Author: admin

柑橘(Citrus)作为我国重要经济作物之一,是我国栽种面积最广、经济价值最高的果树之一,枳橙(Citrange)作为柑橘最主要的砧木,而砧木氮素利用率不足制约了其生长,从而影响柑橘产量,因此研究柑橘砧木对氮素的吸收和利用是有必要的。谷氨酰胺合成酶(glutamine synthase,GS)作为调控氮代谢的关键酶,在细胞中促进合成蛋白质和运输氮。为研究枳橙谷氨酰胺合成酶基因调控氮素代谢的特性和功能,本研究克隆了 GS基因家族中GInHZ的全长序列,并进行生物信息学分析,构建超表达载体并通过农杆菌介导法将基因转入拟南芥中,通过测定转基因型株系与野生型株系的表型、叶绿素含量、GS酶活等指标,对GInHZ基因功能进行分析讨论。1.从枳橙中克隆得到一个GlnHZ基因并开展生物信息学分析。结果表明:GlnHZ全长编码序列(coding sequence,CDS)为2523bp,编码确认细节840个氨基酸,分子式为C_(4211)H_(6617)N_(1119)O_(1233)S_(27),分子质量为93.51kD,等电点为5.78,不稳定系数为44.54属于不稳定亲水蛋白,GlnHZ蛋白中信号肽存在概率为0.0004,蛋白二级结构结果表明含有394个α-螺旋(α-spiral),占比为46.9%。1 14个伸展链(Extended strand),占比为 13.57%。β-转角(β-turn)44个,占比为 5.24%。无规则卷曲(Random coil)288个,占比为34.29%。预测没有任何跨细胞膜结构,无信号肽,为非分泌蛋白。亚细胞定位预测在叶绿体、细胞核、细胞质、液泡和细胞骨架中均有存在。进化树分析表明GlnHZ蛋白与克莱门柚(Citrus clementina)和甜橙的亲缘关系最相近为90%,与文冠果(Xanthoceras sorbifolium Bunge)也存在着62%的同源关系。2.利用同源重组技术成功构建了 PBI121-GInHZ超表达载体。提取质粒扩繁线性化后与目的基因进行重组,连接转化DH5α大肠杆菌培养,挑菌检测并完成测序,利用冻融法转化农杆菌GV3101,花序侵染法侵染野生拟南芥获得转基因植株,在含有卡那霉素抗性的培养基中筛选出了阳性植株并selleck NMR提取DNA进行PCR检测,获得T1、T2代植株种子。3.将T2代转基因型与普通野生型拟南芥,用Hoagland营养液进行培养。在培养的15d-45d期间分别测定其株高、抽薹时长和抽薹根数、根系结构扫描、生物量、叶绿素含量及GS酶活等指标。结果表明:转基因株系在几次测定时,株高均要高于野生型,抽薹时间也早于野生型3-5d,抽薹根数平均多约一根。转基因株系的根系在根长度、根表面积和侧根数上均强于野生株系。转基因株系生物量在25d时低于野生型株系,但在45d时二者无显著差异;转基因型株系绿素a、叶绿素b和总叶绿素均显著高于野生型株系;GS酶活表现出转基因型株系显著高于野生型,且随着栽培时间的增加,转基因型GS酶活的下clinical genetics降速率显著低于野生型。结论:试验结果表明GInHZ基因的过量表达促进了转基因植株的分根,从而提高拟南芥对氮素的吸收、进而促进地上部生长和增加叶绿素含量。因此推测GInHZ基因对拟南芥氮素吸收代谢有着正向调节作用。这一研究为后续柑橘氮素高效利用品种选育提供一定的理论基础。

目的 在舌鳞状细胞癌中，蛋白质表达的改变对疾病的发生发展起着至关重要的作用。本研究旨在绘制舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCR428 molecular weightC)的蛋白质组学图谱并进行生信分析，筛选TSCCKPT-330体内实验剂量诊断和治疗相关的生物标记物并进行验证。方法 选用5对TSCC癌与癌旁组织，利用液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS)绘制TSCC蛋白质组学图谱，通过差异分析揭示TSCC癌与癌旁组织的差异表达蛋白，并将差异表达蛋白进行亚细胞定位分析、GO分析及蛋白质互作网络富集分析，最后将富集出的典型差异蛋白用另外15对TSCC癌与癌旁组织标本加以验证。结果 TSCC癌与癌旁组织共检测出6 894个蛋白质，其中鉴定出159个差异表达蛋白。这159个差异表达蛋白多富集在转录、信号转导、转录调节等通路；亚细胞定位主要分布在胞质和细胞核中，其中上调最为显著的3个蛋白是Q06546(GABPA)、P23443(RPS6T cell biologyKB1)和P46952(HAAO),下调最为显著的3个蛋白是Q6NXR4(TTI2)、Q9H981(ACTR8)和Q9H930(SP140L)。将GO分析富集在转录和信号转导相关通路中的差异表达蛋白进行蛋白质互作分析，蛋白互作网络核心蛋白HDAC6、DIDO1和RPS6KB1在癌组织中表达显著升高，此结果在另外15对TSCC癌与癌旁组织中得以验证。结论 TSCC蛋白质组学图谱可以全面描述该疾病特征并发现众多表达差异蛋白，HDAC6、DIDO1和RPS6KB1有望作为TSCC诊治过程中的生物标志物。

