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目的:探讨交替使用悬浮床与翻身床对大面积烧伤病人创面愈合、疼痛及生活质量的影响。方法:选取医院96例大面积烧伤病人进行回顾性研究(2018年3月—2021年5月)MC3,根据不同治疗方法分为对照组与观察组各48例，均给予传统常规治疗。对照组采用悬浮床治疗，观察组交替使用悬浮床与翻身床进行治疗。比较两组病人创面愈合时间、植皮成活率、血清白蛋白用量、1%面积血浆用量、住院时间、并发症发生情况及治疗前后视觉模拟量表(VAS)评分、简明健康状况量表(SF-36)评分、匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分变化。结果:观察组病人创面愈合时间、住院时间短于对照组，植皮成活率高于对照组，血清白蛋白用量、1%面积血浆用量少于对照组(P<0.05);观察组病人全身感染率为14.58%、血培养阳性率为16.67%、创面分泌物杆菌阳性率为14.58%,低于对照组的33.33%、35.42%、33.33%(P<0.05);治疗后两组病人VAS评分、SF-36评分、PSQI评分均明显改善，且观察组病人改善更明显(P<0.05)。结论:悬浮床和翻身床交替使用治疗大面积烧伤，可减少血浆及血清白蛋白输注量，减少www.selleck.cn/products/ly2157299细菌生长，促进创面愈合，改善睡眠Amperometric biosensor质量，提高植皮成功率，改善预后。

目的:观察牙周炎患者即刻种植的长期效果和稳定性,为临床治疗提供参考。方法:收集2016年3月至2017年5月之间,在河南大学赛思口腔医院种植中心经临床诊断为牙周炎不能保留患牙,牙周治疗控制急性感染后采取拔牙后即刻种植,自完成临床戴牙起,随访时间在6年以上的患者共计45例。检查患者口腔卫生保持情况,种植修复体的健康状况,记录种植修复体周围牙龈指数、龈沟深度、X线根尖片观测的种植体颈部周围牙槽骨吸收情况,以及种植修复后并发症的发生情况。结果:45例患者共计78个种植牙位,其中有1颗种植体松动脱落,其余种植体及修复体均Tamoxifen MW稳固。88%的患者(40例)口腔卫生良好,牙周炎症得到有效控制,种植体周围牙龈指数平均为1.2,平均龈沟深度3.2±0.3mm,X线根尖片检查未观测到种植体颈部周围有明显骨吸收。约12%的患者(5例)口腔卫生状况依然Erastin分子式较差,种植体周围牙龈指数平均2.8,平均龈沟深度3.8±0.6mm,X线根尖片检查种植体颈部周围牙槽骨平均吸收约1.5±0.3mm,其中失败的1颗种植体也在这5例患者中。结论:牙周炎患者经过牙周治疗,采用即刻种植的术式可以获得相对稳定的长期治疗效果,患者的口腔卫生日常维护和牙周炎的控制对于种植修复体的健康至Congenital CMV infection关重要。

目的 探讨福辛普利辅助治疗老年冠状动脉粥样硬化性心脏病并发心力衰竭（CHD-HF）患者的效果。方法选择20lipid biochemistry20年8月至2022年8月呼伦贝尔Alpelisib生产商市人民医院老年病科收治的120例老年CHD-HF患者为研究对象，其中男63例（52.50%），女57例（47.50%），按照随机数表法分为对照组和观察组。对照组（n=60）给予普伐他汀治疗，selleckchem Ceralasertib观察组（n=60）在对照组基础上给予福辛普利辅助治疗，观察两组临床疗效、心功能、血管内皮功能、不良反应。结果 观察组治疗总有效率高于对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；治疗后，观察组左心室射血分数（LVEF）、左心室短轴缩短率（LVFS）水平高于对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；观察组左心室收缩末期内径（LVESD）低于对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；观察组血管内皮生长因子（VEGF）、内皮素-1(ET-1)水平低于对照组，差异有统计学意义（P <0.05）；两组不良反应发生率比较，差异无统计学意义（P> 0.05）。结论 福辛普利辅助治疗老年CHD-HF可以提高临床疗效和心功能，改善血管内皮功能，且不良反应增加不明显。

目的 探究腹腔镜胆囊切除术中应用右美托咪定联合罗哌卡因腹横肌平面阻滞的效果。方法 将吉水县人民医院2019年1月—2021年1 2月收治并择期行腹腔镜胆囊切除术的74例患者，按随机数字表法分为对照组和观察组，每组37例。对照组采用罗哌卡因腹横肌平面阻滞，观察组采用右美托咪定联合罗哌卡因腹横肌平面阻滞，比较2组围手术期血流动力学参数、术后48 h疼痛评分、镇痛泵PI3K抑制剂首次按压时间和按压次selleck抑制剂数及不良反应。结果 观察组气腹前（T0）至气管拔管hepatic glycogen后1 0 min(T3)平均动脉压（mean arterial pressure,MAP）和心率（heart rate,HR）参数低于对照组（P<0.05）；观察组术后6 h疼痛评分低于对照组（P<0.05）；观察组镇痛泵首次按压时间长于对照组（P<0.05）；观察组48 h内按压次数少于对照组（P<0.05）；观察组不良反应发生率为2.70%，略低于对照组的8.11%(P>0.05)。结论 腹腔镜胆囊切除术中应用右美托咪定联合罗哌卡因腹横肌平面阻滞效果较好，可维持患者血流动力学稳定，延长神经阻滞时间，缓解术后疼痛，亦不会增加不良反应发生率。

