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目的 分析circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达与临床意义，探究circ-RACGAP1对膀胱癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法 通过TCGA数据库探究circ-RACGAP1在膀胱癌组织中的表达，分析circ-RACGAP1表达与膀胱癌患者临床病理特征的关系。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法分析细胞系5637、T24、J82、RT-4、UM-UC-3中circ-RACGAP1表达。通过脂质体转染技术将circ-RACGAP1敲降质粒转染T24细胞。克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验分别分析敲降circ-RACGAP1对T24细胞增殖、迁移和侵袭的影响。采用deepBase、Circbank、CircInteractome、circRNABase数据库和荧光报告系统验证circ-RACGAP1和miR-4324之间的靶向结合。qPCR检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中miR-4324表达selleck的影响。采用Western blot法检测敲降circ-RACGAP1对T24细胞中Rac-GTP酶激活蛋白1(RACGAP1)蛋白和磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路蛋白表达的影响。结果 膀胱癌组织中circ-RACGAP1呈高表达(P<0.01),其表达随着患者临床分期恶性程度增高而升高(P<0.01)。膀胱癌细胞系中circ-RACGAP1表达明显高于人正常膀胱上皮细胞(均P<0.01)。与对照组比较，sh-sh-circ-RACGAP1组T24细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显降低(均P<0.01)。circ-RACGAP1可靶向抑制miR-4324的表达(P<0.01)。与对照组比较，sh-circ-RACGAP1组T寻找更多24细胞中RACGAP1蛋白表达水平降低(P<0.01),PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、核因子κB(NF-κB)表达水平均降低(均P<0.01)Rodent bioassays。结论 膀胱癌组织和细胞系中circ-RACGAP1呈高表达，敲降circ-RACGAP1能够抑制T24细胞的恶性生物学行为，circ-RACGAP1是通过抑制miR-4324表达激活PI3K/AKT信号通路来发挥作用。

背景:肝癌是全球肿瘤发病率和死亡率较高的恶性肿瘤之一,给患者和社会带来巨大的负担。传统的治疗方法包括手术切除、放射治疗和化疗,但对晚期肝癌患者的有效性和安全性尚不明确。近年来,新型抗肿瘤药物和联合化疗方案的研究取得了一定的进展,为提高肝癌患者的生存率和生活质量提供了新的治疗思路。5-氟尿嘧啶(5-FU)是一种广泛应用于临床肿瘤治疗的药物,通过干扰DNA和RNA合成抑制肿瘤细胞生长。然而,5-FU单药治疗肝癌的疗效有限,且可能产生明显的副作用。因此,探索新型联合治疗方案成为研究重点。苦参碱是一种生物碱类化合物,来源于中药苦参。研究发现,苦参碱具有抗炎、抗氧化和抗肿瘤等多种生物活性,对多种恶性肿瘤细胞具有抑制作用。基于苦参碱和5-FU各自的抗肿瘤作用和作用机制,本研究提出了将两者联合应用于肝癌治疗的方案。理论上,苦参碱和5-FU联合应用可能具有协同作用,提高治疗效果,同时减轻单一药物可能带来的副作用。然而,目前关于苦参碱联合5-FU治疗肝癌的临床研究尚不多见,有关其疗效和安全性的数据亟待补充。目的:本研究主要探讨苦参碱联合5-FU治疗肝癌的作用和分子机制。方法:MTT实验检测苦参碱联合5-FU对肝癌细胞Hep G2增殖作用的影响,检测OD值,计算联合用药指数CI值。采用平板克隆实验评价苦参碱联合5-FU对肝癌细胞转移抑制的协同效应。采用细胞划痕实验检测联合用药对细胞迁移的影响。采用流式细胞术评价联合用药对肝癌细胞周期的影响。采用trans well实验检测联合用药对肝癌细胞迁移、侵袭的影响。采用Western Blot实验检测药物作用对肝癌细胞凋0亡、周期、迁移相关蛋白表达的影响。采用Western Blot实验方法评价联合用药对MAPK P38通路的影响。采用荧光分析programmed cell death法检测联合用药对肝癌细胞内JC-1的作用。引入P38 MAPK信号通路激动剂,评价激活通路后联合用药对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期的影响。采用裸鼠皮下成瘤实验评价苦参碱联合5-FU对体内Hep G2细胞的抑制作用。结果:1.苦参碱联合5-FU治疗肝癌细胞的CI值均小于1,差异有统计学意义。2.平板克隆实验证明苦参碱联合5-FU显著抑制肝癌细胞克隆形成率,差异有统计学意义。3.流式细胞仪检测结果和WB实验检测周期蛋白水平结果显示苦参碱联合5-FU将Hep G2细胞周期阻滞到S期,差异有统计学意义。