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旨在筛选和鉴定与鸭补体调节因子Vitronecbiotic indextin(Vn)结合的鸭疫里默杆菌(Riemerella anatipestifer,R.anatipselleck ZD1839estifer)外膜蛋白。在酵母表达鸭Vn及间接免疫荧光和免疫斑点杂交试验检测鸭疫里默杆菌结合Vn的基础上，以重组Vn为诱饵蛋白进行His pull-down及LC-MS/MS质谱鉴定，筛选外膜蛋白并进行生物信息学分析；原核表达候选外膜蛋白及截短片段，制备多克隆抗体，利用Far-Western blot验证与鸭Vn结合，并用间接ELISA测定肝素和氯化钠对结合的selleck NMR影响；测定Vn及抗外膜蛋白抗体对血清杀菌活性的影响。结果显示，鸭疫里默杆菌能在体外结合鸭Vn,经His-pull down、质谱鉴定及蛋白质结构分析，筛选出的外膜蛋白Omp45具有β桶状结构及7个暴露于细胞膜外的多肽环；成功原核表达Omp45及截短片段，制备的抗Omp45多克隆抗体间接ELISA效价超过1∶12 800,Western blot检测多克隆抗体可以与重组蛋白发生特异性反应；Far-Western blot及间接ELISA结果显示，Omp45、包含2个及以上细胞膜外多肽环的截短片段同时以肝素和氯化钠敏感方式结合Vn;血清杀菌试验结果显示，鸭疫里默杆菌对缺乏Vn的健康鸭血清的抵抗力降低，在抑制补体经典激活途径条件下抗Omp45抗体也能极显著降低细菌在鸭血清中的存活率(P<0.01)。结果表明，成功筛选并鉴定了与鸭Vn结合的鸭疫里默杆菌外膜蛋白Omp45,为进一步阐明鸭疫里默杆菌致病机制奠定了基础。

DNA甲基化是一种常见的表观遗传修饰,在多种生物学过程中发挥关键作用,如X染色体失活、基因表达、胚胎发育、基因组印记、癌症的发生发展等。胚胎干细胞是一类具有无限自我更新能力及分化潜能的多能干细胞,已有研究表明DNA甲基化与胚胎干细胞的多能性及分化能力密切相关。亚硫酸氢盐测序是检测DNA甲基化的金标准。然而,在重亚硫酸盐转化过程中,DNA双链会打开并分离,数据分析难以明确同一条DNA来源的两条链的甲基化状态。为了分析细胞中DNA两条链甲基化的对称性,本研究参考购买AG-221已有文献建立了发卡-全基因组甲基化测序(Hairpin whole genome bisulfite sequencing,HPWGBS)体系,利用发卡接头将DNA的正负链连接在一起,测序得到来源于同一条DNA双链的两条链的甲基化状态。本研究首先对亚硫酸氢盐转化的效率进行了检测,结果表明在亚硫酸氢盐浓度为0.5×,BS转化时间为9 h时,转化效率最高。本研究优化了发卡接头和测序接头的比例,使发卡接头的连接效率达到较高水平。扩增后的文库经过磁珠纯化和琼脂糖凝胶电泳分离,使得到的产物中发卡接头的连接效率达到90%以上。为了研究胚胎干细胞中DNA半甲基化的状态,分别使用超声打断和酶法打断获得的DNA进行HPWGBS建库,测序得到100G的数据。分析发现发卡接头的连接效率为91%,基因组比对效率为78%以上。Cp G位点的总体覆盖为95%,其中大于70%的Cp G测了5次以上,表明该体系比较完整地检测了基因组中的Cp G位点。对双链的DNA甲基化水平进行分析,结果表明胚胎干细胞中的全甲基化水平为26.30%,正链甲基化水平为7.82%,负链的甲基化水平为7.74%。在ESCs分化过程中,伴随着多能性基因和胚层分化相关基因的甲基化状态的调整。为了从单细胞水平明确ESCs分化过程中特定基因调控区域(主要为Cp G岛)甲基化状态的变化模式,研究根据多能性基因(如Fut4、Prmt5、Vgll4)和三胚层标志基因(如Tubb3、Meis1、Pdgfra、Bmp4、Hand1、Gata6、Klf5、Sox17、Foxa2、Gsc、CxcHepatic organoidsr4)的Cp G岛序列设计了用于重亚硫酸盐-PCR的引物。收集ESCs拟胚体分化和原始态-始发态(NPT)分化过程中的样品,提取基因组DNA,进行重亚硫酸盐转化后用于BS-PCR。每个样品的PCR产物等摩尔寻找更多混合后进行酶法打断成300 bp左右的片段,连接测序接头进行文库构建,以同时检测同一样品中多个靶标区域的DNA甲基化状态。目前,本研究可以实现多对引物同时放入反应体系进行BS PCR。综上所述,本研究1)建立并优化了HPWGBS体系,并用于研究ESCs中DNA半甲基化的分布情况,2)解析了ESCs随机分化和NPT过程中多能性和分化相关基因Cp G岛甲基化的转变模式。因此,为研究多种细胞、组织中DNA半甲基化的分布和功能提供了技术手段,为进一步理解ESCs多能性退出或者转变过程中的调控机制提供了参考。

