅胁迫引起的核损伤。因此,进一步对多花黄精组培苗(CK)、1 mM的PbCl_2处理的组培苗(Pb4)及添加MT4的组培苗进行转录组测序分析,共获得61.43 Gb的高质量reads,比对率介于80.92-82.86%。在CK-Pb4、CK-MT4、Pb4-MT4的处理组进行成对比较中分别筛选出4673、7368、4181个差异表达基因。KEGG富集分析发现,差异表达基因在内质网对蛋白质的加工和玉米素的生物合成中富集最显著,可能对多花黄精缓解铅胁迫具有重要的调节作用;AMPK、MAPK信号通路相关的β调节亚基、丝裂原活化蛋白激酶、过氧化氢酶等在MT4处理下表达显著上调;类黄酮生物合成途径的氢黄酮醇4-还原酶/黄酮4-还原酶、羟基肉桂酰转移酶在MT4处理下显著上调;在MT4处理中,重金属相关家族HIPPs/HPPs中有4个基因表达显著上调。进一步对CK、Pb4和MT4处理的多花黄精进行代谢组分析,共检测到1649种代谢物,包括氨基酸及其衍生物、酚酸类、核苷酸及其衍生物、黄酮、醌类、木脂素和香豆素等12类。在CK-Pb4、CK-MT4、Pb4-MT4的处理组之间成对比较中分别筛选出217、267、131个差异代谢物。KEGG富集分析发现,差异代谢物在类黄酮生物合成过程、色氨酸代谢为中富集最显著,其中类黄酮在MT4处理后显著上调。同时对转录组和代谢组进行联合分析,发现色氨酸代谢途径和类黄酮生物合成途径是褪黑素缓解多花黄精铅胁迫的关键途径。(5)基于多花黄精转录组的HIPPs/HPPs基因家族鉴定与表达调控对多花黄精转录组数据进行分析时发现,在MT4处理中,重金属相关家族HIPPs/HPPs中有4个基因表达显著上调。因此,进一步对多花黄精HIPPs/HPPs家族进行分析。基于多花黄精不同转录组数据,分别鉴定出68个PcHIPPs和43个PcHPPs基因家族成员。亚细胞定位分析表明,PcHIPPs/PcHPPs基因有73个分布在细胞核内。对多花黄精PcHIPPs/PcHPPs不同组织部位和盐胁迫处理下的表达量进行分析,结果表明,PcHIPPs/PcHPPs基因在多花黄精根状茎中表达上调,在盐胁迫处理48 h时大部分PcHIPPs/PcHPPs基因表现出明显的下调现象。qRT-PCR结果表明,1 mM PbCl_2处理抑制PcHIPPs/PcHPPs基因家族大部分成员的表达,在相同处理中附加200μM MT后PcHIPPs/PcHPPs基因家族的表达量升高。

目的 探讨多回波采集重度T_2~*WI三维梯度回波(ESWAN)序列联合磁共振弥散加权成像(DWI)在前列腺增生和前列腺癌中的诊断价值。方法 选取研究对象为湖南省人民医院2017年1月～2020年1月收治的19例前列腺癌患者,将其设为前列腺癌组,另外选取同期收治的11例前列腺增生患者行对照分析,设为前列腺增生组,所有患者入院2～3d后选择飞利浦Ingenia3.0T MRI超导磁共振机行ESWAN和DWI扫描,另外通过一致性分析ESWAN、DWI及ESWAN联合DWI诊断前到腺增生和前列腺癌的价值。结果 前列腺19例癌患者中,存在癌灶26个:主要包括高信号结节2个,等信号结节2个,T_2W1低信号结节18个,高低混杂信号结节4个;其中外周带病灶位置为16个、中央带病灶位置为10个,癌灶突出包膜、侵及精囊腺和骨转移分别为15例、7例、4例。此外,还有前列腺增生11例患者结节均处于中Neuroscience Equipment央带,T_2W1低信号结节、T_1W1信号略低结节、等信号结节和低信号结节分别为4、4、2和1个。前列腺癌组ADC值显著低于前列腺增生组,P<0.05。30例前列腺增生和前列腺癌患者中ESWAN检查(+)24例,灵敏度66.67%,特异度91.67%,准确率76.67%,Kappa=0.544。30例前列腺增生和前列腺癌患者中DWI检查(+)25例,灵敏度67.57%,Roxadustat试剂特异度96.30%,准确率PUN30119化学结构76.67%, Kappa=0.544。30例前列腺增生和前列腺癌患者中联合检查(+)28例,灵敏度84.85%,特异度96.3 0%,准确率90.00%,Kappa=0.801。DWI结合ESWAN诊断前列腺癌、前列腺增生的灵敏度和准确性均明显高于单一诊断,P<0.05。结论 ESWAN、DWI均可应用在前列腺癌、前列腺增生诊断之中,且ESWAN联合DWI诊断前列腺癌、前列腺增生的灵敏度和准确性更高,值得临床重视。

