Author: admin

植物来源外泌体样囊泡(plant-derived exosome-like nanovesicles,PELNs),与牛奶等动物来源外泌体的组分、结构和生物功能相似,是一种新兴的食品活性成分。有研究表明,PELNs具有促进干细胞增殖、维持肠道稳态等功能,可促进机体健康。炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)严重威胁到人类健康,有效防治IBD至关重要。目前,大蒜来源外泌体样囊泡(garlicderived exosome-like nanovesicles,GELNs)对IBD的作用鲜有报道。为了深入探究GELNs对结肠炎的影响,本研究首先从蒜汁中分离提取GELNs,并对其主要成分进行鉴定;然后,通过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人结直肠腺癌细胞(Caco-2)模型评估GELNs对肠上皮细胞炎症损伤的保护作用;最后,建立葡聚糖硫酸钠(dABT-199试剂extran sulphate sodium salt,DSS)诱导小鼠结肠炎模型,进一步探究GELNs对结肠炎的保护作用和机理。具体研究内容和结果如下:1、采用蔗糖密度梯度和超高速离心相结合的方法分离提取GELNs,测定粒径和ζ电位;采用液相色谱与质谱联用对GELNs的脂质和蛋白质进行分析,采用RNA转录组测序技术进行mi RNAs序列鉴定和靶基因预测分析。结果表明:GELNs为纳米级杯状囊泡,ζ电位为负值,包含26种脂质、61种蛋白质和127种已知的mi RNAs;其中,多个mi RNAs可靶向编码人源炎症相关基因。2、建立LPS诱导的Caco-2单层肠上皮细胞炎症模型,探究GELNs对肠上皮细胞炎症的保护作用。结果表明:GELNs(5、10μg/m L)能显著降低LPS引起的通透性损伤、一氧化氮(nitric oxide,NO)过量产生,上调胞质紧密粘连蛋白1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭合蛋白(claudin-1)和咬合蛋白(occludin)的表达,并抑制促炎因子白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的分泌水平,上调抗炎因子白介素-10(interleukin-10,IL-10)的水平,改善肠道屏障损伤。TLR4抑制实验表明,GELNs的抗炎活性与TLR4信号通路密切相关。3、建立DSS诱导小鼠结肠炎模型,评估GELNs对结肠炎的缓解作用。结果表明:每日灌胃剂量为100 mg/kg时,GELNs可有效改善小鼠炎症反应、肠道组织病理损伤和紧密连接蛋白结构紊乱,显著下调toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)/髓样分化初级反应基因88(myeloi获悉更多d differentiation primary response gene 88,My D88)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路关键蛋白的表达;有效地抑制IL-6、白介素-17A(interleukin-17,IL-17A)、IL-1β、TNF-α、IFN-γ和NO的过度分泌。此外,GELNs通过恢复毛螺杆菌(Lachnospiraceae)、抑制螺杆菌(Helicobacter)、拟杆菌(Bacteroides)、埃希菌-志贺菌(Escherichia-Shigella)和阿克曼氏菌(Akkermansia)的相对丰度等改变结肠炎小鼠的肠道菌群,并显著增加短链脂肪酸(short chain fatty acid,SCFAs)的产生。本研究全面解析了大蒜外泌体样囊泡的主要成分,研究表明,GELNs可能通过其所携带的mi RNBioconcentration factorAs调控小鼠结肠内TLR4/My D88/NF-κB信号通路,促进有益菌丰度,降低有害菌丰度,发挥缓解结肠炎的作用。本文阐明了GELNs缓解肠道炎症潜在作用机制,揭示了这些成分与抗肠炎活性之间的关系,这将为开发具有肠道保护功能的大蒜衍生产品提供理论基础。