目的:探究金丝桃苷调控Toll样受体4(TLR4)/髓样分化因子88(MyD88)/核因子-κB(NF-κB)信号通路对牙周炎大鼠牙周组织损伤的影响。方法:构建牙周炎大鼠模型，建模成功大鼠随机分为模型组、金丝桃苷(30 mg/kg)组、金丝桃苷(30 mg/kg)+TLR4激活剂(脂多糖，0.4 mg/kg)组，每组15只，另取15只健康大鼠作为对照组，建模结束后，各组大鼠按对应方式给药，1次/d,连续4周。HE染色及抗酒石酸酸性磷酸酶染色分别观察各组大鼠牙周组织病理变化及破骨细胞数量；ELISA法检测各组大鼠血清骨保护素(OPG)、NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平；AZD2281说明书荧光定量PCR法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平；蛋白印迹法检测各组大鼠牙周组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。结果:对照组大鼠牙周组织结构正常；与对照组相比，模型组大鼠牙周组织炎性细胞浸润明显，伴随neuroblastoma biology骨吸收陷窝数量增多，牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-αRepSox IC50、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05);与模型组相比，金丝桃苷组大鼠牙龈上皮较完整，炎性细胞浸润程度较轻，骨吸收陷窝减少，牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著降低(均P<0.05),血清OPG水平显著升高(P<0.05);与金丝桃苷组相比，金丝桃苷+TLR4激活剂组大鼠牙周组织炎性细胞浸润程度加深，骨吸收陷窝增多，牙周组织破骨细胞数量、TLR4、MyD88、NF-κB mRNA和蛋白表达水平、血清RANKL、TNF-α、IL-6水平显著升高(均P<0.05),血清OPG水平显著降低(P<0.05)。结论:金丝桃苷可缓解牙周炎大鼠牙周组织损伤，抑制大鼠炎性反应，其机制与抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。

目的：分析亚低温在Ⅰ型干扰素（干扰素-α2b）诱导的人心肌细胞AC16凋亡过程中的作用及分子机制。方法：不同浓度的干扰素-α2b在不同时间点刺激人心肌细胞AC16,CC寻找更多K-8检测心肌细胞增殖；流式细胞仪检测干扰素-α2b刺激心肌细胞后常温、亚低温对细胞的影响；线粒体Mito-Tracker绿色荧光探针染色激光共聚焦成像观察线粒体形态的变化；流式细胞仪检测不同干预条件下线粒体膜电位变化情况；通过线粒体Mito-Tracker绿色荧光探针染色激光共聚焦成像评估线粒体动力相关蛋白1(Drp1)与线粒体的共定位情况及不同干预条件对线粒体的影响；使用蛋白免疫印迹法检测不同干预条件下，LGK-974化学结构磷酸化Drp1 Ser616、Drp1、核酶多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1(PARP1)、剪切型PARP1(cleaved-PARP1)蛋白表达变化。结果：CCK-8及流式细胞仪检测发现干扰素-α2b抑制AC16细胞增殖，并可诱导AC16细胞凋亡，亚低温干预发挥心肌保护作用；不同干预条件下，AC16细胞线粒体损伤程度不一，表现为亚低温干预细胞具有较好的线粒体形态和更高的线粒体膜电位；Mito-Tracker绿色荧光探针检测发现心肌细胞损伤时Drp1从胞浆转移至线粒体中参与线粒体分裂，且亚低温干预发挥抑制作用；蛋白免疫印迹法检测发现亚低温干预后磷酸化Drp1 Ser616/Drp1和cleaved-PARP1/PARP1显著降低，且线粒体分裂抑制root canal disinfection剂1(Mdivi-1)预处理可部分逆转上述现象。结论：亚低温干预通过改善线粒体功能抑制Ⅰ型干扰素-α2b诱导的人心肌细胞AC16凋亡。