目的:探究三维斑点追踪成像(3D-STI)评价乳腺癌患者化疗后早期右室心肌力学特性的临床应用价值。方法:选取102例接受吡柔比星化疗的乳腺癌患者为研究对象，分别于化疗前(T0)、化疗第2周期末(T1)、第6周期末(T2)进行3D-STI检查，化疗期间右心室射血分数(RVEF)<45%或下降10%以上定义为心脏毒性反应(AIC)。比较T0、T1、T2右室3D-STI参数，评估各参数对AIC的预测价值。结果:与T0时相比，T1时RVGAS、RVGLS绝对值均降低(P<0.05),T2时均进一步降低www.selleck.cn/products/mk-4827(P<0.05),RVEF在T2时降低(P<0.05);Logistic回归分析显示，T1selleck Puromycin时RVGAS、RVGLS绝对值均与AIC的发生具有相关性(P<0.05);ROC曲线显示，T1时RVGAS绝对值<27.Transplant kidney biopsy7%预测化疗结束后出现AIC的敏感度、特异度分别为77.80%、82.90%,对应的曲线下面积(AUC)为0.88,T1时RVGLS绝对值<19.96%预测化疗结束后出现AIC的敏感度、特异度分别为72.20%、88.20%,对应的AUC为0.84。结论:3D-STI参数可反映乳腺癌患者吡柔比星化疗后右室心肌力学早期变化，RVGAS、RVGLS绝对值可在一定程度上预测AIC风险。

荧光探针通过光学信号探测方法,具备灵敏度高、选择性好、响应快且对细胞损伤较小等优点,成为分析化学和生物研究领域的热点之一。在各种类型荧光探针中,有机小分子荧光探针以其独特的性质,如高的摩尔消光系数与荧光量子产率、光谱范围易于调节、分子结构易于合成与功能化修饰、良好的生物相容性等优点,一直以来受到研究人员的持续关注。近红外荧光探针由于具有深的组织穿透性、小的光损伤以及可避免生物自发荧光干扰的特点,对其构建和应用成为荧光成像与传感领域研究的热点;而近红外二区(NIR-Ⅱ,1000nm～1700 nm)荧光可提供更高质量的成像,如更高的分辨率、更高的信噪比和更深的穿透率等。本文第一个工作基于喹啉熔共轭罗丹明染D-Lin-MC3-DMA生产商料,设计构建检测汞离子的新型比色和比率近红外荧光探针QR。由于探针分子内的喹啉结构,QR呈现强的可见区荧光发射,当QR与汞离子发生特异性反应FG-4592体外后,螺内酰胺结构开环,可见区荧光减弱,并且近红外区的荧光明显增加,产生明显的比率双通道荧光响应。QR对Hg~(2+)具有的高选择性和高灵敏度(检测限为23 n M)。根据这些光谱测试特性,探针QR不仅能用于检测自来水样中的Hg~(2+),更重要的是,在活细胞中能以双通道比率荧光成像监测Hg~(2+)变化。针对NIR-Ⅱ有机染料在水中荧光淬灭问题,本论文第二个工作开发具备聚集诱导发光(AIE)性质的NIR-Ⅱ染料,即以氮杂氟硼二吡咯(Aza-BODIPY)为染料骨架,引入三苯胺(TPE)和四芳乙烯基(TPA)作为供体基团,设计合成了具有AIE性质的NIR-Ⅱ染料JF。染料JF有NIR-Ⅱ区域荧光发射,并具有明显的聚集诱导发光性质。通过包裹DSPE-PEG2000,得到生物兼容性好的染料纳米材料JF-NPs,该荧光材料有较高摩尔消光吸收为4.66×10~4 M~(-1)cm~(-1)及荧Laparoscopic donor right hemihepatectomy光量子产率可达8.2%,以及很高的光稳定性和化学稳定性。最后将此纳米材料JF-NPs通过尾静脉注射小鼠体内中,在相同条件下,材料在血管中的荧光成像信噪比(Sign Backgrounnd Radio,SBR)是ICG的1.94倍,因此JF-NPs能够作为NIR-Ⅱ活体成像研究的有效工具。