目的 探讨膝痹宁通过肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT1)调节大鼠滑膜氧化还原稳态缓解膝骨关节炎(KOA)疼痛的效应机制。方法 提取大鼠膝关节成纤维样滑膜细胞(FLS)，采用CCK-8法筛选膝痹宁冻干粉干预FLS细胞的合适作用浓度。将FLS细胞分为对照组、KOA组、膝痹宁组，后两组采用5μg/ml脂多糖(LPS)诱导KOA炎症细胞模型，膝痹宁组加入100μg/ml膝痹宁，培养24 h。采用Real-time PCR和Western blotting检测CPT1、肉碱/有机阳离子转运体1(OCTN1) mRNA和蛋白的表达；采用试剂盒检测CPT1、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；使用2?,7?-二氯荧光素二乙酸酯检测活性氧(ROS)水平。提取大鼠背根神经节(DRG)神经元细胞，采用βⅢ-微管蛋白(βⅢ-tubulin)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色进行鉴定。将收集的各组multifactorial immunosuppressionFLS上清加入DRG神经元中干预24 h，分别设为对照selleckchem CX-5461组、KOA组、膝痹宁组，采用Real-time PCR和Western blotting检测DRG神经元瞬时受体电位A1离子通道(TRPA1)mRNA和蛋白selleck HPLC的表达，实时荧光钙成像观察DRG神经元中TRPA1开放后Ca~(2+)内流情况，ELISA法检测降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)水平。结果 选取膝痹宁冻干粉浓度100μg/ml进行实验。Real-time PCR和Western blotting检测结果显示，膝痹宁组CPT1、OCTN1 mRNA和蛋白表达水平高于KOA组(P<0.05)。与对照组比较，KOA组ROS水平[(26.46±2.07) AU vs.(5.52±0.78) AU]和MDA含量[(3.13±0.02) nmol/ml vs.(2.77±0.03) nmol/ml]明显升高(P<0.05),CPT1[(4.98±0.02) nmol/min vs.(11.50±0.21) nmol/min]和SOD[(11.38±0.05) U/ml vs.(17.6±0.07) U/ml]活性明显降低(P<0.05)；与KOA组比较，膝痹宁组ROS水平[(14.07±1.41) AU]和MDA含量[(2.87±0.01) nmol/ml]明显降低(P<0.05),CPT1[(7.94±0.21) nmol/min]和SOD活性[(13.81±0.07) U/ml]明显升高(P<0.05)。与KOA组比较，膝痹宁组FLS上清干预可抑制DRG神经元中TRPA1 mRNA和蛋白的表达，以及TRPA1开放后Ca~(2+)的内流(P<0.05)，降低CGRP和SP表达量[(19.93±1.2) ng/L vs.(30.19±1.58) ng/L,P<0.05;(84.23±1.26) ng/L vs.(123.16±2.95) ng/L,P<0.05]。结论 膝痹宁可能通过CPT1调控大鼠滑膜细胞氧化还原稳态而影响DRG神经元细胞膜上TRPA1的Ca~(2+)内流，减少疼痛因子的分泌，从而发挥减轻KOA疼痛的作用。

目的 探讨血浆网膜素1(Omentin-1)对于冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary heart disease, CHD)疾病程度的相关性。方法 选取住院期间行冠状动脉造影并诊断为Chelicopter emergency medical serviceHD的患者114例，其中不稳定型心绞痛(unstable angina, UA)43例、稳定型心绞痛(stable angina, SA)27例、急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)44例，另选取同一时间段内行冠状动脉造影显示无狭窄患者29例为对照组。比较患者的一般资料及实验室检查，采用酶联免疫吸附法检测血浆Omentin-1水平。采用冠状动脉病变评分(Gensini)评估冠状动脉病变狭窄程度。Logistic回归分selleckchem GSK126析冠状动脉病变狭窄程度的影响因素。Pearson相关分析Gensini评分与血浆Omentin-1水平之间存在的相关性。