4.WB检测苦参碱联合5-FU对Hep G2细胞凋亡蛋白表达水平的影响,结果显示联合用药上调cleaved-PARP、cleaved-caspase 3、cleaved-caspase 7表达,差异具有统计学意义。5.细胞划痕实验显示,苦参碱联合5-FU降低Hep G2细胞48h细胞迁移率,差异有统计学意义。6.Transwell检测结果显示,苦参碱联合5-FU减少Hep G2细胞48h穿膜细胞数,差异有统计学意义。7.WB实验检测结果显示,联合用药下调细胞生长因子tgf-β、cleaved-tgf-β蛋白表达水平,差异有统计学意义。8.WB实验检测结果显示,苦参碱联合5-FU可以影响p38/Akt信号通路磷酸化。9.引入p38MAPK信号通路特异激活剂,MTT、平板克隆、细胞周期、细胞划痕、WB实验结果显示激动剂降低了苦参碱联合5-FU对Hep G2细胞增殖、迁移、凋亡的作用。10.JC-1染色检测线粒体膜电位变化实验结果显示苦参碱联合5-FU诱导Hep G2细胞内线粒体损伤。11.裸鼠皮下成瘤实验检测结果显示,苦参碱联合5-FU在体E7080供应商内对肿瘤生长同样有显著抑制作用,且不造成LEE011临床试验更多肝脏损伤。结论:1.苦参碱联合5-FU抑制肝癌细胞Hep G2增殖呈剂量依赖性。2.苦参碱联合5-FU在体内外通过抑制Hep G2增殖、迁移、诱导凋亡发挥协同抗肝癌作用。3.苦参碱联合5-FU抗肝癌作用主要作用机制是调控p38MAPK/Akt信号通路表达及造成细胞内线粒体损伤。

目的 观察增强型体外反搏对老年原发性高血压伴静息心率增快患者肾素-血管紧张素-醛固酮(RAAS)系统及颈动脉结构和血流动力、同型半胱氨酸(Hcy)、脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)及超敏C反应蛋白(hs-CRP)、血脂的影响。方法Strongyloides hyperinfection 将150例老年原发性高血压伴静息心率增快患者随机分为2组,对照组75例予生活干预和富马酸比索洛尔治疗,观察组75例在对照组治疗基础上加增强型体外反搏治疗,疗程均PUN30119价格为12周。比较两组治疗前后,RAAS系统指标血浆肾素(PRA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)水平,颈动脉超声内-中膜厚度(IMT)、血管舒张期内径(Dd)、血管搏动指数(PI)、阻力指数(RI)、舒张末期峰值流速(EDV)、收缩期峰值流速(PSV)、血流最大剪切率(SR),血脂指标及Hcy、Lp-PLA2、hs-CRP水平,血压、心率变化。结果 观察组24 h平均收缩压(24hmSBP)、24 h平均舒张压(24hmDBP)以及日间心率(dHR)、夜间心率(nHR)、24 h心率(24hHR)、AngⅡ、ALD、PRA、hs-CRP、Hcy、Lp-PLA2、总胆固醇(TC)、三酰甘Fulvestrant分子量油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平及颈总动脉IMT、PI、RI、Dd均低于对照组(均P<0.05),颈总动脉EDV、PSV及SR均高于对照组(均P<0.05)。结论 增强型体外反搏治疗老年原发性高血压伴静息心率增快,能抑制患者RAAS系统激活,改善颈动脉粥样硬化和血流动力,抑制炎症反应,调节血脂和Hcy代谢。

目的:慢性肾脏疾病(Chronic kidney disease,CKD)作为全球性的公共健康问题,其患病率和病死率高。终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)患者的心血管死亡率显著高于普通人群,而透析人群更是达到普通人群的10-20倍。这是由于在人体中具有重要功能的心脏和肾脏,它们通过多种机制相互依存、又相互影响。除了动脉粥样硬化疾病之外,CKD患者可能有继发性心功能不全,包括左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)、舒张功能障碍、心律失常和心力衰竭(heart failure,HF)。在CKD早期,患者可无任何临床症状,同时左室射血分数(LVEF)往往保持正常,当出现心力衰竭、心律失常等临床表现时才被发现,但已进展至晚期。因此早期发现亚临床性的心肌损伤、采取有效措施防止心肌病变发生发展,延缓CKD患者心脏并发症的出现对患者具有重要意义。CKD所致心肌损伤包括心肌细胞肥大、炎症、心肌间质胶原纤维增生及沉积,进而发生间质纤维化。心肌间质纤维化被认为是终末期肾病患者的不良预后因素,由于其进展可导致心肌硬度增加,从而引起左室收缩或舒张功能的障碍。而CKD中存在的持续炎症反应,也可促进成纤维细胞增殖及加重心肾功能衰竭。血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(angiotensin receptor-neprilysin inhibitor,ARNI)不仅可阻断血管紧张素(angiotensin II,AngⅡ)的信号传导,还可抑制利钠肽的分解,进而发挥扩张血管、促进水钠排泄、防止或逆转心室重构等多重作用。作为治疗高血压及HF药物,在临床医生试验性对ESRD合并HF患者用药过程中,发现此类患者的症状体征得到明显改善。但临床依然需要精准的定量评价指标来评估ARNI对心脏损伤的保护作用及可能的影像学机制。