研究内容:1、基于公共数据库对Musashi2、TGF-β信号通路在结直肠癌中的生物信息学分析;2、探讨Musashi2在TGF-β/Smad_(2/3)信号通路诱导EMT和结直肠癌转移过程中的作用;3、探讨Musashi2与CDC42的相互作用和调控机制。第1章基于公共数据库对Musashi2、TGF-β信号通路在结直肠癌中的生物信息学分析目的:RNA结合蛋白Musashi2在诸多癌症中明显高表达,调控癌症干细胞生物学功能,并作为预后相关基因导致患者不良预后。TGF-β信号通路参与癌症转移、侵袭及EMT等进程,并介导肿瘤细胞的化疗耐药。从公共数据库中获得结直肠癌中Musashi2及TGF-β信号通路相关生物信息数据,探讨Musashi2和TGF-β信号通路在结直肠癌中的作用,为后续研究提供理论支持。方法:于多种公共数据库中获得结直肠癌中Musashi2、EMT和TGF-β通路相关的临床数据、基因表达相关数据,并进行相应的整理。通过在线公共数据库TIMER、GEPIA及R软件等对整理后的数据进行分析,阐明Musashi2和TGF-β信号通路相关标志物在肿瘤中的差异表达情况及相关性、对EMT进程及预后的影响。分组比较联合配对比较分析Musashi2、EMT相关标志物和TGF-β信号通路相关标志物在结直肠癌中的差异表达情况。分析目的基因与临床病理资料的关系,绘制ROC曲线并进行单因素及多因素分析,通过COX回归分析及Log-rank test检验分析基因与预后关系并绘制生存曲线。建立目的基因相关的预后模型及进行Musashi2相关的单基因差异分析,将得到的结果进行富集分析与可视化处理。对Musashi2在结直肠癌免疫微环境中的作用进行免疫浸润相关分析,分析其与免疫细胞、免疫功能、免疫检查点等的关系。全面揭示Musashi2介导TGF-β诱导的EMT和结直肠癌免疫浸润中的关键靶标基因和效应通路,丰富对EMT和TGF-β-Musashi2调控网络的认识。结果:相对于对应的正常癌旁组织,Musashi2在结直肠癌中高表达,并导致患者不良预后的发生。TGF-β在结直肠癌中高表达,对于患者预后的影响体现在导致患者总体生存率下降。在结直肠癌中,TGF-β与Musashi2呈正相关关系。基于Musashi2表达情况的阳性富集信号通路的富集分析和基于TGF-β表达情况的Musashisevere bacterial infections2相关基因集的分析结果显示Musashi2和TGF-β/Smad_(2/3)信号通路呈现正相关关系。结直肠癌中Musashi2和TGF-β/Smad_(2/3)信号通路等与肿瘤EMT相关标志物关系紧密。Musashi2在结直肠癌相关的肿瘤免疫微环境中,与多种免疫细胞、功能等密切相关。结论:Musashi2在结直肠癌中明显高表达,与EMT、TGF-β/Smad_(2/3)信号通路等密切正相关,可作为预后相关标志物;TGF-β/Smad_(2/3)信号通路可能调控Musashi2的表达并介导其参与结直肠癌EMT的进程。第2章探讨Musashi2在TGF-β/Smad2/3通路诱导的EMT和结直肠癌转移中的作用目的:探讨RNA结合蛋白Musashi2在TGF-β/Smad2/3信号通路诱导的结直肠癌上皮细胞间质转化过程中的作用,以及经TGF-β/Smad2/3信号通路诱导后对结直肠癌增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。方法:获取临床结直肠癌术后的新鲜癌与对应的癌旁组织标本,免疫组化、组织免疫荧光检测Musashi2在组织中的表达情况。免疫荧光检测Musashi2在细胞里的定位及半定量表达。构建TGF-β/Smad2/3信号通路诱导的结直肠癌细胞EMT模型,分别加入TGF-β/Smad2/3通路激动剂(TGF-β1)和/或抑制剂(ITD-1)探讨TGF-β是否通过激活Smad2/3经典信号通路上调Musashi2基因表达。Western blot和q RT-PCR实验在蛋白水平及m RNA水平检测Musashi2、TGF-β在结直肠癌细胞系中的基础表达情况。Western blot检测经TGF-β1、ITD-1处理后细胞Musashi2、TGF-β/Smad2/3信号通路及EMT相关标志物表达的变化;外源性干预Smad2/3基因的表达,检测Musashi2的变化。外源性上调结直肠癌SW480细胞及下调HCT116细胞Musashi2基因的表达,构建稳定上调和下调Musashi2基因表达的体外细胞模型,采用Western blot和q RT-PCR予以效率验证及筛选。此外,对于稳定上调Musashi2的SW480细胞予以TGF-β/Smad2/3信号通路抑制剂ITD-1处理,而对于稳定下调Musa此网站shi2的HCT116细胞予以该信号通路激动剂TGF-β1处理。通过CCK8、划痕、鬼笔环肽、克隆形成实验、Transwell、结晶紫染色和Ed U实验,检测外源性干预Musashi2的表达对SW480和HCT116细胞体外增殖、细胞形态变化、迁移和侵袭能力的影响,以及Musashi2对于结直肠癌的生物学特征的影响是否可被TGF-β/Smad2/3信号通路激动剂或者抑制剂所回复。通过鬼笔环肽染色、q RT-PCR、免疫荧光和Western blot等,检测Musashi2被外源性干预表达及给药后对结直肠癌SW480细胞的细胞骨架重构、凋亡相关标志物表达变化和EMT进程的影响。将外源性干预Musashi2的结直肠癌细胞经皮下注射种植于雌性免疫缺陷裸鼠,体内动物实验检测Musashi2对结直肠癌细胞致瘤性的影响。IHC联合IF检测裸鼠皮下成瘤后,取下来的肿瘤中Musashi2、E-cadherin、Ki-67、BAX、Vimentin的表达情况,从体外动物实验水平验证Musashi2对于结直肠癌增殖、EMT进程的影响。结果:Musashi2高表达于结直肠癌组织,并在HCT116细胞中高表达,而在SW480细胞中相对低表达。