结果 与对照组比较，UA、AMI组男性比例、年龄、吸烟比例较高，高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)较低，SA、UA、AMI组高血压病比例较高，AMI组糖尿病比例、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin, LDL-C)较高，左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、Omentin-1较selleckchem LBH589低，差异有统计学意义(P<0.05)。与SA组比较，UA、AMI组男性比例多，吸烟史比例较高，AMI组LDL-C较高、LVEF、Omentin-1较低，差异有统计学意义(P<0.05)。与UA组比较，AMI组男性比例、LVEF、Omentin-1较低，糖尿病病史比例、LDL-C较高，差异有统计学意义(P<0.05)。与轻度狭窄组比较，重度狭窄组糖尿病比例、LDL-C较高，LVEF较低，中度狭窄和重度狭窄组Omentin-1较低，差异有统计学意义(P<0.05)。与中度狭窄组比较，重度狭窄患者LDL-C较高，Omentin-1较低，差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示，性别、吸烟史、糖尿病史、LDL-C、LVEF、血浆Omentin-1是CHD冠状动脉狭窄程度的危险因素(P<0.05)。Pearson相关分析显示，CHD组血浆Omentin-1水平与Gensini评分呈负相关关系(r=-0.766,P<0.05)。结论 血浆Omentin-1水平与冠状动脉严重程度存在负相关关系，高水平的血浆Omentin-1在冠状动脉疾病发病机制中起保护作用。因此血浆Omentin-1可以作为预测CHD发生发展、评估冠状动脉病变严重程度，成为CHD进展的潜在生物标志物。

目的 研究瑞戈非尼治疗老年晚期结直肠癌的剂量特点、有效性及安全性。方法 选取2019年1月～2022年1月收治的80例老年ABT-199抑制剂晚期结直肠癌患者作为研究对象，患者均接受瑞戈非尼治疗，使用回顾性研究方法对瑞戈非尼治疗的剂量特点、临床效果、不良反应进行总结。结果 本组80例患者的客观缓解率1.25%、疾病控制率46.25%，患者无进展生存时间（4.02±1.23）月、总生存时间（8.27±1.25）月，不良反应确认细节发生率82.50%；患者按瑞戈非尼维持剂量分为低、中、高剂量组，三组患者的疾病控制率、无进展生存时间与总生存时间、不良反应发生率比较，差异均无统计学意义（P> 0.05）。结论 瑞戈非尼治疗老年晚期结synthetic immunity直肠癌有良好的有效性与安全性，患者生存获益明显，不同瑞戈非尼维持剂量对患者的治疗效果及不良反应发生率无明显差异，推荐患者维持剂量为每天120 mg。

目的：观察甘草次酸对咳嗽变异性哮喘小鼠Th1/Th2平衡的影响，并初步探讨其减轻肺部炎症的作用机制。方法：将48只雌性幼龄BALB/c小鼠，分为空白对照组、模型对照AMG510 IC50组、醋酸泼尼松组（5 mg/kg）、甘草次酸高剂量组（20 mg/kg）、甘草次酸中剂量组（10 mg/kg）及甘草次酸低剂量组（3-MA体外5 mg/kg），每组8只。采用卵蛋白（OVA）诱导的方法建立咳嗽变异性哮喘模型，给予药物治疗后观察动物哮喘行为学；计算肺脏指数；采用ELISA法测定肺泡灌洗液中OVA-sIgE水平；采用HE染色观察肺组织病理变化；Western blot法检测肺组织中T-bet、IFN-γ、Gata3、IL-4、IL-13的蛋白表达。结果：与模型对照组相比，醋酸泼尼松和甘草次酸组小Liquid Media Method鼠肺脏指数、肺泡灌洗液中OVA-sIgE水平及肺组织中的Th2相关因子表达情况均明显降低（P<0.05或P<0.01），肺组织中的Th1相关因子表达情况明显升高（P<0.05），肺组织的病理情况有所改善。结论：甘草次酸对咳嗽变异性哮喘小鼠有治疗作用，其机制可能与调节肺组织中Th1/Th2有关。

目的 探讨血清中D-乳酸、二胺氧化酶和细菌内毒素水平在原发性肝癌放疗患者中的变化及其在肠道屏障功能评估中的临床意义。方法 序贯纳入2020年1月至2021年12月150例原发性肝癌且均需行局部放射治疗的患者。住院24 h内进行患者主观整体营养评估(PG-SGA)、mGPS评分，并根据是否合并胃肠功能障碍分为胃肠功能障碍组和非胃Food biopreservation肠功能障碍组，分别取患者放疗开始前、放疗完成时以及放疗完成后1个月3个时间段的外周血，以检测血清中D-乳酸、DAO和细菌内毒素的水平。比较3组血清中D-乳酸、DAO和细菌内毒素水平变化，进一步判断肝癌患者放疗前血清中D-乳酸、DAO和内毒素与PG-SGA、mGPS、胃肠功能障碍之间的关系。