心脏磁共振(cardiac magnetic resonance,CMR)作为非侵入性影像学手段,除可提供类似于心脏超声功能学信息外,还可通过组织追踪技术(tissue tracking,TT)定量评估心肌应变,同时提供包括延迟强化(late gadolinium enhancement,LGE)、水肿、铁负荷及弥漫性心肌纤维化等多种详细的组织学信息。对肾脏人群成像的一大挑战是,由于担心肾源性系统性纤维化(nephrogenic systemic fibrosis,NSF)的发生,需要避免在CKD患者中使用钆基造影剂。因此,这激发了肾脏学界对量化组织异常的替代技术的兴趣。既往研究虽然已发现CKD患者的天然T1值升高,但是基于肾脏人群中的CMR多指标与病理组织相关性尚未完成,在临床应用之前应该克服这一障碍。因此,本研究分为四个部分,首先通过多CMR观察兔CKD发生发展过程中心肌应变参数及组织特征参数的变化,探讨监测CKD所致亚临床心肌损伤的CMR评价指标;随后进一步通过多参数CMR评估ESRD患者不同几何构型的心肌损伤,并分析影响天然T1值的主要因素。在ARNI治疗中,首先基于CMR在兔CKD心肌损伤模型中观察其疗效及可能机制,进一步验证病理及免疫组化与CMR参数相关性。同时通过多参数CMR对腹膜透析合并射血分数非减低型心衰(non-reduced ejection fraction heart failure,non-HFrEF)患者的药物疗效进行初步评估。方法:研究一:14只健康兔,注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)共8周,建立CKD模型,control组选取12只健康兔。分别于注射C-BSA前、注射C-BSA后4周、6周及8周对两组实验兔进行CMR检查,测量心脏结构、功能及组织特征的变化情况,同时检测血肌酐、尿素氮指标。每次磁共振检查结束后随机处死3只实验兔,进行病理及免疫组化检查。并以病理及免疫组化结果作为参照,比较CKD发生发展过程中CMR多参数的变化情况。研究二:本研究共纳入83名ESRD患者及40名健康志愿者,根据左心室质量指数及重构指数将ESRD患者分为四组(正常几何、向心重构、同心性肥厚和离心性肥厚组),利用CMR组织追踪技术及T1mapping及T2mapping技术进行图像采集,获得左心室径向、周向、纵向的三维应变参数及天然T1及T2值。通过多元线性回归分析影响天然T1值的主要因素。研究三:本研究中选取18只实验兔,分为对照组、模型组及治疗组,每组6只。治疗组在模型组的基础上给予ARNI治疗4周后,将三组实验兔进行CMR扫描后全部处死,通过CMR评估各组实验兔的炎症及纤维化改变,并进一步验证CMR与病理及免疫组化相关性及药物作用的可能机制。研究四:本研究随机选取2019年10月至2022年10月确诊为ESRD并进行腹膜透析且合并non-HFrEF的患者,于用药前及用药后3个月进行CMR检查及相关实验室检查。基于CMR测量的左房室功能指标,整体心肌应变指标及组织特征参数指标及不良事件发生情况,分别比较用药前后CMR相关指标的变化情况。结果:研究一:随着C-BSA的注射,血肌酐及尿素氮指标持续升高,8周末达峰值。注射C-BSA4cutaneous nematode infection周后,CKD组纵向应变(GLS)较control组减低,细胞外容积(ECV)升高(p<0.05)。注射C-BSA 6周时,CKD组GLS进一步减低,pre-T1值、T2值及ECV值显著升高(p<0.0PLX4032研究购买5),在8周末变化最明显。常规心脏磁共振参数包括LVEF,左室舒张末期容积(LVEDV)、左室收缩末期容积(LVESV),每搏输出量(LVSV)在注射C-BSA前、注射后各时间点之间与control组比较差异均无统计学意义(p>0.05)。8周末时,室间隔心肌厚度显著增加(p<0.05),CKD组的GCS较control组降低。pre-T1及ECV与胶原容积分数(CVF)呈显著正相关,T2值与IL-6呈显著正相关。通过联合诊断的ROC曲线,发现pre-T1及GLS的联合诊断对CKD所致亚临床心肌损伤的诊断价值最高(AUC=0.839)。研究二:与其他构型相比,离心性肥厚组LVEF最低(p<0.05),而其他三组间的LVEF无统计学差异。与对照组相比,四组构型的ESRD患者均表现出天然T1和T2值增加,左心室GRS、GCS及GLS降低(p<0.05)。LVH组较non-LVH组具有更高的天然T1值和更低的GLS,尤其在离心性肥厚组中。在ESRD患者中,四个几何构型组之间的T2值没有统计学差异(p>0.05)。以天然T1作为因变量,进入回归方程的变量是体重指数(BMI)、血红蛋白含量、透析时间和患者舒张压(DBP)。研究三:给予4周的ARNI治疗后,治疗组实验兔的血清肌酐及尿素氮较模型组减低。GLS较模型组显著升高,pre-T1值较模型组显著减低(p<0.05)。与对照组相比,模型组实验兔的心肌细胞形态学发生明显改变,并出现明显心肌纤维化,而治疗组实验兔心肌细胞形态有所恢复,心肌纤维化程度明显改善,CVF显著减低(p<0.05);与对照组相比,模型组实验兔心肌组织中IL-6、TNF-a、Integrinβ1、Collagen I和Collagen III蛋白高表达,而治疗组实验兔心肌组织中相应蛋白水平明显减低。pre-T1及ECV与CVF呈正相关(r=0.799;r=0.551)。