TGF-β1上调Musashi2和TGF-β/Smad2/3信号通路相关基因的表达,相反,ITD-1则抑制其表达。干预Smad2/3表达后,Musashi2表达受到抑制。下调Musashi2后,凋亡标志物BAX和上皮相关标志物E-cadherin的表达增加,而Bcl-2和间质相关标志物N-cadherin、Snail、Vimentin表达受到抑制,这种作用能够被TGF-β1以逆转;上调Musashi2后,BAX、E-cadherin的表达下降,而N-cadherin、Snail、Bcl-2、Vimentin表达增加,ITD-1能逆转此种调控作用。SW480细胞经过表达Musashi2、TGF-β1处理后导致的结直肠癌细胞形态学变化,细胞形态学上出现细长、丝状伪足、间隙增宽等EMT改变。TGF-β1促进结直肠癌细胞增值、迁移能力,而ITD-1则发挥抑制作用;下调Musashi2抑制结直肠癌细胞增值、迁移及侵袭能力,而这种抑制效果可以被TGF-β1逆转;上调Musashi2刺激结直肠癌细胞增值、迁移及侵袭能力,而这种刺激效果可以被ITD-1逆转。裸鼠体外成瘤中,下调Musashi2的表达,抑制肿瘤生长,并导致瘤体中BAX、E-cadherin表达增加,而Musashi2、N-cadherin、Snail、Bcl-2、Vimentin表达减少。结论:TGF-β与结直肠癌EMT过程密切相关,其可通过经典的Smad2/3信号通路诱导结直肠癌发生EMT,导致不良预后。Musashi2作为重要分子,和TGF-β呈正相关关系,其表达受到TGF-β/Smad2/3信号通路的调控,TGF-β/Smad2/3信号通路可能通过调控Musashi2的表达来调节结直肠癌增殖、转移、凋亡及EMT。Musashi2参与调控结直肠癌细胞增殖、迁移、凋亡、侵袭及EMT进程,而这个过程受到TGF-β/Smad2/3信号通路调控。第3章探讨Musashi2与CDC42的相互作用和调控机制目的:探讨Musashi2与CDC42的相互作用和调控机制以及对结直肠癌体内外增殖、侵袭、迁移等生物学行为的作用。方法:生物信息学分析CDC42在结直肠癌中的差异表达、与患者预后的相关性及与Musashi2、EMT、TGF-β通路相关性。收集临床病例的样本和资料,IHC联合IF检测结直肠癌组织标本中CDC42蛋白的表达,分析结直肠癌组织标本中Musashi2和CDC42表达的相关性。Western blot联合PCR检测结直肠癌细胞中CDC42的基础表达情况、经外源性下调后的表达验证与筛选以及外源性干预Musashi2表达后CDC42的表达情况。Western blot检测下调CDC42的表达对EMT及凋亡相关蛋白的影响和对Musashi2上调所导致的相关基因表达变化后的作用。IF检测CDC42在细胞内和组织中的表达定位情况、与Musashi2的共定位关系以及下调Musashi2的表达对二者的影响。划痕、平板克隆、CCK8、Transwell、Ed U等实验检测外源性下调CDC42表达后,细胞增殖、迁移的变化。在构建好的稳定上调Musashi2的SW480体外细胞模型中进一步敲降CDC42基因表达,通过Rescue实验证实CDC42是Musashi2影响结直肠癌迁移、侵袭和转移能力的主要调控分子。通过划痕实验、平板克隆实验、CCK8、Transwell、Ed U实验,检测外源性上调Musashi2的结直肠癌SW480细胞经干扰CDC42表达后对EMT和结直肠癌增殖、侵袭、凋亡及转移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀、m RNA衰减联合双荧光素酶实验,阐明Musashi2转录后调控CDC42的分子机制和作用位点。检测外源性干预CDC42的表达后,体外实验将对应的细胞接种于4周年龄的裸鼠皮下,适时予以观察及测量。IHC、IF检测外源性干预Musashi2、CDC42基因表达后,裸鼠皮下成瘤后肿瘤中CDC42、Ki-67、E-cadherin、Vimentin和BAX的表达情况。结果:Musashi2和CDC42高表达于结直肠癌组织,且Musashi2和CDC42之间呈现正相关关系。下调CDC42的表达能够促进E-cadherin、BAX的表达,而抑制N-cadherin、Snail、Bcl-2、Vimentin的表达,并且能够降低Musashi2上调对上述基因表达的调控作用。Western blot等实验结果表明Musashi2过表达能够上调CDC42的表达,这种上调作用能够被抑制CDC42表达所回复。CCK8、Ed U及平板克隆实验结果表明下调CDC42的表达能够抑制结直肠癌细胞增殖,且能降低Musashi2的上调对细胞增殖活性的促进作用。Transwell及划痕研究结果提示下调CDC42的表达可抑制细胞迁移与侵袭,并能降低Musashi2过表达对细胞迁移和侵袭能力的促进作用。利用RIP试剂盒及相应的抗体结合Musashi2后,Musashi2作为RNA结合蛋白,能够和CDC42的m RNA结合,且外源性干预下调Musashi2蛋白的表达后,CDC42的m RNA表达也随之下降。m RNA衰减实验结果表明,经放线菌素D处理后,相对于阴性对照组而言,Musashi2下调组CDC42的m RNA的合成受到抑制,随着时间推移,CDC42的m RNA越来越少,表明Musashi2作为RNA结合蛋白,调控CDC42的m RNA的稳定性。