结果 放疗开始前、放疗完成时及放疗完成1个月3组患者的血清中D-乳酸分别为[5.30(0.34～10.52)]mg/L、[16.25(14.73～20.01)]mg/L、[16.85(3.23～34.20)]mg/L,二胺氧化酶分别为[5.92(0.12～9.06)]U/L、[12.89(7.43～22.05)]U/L、[14.47(13.30～19.41)]U/L,细菌内毒素分别为[5.68(1.78～9.83)]U/L、[9.72(6.36～15.71)]U/L、18.45[(15.99～23.25)]U/LMS-275, 3组间D-乳酸、DAO和细菌内毒素水平明BI 10773 MW显呈上升趋势，差异有统计学意义，且两两比较发现D-乳酸及DAO水平在放疗开始前与放疗完成时、放疗完成1个月后之间均有统计学差异(P<0.05),而放疗完成时与放疗完成1个月后无统计学差异(P>0.05);放疗前胃肠功能障碍组的患者血清D-乳酸、二胺氧化酶及细菌内毒素水平分为(22.92±16.62)mg/L、(13.95±9.18)U/L、(32.08±21.85)U/L,均高于非胃肠功能障碍组即分别为(17.63±13.75)mg/L、(9.43±8.05)U/L、(10.95±10.14)U/L,且放疗前D-乳酸、二胺氧化酶、细菌内毒素水平与PG-SGA、mGPS评分均呈显著正相关，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 监测原发性肝癌放疗患者血清中D-乳酸、DAO及细菌内毒素水平可作为评估患者胃肠功能障碍、营养状况及炎症状况的指标。

目的 观察中医正骨推拿治疗早中期膝骨性关节炎（KOA）患者Citric acid medium response protein的临床疗效。方法 263例为2019年3月—2020年7月于江苏省中医院推拿科门诊或住院就诊的KOA患者，符合纳入标准80例，采用随机数字表法分为治疗组和对照组，每组40例。分别行中医正骨推拿和传统推拿治疗，每周3次，共治疗2周。两组均在治疗前后行西安大略麦马斯特大学骨性关节炎指数可视化量表（WOMAC）评分、膝关节主被动活动度及表面肌电图评估，并随访3个月。结果 治疗过程中两组各脱落2例，最终76例纳入统计分析。与本组治疗前比较，治疗后及末次随访时两组患者WOMAC评分、膝关节主被动活动度及表面肌电图值均改善（P<0.05）。治疗2周后，治疗组患者疼痛、关节功能、WOMAC总评分、膝关节主被动活动度及股内侧肌和股外侧肌平均肌电图（AEMG）比较均显著低于对照组（P<0.05），关节僵硬评分及股内侧肌和股外侧肌平均功率斜率（MPFs）比较，差异无统计学意义（P>0.05）。末次随访时，治疗组患者疼痛、僵硬、关节功能、总评分及膝关节主被动活动度均显著低于对照组（P<0.05）。两组患者总有效Lorlatinib分子式率相当（P>0.05），治疗组治疗后及末次随访时的愈显率[47.5%(19/40)、80.0%(32/40)]明显优于同期对照组[5.0%(2/40)、35.0%(14/40)CX-5461分子式]，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 中医正骨推拿可以更有效的治疗早中期KOA患者，提高患膝关节活动度，改善股四头肌肌力和耐疲劳能力。

目的：探讨二维与彩色多普勒超声在甲状腺良恶性结节鉴别诊断中的应用效果。方AMG510法：选取2019AM-2282溶解度年10月～2022年10月建瓯市立医院收治的80例甲状腺结节患者，经病理确诊80例甲状腺结节患者中良性结节52例，恶性结节28例，对所有患者均进行二维超声、彩色多普勒超声检查，比较不同检查方式的检出情况、检出特征及不同诊断技术的诊断价值、显影质量、出结果时间。结果：联合检查诊断良恶性结节的检出率显著高于彩超、二维超声，且彩超的检出率显著高于二维超声，差异有统计学意义(P<0.05);二维超声诊断良性结节边界清晰、结节囊实质、形态规则的发生率较恶性结节高，低回声、微钙化发生率较低，差异有统计学意义(P<0.05);彩超诊断良性结节I型血流信号发生率较恶性结节高，Ⅱ、Ⅲ型较恶性结节低，差异有统计学意义(P<0.05)。彩超与二维超声单独检查诊断效能比较，差异无统计学意义(P>0.05):联合检查的诊断效能显著高于二维超声(P<0.05),高于彩超(P>0.05)。联合检查诊断价值、显影质量评分显著高于彩色多普勒超声、二维超声，出结果时间显著高于彩色多普勒超声、二维超声(P<0.05)。population precision medicine结论：甲状腺良恶性结节诊断中采用二维与彩色多普勒超声联合检查更有助于对疾病的筛查，准确性高。