目的 研究氯BLZ945临床试验化锂(lithium chloride, LiCl)干预对双侧卵巢切除(ovariectomized, OVX)小鼠骨丢失、Janus激酶/信号转导与转录激活子(The janus kinase/signal transducer and activator of tran-ions, JAK/STAT)信号通路及成骨细胞(osteoblast, OB)的影响。方法 体内实验：选取8周龄雌性C57BL6/J小鼠24只，分为假手术组(Sham组),OVX组和卵巢切除+氯化锂干预(OVX+LiCl)组。收集动物左右侧股骨及右侧胫骨标本，进行Micro-CT、免疫组织化学和骨生物力学测试。体外实验：处死3日龄C57BL/6小鼠，分离颅骨培养原代OB,分为空白对照组(Control组)和LiCl组进行细胞活性检测、碱性Helicobacter hepaticus磷酸酶染色、茜素红染色、实时荧光定量PCR检测。结果 Micro-CT分析示OVX组骨量减少，骨小梁厚度变薄，骨小梁数量减少，骨小梁分离度增加，LiCl干预显著改善骨丢失。生物力学示OVX组的最大载荷、最大应力均显著低于Sham组(P<0.05),OVX+LiCl组的最大载荷、最大应力较OVX组显著升高(P<0.05)。免疫组化结果示，OVX+LiCl组JAK2和STAT3表达LBH589显著高于Sham组(P<0.05);OVX组P-STAT3表达明显低于Sham组(P<0.05),而OVX+LiCl组表达显著升高(P<0.05)。LiCl组的OB增殖活性显著高于对照组(P<0.05)。LiCl组的碱性磷酸酶活性和钙结节数量显著高于OVX组(P<0.05)。LiCl组STAT3 mRNA和OCN mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论 LiCl通过调控OB改善OVX小鼠骨量和骨微结构，其机制可能与调节JAK/STAT3信号通路有关。

胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)是恶性级别最高的胶质瘤,占胶质瘤发生率的50%以上。由于GBM肿瘤细胞具有高度异质性,常常表现为弥漫性浸润性生长,并且肿瘤内血管化严重,外科手术做到肿瘤完全切除难度较大,而且GBM对现有放化疗的耐受性高,多种联合治疗方案对GBM疗效较差。因此,探索GBM新的治疗方法,特别是靶向治疗尤为重要。铁是细胞存活和代谢的重要微量元素,参与遗传物质合成、线粒体生物合成、能量代谢和氧气运输等生物过程。研究表明,在乳腺癌、卵巢癌等肿瘤组织中铁的含量及铁代谢相关蛋白发生infections in IBD改变。例如,在乳腺癌、前列腺癌和卵巢癌中铁输出蛋白(ferroportin,FPN)的表达降低,它能引起不稳定铁池水平增加,促进肿瘤生长。而细胞中的铁超载,引起铁离子及含铁酶催化的细胞脂质过氧化物的代谢异常增强,导致细胞氧化还原失衡,大量脂质过氧化产物堆积,造成细胞氧化应激和铁死亡等细胞损伤。p53作为一种抑癌因子,可以诱导由细胞损伤或生理环境导致的生长停滞或细胞凋亡,包括维持基因组的稳定性、调节细胞代谢和肿瘤微环境。研究表明,p53通GSK1349572细胞培养过调节铁代谢相关蛋白来调节铁稳态,一些铁调节相关蛋白(如铁调节蛋白、铁转运蛋白等)还与p53形成反馈调节回路。同时,p53通过对溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11,也称x CT)的转录过程发挥抑制作用,并抑制胱氨酸/谷氨酸转运系统(system x_c~-),抑制谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase 4,GPX4)的表达,从而增强细胞对铁死亡的敏感性。