T2与IL-6呈正相关(r=0.683)。研究四:共招募了22名腹膜透析合并non-HFrEF患者。与基线水平相比,使用ARNI治疗3个月后,患者的收缩压显著降低(146.05±17.37 vs.137.71±17.36,p<0.05),GLS较治疗前明显增加(-10.05±3.50 vs.-12.10±3.33,p<0.01)。GRS,GCS与治疗前相比无统计学差异。与基线水平相比,天然T1值显著减低(1353.45±59.63 vs.1326.77±55.13,p<0.05),T2值显著减低(45.36±1.81 vs.42.95±1.56,p<0.001),左房主动应变(εa)显著提高,代表增压泵功能的恢复。患者的心力衰竭的体征和症状明显缓解。治疗前后血清肌酐、血清钙、血清钾、e GFR、血红蛋白比较无显著性差异,所有患者均未出现药物不良反应。结论:1.本研究发现在CKD的进展过程中,pre-T1及T2可以表征弥漫性间质纤维化及心肌炎症反应状态。结合GLS及pre-T1值的联合诊断可以早期敏感、定量地检测CKD的亚临床心肌损伤。2.在ESRD患者中,表征心肌间质纤维化的天然T1值在左室各几何构型中存在差异,表明其具有导致心肌形态学变化的后果。天然T1可以作为监测ESRD进selleckchem展或治疗效果的影像学新型“生物标志物”。BMI,血红蛋白含量、腹膜透析时间及DBP是影响天然T1的主要因素。3.基于平扫CMR的GLS、pre-T1值可评价ARNI对CKD心肌损伤的保护作用,ARNI可降低心肌的炎症反应,同时可能通过调节Integrinβ1、Collagen I和Collagen III蛋白的表达,改善心肌纤维化的程度。4.对于腹膜透析合并non-HFrEF的患者,采用ARNI治疗能快速、有效的改善患者的收缩压,提高患者的左室收缩功能及左房增压泵功能。天然T1值的减低可能代表了逆转心室纤维化、炎症及水肿的作用,而T2值敏感检测心肌水肿的变化,在随访腹膜透析合并non-HFrEF疗效评价中具有独特的应用价值。

目的：探索磁共振成像多点非对称回波采集与迭代最小二乘法水脂分离（iterative decomposition of water and fat with echo asymmetry and the least squares estimation quantification sequence,IDEAL-IQ）和体素内不相干运动（intravoxel incoherentmotion,IVIM）在子宫内膜癌（endometrialcarcinoma,EC）细胞增殖状态评membrane photobioreactor估中的价值。方法：回顾并分析24例Ki-67增殖指数低（≤50%）和19例Ki-67增殖指数高（>50%）的EC患者的资料，分别测量病灶IDEAL-IQ成像的脂肪分数（fat fraction,FF）、R_2*弛豫率（R_2*）值和IVIM成像的慢速表观弥散系数（slow apparent difStaurosporine体内fusion coefficient,ADCslow）、快速表观弥散系数（fast apparent diffusion coefficient,ADC-fast）和灌注分数（perfusion fraction,f）并进行对比。受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线的曲线下面积（area under curve,AUC）被用于确定各参数的诊断效能，logistic回归和DeLong检验分别被用于多参数联合诊断和不同AUC间的差异分析。Spearman相关被用于评估各参数值与Ki-67增殖指数的相关性。结果：Ki-67增殖指数高的组ADC-slow、ADC-fast和R_2*值均显著低于Ki-67增殖指数低的组（P分别为<0.001、0.004、<0.001）。ADC-slow、ADC-fast、R_2*以及三者联合鉴别Ki-67增殖指数高、低组EC的AUC分别为0.860、0.748、0.862和0.978。DeLong分析显示，ADC-slow+ADC-fast+R_2*与ADC-slow、ADC-fast及R_2*之间的AUC差异均有统计学意义（Z分别为2.109、3.134、2.227;P分别为0.035、0.002、0.023）。ADC-slow和R_2*值均与Ki-67增殖指数呈中度负相关（r分别为-0.547、-0.711,P<0.001）,ADC-fast与Ki-67增殖指数呈轻度负相关（r分别为-0.324,P=0.034）。结论：ADC-slow、ADCAG-221体内实验剂量-fast和R_2*均有助于评估EC患者的细胞增殖状态，且三者联合能够对Ki-67增殖指数高、低组EC进行更有效的鉴别。