胡椒碱（PIP）是从胡椒是获悉更多来自黑胡椒藤的干浆果中提取出的一种酰胺类生物碱，是胡椒发挥药理作用的主要成分。目前对于胡椒提取物及胡椒碱的研究发现，胡椒碱具有抗炎、抗氧化、镇痛、神经保护等作用。PIP对神经退行性疾病有较好的治疗作用。本文主要从胡椒碱对神经退行性疾病的作用机制方面进行讨论。(1)减轻炎症反应：PIP能调节NF-κB与丝裂原活化蛋白激酶信号通路相关通路介导TNF-α,IL-1β,IL-6和HMGB1等相关炎症因子的分泌来降低脑内相关炎症反应。(2)抗氧化应激：PIP能通过调节5-HT能系统与BDNF的相互作用而发挥抗氧化作用。(3)调节自噬：PIP能调节嘌呤能受体P2X-配体阀门离子通道4(P2RX4)来调控自噬，并且能通过肠脑轴调节mmu-miR-99a-5p及Atg5和Atg14自噬蛋白等相关因子。(4)清除淀粉样蛋白沉积：PIP能够调控β-淀粉样前体蛋白裂解酶1、早老素蛋白1、凋亡蛋白酶激活因子、胱天蛋白酶3和过氧化氢酶等相关因子的表达，降低淀粉selleck产品样蛋白的沉积来保护大脑神经系统。(5)镇痛：PIP可以调节辣椒素受体—TRPV1降低疼痛反应，并且可以调节miR-implantable medical devices520a,IL-10和TGF-β1等因子达到抑制疼痛的效果。综上所述，PIP可以通过减轻炎症反应、抗氧化应激、调节自噬、清除淀粉样蛋白沉积与镇痛等方式保护中枢神经系统，抑制神经退行性疾病的发生。本文对胡椒碱在治疗神经退行性疾病作用及机制进行综述，以期为其临床应用及研究提供参考。

研究背景及目的结肠炎相关性结直肠癌(colitis-associated colorectal cancer,CAC)是一种以临床可检测到炎性肠病(inflammatory bowel disease,IBDs)为先发症状的结直肠癌(colorectal cancer,CRC)类型。慢性炎症在CAC发生、发展中起着积极的作用。针对炎症和参与炎症过程的关键分子或信号分子可能是一种良好的CAC预防和治疗策略。具有抗炎、较少副反应的中草药可通过参与癌变过程的多种分子、多个信号通路,发挥抗CAC作用。白芍(Radix Paeoniae Alba,RPA)是一种传统的中药,能够下调炎症反应,具有潜在的抗CAC作用。芍药苷(paeoniflorin,PF)是从RPA中提取的一种单萜类糖苷化合物。PF是RPA的主要有效成分,具有挥抗炎、免疫调节作用。本研究旨在探讨PF对CAC的预防效果及分子机制。研究方法1.文献计量学分析:根据中英文文献检索策略,分别从中文数据库中国知网(China National Knowledge Infrastructure,CNKI)、英文数据Web of Science Core Collection数据库(Wo SCCd)进行文献检索。利用Cite Space 5.8.R1软件从年度发表数量、国家/地区、机构、作者/被引作者、重要期刊、参考文献、关键词等方面全面分析RPA在肿瘤防治中的研究现状以及应用前景。2.网络药理学研究:利Y-27632采购用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine for Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)和疾病数据库获得RPA活性成分和抗CAC的候选靶标。采用Cytoscape3.7.2软件构建候选靶标蛋白-蛋白相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络识别RPA抗CAC的核心靶标。GO和KEGG富集分析预测RPA抗CAC可能的作用机制。最后采用Schr?dinger软件通过分子对接技术评价关键靶标与活性成分的结合程度。3.PF对AOM/DSS诱导CAC小鼠模型的预防效果:首先,采用氧化偶氮甲烷(azoxymethane,AOM)和葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)联合干预小鼠,造成结肠黏膜上皮的持续损伤/修复病程,建立CAC小鼠模型。AOM/DSS模型组小鼠单次腹腔注射10 mg/kg的AOM溶液。1周后进行3个周期21 d的2.5%DSS刺激。空白对照组小鼠给予生理盐水(normal saline,NS)代替AOM,饮用不添加DSS的水。通过观察小鼠体重、粪便形状以及结肠大体、组织学结构的变化,判断CAC小鼠模型是否建立成功。同时,以单独给予AOM诱导的散发型CRC小鼠模型以及DSS诱导的慢性肠炎小鼠模型作为模型对照。