因此,p53和铁代谢相关蛋白及铁死亡之间的相互作用可能为揭示癌症中铁代谢Berzosertib分子式改变的机制提供新的思路。综上所述,研究p53对GBM中铁代谢的作用可以为GBM的发病机制提供新的研究思路,并可能为开发GBM新的靶向治疗方法产生重要作用。但目前针对p53在GBM铁代谢及铁死亡过程中发挥的作用尚不明确,需要进一步探索。为探究p53对GBM铁代谢及铁死亡的作用及相关机制。本实验选择了两株GBM细胞系——U87(p53野生型)和U251(p53突变型)细胞,通过细胞培养进行铁代谢及铁死亡相关研究。通过铁检测试剂盒(Iron Assay Kit)测定细胞中的铁含量水平;通过Western Blotting检测铁代谢相关蛋白,包括二价金属转运体(divalent metal transporter 1,DMT1)、转铁蛋白受体(transferrin receptor 1,Tf R1)、铁调节蛋白1(iron regulatory protein 1,IRP1)、铁调节蛋白2(iron regulatory protein 2,IRP2)、重链铁蛋白(ferritin heavy chain,FTH)、FPN及铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4等是否存在差异;通过实时荧光定量PCR(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测细胞铁代谢相关基因m RNA表达水平并进行定量分析和差异比较;通过CCK-8(cell counting kit-8)试剂盒检测细胞存活率;通过流式细胞术检测Erastin处理后两组细胞的脂质过氧化水平;通过透射电子显微镜观察不同处理后细胞形态的改变;通过CRISPER-Cas9技术将U87细胞TP53基因敲除,进行铁代谢及铁死亡蛋白的检测。从两株细胞中铁代谢及铁死亡相关基因及蛋白表达的差异,并结合前述两株细胞不同p53类型的差异,明确p53在GBM细胞系铁代谢及铁死亡中发挥的作用。实验研究结果如下:1.Western Blotting结果显示,与U87细胞相比,U251细胞p53蛋白表达水平降低55.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。2.通过Iron Assay Kit对U87及U251细胞进行铁含量测定,结果显示,U251细胞比U87细胞的铁含量高21.6%,且差异具有统计学意义(P<0.05)。3.RT-PCR结果显示,与U87细胞相比,U251细胞在IRP1、IRP2、FPN、DMT1和Tf R1的m RNA表达水平分别降低46.49%、58.29%、92.88%、29.16%和23.04%,差异具有统计学意义(P<0.01),而FTH的m RNA表达在两种细胞之间没有明显差异(P>0.05)。4.Western Blotting结果显示,与U87细胞相比,U251细胞中FTH蛋白含量降低59.49%,Tf R1蛋白含量升高23.17%,IRP2蛋白含量降低40.80%,差异具有统计学意义(P<0.05),而IRP1、DMT1、FPN蛋白含量无明显差异(P>0.05)。5.Erastin处理24 hrs后,与U87细胞相比,U251细胞存活率降低16.80%,差异具有统计学意义(P<0.05)。对Erastin处理后24 hrs、48 hrs、72 hrs、96 hrs、120 hrs的两种细胞进行细胞存活率检测,结果显示,与对照组相比,U87组细胞存活率下降10.72%、37.67%、49.64%、57.63%、55.55%,U251组细胞存活率下降10.33%、29.91%、54.36%、68.92%、86.38%;与DMSO组相比,U87组存活率下降11.40%、34.93%、48.72%、56.69%、56.07,U251组存活率下降8.97%、29.17%、54.55%、70.02%、86.11%,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。