目的:非洲猪瘟病毒严重影响了我国生猪安全,而干扰素发挥的抗病毒作用对抑制非洲猪瘟感染至关重要。干扰素(Interferon,IFN)在抗病毒、抑制肿瘤和免疫调节等方面发挥着重要作用。干扰素α(IFN-α)作为I型IFN的一种,主要参与抗病毒免疫过程;干扰素λ(IFN-λ)是III型IFN,其对抗病毒免疫反应的作用仅限于暴露和感染风险较高的上皮组织,在粘膜感染中。而且通过仓鼠卵巢细胞(Cselleckchem BAY 73-4506hinese Hamster Ovary,CHO)表达系统表达的重组蛋白,它的分子结构和生物学功能与天然蛋白分子最相似,同时具备外源性蛋白表达量较高等优势。单克隆抗体在免疫CP-456773体内实验剂量分析领域发挥着重要作用,极大提升了免疫学检测的特异性和灵敏度。本研究拟构建猪源IFN重组质粒并通过CHO表达系统进行高效表达,从而制备灵敏度高、特异性强的单克隆抗体,为在以后的研究中更好地建立不同IFN分子的检测方法以及建立研究猪病毒感染和免疫过程中不同细胞因子的分泌情况的关键技术平台奠定基础。方法:(1)构建猪源重组干扰素(r Po IFN)质粒:提取猪外周血淋巴细胞总RNA并反转录为c DNA,以Gen Bank中目的基因的序列(Gen Bank登录号:α:NM＿214393.1;λ:NM＿001142837.1)为模板设计引物,聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增目的基因Po IFN-α和Po IFN-λ,将pc DNA3.1真核表达载体通过HindⅢ和XhoⅠ双酶切后回收纯化,通过T4连接酶连接目的基因与载体得到重组质粒并测序。(2)CHO表达纯化IFN蛋白;参照Expi CHO~(TM)表达系统操作说明进行复苏、传代、转染和收集纯化,并对纯化后的蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。(3)单克隆抗体制备:蛋白乳化免疫小鼠,检测阳性血清效价后将脾细胞与SP2/0细胞进行融合并建立间接酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选所需的阳性杂交瘤细胞,亚克隆扩大培养后制备腹水得到单克隆抗体,纯化制备的抗体并进行鉴定。(4)通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)技术检测猪不同部位IFN分子的产生与分布情况。结果:(1)扩增出Po IFN-α和Po IFN-λ两条特异性条带,大小分别为612 bp和630 bp;经过T4连接酶连接成功构建出重组质粒pc DNA3.1-Po IFN-α和pc DNA3.1-Po IFN-λ。(2)通过CHO真核表达系统成功表达并纯化出正确大小的可溶性蛋白,IFN-α大小为20 k Da左右、浓度为1.2 mg/m L,IFN-λ大小为25 k Da左右、浓度为0.86 mg/m L。(3)血清效价检测符合细胞融合要求;建立间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤,通过间接ELISA筛选和5次亚克隆IFN-α得到一株能稳定分泌抗IFN-α蛋白的单克隆细胞株(3c6)、IFN-λ得到一株能稳定分泌抗IFN-λ蛋白的单克隆细胞株(3e8);亚型鉴定二者均为为Ig G1亚型、Ig Gκ轻链;Western-blot显示抗体可以特异识别IFN-α与IFN-λ,抗体纯化后IFN-α效价检测可达1:256000、IFN-λ效价检测可达1:32000。(4)IHC可知在脾脏中可见广泛IFN阳性细胞,且红脾区较多,白脾区、脾小体等相对较少,肝脏中阳性细胞主要集中于中央静脉周围。结论Biogeochemical cycle:(1)成功构建出猪源干扰素重组质粒pc DNA3.1-Po IFN-α和pc DNA3.1-Po IFN-λ。(2)成功表达并纯化出正确大小的可溶性蛋白,且重组蛋白纯度好、浓度高。(3)成功制备出r Po IFN-α和r Po IFN-λ的单克隆抗体,且抗体灵敏度高、特异性强。(4)利用制备的单抗成功在ASFV攻毒猪脏器组织中特异性检测到组织中产生的IFN-α与IFN-λ阳性细胞以及二者在肝脏和脾脏组织中的分布状态。

硫芥(Sulfur Mustard,SM),是糜烂性化学毒剂的代表,其毒性作用强、损伤范围广,有“毒气之王”之称。SM的主要靶器官是皮肤、眼睛和呼吸道,中毒后会引起红斑、水疱、瘙痒和溃疡等多种症状。临床研究表明,多数SM中毒的患者在中毒几年甚至几十年后仍具有类似焦虑,抑郁和认知功能减退等神经损伤症状。前期人们认为SM对神经系统的影响主要是身体其他部位的损伤引起的继发效应,并非由SM直接作用导致。但是相关临床数据、体内外实验研究表明SM能够对神经系统产生损伤,降低动物神经细胞存活率,但确切的毒性作用以及毒性机制目前仍不清楚,SM抗毒药物的研究亦严重不足。由于神经系统的特殊性,受供体组织来源及伦理学的限制,直接从神经组织分离培养原代人神经细胞难以实现,因此缺乏S确认细节M对人源神经细胞的研究数据。神经细胞多为增殖不活跃或终末分化的细胞,且具有多种类型。那么SM是否会影响增殖不活跃的人源神经细胞的活性?对不同阶段或类型的神经细胞的影响是否相同?SM对神经细胞损伤的毒性机制是什么?