比较各处理小鼠肠道肿瘤发生、结肠组织学结构改变以及细胞因子含量,观察炎症对CAC的促进作用。随后,雄性昆明小鼠随机分为空白对照组(Blank control组)、溶剂对照组(Solvent control组)、模型对照组(AOM/DSS+NS组)、PF低剂量组(AOM/DSS+PF(15 mg/kg)组)、PF中剂量组(AOM/DSS+PF(30 mg/kg)组)、PF高剂量组(AOM/DSS+PF(60 mg/kg)组)、阳性对照组(AOM/DSS+aspirin组)。AOM/DSS+NS组、AOM/DSS+PF(15 mg/kg)组、AOM/DSS+PF(30 mg/kg)组、AOM/DSS+PF(60 mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠单次10 mg/kg AOM腹腔注射。1周后,AOM/DSS+PF(15 mg/kg)组、AOM/DSS+PF(30 mg/kg)组、AOM/DSS+PF(60 mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠在接受DSS刺激前给予药物治疗并持续12周。其中,PF治疗组按15、30和60 mg/kg 3个浓度分别进行灌胃治疗。阳性对照组小鼠给予30 mg/kg的Aspirin进行灌胃治疗。Blank control组、AOM/DSS+NS组给予NS代替药物,Solvent control组给予含0.2%二甲基亚砜(dimethyl sulphoxide,DMSO)的NS。药物治疗结束后,对小鼠的体重、结肠荷瘤、结肠组织结构、肿瘤细胞增殖标记物Ki67和细胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达进行检测,评估PF对CAC小鼠的预防效果。采用苏木精-伊红(hematoxylin&eosin,H&E)染色法观察小鼠肝肾组织结构改变,检测血清谷草转氨酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST/GOT)、谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT/GPT)、肌酐(creatinine,CRE)和尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,评估药物对小鼠肝、肾毒性。4.PF对AOM/DSS诱导CAC小鼠模型的作用机制:首先,采用抗体芯片技术检测血清18种细胞因子的含量,酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测结肠组织白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-17A和IL-10的含量。然后,免疫组化技术检测结肠肿瘤组织中F4/80和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)表达,实时定量PCR(real-time quantitative,RT-PCR)检测结肠肿瘤组织中维甲酸受体相关孤儿受体-γt(retinoic acid receptor-related orphan receptor-γt,RORγt)、IL-17A和叉头样转录因子3(forkhead box protein 3,Foxp3)m RNA表达。随后,通过免疫印迹法检测IL-6下游分子信号转导与转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)的表达。接着,采用TUNEL染色法检测结肠肿瘤组织中凋亡细胞的数量,免疫印迹法检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达,评价PF对CAC小鼠结肠肿瘤凋亡的影响。最后,荧光显微镜下观察结肠肿瘤组织LC3/P62荧光表达,免疫印迹法检测结肠组织Beclin 1、P62和p-m TOR的表达。通过免疫印迹法检测自噬抑制剂巴佛洛霉素A1(bafilomycin A1,BAF)存在和不存在情况下,结肠组织LC3II的蛋白表达,评估PF对CAC小鼠结肠肿瘤自噬的影响,揭示PF对CAC小鼠预防的作用机制。研究结果1.RPA防治肿瘤的研究现状及发展趋势:虽然近30年来该领域的中文及英文文献总量较低,但年文献数量均有显著增长。以中国为核心的东亚国家在RPA抗肿瘤研究中起着关键作用。国内发文量分布存在地区不平衡性,可能与RPA的产地分布有关。高等学校,尤其是中医院校是该项研究的主要研究力量。