双荧光素酶实验结果表明,RNA结合蛋白Musashi2能够和CDC42的3’UTR结合,并向上积极调控其表达。下调Musashi2、CDC42的表达后,肿瘤细胞体外成瘤进程受到明显抑制,组织IHC联合IF结果提示CDC42、Ki-67、Vimentin的表达降低,而E-cadherinOthers抑制剂、BAX表达增加。进一步从体外实验角度验证CDC42对结直肠癌肿瘤增殖能力的影响,促进肿瘤增殖生长,且受到Musashi2的调控。结论:Musashi2作为RNA结合蛋白,能够和CDC42的m RNA的3’UTR结合,促进其稳定性,调控其表达,参与结直肠癌增殖、EMT及转移等生物学进程,CDC42是Musashi2影响结直肠癌增殖、侵袭和转移能力的主要调控分子。

目的:探讨非小细胞肺癌(nonCB-839小鼠-small cell lung cancer, NSCLC)中程序性死亡受体1(programmed death receptor-1,PD-1)及程序性死亡受体配体1(programmed death receptor ligand-1,PD-L1)的表达和EGFR突变及其与预后的关系。方法:收集2013年01月至2015年12月由我院病理科经组织学诊断为非小细胞肺癌，并完成EGFR突变检测的150例患者的临床资料，应用免疫组织化学方法检测NSCLC组织中PD-1/PD-L1和CD8蛋白表达情况，分析其与临床病理参数及与EGFR突变的相关Parasitic infection性，并对影响患者预后的多个临床病理因素进行分析。结果:非小细胞肺癌组织中PD-1/PD-L1和CD8的阳性表达率分别为34.7%(52/150)、50.4%(57/113)和59.2%(84/142)。其中PD-L1的表达与PD-1的表达(P=0.025,r_s=0.211)有关；PD-1的表达与术后病理分期(P=0.031,r_s=-0.177)及EGFR突变(P=0.001,r_s=-0.257)和CD8的表达(P=0.000,r_s=0.323)有关；CD8的表达与组织学类型(P=0.048,r_s=0.173)有关。对NSCLC患者随访，肿瘤中-低分化程度、临床分期Ⅳ期、存在远处转移及PD-1高表达的患者总生存期分别低于肿瘤高分化程度、临床分期I-III期、不存在远处转移及PD-1低表达的患者(均P<0.05)。结论:PD-1/PD-L1和CD8参与NSCLC的病理过程，PD-1的表达与非小细胞肺癌患者术后病理分期及购买GSK2118436EGFR突变状态有关，影响患者预后。

研究背景:脓毒症相关性脑病(SAE)是ICU中最常见的一种脑病,它是指机体受到各种感染而出现的炎症反应所导致的弥漫性脑功能障碍,没有明显的中枢神经系统(CNS)感染,主要表现意识水平紊乱和认知功能障碍。虽然近年来针对SAE的诊治有了很大进展,但是该病的发病率每年都在上升,死亡率也很高,对公共卫生造成了很大的影响。SAE的病因比较复杂,包括神经炎症、氧化应激、线粒体功能障碍、血脑屏障(BBB)损害、脑代谢及灌注改变、神经递质异常等。SAE涉及多种病理生理机制,其中,神经炎症是SAE继发神经功能障碍的重要致伤环节,目前尚缺乏有针对性的治疗和预防手段。腺苷能系统作为能量网络的稳态调节器,在调节免疫功能方面发挥着重要作用,包括大脑中涉及细胞因子的炎症过程。在应激条件下,腺苷水平会升高,并通过与G-偶联受体的相互作用在组织中发挥作用。近年来,研究表明,对腺苷代谢的研究似乎在治疗脓毒症方面具有广阔的前景。枸橼酸咖啡因是甲基黄嘌呤类药物的一种,众所周知,咖啡因是非选择性腺苷受体拮抗剂,可作用于不同的生物系统,特别是中枢神经,主要是通过刺激中枢神经系统而发挥作用。有研究显示其对不同的脑部疾病均有治疗作用,例如在高氧血症所致新生儿脑损伤中显示出抗氧化应激、抗炎和抗凋亡作用;可减少发育中大脑中的神经元由于缺血缺氧导致的凋亡;在神经退行性疾病模型中显示出改善脓毒症大鼠的认知障碍及行为异常,缓解认知障碍的作用。咖啡因通过调节腺苷受体缓解各种脑部疾病的严重程度,但其在SAE中的作用尚不明确,我们将探索枸橼酸咖啡因是否可通过抑制星形胶质细胞中UCP2/NLRP3轴减轻脓毒症相关性脑病所致神经损伤。目的:通过前瞻性研究收集SAE患者及对照组患者的脑脊液标本进行临床实验,以初步探索脓毒症相关性脑病的发病机制,探索NLRP3炎症小体激活和相关炎症因子是否可能参与SAE的发病。构建脓毒症相关性脑病大鼠模型,探索枸橼酸咖啡因是否可通过抑制星形胶质细胞中UCP2/NLRP3轴而减轻SAE所致神经损伤。探索枸橼酸咖啡因在脓毒症所致大鼠神经损伤中的保护作用,抗炎及抗凋亡特性,为有效防治SAE开辟新途径。研究方法1.临床实验:收集13例脓毒症相关性脑病儿童及13例对照组儿童(符合以下标准的神经系统疾病儿童作为对照:无任何神经炎症或神经退行性疾病,无脓毒症和脑病,磁共振成像无脑损伤,脑脊液分析无中枢神经系统感染)的脑脊液(CSF)剩余标本,-80℃保存。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定CSF中IL-18和IL-1β的水平。