目前尚不清楚。临床上中毒患者的神经损伤症状是SM急性期毒性的延续,还是后续逐渐发展形成?目前也尚不清楚。人诱导性多能干细胞(hiPSC)是将人的体细胞经过重编程技术得到的一种携带人体遗传信息的多能干细胞。hiPSC的出现为研究化学毒剂神经损伤提供了较为理想的人源细胞。目前已经可以将hiPSC诱导分化为多种神经细胞亚型,应用于疾病研究和药物开发过程等多个方面,尤其是在药物神经毒性和有效性的评价中表现出巨大的应用潜力。通过加入特定的诱导因子可将hiPSC定向诱导分化为神经干细胞(NSC)和Neuron,从而得到不同阶段的神经细胞。人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)是一种永生化神经细胞,其形态、生理生化特征与人体正常神经元相似程度高,被广泛应用于神经系统疾病的相关研究。因此本课题将hiPSC、hiPSC源NSC和hiPSC源NCompound C浓度euron作为不同阶段的神经细胞,将SH-SY5Y作为另一种不同类型的神经细胞,建立SM神经细胞染毒模型,研究SM对不同阶段和类型神经细胞的毒性作用及毒性机制。另外通过给予动物皮下注射SM的方式,建立动物染毒模型,动态研究SM对动物神经系统的影响。本研究将为建立SM神经损伤人源化模型、深入理解中毒机制及抗毒药物研究提供依据,具有重要的理论与现实意义。一、基于人诱导性多能干细胞的硫芥神经细胞毒性研究将不同浓度的SM溶液加入到不同阶段和类型的神经细胞中(hiPSC染毒浓度:0.001,0.01,0.1,0.5,1.0,10,100,200 μmol·L-1;hiPSC 源 NSC 和 Neuron 以及 SH-SY5Y染毒浓度:0.1,1.0,10,50,100,200,400,800 μmol·L-1),另外以 0.2%无水乙醇为溶剂对照。与细胞作用30min后除去,之后继续培养24h,建立SM神经细胞损伤模型。从细胞融合率和形态、细胞活力和细胞增殖方面研究SM对不同阶段和类型神经细胞的毒性。1.硫芥对不同阶段和类型神经细胞融合率和细胞形态的影响为了研究SM对神经细胞融合率和形态的影响,在SM染毒前后24 h采用IncuCyte ZOOM活细胞动态成像分析仪监测细胞融合率和形态的变化。结果显示,与对照组相比,hiPSC源Neuron和SH-SY5Y的800 μmol·L-1组细胞融合率在SM染毒后即发生明显变化。之后随着时间延长和染毒浓度增加融合率逐渐降低,细胞原有形态逐渐改变,细胞核皱缩,形态变圆,细胞碎片增多。hiPSC及hiPSC源NSC的细胞融合率和细胞形态的变化在SM染毒后约6～8h开始出现,之后随着时间延长和染毒浓度增加融合率逐渐降低,形态变化主要表现为细胞皱缩变圆、形态逐渐模糊、细胞碎片增多。上述结果表明SM能够时间和浓度依赖性地降低神经细胞的融合率,影响细胞正常形态结构。SM毒性在不同细胞中出现的时间不同,也说明不同细胞对SM毒性的敏感性不同。2.硫芥对不同阶段和类型神经细胞活力的影响为了研究SM对神经细胞活力的影响,在SM染毒24h后,采用CCK-8法检测各组细胞在450nm波长处的吸光度值(OD450nm)并计算细胞存活率;采用试剂盒检测细胞的乳酸脱氢酶(LDH)释放量;采用Calcein-AM/PI荧光染色法统计死细胞比例。结果显示,与对照组相比,SM染毒24h后能够浓度依赖性地降低hiPSC、hiPSC源NSC和Neuron以及SH-SY5Y的OD450nm值。SM对细胞的半数抑制浓度分别为0.17、11.72、18.78和15.92 μmol·L-1。SM能够引起细胞的LDH释放量逐渐增加,死细胞比例逐渐上升。上述结果表明SM能够浓度依赖性的降低hiPSC、hiPSC源NSC、hiPSC源Neuron和SH-SY5Y的细胞活力。hiPSC对SM的毒性最为敏感,hiPSC源NSC和Neuron以及SH-SY5Y对SM毒性的敏感性相近。SM能够损伤神经细胞膜结构,显著降低神经细胞存活率,最终引起大量细胞死亡。3.硫芥对不同阶段和类型神经细胞增殖能力的影响为了研究SM对神经细胞增殖能力的影响,在SM染毒24 h后,采用EdU荧光染色法检测细胞EdU阳性比例。结果显示,与对照组相比,随着SM染毒浓度增加,hiPSC、hiPSC源NSC和Neuron以及SH-SY5Y细胞中EdU阳性细胞比例均逐渐减小。表明SM能够显著降低神经细胞的增殖能力。本部分研究表明:SM能够浓度依赖性地降低神经细胞的细胞活力,SM对hiPSC的损伤最严重,对hiPSC源NSC和Neuron以及SH-SY5Y的损伤程度接近。但不同细胞的毒性损伤表现有所差异。SM对hiPSC和NSC的损伤主要表现较为一致,即降低细胞增殖能力,导致死细胞比例增加,但对细胞膜的损伤程度较小。SM对增殖不活跃的Neuron的损伤与NSC和SH-SY5Y的其损伤主要表现为破坏细胞膜结构,增加死细胞比例,降低细胞增殖能力。二、基于人诱导性多能干细胞的硫芥神经细胞毒性机制研究为了进一步研究SM对神经细胞损伤的毒性机制,从SM产生细胞毒性的物质和效应两个方面开展研究。采用上述SM对神经细胞的染毒方法,在24 h后检测神经细胞内DNA双链断裂标志物γ-H2A.X含量,细胞内SM与DNA的加合物的种类,细胞内NAD+/NADH、ATP和活性氧(ROS)的含量,以及细胞糖酵解和氧化磷酸化水平。