禽蛋是我国居民餐桌上的必备食品之一,因其高营养价值而广受人们欢迎。我国禽蛋产量总体稳步增长并位居世界首位,自2015年以来年产量保持在3000万吨以上,成为我国主要消费的禽产品之一。在蛋鸡饲养过程中会使用药物来预防或治疗各类疫病,但使用不当会导致药物残留在禽蛋中,进而影响人类身体健康。现有禽蛋中药物残留检测方法涵盖的范围小,种类少,因此,建立一种快速、高效检测禽蛋产品中多类药物残留的方法对保证禽蛋产品的质量安全、降低食用风险具有重要意义。本文利用液相色谱-三重四极杆串联质谱,基于Qu ECh ERS的前处理技术建立289种药物残留筛查识别方法,为快速检测禽Elexacaftor浓度蛋中跨类多种药物残留提供技术手段。主要研究内容及结果如下:基于QuEChERS法建立同时测定禽蛋中289种药物残留检测的液相色谱-三重四极杆串联质谱方法。包括β-受体激动剂类、四环素类、大环内酯类、磺胺类和喹诺酮类等17类药物。方法分别采用乙腈和酸性乙腈作为提取液,在含有柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液(p H≈4)的条件下涡旋振荡提取,经C18、PSA、Na_2SO_4净化处理后浓缩上机检测。利用液相色谱-四极杆飞行时间质谱构建17类289种药物的一级和二级质谱数据库。首先通过药物英文名称、化学式、CAS号和精确分子量等信息进行一级谱库构建,随后通过液相色谱-四极杆飞行时间质谱采集每个化合物碎片离子信息,构建高分辨二级质谱库,并与一级信息匹配,同时结合色谱信息中的保留时间,获得完整的质谱数据库。针对禽蛋中289种药物残留检测方法开展方法评价及验证。基于已建立的前处理方法和仪器方法,通过液相色谱-三重四极杆串联质谱对鸡蛋、鸭蛋开展高中低不同浓度的方法学评价实验,结果表明药物添加浓度在0.25～100μg/kg范围内,线性良好,回收率范围在51.07%-117.8%之间,RSD小于20%。利用液相色谱-四极杆飞行时间质谱,通过匹配质谱碎片信息对该方法进行验证,结果表明不同浓度的添加水平所获得的质谱碎片信息能够实现与数据库中信息匹配,其中有215种药物在0.25～100μg/kg内线性范围良好,回收率范围满足50%～130%,RSD小于20%,74种在100μg/kg浓度可获得二级谱图,回收率范围在51.79%-119.62%之间,RSD均小于20%。最后针对不同种类的禽蛋样品进行实际检测应用,结果表明1个鹌鹑蛋中检出磺胺二甲嘧啶,该样品通过三重四极杆串联质谱获得准确定量结果的同时,采用selleckchem Navitoclax四极杆飞行时间质谱对其质谱碎片信息进行了比对验证,证明了方法的准确性Testis biopsy和实用性。

目的 ：分析2型糖尿病（T2DM）患者低血糖恐惧感与情绪智力及心理弹性的关系。方法 ：随机选取2021年4月―2022年4月湖南省人民医院内分泌科收治的186例经历过低血糖的T2DM患者作为研究对象。对研究对象发放一般资料调查问卷、低血糖恐惧感量表Ⅱ（CHFSⅡ）、情绪智力量表（WLEIS）和心理弹性量表（CDRISC）调查患者的一般资料、低血糖恐惧感、情绪智力、心理弹性情况。分析T2DM患者低血糖恐惧感与情绪智力及心理弹性的相关性。结果 ：186例T2DM患者CHFSⅡ总分、WLEIS总分、CD-RISC总分分别为（45.05±7.49）、（60.68±7.15）、（53.38±6.73）。不同年龄、文化程度、工作情况、病程的T2DM患者CHFSⅡ、WLEwww.selleck.cn/products/plx5622IS、CDRISC量表得分比较，差异有统计学意义。PeaABT-263rson相关分析显示，T2DM患者情绪控制得分（r=-0.534）、自我情绪知觉得分（r=-0.581）、情绪运用得分（r=-0.521）、他人情绪知觉得分（r=-0.489）、WLEIS总分（r=-0.545）、坚韧得分（r=-0.583）、乐观得分（r=-0.562）、力量评分得分（r=-0.541）、CD-RISC总分（r=-0.568）与CHFSⅡ总分均呈负相关。多元线性回归分析结果显示，年龄、文化程度、病程、WLEIS总分、CD-RISC总分均是T2DM患者低血糖恐惧感的影响因素。结论 ：T2DM患者存在不同程度food microbiology的低血糖恐惧感，且情绪智力和心理弹性均与其存在相关性，可通过提高情绪智力和心理弹性水平改善T2DM患者的低血糖恐惧感。