2.动物实验:选用60只日龄30天的健康雄性Wistar大鼠(体重100~120克),分为两组:(1)sham组;(2)SAE组。以盲肠结扎穿孔法(CLP)建立大鼠脓毒症模型。假手术的大鼠使用相同的方法分离盲肠,但没有结扎和穿刺。CLP处理12h后,进行神经行为学评分,筛选出SAE大鼠,SAE组按照用药与否以及剂量不同再分为三组:(1)SAE;(2)SAE+Caf(10mg/kg);(3)SAE+Caf(20mg/kg)。对10和20mg/kg咖啡因组大鼠进行枸橼酸咖啡因(Caf)给药,腹腔注射Caf,每天一次,连续三天。假手术组和SAE组大鼠腹腔注射等量生理盐水。最后一次给药后,处死各组大鼠,取每组大鼠脑组织部分用液氮冻存转移至-70℃超低温冰selleck抑制剂箱保存,部分用4%多聚甲醛固定,用于后续实验。利用Tunel-Neun免疫荧光双染,观察各组大鼠大脑皮层中神经元的凋亡,并对双阳百分比进行量化。GFAP是星形胶质细胞活化的标志物,利用GFAP免疫荧光染色检测各组动物大脑皮层中星形胶质细胞激活。利用试剂盒检测各组动物大脑皮层的线粒体膜电位(MMP),试剂盒检测各组动物大脑皮层中ROS生成。利用GFAP-UCP2免疫荧光双染,观察各组大脑皮层内星形胶质细胞中UCP2表达,并对双阳百分比进行量化。同时应用Western blot测定各组大鼠大脑皮层中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β蛋白的表达水平。3.细胞实验:分离Wistar大鼠大脑皮层星形胶质细胞,采用GFAP免疫荧光染色法进行鉴定。LPS(100ng/ml)联合IFN-γ(200U/ml)刺激星形胶质细胞24小时,建立星形胶质细胞脓毒症模型进行下一步研究。LPS及IFN-γ刺激同时,用100μM或200μM枸橼酸咖啡因处理细胞,分成四组:(1)control;(2)LPS+IFN-γ;(3)LPS+IFN-γ+Caf(100μM);(4)LPS+IFN-γ+Caf(200μM)。各组细胞中UCP2的蛋白水平、线粒体膜电位(MMP)、线粒体复合物Complex I和III的活性、ROS生成分tumour biology别采用Western blot、流式细胞检测术、试剂盒以及荧光染色进行检测。同样应用Western blot检测各组细胞中NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β的蛋白水平,ELISA检测各组细胞上清中IL-1β、IL-18的含量。结果1.与对照组相比,SAE患者组脑脊液中IL-18和IL-1β水平显著上调(P<0.01)。2.CLP处理12h后,为了确认大鼠在CLP后12小时是否发生SAE,对大鼠进行神经行为测定。神经行为测试总分较低的CLP大鼠将被诊断为SAE。结果显示,SAE组的神经行为测试得分明Puromycin作用显低于假手术组,提示SAE大鼠模型制作成功。3.各组大脑皮层中神经元的凋亡情况显示,与Sham组比较,SAE组双阳百分比显著升高(P<0.01);与SAE组比较,SAE+Caf(10mg/kg)组和SAE+Caf(20mg/kg)组双阳百分比均显著下降(P<0.01),其中SAE+Caf(20mg/kg)组下降更明显,提示SAE组的大脑皮层中TUNEL/Neu N阳性细胞水平较高,枸橼酸咖啡因处理后,细胞凋亡受到限制。检测各组动物大脑皮层中星形胶质细胞激活情况,结果显示,与Sham组比较,SAE组GFAP蛋白阳性表达水平明显增多;与SAE组比较,SAE+Caf(10mg/kg)组和SAE+Caf(20mg/kg)组GFAP蛋白阳性表达水平有所减少(P<0.01),其中SAE+Caf(20mg/kg)组减少的更明显。GFAP荧光强度在CLP大鼠中显著增加,而枸橼酸咖啡因降低了GFAP的表达。这些结果表明,枸橼酸咖啡因可能抑制CLP诱导的神经元凋亡和星形胶质细胞的活化。4.与Sham组比较,SAE组的线粒体膜电位明显降低(P<0.01);与SAE组比较,SAE+Caf组(20mg/kg)的线粒体膜电位明显升高(P<0.01),提示枸橼酸咖啡因治疗恢复了线粒体膜电位水平,抵消了CLP的影响。与Sham组比较,SAE组ROS生成量明显增多(P<0.01);与SAE组比较,SAE+Caf(20mg/kg)组ROS生成量明显降低(P<0.01),提示CLP诱导的ROS水平的增加被枸橼酸咖啡因所抑制,表明线粒体功能恢复。这些数据表明,枸橼酸咖啡因可以保护线粒体功能免受SAE损伤。5.观察各组大脑皮层内星形胶质细胞中UCP2表达情况,结果显示,与Sham组比较,SAE组UCP2阳性蛋白表达水平有所降低,而GFAP阳性蛋白表达水平有所增加;与SAE组比较,SAE+Caf(20mg/kg)组UCP2阳性蛋白表达水平有所增加,而GFAP阳性蛋白表达水平有所降低,提示枸橼酸咖啡因处理诱导了UCP2蛋白表达的显著增加。与Sham组比较,SAE组中NLRP3蛋白、caspase-1、pro-IL-1β和IL-1β的相对表达水平均显著增加(P<0.01);SAE+Caf(10mg/kg)组pro-IL-1β、IL-1β和NLRP3蛋白相对表达水平较SAE组显著降低,caspase-1蛋白相对表达水平有降低趋势但没有统计学意义;SAE+Caf(20mg/kg)组中caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β和NLRP3蛋白的相对表达水量均低于SAE组(P<0.01)。