研究DNA损伤、能量代谢和氧化应激在SM神经毒性中的作用,并分析在不同阶段和类型的神经细胞中这些机制的变化是否一致。1.硫芥对不同阶段和类型神经细胞DNA的影响为了研究SM对神经细胞DNA的影响,在SM染毒24 h后,首先采用免疫荧光法检测神经细胞中DNA双链断裂标志物γ-H2A.X的含量,之后采用超高效液相色谱-质谱联用检测SH-SY5Y细胞中的SM-DNA加合物的种类。结果显示,与对照组相比,SM能够浓度依赖性增加hiPSC、hiPSCPediatric emergency medicine源NSC和Neuron以及SH-SY5Y细胞内的γ-H2A.X含量。DNA加合物的检测结果显示,在SM 10 μmol·L-1染毒的SH-SY5Y细胞中检测到2种主要的SM-DNA加合物:鸟嘌呤的N7位单加合物和双链加合物。上述结果表明SM进入神经细胞后,能够与细胞内的DNA加合,可能导致神经细胞DNA双链断裂增加,引起DNA损伤。2.硫芥对不同阶段和类型神经细胞能量代谢的影响为了研究细胞能量代谢在SM神经毒性中的作用,在SM染毒24 h后,采用NAD+/NADH和ATP试剂盒检测细胞内NAD+/NADH和ATP的含量变化;采用Seahorse细胞代谢呼吸动态分析仪检测细胞糖酵解和氧化磷酸化水平的变化。结果显示,与对照组相比,SM能够浓度依赖性地降低hiPSC源NSC和SH-SY5Y细胞内NAD+/NADH和ATP的含量,且NAD+/NADH含量的减少程度高于ATP。hiPSC源NSC和SH-SY5Y的基础糖酵解水平、糖酵解能力最大值和非糖酵解酸化水平均随着SM染毒浓度增加逐渐降低;细胞基础呼吸水平、最大呼吸能力以及ATP生成能力也随SM染毒浓度增加而逐渐降低。hiPSC的检测结果显示,随着SM染毒浓度增加,细胞内NAD+/NADH的含量逐渐降低,而ATP含量逐渐增加。细胞的基础糖酵解水平、糖酵解能力最大值和非糖酵解酸化水平随SM染毒浓度增加逐渐增加;细胞基础呼吸水平、最大呼吸能力以及ATP生成能力随SM染毒浓度增加逐渐降低。上述结果表明,SM能够导致hiPSC源NSC和SH-SY5Y细胞的糖酵解水平和线粒体氧化磷酸化水平逐渐降低,细胞内能量相关物质NAD+/NADH和ATP含量逐渐减少。SM导致hiPSC的细胞糖酵解水平增加,氧化磷酸化水平降低,细胞内NAD+/NADH含量减少,而ATP含量增加。提示SM能够引起不同阶段和类型神经细胞的能量代谢紊乱。3.硫芥对不同阶段和类型神经细胞内活性氧含量的影响为了研究氧化应激在SM神经毒性中的作用,在SM染毒24 h后,采用试剂盒检测细胞内ROS平均荧光强度的变化。结果显示,与对照组相比,随着SM染毒浓度的增加,hiPSC、hiPSC源NSC和Neuron细胞内ROS的平均荧光强度逐渐降低,SH-SY5Y细胞内ROS的平均荧光强度逐渐增加。上述结果表明SM染毒后引起hiPSC、hiPSC源NSC和Neuron氧化应激水平降低,SH-SY5Y氧化应激水平增加。本部分研究表明:SM对增殖不活跃的神经细胞具有显著毒性的原因,一方面可能与DNA加合物形成引起的DNA损伤有关,另一方面SM能够通过其他效应引起细胞损伤,如细胞能量代谢紊乱和氧化应激等。SM对神经细胞损伤的几种机制在终末分化的神经元中同样存在,也表明了 SM不仅靶向增殖活跃的细胞,对增殖不活跃的细胞同样具有毒性损伤。三、硫芥对动物神经系统的影响临床研究发现SM对神经系统的影响可持续多年,有明显的长期效应,那么这种长期效应是SM未恢复的急性损伤效应,还是后续逐渐产生的?目前尚不清楚。本部分采用背部皮下注射方式给予小鼠20mg/kg SM,建立SM中毒损伤模型。通过新物体识别实验、旷场实验、悬尾实验和转棒实验,动态观察在中毒两周和两个月后,SM对小鼠神经系统的影响。实验结果显示,在SM中毒两周和两个月后,与溶剂对照组相比,SM组小鼠在旷场中运动的总距离以及进入旷场中心区域的时间和距离、在新物体识别实验中学习训练1h和24 h后对新物体的偏好指数均有降低趋势,但无显著性差异。悬尾实验中SM组小鼠的不动实验,以及转棒实验中在转棒上的停留时间与溶剂对照组相比均无显著性差异。表明在中毒两周和两个月后,20mg/kg SM并未对小鼠焦虑、抑郁情绪、认知能力和神经肌肉功能产生明显影响。提示临床上的神经症状可能不是未恢复的急性期损伤效应,可能是后期逐渐产生的神经损伤,后续也仍需要进行长期动态检测观察SM对神经系统损伤。综上所述:1.本课题建立了一种基于人诱导性多能干细胞和人神经母细胞瘤细胞的SM染毒模型,能够从细胞活力、死细胞比例、LDH释放量和细胞增殖能力方面很好地反映神经细胞的毒性反应,为后续毒性机制研究以及治疗药物筛选提供良好的细胞模型。2.SM对不同阶段和类型的人源神经细胞的毒性有差异,对hiPSC的毒性最严重。3.SM对增殖缓慢的神经细胞具有直接毒性作用,其毒性机制可能与DNA损伤,氧化应激和能量代谢紊乱有关,详细的神经毒性机制仍需要进一步深入研究。4.SM对神经系统的损伤可能不是未恢复的急性期效应,而可能是后期逐渐产生的损伤效应。