目的 探讨改良迷宫射频消融手术对二尖瓣关闭不全合并房颤的疗效。方法 选取2012年7月至2022年5月收治的90例二尖瓣关闭不全合并房颤患者作为研究对象，将其分对照组和观察组，对照组40例为既往单纯接受二尖瓣成形手术，观察组50例接受二尖瓣成形手术联合改良迷宫射频消融手术治疗，比较两组患者治疗疗效、心功能指标、血清炎性因子指标、并发症等CL 318952生产商。结果 观察组术后1个月房颤复律74.00%、术后3个月房颤复律72.00%、术后6个月房颤复律72.00%高于对照组47.50%、50.00%、50.00%，差异有统计学意义（P<0.05）；两组患者术前心功能指标比较，差异无统计学意义（P>0.05），术后1个月时，观察组LVEDD、LVEF低于对照组，LAD高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；两组患者术前IL-1β、IL-6指标比较，差异无统计学意义（P>0.05）；术后3 d时，观察组IL-1β、IL-6指标低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），观察组并发症发生率（4.00%）microbial symbiosis低于对照组（7.50%），差异无统计学意义（P>0.05）。结论 二尖瓣成形手术联合改良迷宫射频消融手术治疗二尖瓣关闭不全合并房颤，相比于单一使用二尖瓣成形手术治疗，联合手术更能提高房颤复律，改善患者Tofacitinib IC50心功能，降低血清炎性因子指标，疗效高，且不会增加术后并发症发生率。

细菌感染性疾病严重危害人类健康,抗生素的发现以及使用有效降低了死亡率,但与此同时长期不合理的使用抗生素造成的细菌耐药问题也越来越突出,给临床带来极大的挑战。鲍曼不动杆菌是医院感染中最常见的多重耐药菌,可侵袭病人的多个部位造成感染,其中肺部感染较为常见。它对正常人不造成严重威胁,但在机体免疫功能低下时引起感染,表明宿主正常状态的免疫系统对鲍曼不动杆菌的入侵具有较强的防御功能。目前鲍曼不动杆菌与宿主的相互作用研究有限,因此本研究通过探讨鲍曼不动杆菌感染诱导的宿主免疫微环境的动态变化,为临床治疗提供新的治疗靶点和理论基础。在本研究中,小鼠体内细菌载量实验表明鲍曼不动杆菌感染后,细菌载量在Mirdametinib说明书小鼠体内逐渐减少,至感染后96小时,小鼠体内的细菌全部被清除。通过流式细胞术检测小鼠肺部免疫细胞组成以及数目的变化发现:小鼠肺部的免疫细胞组成随着体内细菌载量的减少也发生相应的变化,主要表现为在感染后4小时内,肺泡巨噬细胞的比例以及数量显著减少,而中性粒细胞的比例以及数量显著增多;在感染后4-6天,肺泡巨噬细胞的比例逐渐回升,而中性粒细胞和其他免疫细胞比例逐渐减少,肺部的免疫细胞构成逐渐恢复到正常状态的水平。进一步研究鲍曼不动杆菌感染条件下肺泡和肺组织中免疫微环境变化的差异发现:感染6小时后,小鼠肺泡和肺组织中的细菌载量相当,并且两者的细菌载量随感染时间推移都急剧下降;同时两者的免疫细胞组成发生了类似的动态变化,即早期的肺泡巨噬细胞减少和中性粒细胞增多,和后期的肺泡巨噬细胞增多和中性细胞的减少。表明在鲍曼不动杆菌呼吸道感染条件下,肺泡内的免疫细胞构成可模拟肺组织内的免疫细胞构成变化。为了研究小鼠呼吸道感染鲍曼不动杆菌后肺部免疫细胞构成变化的分子机制,分别对Ifnar-/-小鼠、Nlrp3-/-Aim2-/-小鼠和WT小鼠呼吸道感染鲍曼不动杆菌,IDN-6556试剂结果发现突变体小鼠肺泡和肺组织内免疫细胞构成的变化与WT小鼠相当,提示鲍曼不动杆菌呼吸道感染诱导的宿主肺部免疫微环境的变化不依赖于I型干扰素信号通路以及NLRP3和AIM2炎症小体信号通路。为了深入解析鲍曼不动杆菌感染诱导的肺泡免疫微环境的构bio-mediated synthesis成组分和动态变化,对WT小鼠未感染、感染鲍曼不动杆菌6小时和6天的肺泡灌洗液样本进行单细胞测序和分析。结果显示鲍曼不动杆菌感染6小时后肺泡巨噬细胞处于免疫应答状态,有大量炎症因子通路激活;感染6天后肺泡巨噬细胞处于恢复状态,通过自我增殖进行重建,进而逐渐恢复到生理状态下的免疫微环境。综上所述,本研究通过鲍曼不动杆菌呼吸道感染小鼠模型,揭示了宿主清除鲍曼不动杆菌的动态过程和内在机制,发现了肺泡巨噬细胞的早期显著减少和中性粒细胞大量募集的内在关系,及二者在肺部鲍曼不动杆菌清除中的重要功能。肺泡免疫微环境的单细胞测序分析阐明了肺泡微环境的具体免疫细胞构成以及鲍曼不动杆菌感染诱导的肺泡巨噬细胞消失与重构的变化规律。该研究不仅丰富了人们对宿主免疫防御感染的细胞机制理解,并对呼吸道感染性疾病的诊断与预防都具有重要的理论指导意义。

目的 研究一种靶向溴结构域蛋白4(severe combined immunodeficiencybromodomain-containing protein 4,BRD4)的新型小分子抑制剂15h（简称15h）对Gefitinib生产商弥漫性大B细胞淋巴瘤（diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）细胞凋亡的影响并探索其作用机制。方法 首先运用Alphascreen实验探索15h对BET主要家族成员的靶向抑制作用、MTT法检测15h对几种血液系统恶性肿瘤细胞株细胞活力的影响。其次采用流式细胞术检测15h对DL BCL细胞凋亡的影响。最后利用Western blot和qRT-PCR分析15h对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和转录因子C-Myc的调控作用。结果 15h主要靶向抑制BET蛋白家族成员BRD4，对OCI-LY10细胞活力的抑制作用呈现时间和浓度依赖性。与对照组相比，细胞凋亡率从（4.612±0.13）%逐渐增加到（50.7±4.35）%。Western blot和qRT-PCR检测结果表明经15selleck激酶抑制剂h处理后的OCI-LY10细胞，其转录因子C-Myc表达被抑制，促凋亡蛋白Bax上调、抗凋亡蛋白Bcl-2下调。结论 新型小分子抑制剂15h可能通过靶向抑制BRD4与转录因子C-Myc的结合，抑制C-Myc基因转录，进而上调Bax、下调Bcl-2，最终诱导DLBCL细胞凋亡。