上述数据表明,枸橼酸咖啡因可以促进UCP2的表达,并抑制NLRP3炎症小体的激活。6.成功原代分离出大鼠大脑皮层星形胶质细胞。LPS+IFN-γ组UCP2蛋白相对表达量较Control组有上升趋势,但无统计学意义(P>0.05);与LPS+IFN-γ组比较,LPS+IFN-γ+Caf(100μM)组和LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组UCP2蛋白相对表达水平明显增加(P<0.01),其中LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组变化最大。LPS+IFN-γ组线粒体膜电位明显高于Control组(P<0.01);与LPS+IFN-γ组比较,LPS+IFN-γ+Caf(100μM)组和LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组线粒体膜电位明显降低(P<0.01),其中LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组变化最大,提示枸橼酸咖啡因显著恢复了MMP水平。LPS+IFN-γ组线粒体复合物Complex I、III活性均低于Control组(P<0.01);与LPS+IFN-γ组比较,LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组线粒体复合物Complex I、III活性均明显增加(P<0.01)。LPS+IFN-γ组ROS生成量较对照组明显增多(P<0.01);LPS+IFN-γ+Caf(100μM)组和LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组ROS生成量较LPS+IFN-γ组减少(P<0.01),其中LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组变化最大。以上数据表明,枸橼酸咖啡因可以促进UCP2的表达,缓解星形胶质细胞的线粒体功能障碍。7.与Control组比较,LPS+IFN-γ组中NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β蛋白的相对表达水平均明显升高(P<0.01);LPS+IFN-γ+Caf(100μM)组和LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组的NLRP3、caspase-1、pro-IL-1β、IL-1β蛋白的相对表达水平明显比LPS+IFN-γ组低,其中LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组变化最为显著(P<0.01)。LPS+IFN-γ组细胞上清中IL-1β、IL-18含量明显高于Control组(P<0.01);与LPS+IFN-γ组比较,LPS+IFN-γ+Caf(100μM)组和LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组细胞上清中IL-1β、IL-18含量明显降低,以LPS+IFN-γ+Caf(200μM)组变化最为显著(P<0.01)。上述数据表明,与大鼠大脑皮层的结果类似,枸橼酸咖啡因抑制了星形胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活和促炎因子的分泌。结论1.通过前瞻性研究收集了SAE及对照组患者脑脊液标本进行实验,结果显示SAE患者组脑脊液中IL-18和IL-1β分泌显著增加,推测NLRP3炎症小体激活及相关炎症因子可能参与SAE发病机制,这些发现提示NLRP3炎性小体可能作为SAE的治疗靶点,需要进行进一步实验验证。2.通过盲肠穿刺结扎法成功建立了脓毒症大鼠模型,并通过神经行为测试可筛选出SAE大鼠模型。枸橼酸咖啡因可抑制SAE大鼠大脑皮层的神经元凋亡和星形胶质细胞活化,可缓解SAE大鼠大脑皮层线粒体功能障碍。枸橼酸咖啡因可以促进SAE大鼠大脑皮层星形胶质细胞中UCP2的表达,并抑制NLRP3炎症小体的激活。3.枸橼酸咖啡因可通过促进UCP2的表达,缓解LPS和IFN-γ刺激的星形胶质细胞的线粒体功能障碍;枸橼酸咖啡因可抑制LPS+IFN-γ刺激的星形胶质细胞中NLRP3炎症小体的激活和促炎因子的分泌,从而起到对SAE的神经保护作用。综上所述,枸橼酸咖啡因通过激活UCP2的表达,从而抑制星形胶质细胞中NLRP3炎性小体的激活,减轻星形胶质细胞的线粒体功能障碍、星形胶质细胞激活和神经元凋亡,对SAE起到保护作用。我们的结果表明UCP2可能是使用枸橼酸咖啡因治疗SAE的治疗靶点。