学科核心素养是在学科学习过程中逐渐发展起来的,体现在解决真实情境中的实际问题时所表现出的价值观、必备品格与关键能力。它是学生知识、能力、情感态度与价值观的综合体现。在新课改背景下,核心素养的培养已成为教学目标的主要依据,是课程教学的指挥棒。作业是教学中最有效的辅助手段之一,是由学生所主导的学习过程,也是培养学生核心素养的有效手段,具有重大的教育价值。目前,许多教育工作者通常采用“题海”战术来巩固知识,导致作业形式单一,练习枯燥乏味,无形中加重了学生的学习负担,打击了学生的学习积极性。因此,本研究尝试以培养核心素养为目标,改变传统作业形式,采取多元化作业设计,通过多样化的作业形Genetic forms式提高学生的学习积极性,从多个角度促进学CDK抑制剂生的全面发展,以此达到培养学生核心素养的目的。本研究的主要内容包括四个方面:(1)通过文献研究法梳理核心素养与作业的国内外研究情况,阐明核心素养与作业设计的内涵并确定相关的理论基础,并以此为基础进行研究。(2)采用问卷调查法了解高中生物学学生作业现状和教师作业设计情况,并以此为依据,构建多元化作业设计体系。再以《选择性必修一:稳态与调节》为例设计多元化作业案例进行教学实践。(3)组织开展实验班和对照班的差异性教学,将多元化作业案例引入教学实践中,收集反馈并进行反思,对已有的策略进行修改和完善。(4)通过检测卷,对实验班和对照班进行实验中期与后期评价,检查学生核心素养水平变化与学习情况,以评价研究结果。本研究取得了如下成果:(1)通过案例实施与反思构建了完整的多元化作业的设计体系,可为一线教师教学过程中的作业设计提供参考。(2)通过教育实践证明:在多元化作业形式的影响下,实验班与对照班的第一次后测成绩未出现明显的差异,但具有进步趋势。第二次后测成绩出现显著性差异(P<0.001),其中学生的生命观念、科学探究等方面的核心素养有所提高,且学生的学习兴趣有明显增强。综上,本研究所获成果对促进学生的学习和发展,提高教师的教学效果具有重要的意此网站义和应用价值。

目的 探讨超声造影（CEUS）对慢性肝病背景下最大径≤3 cm肝细胞肝癌（HCC）的诊断价值。方法 选取我院收治的189例慢性肝病患者（共252个肝脏局selleck产品灶性病变），均行CEUS检查，观察HCC增强模式，比较最大径>2 cm与≤2 cm HCC增强模式的差异。以组织病理学或临床诊断结果为金标准，计算HCC典型增强模式及其联合不典型增强模式对最大径≤3 cCompound C生产商m HCC的诊断准确率physical and rehabilitation medicine、灵敏度、特异度；绘制受试者工作特征曲线评估其诊断效能。结果 252个病灶中，HCC 95个（最大径>2 cm 39个，最大径≤2 cm 56个），其他恶性肿瘤24个，良性病灶133个。HCC动脉期、门脉期、延迟期主要表现为高-等-低增强（38.95%,37/95）和高-低-低增强（29.47%,28/95）的典型增强模式，28.42%(27/95)呈不典型增强模式。最大径>2 cm HCC典型增强模式占比高于最大径≤2 cm HCC(82.05%vs. 58.93%)，不典型增强模式占比低于最大径≤2 cm HCC(12.82%vs. 39.27%)，差异均有统计学意义（均P<0.05）。典型增强模式对最大径≤3 cm HCC的诊断准确率、灵敏度、特异度分别为84.52%、65.26%、96.18%，曲线下面积为0.807；其联合不典型增强模式的诊断准确率、灵敏度、特异度分别为93.65%、93.68%、93.63%，曲线下面积为0.937；除特异度外，其余诊断效能与典型增强模式比较差异均有统计学意义（均P<0.05）。结论 HCC病灶越小CEUS呈不典型增强模式占比越高；联合典型与不典型增强模式有助于提高对慢性肝病背景下最大径≤3 cm HCC的诊断效能，具有较好的临床价值。

目的 探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）、液基薄层细胞学（thin-prep cytology test,TCT）及其联合检测在子宫颈癌筛查中的临床价值。方法 回顾性分寻找更多析2020年6月至2021年9月于西南医科大学附属医院行HPV检测、液基细胞学、阴道镜宫颈活检组织病理检查的4 723例病人资料，一是分析HPV高危型感染及亚型在不同年龄组、不同级别宫颈病变中的分布情况；二是分析细胞学结果与高危HPV、单一感染和多重感染的相关性。结果 检出HPV阴性11.60%Torin 1，高危人乳头瘤病毒（high risk HPV, hr-HPV）占85.84%，低危人乳头瘤病毒（low risk HPV, lr-HPV）占2.56%，不同年龄组间高危HPV和多重感染的差异具有统计学意义（χ~2=25.144,P <0.001；χ~2=169.426,P <0.001）。宫颈Biomolecules细胞学结果不仅在高危HPV、低危HPV和阴性组间存在差异（χ~2=397.923,P <0.001），在单一感染和多重感染组间的差异也具有统计学意义（χ~2=352.180,P <0.001）。阴道镜下活检，病理诊断阴性3 521例，阳性1 202例，其中子宫颈癌占2.01%，子宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）各级别中，CIN3占6.61%,CIN2占4.04%,CIN1占12.79%；子宫颈癌中检出率最高的是HPV16、18、52、58和59型，对于子宫颈癌，TCT检查的敏感度为53.68%，特异度为99.81%；高危HPV检测的敏感度为87.37%，特异度为14.20%；联合检测的敏感度为93.68%，特异度为14.13%。结论 40岁以上妇女是宫颈癌的高发人群；HPV检测时应当将16、18、52、58作为HPV阳性分流转诊阴道镜；TCT和高危HPV联合检测能够提高对CIN1+和宫颈癌筛查的敏感度。