目的 对程序性死亡受体配体2(Programmed cell Death 1 Ligand 2,PD-L2)进行泛癌症分析,以探索其表达分布、功能作用、预后指导意义和免疫治疗疗效预测价值。方法 本研究应用R语言“gsub”、“avereps”和“sapply”等命令提取肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和国际肿瘤基因组协作组(International Cancer Genome Consortium,ICGC)数据库中 PD-L2 编码基因pdcdllg2 mRNA 在 33种人类恶性肿瘤组织和国际范围内8种恶性肿瘤中的表达水平。对人类蛋白图谱数据库(Human Protein Atlas,HPA)中19种恶性肿瘤的免疫组化染色结果进行分析,明确PD-L2蛋白在肿瘤组织中的表达分布。应用R语言中“quantile”等命令将pdcdllg2 mRNA表达水平由低向高排序,并将其分为表达量最低30%组和最高30%组,随后利用基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA)软件以京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)基因集和 Reactome 基因集为参照进行功能富集分析。应用R语言“estimateScore”等命令计算泛癌症中pdcd1lg2mRNA的表达与肿瘤基质细胞评分和肿瘤免疫细胞评分的相关性。应用R语言“cor.test”等命令利用Spearman相关性检验确定pdcd1lg2 mRNA的表达与免疫调节分子(免疫刺激分子、免疫抑制分子、趋化因子及趋化因子受体)mRNA表达以及肿瘤突变负荷(Tumor Mutation Burden,TMB)和微卫星不稳定(MicroSatellite Instability,MSI)之间的相关性。在检索相互作用基因的搜索工具(Search Tool for the Retrieval of Interacting Genes,STRING)数据库中设置“minimum required interaction score”为0.700以识别与PD-L2相互作用的分子。在TIMER数据库中“Gene”亚模块计算21种不同免疫细胞类型浸润丰度与pdcd1lg2 mRNA表达水平间的相关性。分别应用R语言“survfit”等命令和“coxph”等命令进行Kaplan-Meier生存分析及Cox回归分析明确pdcd1lg2 mRNA与患者总生存期(Overall Survival,OS)或无进展生存期(Progrselleck抑制剂ession-Free Survival,PFS)的关系。在肿瘤免疫同基因小鼠(Tumor Immune Syngeneic MOuse,TISMO)数据库中选择“Gene”模块输出pdcd1lg2 mRNA 在多个小鼠恶性肿瘤免疫治疗队列中不同治疗反应组中的表达差异。利用肿瘤免疫功能障碍和排斥(Tumor Immune Dysfunction and Exclusion,TIDE)数据库中“Biomarker Evaluation”模块比较7种常见免疫治疗疗效标记物和pdcd1lg2 mRNA的表达在恶性肿瘤免疫治疗疗效预测中的准确度。结果 来自TCGA数据库的33种肿瘤组织内和来自ICGC中12个肿瘤数据集的8种肿瘤组织中均表达pdcdllg2 mRNA,但不同肿瘤类型之间表达水平差异较大;同一部位恶性肿瘤的不同病理亚型之间其表达量不完全一致;不同部位的同一病理类型恶性肿瘤中其表达量也可能存在差异。与pdcd1lg2 mRNA表达趋势相似,PD-L2蛋白在HPA数据库19种恶性肿瘤组织中广泛表达,其既可以表达在肿瘤细胞上,也可以表达在间质细胞上。GSEA功能富集结果提示泛癌症中pdcd1lg2mRNA的表达与多条免疫功能相关通路相关,例如ANTIGEN PROCESSING AND PRESENTATION(抗原加工与提呈)和 TCR SIGNALING(TCR 信号)等;同时与 TNFR2 NON CANONICAL NF-KB PATHWAY(TNFR2 非经典 NF-κB 通路)和 REGULATED NECROSIS(调节性坏死)等非免疫相关通路相关。除胸腺瘤外,TCGA数据库中其他32种恶性肿瘤组织中pdcd1lg 2mRNA的表达与肿瘤免疫细胞评分和肿瘤基质细胞评分均呈正相关(R>0.25,p<0.05)。Spearman相关性分析结果发现pdcd1lg2 mRNA的表达与多种免疫刺激分子的表达呈负相关(Cor<0,p<0.05),例如ULBP1、TNFSF9和TNFSF15等;与多种免疫抑制分子的表达呈正相关(Cor>0,p<0.05),例如TIGIT、PDCD1和LAG3等。STRING数据库同样发现PD-L2与多种免疫相关分子相互作用,例如PD-1,CD3和CD28等。基于以上结果,我们基本确定PD-L2在泛癌症中与肿瘤免疫杀伤过程密切相关,接下来我们主要研究PD-L2与免疫细胞的关系。