目的:本研究通过收集初次接受经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronay interventi on,PCI)术的ST段抬高型心肌梗死(ST-segment elevation myocardial infarction,STE MI)患者临床资料,进行回顾性病例对照研究,探讨术前血清中性粒细胞与淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、红细胞分布宽度(red blood cell distribut ion width,RDW)及胱抑素C(cystatin-C,Cys-C)等新型炎症标记物与术后发生ST段回落值(ST segment resolution,STR)不良的关系以及上述炎症标记物是否可作为急诊PCI术后STR不良的预测指标。方法:选取2020年1月至2022年10月期间就诊于内蒙古医科大学附属医院急诊科,胸痛时间<12小时内接受急诊PCI术且术后TIMI血流3级的前壁STEMI患者134例,收集所有研究对象的术前实验室结果、心彩超、术前及术后90分钟内心电图等资料。并按术后心电图单导联ST段回落程度分为STR良好组(STR≥50%)和STR不良组(STR<50%),运用统计学软件进行分析,比较两组间术前各项指标是否有明显的差异,观测指标包括NLR、RDW及Cys-C。采用二Gefitinib体内实验剂量元logistic回归分析发生STR不良的危险因素。结果:(1)本研究共纳入134例前壁STEMI患者,其中术后90分钟内发生STR不良患者49例(占比36.6%);STR良好患者85例(占比63.4%);两组间年龄、性别、吸烟及伴随疾病方面无明显差异,(P>0.05)。(2)STR不良组与STR良好组间比较术前C反应蛋白(hs-CRP)、D-二聚体(D-D)、血肌酐(Cr)、白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)、LVEDd、LVEF、killip分级及植入支架数目等无统计学差异,(P>0.05)。(3)STR不良组术前中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)[8.47(3.97,13.7)vs 3.79(1.73,7.11);P<0.05]、红细胞分布宽度(RDW)[16.2(12.9,17.6)%vs13.3(12.9,13.75)%;P<0.05]、血清胱抑素C(Cys-C)[0.97(0.81,1.32)mg/l vs 0.77(0.63,1.09)mg/l;P<0.05]、胸痛至开通罪犯血管时间[8(4,12)h vs 5(3,8.5)h;P<0.05]、心肌酶(CK)[1053(292,1795)U/L vs 164(88.5,377)U/L;P<0.05]、肌酸激酶同工酶(CK-MB)[135.7(58.35,274.3)ng/ml vs 28.9(16.15,61.5)ng/ml;P<0.05]、超敏肌钙蛋白T(c Tn T-hs)[0.77(0.303,3.35)ng/ml vs 0.048(0.03,0.274)ng/ml;P<0.05]氨基末端脑钠肽前体(NT-Pro BNP)[799(103.65,1982)pg/ml vs 124.7(40.5,380.85)pg/m;P<0.05]均显著高于STR良好组,差异均具有统计学意义。本研究按胸痛至开通罪犯血管时间的长短将患者分为4个组后,分析数据发现,胸痛至开通罪犯血管时间≤3小时的患者在STR良好组中占比明显高于STR不良组35(41.18%)vs 7(14.29%),而胸痛至开通罪犯血管时间为9～12小时的患者在STR良好组中的占比明显低于STR不良组15(17.65%)vs 22(44.9%),差异有bio-based oil proof paper统计学意义。(4)多因素logistic回归分析结果显示,NLR、RDW及NT-Pro BNP是STR不良发生的独立危险因素,NLR(OR:1.111;95%CI:1.006～1.226,P<0.05);RDW(OR:1.623;95%CI:1.268～2.099,P<0.05);NT-Pro BNP(OR:1.000;95%CI:1.000～1.001,P<0.05),受试工作(ROC)曲线分析示NT-Pro BNP曲线下面积0.712,NT-Pro BNP最佳截断值为452.15 pg/ml时,识别STR不良的灵敏度为65.3%,特异度为77.6%。NLR曲线下面积为0.748,NLR最佳截断值为3.18时,识别STR不良的灵敏度为91.8%,特异度为44.7%;RDW曲线下面积为0.706,RDW最佳截断值为14.5%时,识别STR不良的灵敏度为61.2%,特异度为95.3%。RDW联合NLR曲线下面积为0.767,显著高于两者单独预测的面积,RDW联合NLR最此网站佳截断值为0.48时,识别STR不良的灵敏度为65.3%,特异度为94.1%。结论:(1)急诊PCI术后梗死相关动脉血流达到TIMI 3级的前壁STEMI患者仍有一定的概率出现STR不良。(2)胸痛至开通罪犯血管时间、术前CK、CK-MB、c Tn T-hs及Cys-C的增高水平与急诊PCI术后STR不良发生密切相关。术前NLR、RDW及NT-Pro BNP的增高水平是前壁STEMI患者PCI术后发生STR不良的独立危险因素。