国际期刊《Journal of Ethnopharmacol》及寻找更多中文核心期刊《中草药》、《中国实验方剂学杂志》关注了RPA对肿瘤的研究。关键词分析可见,RPA抗肿瘤研究的热点主要集中在其活性成分PF和凋亡。2.TCMSP数据库检索到RPA的8个活性成分及89个靶蛋白。Cytoscape3.7.2软件构建的“药-靶”互作网络显示靶点数最多的4个活性成分依次是山奈酚(kaempferol,43),b-谷甾醇(β-sitosterol,35),PF(4)和(+)-儿茶素((+)-catechin,3)。Drug Bank、OMIM、Gene Cards数据库检索到1936个CAC相关靶点。Venny2.1.0软件获得41个RPA抗CAC候选靶点。Cytoscape3.7.2软件构建PPI互作网络拓补结构分析显示,IL-6的度大于20。聚类分析显示IL-6、JUN、MAPK8、TNF、STAT1、ICAM、CAT、NOS2、PTGS2所在的节点群评分最高(7.25)。其中,IL-6得分最高。结合网络拓扑结构和聚类分析结果,提示IL-6是RPA抗CAC的核心靶点。RPA抗CAC的候选靶标功能富集于TNF信号通路,Relaxin信号通路,IL-17信号通路,凋亡通路,Toll样受体信号通路,HIF-1信号通路,鞘脂信号通路,NOD样受体信号通路、胰腺癌、Th17细胞分化等癌症相关通路。最后,IL-6与山奈酚、b-谷甾醇,PF和(+)-儿茶素均有良好的对接能力。其中,PF与IL-6的对接分数在四个活性成分中最低。3.经过10 mg/kg的AOM溶液腹腔注射和3个周期浓度为2.5%的DSS饮用联合干预,AOM/DSS组小鼠出现体重减轻、稀便及血便等结肠炎症状。第28d,小鼠结肠可出现不典型增生。随时间推移,第91 d,结肠可见到明显浸润型癌组织,伴有严重的肠道炎症反应,提示AOM/DSS诱导的CAC小鼠模型成功。在AOM诱导的散发性CRC模型小鼠中,单独腹腔注射10 mg/kg的AOM第210d,小鼠结肠出现明显肿块型CRC。然而,小鼠未出现明显稀便或血便以及结肠组织炎性细胞浸润等结肠炎改变。在DSS诱导的慢性肠炎模型小鼠,单独给予3个周期的2.5%DSS饮用第91 d,小鼠结肠未见到明显的不典型增生。AOM/DSS组小鼠外周血细胞因子IL-6、TNF-a和MIP-3a含量、结肠组织IL-6和IL-17A含量显著高于Blank control组和AOM组(P<0.05)。药物干预过程中,AOM/DSS+PF(30和60mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠存活率和增重率显著高于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。药物干预结束后,AOM/DSS+PF(30和60mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠结肠荷瘤数显著少于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。AOM/DSS+PF(15、30和60mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠结肠荷瘤面积显著小于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。AOM/DSS+NS组小鼠结肠肿瘤突破粘膜层,呈中分化浸润癌,并伴有严重炎症反应。AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠结肠肿瘤局限于黏膜层内,呈高级别上皮内瘤样变,肠道炎症评分低于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组和AOM/DSS+Aspirin组小鼠结肠肿瘤增殖标记物Ki-67和PCNA表达低于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。肝、肾组织H&E染色显示AOM/DSS+NS组和AOM/DSS+Aspirin组肝细胞嗜酸性减弱,有轻度水样变。各治疗小组肾组织未见明显结构改变。同时,AOM/DSS+NS组与AOM/DSS+Aspirin组血清ALT/GPT活力较Blank control组增高(P<0.05)。AOM/DSS+Aspirin组血清CRE、BUN含量较Blank control组增高(P<0.05)。4.