利用TIMER中多种算法分析确定pdcd1lg2mRNA的表达与多种免疫细胞(例如CD8+T、B细胞、巨噬细胞和树突细胞等)的浸润相关,尤其与结肠癌肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞的丰度呈强程度正相关(EPIC 算法:Rho=0.917;MCP-COUNTER 算法:Rho=0.913;XCELL算法:Rho=0.818;TIMER算法:Rho=0.496)。针对PD-L2的临床应用研究中,Kaplan-Meier生存分析提示pdcd1lg2 mRNA的高表达与结肠癌(P=0.032)、膀胱尿路上皮癌(p=0.011)和肾乳头状细胞癌(p=0.01)等10种恶性肿瘤患者的不良预后相关,而与乳腺浸润癌(p=0.021)、宫颈癌(p=0.011)和食管癌(p=0.044)等10种恶性肿瘤患者的较好预后相关;Cox回归分析发现pdcd1lg2mRNA的高表达是肾乳头状细胞癌(p=0.009)、低级别胶质瘤(p<0.001)和胸腺瘤(p=0.010)患者预后的危险因素,是皮肤黑色素瘤(p<0.001)患者预后的保护性因素。针对PD-L2在患者免疫治疗疗效预测的评价中,虽然泛癌症pdcd1lg2 mRNA的表达与TMB和MSI相关,但其相关性均较弱(R<0.4);在65个荷瘤小鼠免疫治疗队列中,肿瘤组织中pdcd1lg2 mRNA的表达在21个队列中发生变化,其中在19个队列中对治疗产生反应的小鼠肿瘤组织中pdcd1lg2 mRNA的表达水平相比较基线水平升高(p<0.05);在15个肿瘤患者免疫治疗队列中pdcd1lg2 mRNA预测免疫治疗疗效的精确度大于50%(AUC>0.5),其预测能力优于MSI评分和B克隆。结论T-cell immunobiology 在泛癌症肿瘤组织中,PD-L2的表达能够在多条免疫相关功能通路上富集,同时与多种免疫相关分子表达相关,因此其在肿瘤免疫微环境中发挥重要作用。值得注意的是,其可能在结肠癌组织中高表达于肿瘤相关巨噬细胞上。除此之外,PD-L2具有多种肿瘤患者预后指导价值及免疫治疗疗效预测价值。目的 通过前一部分对TIMER数据库中数据进行分析发现相比较其他肿瘤组织中的其他免疫细胞,pdcd1lg2 mRNA的表达与结肠癌肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞(Tumor Associated Macrophage,TAMs)的丰度呈最强程度正相关(EPIC 算法:Rho=0.917;MCP-COUNTER 算法:Rho=0.913;XCELL 算法:Rho=0.818;TIMER 算法:Rho=0.496)。因此本部分研究将验证肠癌组织中PD-L2的表达分布及进一步探索TAMs上PD-L2的表达对肿瘤进展的影响及其作用机制。方法 应用肿瘤免疫单细胞集合(Tumor Immune Single-cell Hub,TISCH)数据库对8个肠癌肿瘤组织单细胞测序数据集进行数据分析了解pdcd1lg 2mRNA在肿瘤细胞、免疫细胞及间质细胞上的表达分布。取7例既往于中国医学科学院肿瘤医院行手术治疗的结肠癌患者肿瘤组织石蜡切片,进行PD-L2和CD68多重免疫荧光染色分析PD-L2在TAMs上的表达;另取3例于中国医学科学院肿瘤医院行手术治疗的结肠癌患者新鲜肿瘤组织,解离为单细胞悬液后进行流式细胞学分析检测免疫细胞及肿瘤细胞上PD-L2的表达。构建小鼠MC38结肠癌细胞系皮下移植瘤模型,在建模后不同时间点(第7天,第14天,第21天和第28天)采用流式细胞学技术分别检测免疫细胞及肿瘤细胞上PD-L2的表达并于第14天流式分选肿瘤中PD-L2-TAMs和PD-L2-TAMs以用于后续实验。在肿瘤细胞系百科全书(Cancer Cell Line Encyclopedia,CCLE)数据库“Expression&CN”模块对人结肠癌细胞系RNA测序数据进行分析,并应用R语言“ggplot”等命令输出pdcd1lg 2mRNA在人肿瘤细胞系上的表达水平。对6种人结肠癌细胞系及3种小鼠结肠癌细胞系进行Western Blot检测确定肿瘤细胞上PD-L2的表达。提取小鼠原代骨髓来源巨噬细胞并将其诱导极化为M1和M2型巨噬细胞,随后采用qRT-PCR和流式细胞学分析分别检测PD-L2-TAMs、PD-L2TAMs、M0型巨噬细胞、M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞上M1和/或M2标志物以确定PD-L2-TAMs的极化方向。将PD-L2-TAMs和PD-L2-TAMs与大肠杆菌混合后,流式细胞学检测其吞噬细菌的数量以了解其吞噬能力。使用流式细胞学分析明确PD-L2+TAMs和PD-L2-TAMs 中溶酶体相关膜蛋白 1(Lysosome-associated membrane protein 1,LAMP1)、LAMP2和Ki-67的表达以了解细胞溶酶体状态和增殖能力。应用Transwell培养模式共培养PD-L2-TAMs/PD-L2-TAMs和肠癌细胞MC38细胞系24小时或48小时,染色后计数发生迁移及侵袭的肠癌细胞个数;同样应用Transwell培养模式共培养两类TAMs和肠癌细胞MC38细胞系7天,计数肿瘤细胞克隆形成的数量。分离小鼠原代T细胞并在CD3和CD28活化条件下共培养PD-L2+TAMs/PD-L2-TAMs和T细胞,流式细胞学检测表达Ki-67和产生干扰素γ(Interferonγ,IFN-γ)的CD8+T细胞的比例。对流式分选得到的PD-L2+TAMs和PD-L2-TAMs进行RNA测序后确定特异性表达基因,并按照差异倍数|log2FC|≥1,显著性Qvalue<0.05筛选差异基因并进行GO和KEGG富集分析。