6.Erastin处理24 hrs后,U87细胞GPX4蛋白表达较对照组及DMSO组相比分别下降35.73%和37.09%,U251细胞GPX4蛋白表达分别下降40.04%和45.06%,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。7.BODIPY C11染色流式细胞术对细胞脂质过氧化水平进行测定,结果显示,经Erastin处理24 hrs后U87细胞中脂质过氧化水平较对照组与DMSO组分别升高34.12%和25.40%,差异具有统计学意义(P<0.01),U251细胞中分别升高34.01%和31.38%,差异具有统计学意义(P<0.001)。8.透射电子显微镜结果显示,在U87及U251两组细胞中,与对照组及DMSO组相比Erastin处理组细胞形态均出现明显改变,细胞中线粒体空泡明显增多,线粒体膜密度增加,线粒体嵴结构减少,细胞核皱缩。9.利用CRISPER-Cas9技术将U87细胞TP53敲除后,Western Blotting测定铁代谢及铁死亡相关蛋白表达,结果显示,与阴性对照组U87-NC细胞相比,敲除后U87-TP53 KO细胞中GPX4及FTH表达水平分别降低39.64%及21.01%,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。综上所述,p53的不同状态可以对GBM细胞系U87及U251细胞铁代谢相关基因及蛋白表达产生不同作用,并且铁代谢相关蛋白的表达可能存在转录后修饰等过程。p53突变会引起GBM细胞对铁死亡的敏感性增强,这种敏感性增强的效应可能是通过对GPX4的表达抑制产生的。本研究为阐明p53在GBM铁代谢及铁死亡中发挥的作用具有重要意义,为GBM的靶向治疗提供了新思路。

植物油是植物种子中主要的高能量贮藏物质,不但具有众多食品和工业用途,还是人类必须脂肪酸的重要来源。开展植物油的合成和调节等方面的研究,不但具有重要的生物学意义,也具有重要的社会和经济意义。植物中油脂合成的生物化学过程已经比较清楚,但其调控机制的研究还不够深入。FUSCA3(FUS3)是少数已报道的正向调控因子,然而,FUS3如何调控油脂代谢的分子机制尚不清楚。本研究对FUS3可能调控的且在种子中高表达的两个AINTEGUMENTA-LIKE基因(AIL6和AIL1)和4个油体钙蛋白CALEOSIN基因(CLO1、CLO2、CLO4和CLO6)进行了功能研究,以深入解析其在FUS3调节油脂代谢中的分子机制。本研究主要获得以下结果:(1)AIL6作为FUS3的下游调节因子通过调节FAD3和FAE1影响种子脂肪酸代谢,通过调节GA、ABA和IAA生物合成及信号通路影响种子休眠:通过诱导表达和双荧光素酶试验确证了FUS3对AIL6的激活表达;通过基因表达分析鉴定了AIL6随着种子发育的成熟表达量逐渐升高;ail6突变体种子脂肪酸组分发生变化,拟南芥AIL6(At AIL6,简称AIL6)和油菜AIL6(Bna AIL6)都可以挽救ail6突变体中脂肪酸组分的变化;在拟南芥中过表达AIL6和Bna AIL6容易引起转基因共抑制,且这种共抑制可以被RNA的RNA聚合酶6(RDR6)的突变体rdr6-11解除;在AIL6高表达的拟南芥或亚麻荠转基因株系种子中,脂肪酸组分发生改变且与ail6突变体的变化相反,具体表现为油酸(18:1)和亚油酸(18:2)的含量显著升高,亚麻酸(18:3)和二十碳一烯酸(20:1)的含量显著降低,尤其是18:2和18:3的变化幅度最大。拟南芥中AIL6过表达系种子的18:2和18:3比率由野生型的1.5提高至5以上。在亚麻荠中过表达AIL6或Bna AIL6后,过表达株系种子中18:2和18:3比率由野生型的0.45提高至1.1以上。对AIL6的32号过表达系和ail6-1突变体发育中种子进行转录组分析发现,AIL6调节脂类代谢相关基因,AIL6过表达后对脂肪酸脱氢酶FAD3和脂肪酸延长酶FAE1的下调表达可能是导致脂肪酸组分变化的原因之一。