目的 分析血液灌流联合血液透析对尿毒症性皮肤瘙痒(UP)患者免疫功能和血清β2-微球蛋白(β2-MG)、内毒素、血清铁蛋白(SF)水平的影响。方法 前瞻性选取2021年12月至2022年5月在秦皇岛市第二医院行MHD治疗的100例UPMolecular Biology患者作为研究对象，采用随机数字表法将患者分为研究组和对照组，每组各50例。对照组患者继续按原治疗方案给予规律性MHD,每周治疗2～3次，每次4 h,研究组患者在常规血液透析的同时串联血液灌流治疗，串联治疗时间为2.0～2.5 h,每月治疗2～3次。于治疗前和治疗6个月末，采用中文版14项尿毒症皮肤瘙痒量表对两组患者的UP症状进行评价；对两组患者治疗前和治疗6个月末的血清肌酐、血尿素氮、免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、 IgE、补体(C)3、C4、β2-MG、内毒素、SF水平及外周血CD4~+T淋巴细胞比例、CD8~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T淋巴细胞比值进行检测和对比。结果 治疗6个月末，两组患者的皮肤瘙痒持续时间评分更多、皮肤瘙痒严重程度评分、皮肤瘙痒发作频率评分及血清肌酐、血尿素氮水平均较治疗前降低，且研究组患者以上指标水平均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗6个月末，研究组患者的血清IgG、IgM、C3、C4水平及外周血CD4~+ T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+ T淋巴细胞比值均较治疗前升高，差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组患者治疗前、治疗6个月末免疫功能比较，差异均无统计学意义(P>0.05);研究组患者治疗6个月末血清IgG、IgM、C3、C4水平及外周血CD4~+ T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+ T淋巴细胞比值均高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗6个月末，研究组患者的血清β2-MG、内毒素、SF水平均较治疗前降低，差异均有统计学意义(P<0.05),而对照组患者治疗前、治疗6个月末血清β2-MG、内毒素、SF水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05);研究组患者治疗6个月末时的血清β2-MG、内毒素、SF水平均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 在UP治疗中采用血液灌流联合MHD方案，能够显著提升治selleck CP-456773疗效果、保护残余肾功能、改善免疫功能指标并有效清除β2-MG、内毒素、SF等中大分子毒素。

目的 探讨MRI平扫、增强扫描以及弥散加权成像(DWI)检查后综合判读患者MRI-腹膜癌指数(PCI)、糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)以及罗马指数(ROMA指数)预测卵巢癌腹膜转移患者行肿瘤减灭术可行性的价值。方法 收集2018年2月至2022年10月宜昌市第二人民医院妇科住院治疗的晚期卵巢癌患者60例。所有患者均在术前2周内完成MRI平扫、增强扫描以及DWI成像检查,并进行MRI-PCI评分;术前1周内采集清晨空腹静脉血测定CA125、HE4,通过HE4值计算ROMA指数。所有患者均行肿瘤减灭术,依据肿瘤残存程度分为完全减灭组和MCC950分子量不完全减灭组。采用Spearman秩相关分析MRI-PCI与术中PCI的相关性。ROC曲线分析MRI-PCI、CA125、HE4、ROMA指数预测不完全减灭术可行性的效能。结果 MRI-PCI与术中PCI呈正相关(r=0.871,P<0.001)。完全减灭组为18例,不完全减灭组为42例。完全减灭组MRIPCI评分和术中PCI评分均更低。在预测不完全减灭术可行性方面,MRI-PCI、CA125、HE4、ROMA指数的AUC分别为0.913、0.731、0.611、0.716。根据最大约登指数计算MRI-PCI最佳截断值为4.5分时,预测不完全减灭术的灵敏度为0.lung infection920,特异度为0.898,阳性预测值为0.781,阴性预测值为3-Methyladenine核磁0.822;CA125最佳截断值为880.26 U/mL时,预测不完全减灭术的灵敏度为0.780,特异度为0.655,阳性预测值为0.711,阴性预测值为0.733;HE4最佳截断值为488.98 pmol/L,预测不完全减灭术的灵敏度为0.760,特异度为0.780,阳性预测值为0.611,阴性预测值为0.717;ROMA指数最佳截断值为96.53%时,预测不完全减灭术的灵敏度为0.688,特异度为0.898,阳性预测值为0.647,阴性预测值为0.802。结论 MRI-PCI与术中PCI呈正相关,当MRI-PCI为4.5分时预测不完全减灭术可行性最有价值。