收集PD-L2+TAMs和PD-L2-TAMs培养48小时后的培养上清,进行细胞因子蛋白芯片检测以了解二者分泌细胞因子的差异。结果 通过对TISCH数据库中8个肠癌肿瘤组织单细胞测序数据集分析发现PD-L2编码基因pdcd1lg2 mRNA主要在肿瘤微环境(Tumormicroenvironment,TME)中的免疫细胞和间质细胞上表达,尤其表达在单核细胞/巨噬细胞细胞群;而在肿瘤细胞上不表达。进一步收集结肠癌患者肿瘤组织进行验证,发现7名入组的结肠癌患者中,4名患者TME中TAMs上表达PD-L2,其数量约占TAMs数量的20%;而3名患者几乎不存在双阳性细胞。流式细胞学分析发现结肠癌患者肿瘤组织中CD8+T细胞可以分为PD-L2HighCD8+T细胞(Ⅰ群)和PD-L2LowCD8+T细胞(Ⅱ群),两者所占CD8+T细胞的比例分别为51.11±7.26%和8.23±5.55%;约34.8±2.55%的B细胞表达PD-L2;而树突状细胞和肿瘤细胞不表达PD-L2。随后通过对小鼠MC38结肠癌皮下移植瘤模型不同时间点肿瘤组织进行流式细胞学分析发现PD点击此处-L2+TAMs细胞群、PD-L2+CD4+T细胞群和PD-L2+CD8+T细胞群的数量并不恒定,而是随肿瘤体积的变化而变化;其中PD-L2+TAMs数量峰值为第 14 天(30.35±5.45%),而PD-L2+CD4+T细胞和PD-L2+CD8+T细胞数量峰值均为第7天。为进一步确认肿瘤细胞上是否可以表达PD-L2,本研究对CCLE数据库中73种人结直肠癌细胞系转录组数据进行分析发现其中24种细胞系不表达pdcd1lg2mRNA,41种细胞系上其表达水平极低。取其中6种人肠癌细胞系和3种小鼠肠癌细胞系进行Western Blot检测发现PD-L2蛋白表达水平与CCLE数据库中对应细胞系的pdcd1lg2 mRNA表达水平趋势一致。综上,因结肠癌组织中PD-L2主要表达在TAMs上,后续实验主要探索PD-L2+TAMs的性质及功能。qRT-PCR或流式细胞学分析发现相比较PD-L2-TAMs,PD-L2+TAMs上M2 型标志物(CD206、Arg-1、IL-10、TGF-β和Ym1)的表达水平更高(p<0.05),与小鼠骨髓来源M2型巨噬细胞上标志物的表达水平相近,因此认为其更趋向于M2型。采用流式细胞学检测发现虽然PD-L2+TAMs较PD-L2TAMs吞噬大肠杆菌数量增多,但差异并无统计学意义(p>0.05)且两类TAMs均有较强的溶酶体活性。除此之外,流式细胞分分析发现小鼠结肠癌皮下移植瘤中几乎所有TAMs(包括PD-L2+TAMs和PD-L2TAMs)均具有强增殖能力。在对肿瘤进展进行研究时发现相比较PD-L2-TAMs,PD-L2+TAMs能够增加肿瘤细胞的迁移(p<0.001)、侵袭(p<0.05)和增殖(p<0.05)能力;同时其可以抑制T细胞的活化和增殖,但并无统计学意义(p>0.05)。最后对两类TAMs进行转录组测序,共有14834个基因为PD-L2+TAMs和PD-L2-TAMs共有,而有576个基因为PD-L2+TAMs特有,有670个基因为PD-L2-TAMs特有;与PD-L2-TAMs相比,PD-L2+TAMs有308个基因的表达出现上调,1 13个基因的表达出现下调。对上调基因进行KEGG通路富集分析发现其主要富集在“Cytokine-cytokine receptor interaction”等通路上;继续收集两种TAMs分选后细胞培养上清,检测308种细胞因子分泌。结果发现PD-L2+TAMs相比较PD-L2-TAMs高表达Resistin和VEGFR1等促肿瘤细胞因子,而低表达MIP-1α等抑肿瘤细胞因子。结论 TAMs通过表达PD-L2进而高分泌Resistin、VEGFR1,低表达MIP-1α,从而影响肿瘤细胞的生物学行为,促进结肠癌肿瘤进展。

【目的】分析棕榈酸帕利哌酮注射液对社区精神分裂症患者疾病家庭负担及康复等效果的影响。【方法】随机抽取上海市446名使用棕榈酸帕利哌酮注射液的精神分裂症患者，分别采用疾病家庭负担量表、药物治疗依从性简明评定量表、治疗满意度VAS100评分、生存质量测定量表简表、社会功能缺陷筛选量表进行治疗前后的评价，分析患者使用棕榈酸帕利哌酮注射液效果。采用SPSS 26.0软件进行数据统计分析。【结果】使用棕榈酸帕利哌酮注射液后，患者的疾病家庭负担量表总分（13.94±12.17）、家庭日常活动得分（3.26±2.74）、家庭娱乐活动得分（2.21±2.30）、家庭关GDC-0973生产商系得分（2.79±2.76）均明显优于治疗前（14.98±12.64、3.51±2.88、2.48±2.38、3.11±2.87），差异有统计学意义（P<0.05）。使用棕榈酸帕利哌酮注射液后，世界卫生组织生存质量测定量表简表得分（62.89±11.94）、药物治疗依从性简明评定量表得分（28.11±5.64）均优于治疗前（60.67±12.62、27.37±6.96），差异有统计学意义（Student remediationP<0.05）。与使用棕榈酸帕利哌酮注射液前相比，使用后患者的住院人数显著降低（P<0.01）。【结论】棕点击此处榈酸帕利哌酮注射液对精神分裂症作用显著，能有效减轻患者的疾病家庭负担，提高患者生存质量，提升患者药物依从性，降低患者住院率，保障长期治疗效果和促进疾病康复。