目的：研究清热通络方通过P2X7R/NALP3/IL-1β炎症信号通路干预痛风性关节炎（GA）大鼠的作用机制。方法：60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组，模型组，秋水仙碱组，清热通络方低、中、高剂量组（1.63、8.14、16.3 g·kg~(-1)·d~(-1)）。除空白对照组、模型组外，各组大鼠预灌胃给药4 d。除空白对照组外，第4天灌胃后复制GA模型，造模后各时间段（4、6、12、24、48、72 h）检测大鼠踝关节肿胀率和热痛阈。给药7 d后取材，HE染色观察踝关节滑膜病理情况，生化法检测血清ATP水平，ELISA法测血清白细胞介素selleck化学（IL)-8、IL-37、IL-1β水平，免疫组化法测滑膜组织P2X7R、NF-κB(P50、P65）、NALP3、IL-1β蛋白表达，RT-qPCR检测PBMCs P2X7R、IL-1β mRNA表达，Western Blot检测PBMCs P2X7R、IL-1β蛋白表达。结果：造模后4 h，各组大鼠踝关节肿胀率升高，24 h达高峰后下降；热痛阈下降，24 h达最低后上升。造模72 h后，与模型组比SARS-CoV抑制剂较，秋水仙碱组和清热通On-the-fly immunoassay络方高剂量组肿胀率和热痛阈显著改善（P<0.05）。秋水仙碱及清热通络方各剂量组踝关节滑膜细胞炎症均有所改善；秋水仙碱组和清热通络方高剂量组血清ATP、IL-8、IL-37、IL-1β水平，PBMCs中P2X7R、IL-1β蛋白及mRNA表达，滑膜组织P2X7R、NALP3、NF-κB(P50、P65）、IL-1β蛋白表达均显著降低（P<0.05）。结论：清热通络方可能通过抑制GA大鼠P2X7R/NALP3/IL-1β信号通路缓解炎症，发挥治疗作用。

总结1例疑似蝶形针selleckchem Puromycin穿透手臂输液港导致病人化疗药外渗的紧急判断方法与护理经验。护理要点：通过设计模型进行体外两步骤试验，排除输液港底座被蝶形针穿透的可能，判断化疗药外渗由蝶形针插偏顺着港座外缘误入周边血管导致，解除了病人、家属以及医护人员的恐慌；通过体内两步骤试验，现场证实蝶形针穿透手臂输液港的FG-4592研究购买影像学误判。并结合化疗药外渗种类、药物特性、外渗范围等综合评估结果，给予不同时机局部冷敷、热敷等物理措施及药物外敷对症处理。化疗药物外渗后10 d病人带港肢体痊愈，避免了非计划性取港带来的损伤和纠cannulated medical devices纷，手臂输液港安全留置至化疗结束。输液港等完全植入性血管通路遇到不可解释的紧急问题时，需要联合医疗措施判断，但不能偏信诊断结论，必须运用丰富的专科知识和/或试验验证等方法，科学审慎地逐一排查，拟订方案查找根本原因，及时解决问题，确保病人安全，避免非计划性拔管事件发生。

目的 基于Th1/Th2免疫失衡与Wnt/β-连环蛋白(Wnt/β-catenin)信号通路探讨清温解毒方联合甲基泼尼松龙治疗系统性红斑狼疮(SLE)的效果。方法 选取2019年2月—2022年2月收治的SLE 120例，根据治疗方法不同分为联合组和常规组2组各60例。联合组给予清温解毒方联合甲基泼尼松龙治疗，常规组给予甲基泼尼松龙治疗。比较2组治疗前和治疗3个月后血清Th1/Th2细胞因子、外周血单个核细胞中Wnt/β-catenin信号通路因子mRNA相对表达量、SLE疾病活动度(SLEDAI)评分、中医证候积分，以及治疗3个月后临床效果和治疗期间不良反应。结果 治疗3个月后，血清干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)、IFN-γ/白细胞介素-4(IL-4)、IL-12/白细胞介素-10(IL-10)2组均高于治疗前，且联合组高于常规组；血清IL-4、IL-10,外周血单个核细胞中Wnt3a、β-catenin mRNA相对表达量和SLEDAI评分、中医证候积分2组均低于治疗前，且联合组低于常规SGLT抑制剂组(P<0.05)。治疗3个月后，联合组总有效率高于常规组(P<0.05)。治疗期间，2组不良反应总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 清温解毒方联合甲基泼尼松龙治疗Marine biomaterialsSLE患者能通过纠正Th1/Th2免疫失衡、CP-456773试剂调节Wnt/β-catenin信号通路加快临床症状消退，提高治疗效果，且安全性良好。