目的:通过观察加速衰老小鼠P8(Senescence accelerated mouse prone 8,SAMP8)海马组织中miRNA-124以及Notch信号通路关键分子蛋白和基因的水平变化,探讨针刺调控miRNA-124靶向Notch信号通路改善老年性痴呆NSCs微环境的机制。方法:1.选取健康8个月大的雄性SAMP8和SAMR1小鼠,分别随机分为以下9组,SAMR1对照组、SAMP8模型组、NSCs移植组、NSCs假移植组、穴位组、非穴组、miR-124高表达组购买Ipatasertib、miR-124低表达组和miR对照组。2.干预方法:应用三焦针法对移植后穴位组、非穴组、miR-124高表达组、miR-124低表达组和miR对照组小鼠进行针刺干预,选穴为膻中、中脘、气海、双侧血海和足三里,非穴位组小鼠在双侧肋下选择两个非穴位点,SAMR1对照组、SAMP8模型组、NSCs移植组、NSCs假移植组进行与针刺干预相同程度的捉抓刺激。共干预治疗30天,每天1次,每7天暂停1天治疗,在第15天进行NSCs移植。3.行为学评价:采用Morris水迷宫进行隐蔽平台试验5天,探索试验1天,反向试验3天及可视平台试验1天,观察各组小鼠逃避潜伏期的变化,对比分析其学习记忆能力。4.ELISA法检测Aβ40、Aβ42、β-分泌酶、γ-分泌酶、磷酸化Tau蛋白、Tau蛋白、APP的表达水平。5.应用Western blot和实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP等蛋白和基因的表达。6.通过实时荧光定量PCR法检测AD小鼠海马组织中miR-124基因的表达。结果:1.Morris水迷宫实验结果显示,隐蔽平台实验中,除SAMP8模型组和NSCs假移植组逃避潜伏期无明显改变之外,其余各组小鼠的逃避潜伏期随训练天数的增加而逐渐缩短,从第四天开始具有统计学差异(P<0.05)。组间两两比较结果显示,第1、2天各组小鼠之间的逃避潜伏期没有明显差异性(P>0.05);第3天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠的逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05);与SAMP8模型组相比,NSCs移植组和穴位组逃避潜伏期明显缩短,具有统计学差异(P<0.05);第4天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组、NSCs假移植组和非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期均明显缩短,具有显著性差异(P<0.05);与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01)。第5天结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组、NSCs假移植组和非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组、miR-124高表达组和miR-124低表达组逃避潜伏期明显减少,具有统计学差异(P<0.05);与移植组相比,miR-124高表达组逃避潜伏期明显缩短,具有显著性差异(P<0.05);与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期明显延长,具有统计学差异(P<0.01)。空间探索实验结果显示,与SAMR1对照组比较,SAMP8模型组在原平台象限停留时间较短且跨越平台次数较少,具有显著性差异(P<0.01);与SAMP8模型组和NSCs假移植组相比,穴位组、miR-124高表达组和miR对照组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05),穴位组跨越平台次数较多,具有显著性差异(P<0.01);与穴位组比较,非穴位组和miR-124低表达组小鼠在原平台象限停留时间较短,具有显著性差异(P<0.05);与miR-124高表达组相比,NSCs移植组、非穴位组和miR-124低表达组在原平台象限停留时间较短,具有显著性差异(P<0.05)。反向平台实验中,除SAMP8模型组和NSCs假移植组逃避潜伏期无明显改变之外,其余各组的逃避潜伏期随训练天数的增加有缩短趋势。