此外发现,AIL6的超高表达引起种子深度休眠,种子发芽延迟且发芽率降低,发芽率最低降至12%。进一步测定AIL6过表达系种子的植物激素发现,GA_4含量降至野生型的6%以下,Aselleckchem DecitabineBA和IAA含量升高。对发育中种子或发芽的种子外源施加GA_3,不能有效恢复低发芽和发芽延迟的现象。通过划破种皮或延长后熟时间可以使发芽率分别提高至80%和40%。此外,AIL6过表达引起的深度休眠可以被GA受体della五重突变体有效解除。综上所述,这些结果表明AIL6作为FUS3下游调节因子,在脂肪酸代谢和种子休眠中具有重要作用。(2)AIL1作为FUS3的下游调节因子部分通过LPAT5调控脂肪酸代谢和油脂积累,AIL1通过对油质蛋白OLE1和油体tumor immune microenvironment钙蛋白CLO1的表达上调促进营养组织中的油脂积累:在fus3-T突变体中,AIL1的表达下调;FUS3可以激活AIL1的表达;AIL1的表达模式显示AIL1在发育中种子表达量较高,尤其是在开花后12天的种子中表达量最高;ail1突变体种子中脂肪酸组分无明显变化。在拟南芥或亚麻荠中过表达AIL1引起的种子脂肪酸组分的变化与过表达AIL6类似,而Bna AIL1-1在rdr6-11中过表达后,种子脂肪酸组分变化不明显。但值得关注的是,在拟南芥种子中过表达AIL1使得种子含油量升高。在拟南芥幼苗中诱导表达AIL1后,幼苗中三酰甘油的含量显著升高,且油质蛋白OLE1和油体钙蛋白CLO1被上调表达。转录组分析发现,AIL1在拟南芥种子中过表达导致41个脂类相关基因的差异表达,其中LPAT5被上调表达。LPAT5的过表达系种子中18:1含量升高,18:3的含量降低,种子含油量升高。在lpat5突变体中过表达AIL1后,种子含油量无明显变化,且18:1和18:3变化的幅度小于在Col-0背景下过表达AIL1的结果。综上所述,这些结果表明AIL1作为FUS3下游调节因子,在脂肪酸代谢和油脂积累中具有重要作用。(3)油体钙蛋白在种子脂肪酸代谢和油脂积累中功能冗余,且影响胚的发育:4个油体钙蛋白基因CLO1、CLO2、CLO4和CLO6在种子发育过程中高表达;种子表达最高的CLO1及CLO2被FUS3诱导表达上调;clo1、clo2、clo4和clo6单突变体种子的脂肪酸组分变化较小,变化趋势一致,种子含油量无明显变化;分别通过杂交和CRISPR创建的clo1×clo2和clo1 clo2双突变体种子的脂肪酸组分变化明显,种子含油量降低了16-23%。在4个基因沉默(4CLO RNAi T_1)的种子中,含油量降低了40%,脂肪酸组分进一步变化,且胚中的油体变小,油体膜变厚。互补试验显示CLO1和油菜的Bna CLO1在clo1 clo2双突变体种子中可以恢复其脂肪酸组分的变化和含油量降低的表型。在拟南芥幼苗、莲座叶和BY2细胞中诱导表达CLO1可以促进营养组织中三酰甘油的积累。突变了EF-hand模体的CLO1(命名为CLO1 DD)在clo1 clo2双突变体中也可以挽救其种子https://www.selleck.cn/products/iacs-010759-iacs-10759.html脂肪酸组分的变化和含油量降低的现象。此外,4CLO RNAi T_1种子皱缩、种子发芽率降低;部分胚未发育成完整的子叶和下胚轴,甚至还是未分化的圆球形胚;有些萌发的幼苗出现形态异常。对clo1 clo2发育中种子的转录组分析发现,脂类代谢、种子/胚发育、胁迫响应和钙离子信号相关基因表达发生变化。综上所述,这些结果表明种子表达的油体钙蛋白在油脂积累和胚发育中具有重要作用。本研究筛选并鉴定了FUS3下游调节因子AIL6、AIL1和种子表达的油体钙蛋白在脂肪酸代谢中的功能。利用模式植物拟南芥、烟草BY2细胞和油料作物亚麻荠展开研究,并鉴定了油菜中同源基因的功能。对于未来采用基因工程手段,设计改良作物含油量等性状具有重要的意义。本研究还揭示了AIL6在种子休眠中的作用,对控制农作物种子萌发方面也具有潜在应用价值。