胃癌是一种危及人类健康的恶性肿瘤,通常发生于胃黏膜上皮细胞,胃癌在全球范围内患病和死亡率都很高。据统计,全世界的胃癌患者有48.6%在中国。胃癌是多种发展较快的癌症之一。目前胃癌的治疗手段依旧以手术切除和化疗为主,但由于化疗毒副作用明显,且癌细胞容易形成耐药性,导致晚期癌症患者预后较差。深入研究胃癌的治疗机制,开发针对胃癌的有效药物已成为关键性问题。虽然已有靶向药物问世,但是应用于临床仍有很大的局限性。中药在癌症治疗中表现出重要的作用。临床研究发现,参芪十一味颗粒对胃癌患者具有良好的治疗效果并能显著提升胃癌患者的生活质量,但是参芪十一味颗粒抗胃癌的作用机制PR-171研究购买尚不明确。因此,对参芪十一味颗粒抗胃癌的主要作用机制进行更加深入的研究,对胃癌的治疗以及新药研发等有重要的意义。因此,本论文基于生物信息学和转录组学的方法对参芪十一味颗粒抗胃癌的潜在作用机制进行了探索性研究。本论文通过生物信息学研究发现参芪十一味颗粒不仅可以通过介导胃癌的免疫系统来影响胃癌的发生发展,同时也会影响胃癌的转录因子,进而影响转录因子的上下游基因进而影响胃癌的发展。借助生物学实验验证得到的部分活性成分对胃癌信号通路的影响,药代动力学较强的对接活性成分会通过影响信号通路影响胃癌的发生发展。本文主要研究内容及研究结果如下:(1)利用中医体系药理学数据库(TCMSP)鉴定出参芪十一味颗粒的98种活性化合物和其对应的241种蛋白质靶点,从Dis Ge NET数据库中鉴定出3932个胃癌相关蛋白。182个重叠蛋白靶标代表了参芪十一味颗粒在胃癌中的潜在治疗靶点。基因本体(GO)富集分析表明,重叠靶点显著富集于调节凋亡过程、程序性细胞死亡和免疫过程。京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析表明参芪十一味颗粒可以通过调控肿瘤坏死因子(TNF)和PI3K-Akt信号通路治疗胃癌。分子对接结果显示参芪十一味颗粒中所含多种活性成分与参与免疫调节的几种关键蛋白质有较强的结合能力,包括IKBKB、TNFSF13B、IL2、PRKCB和SIRT1。这部分结果显示参芪十一味颗粒的抗胃癌活性可以通过调节参与免疫过程的蛋白质来介导。(2)通过R语言分析胃癌单细胞RNA测序数据(GSE174237),获得340个显著差异表达基因。从差异表达基因的蛋白质-蛋白质相互作用网络分析发现十个关键蛋白(FN1、COL1A1、ITGB1、COL1A2、THBS2、BGN、NOTCH1、SDC1、SPP1、FOS)。进一步挖掘发现三个与胃癌发生发展相关的转录因子(NFE2L2、FOS和PPARG)可调控这十个关键蛋白。重要的是,这三个转录因子与参芪十一味颗粒中含有的活性化合物有较强的结合能力。分析结果表明参芪immunocytes infiltration十一味颗粒可调节胃癌相关的上游转录因子进而对癌症的治疗产生重要的作用。(3)选取人参二醇、白桦脂酸和芝麻素对TNFɑ信号通路的作用进行实验研究。通过生物学实验验证人参二醇和白桦CHIR-99021纯度脂酸与TNFɑ信号通路中TNFɑ与TNFR1蛋白结合的效果。实验结果显示,人参二醇和白桦脂酸可以干扰TNFɑ与TNFR1的结合,从而可能调控TNFɑ信号通路。人参二醇对TNFɑ信号通路影响较大,白桦脂酸对TNFɑ信号通路的影响次之。实验结果证明了参芪十一味颗粒中的活性小分子抗胃癌的药理机制。