两两比较结果显示:第7天,与SAMR1对照组相比,其余各小组的逃避潜伏期均有延长的趋势;第8天,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.05);与SAMP8模型组相比,NSCs移植组、穴位组和miR空载组逃避潜伏期明显缩短,具有统计学差异(P<0.05);与NSCs移植组相比,穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期有缩短趋势;与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期有延长趋势。第9天,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组逃避潜伏期明显增加,具有统计学差异(P<0.01);与SAMP8模型组相比,穴位组逃避潜伏期明显减少,具有统计学差异(P<0.05);与NSCs移植组相比,穴位组和miR-124高表达组逃避潜伏期有缩短趋势;与穴位组相比,非穴位组逃避潜伏期有延长趋势。可视平台实验结果显示,各组小鼠逃避潜伏期没有显著性差异。2.应用ELISA法检测Aβ40、Aβ42、β-分泌酶、γ-分泌酶、磷酸化Tau蛋白、Tau蛋白以及APP的表达水平,结果显示,与SAMR1对照组比较,SAMP8对照组中Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶的表达水平显著升高(P<0.01),Tau蛋白水平显著降低(P<0.01);与SAMP8对照组相比,NSCs移植组与穴位组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与穴位组相比,非穴组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著升高(P<0.05),Tau蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与miR对照组相比,miR-124高表达组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著降低(P<0.05),Tau蛋白表达水平显著升高(P<0.01),miR-124低表达组Aβ40、Aβ42、APP、p-Tau、β-分泌酶、γ-分泌酶表达水平显著升高(P<0.01),Tau蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。3.应用Western blot方法检测结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达升高,具有显著性(P<0.01);与SAMP8模型组比较,NSCs移植组、穴位组以及非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达降低,具有显著性(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达降低,具有显著性(P<0.05);与穴位组相比,NSCs移植组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP蛋白表达显著升高(P<0.05)。PCR结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8模型组小鼠海马组织中Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平升高,具有显著性(P<0.01);与SAMP8模型组比较,NSCs移植组、穴位组、非穴位组以及miR-124高表达组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平降低,具有显著性(P<0.01);与NSCs假移植组相比,NSCs移植组、穴位组、非穴位组以及miR-124高表达组NTelaglenastat抑制剂otch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平降低,具有显著性(P<0.01);与穴位组相比,NSCs移植组与非穴位组Notch1、Deltal、Hes1、Hes5、HERP基因水平升高Enfermedad de Monge,具有显著性(P<0.05)。4.PCR结果显示,与SAMR1对照组相比,SAMP8小鼠海马组织中miR-124基因水平降低(P<0.01);与SAMP8比较,NSCs移植组、穴位组和miR-124高表达组中miR-124基因水平均升高(P<0.01);与NSCs假移植组相比,穴位组中miR-124基因水平显著升高(P<0.05);与穴位组相比,NSCs移植组中miR-124基因水平降低(P<0.05);与miR对照组相比,miR-124高表达组miR-124基因水平显著升高(P<0.01),miR-124低表达组miR-124基因水平显著降低(P<0.01)。结论:三焦针法通过调节痴呆小鼠海马微环境miR-124基因,影响其靶向基因介导的Notch信号转导通路,改变NSCs海马组织局部微环境,促进NSCs更好地发挥其生物学功能,从而促进NSCs移植后SAMP8小鼠认知功能和记忆力的改善。