血清细胞因子抗体芯片检测结果显示:与AOM/DSS+NS组相比较,AOM/DSS+PF(15、30和60 mg/kg)组小鼠血清IL-2、IL-13、IL-10、TGF-β1以及IL-12p70水平显著升高(P<0.05)。AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组血清IL-6、IL-21和MIP-3α水平降低(P<0.05),AOM/DSS+PF(60 mg/kg)组血清TNF-α水平降低(P<0.05)。在结肠肿瘤组织中,AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组IL-6和IL-17A水平显著低于AOM/DSS+NS组(P<0.05),IL-10水平高于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。RT-PCR结果显示:与AOM/DSS+NS组相比较,AOM/DSS+PF(15、30和60 mg/kg)组及AOM/DSS+Aspirin组结肠肿瘤组织RORγt以及IL-17A m RNA水平降低(P<0.05)。不同的是,AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织Foxp3 m RNA水平高于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。免疫印迹检测结肠肿瘤组织STAT3表达结果显示:AOM/DSS+PF(15、30和60mg/kg)组p-STAT3(Tyr705)表达水平低于AOM/DSS+NS组(P<0.05),STAT3的表达在各治疗组间没有显著差异(P>0.05)。结肠肿瘤微环境免疫组化检测结果显示:与Blank control组相比较,F4/80以及i NOS在AOM/DSS诱导的CAC小鼠结肠肿瘤组织中表达增加(P<0.05)。不同浓度(15、30和60 mg/kg)PF处理后,F4/80以及i NOS表达均有所降低(P<0.05)。TUNEL凋亡检测结果显示AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组凋亡细胞数显著多于AOM/DSS+NS组。免疫印迹检测凋亡相关蛋白表达结果显示:与AOM/DSS+NS组相比较,AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织Bax水平增加(P<0.05),AOM/DSS+PF(15、30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织Caspase-3水平增加(P<0.05)。与Bax及Caspase-3表达不同的是,AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织抗凋亡蛋白Bcl-2表达较AOM/DSS+NS组降低(P<0.05)。PF对结肠肿瘤组织自噬通量影响的结果显示:在没有自噬抑制剂BAF的条件下,与AOM/DSS+NS组相比较,AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织LC3II表达水平增加(P<0.05)。当加入自噬晚期抑制剂BAF后,AOM/DSS+NS组以及PF对结肠肿瘤组织LC3II表达趋势与未加入之前相似。但是,AOM/DSS+NS组小鼠结肠肿瘤组织LC3II的积累未见显著增长,AOM/DSS+PF(15、30和60mg/kg)组结肠肿瘤组织LC3II的积累明显增加。与AOM/DSS+NS组相比较,AOM/DSS+PF(60 mg/kg)组结肠肿瘤组织Beclin 1表达水平增加(P<0.05),p-m TOR(Ser 2448)表达水平降低(P<0.05)。AOM/DSS+PF(30和60 mg/kg)组结肠肿瘤组织P62表达水平低于AOM/DSS+NS组(P<0.05)。研究结论1.1991-2021年RPA抗肿瘤研究的发文数量不高,但逐年增长。RPA的活性成分PF以及凋亡是该领域研究的热点。2.RPA是一种潜在的抗CAC药,涉及41个CAC靶点及多条信号通路。其活性成分PF能与核心靶标IL-6稳定结合并通过氨基酸残基TYR109、ASP56、LEU46发生相互作用。3.对PF的研究数据支持了其对AOM/DSS诱导CAC小鼠模型的化学预防作用。15-60 mg/kg的PF治疗12周对小鼠肝、肾无明显毒性作用。4.PF通过缓解肠道炎症、抑制IL-6/STAChinese herb medicinesT3信号通路以及调节凋亡、自噬水平发挥对CAC小鼠的预防作用。