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单碱基编辑技术是针对单个碱基进行替换的基因编辑策略,根据不同的单切口Cas9(Cas9n)脱氨酶分为两个工作系统。其中,嘌呤碱基编辑器(Adenine Base EditProbiotic bacteriaors,ABEs)是将编辑活性窗口内的腺嘌呤(A)替换为鸟嘌呤(G),从而将C·G至T·A遗传突变回复纠正。与传统的CRISPR/Cas9基因编辑策略相比,ABEs工作系统基因治疗的效果改善,精确性和安全性进一步提高,具备广泛的应用能力和较高的发展前景。作为一种强大的基因编辑工具,碱基编辑系统也存在着许多技术缺陷,例如靶向范围小、精准性差、编辑活性低、存在脱靶现象等。本研究利用宏基因组分析得到了一种新型腺苷脱氨酶,通过对新型碱基编辑器的突变和改造,进一步提高编辑活性、扩大活性窗口,是碱基编辑工具开发和优化工作的有益尝试。首先,将新型腺苷脱氨酶5V1替换TadA8e脱氨酶,构建5V1-ABE新型碱基编辑器并利用哺乳动物细胞系来检测编辑系统的工作特性。与ABE8e碱基编辑器相比,5V1-ABE编辑器的编辑活性更低,编辑窗口范围更小。因此,根据5V1与TadA8e蛋白同源建模结果,本研究选择Q150/Q151/P152三个靶点对5V1-ABE进行单点突变改造和组合突变改造,得到一种性能更优异的碱基编辑器5V1-GMR-ABE。5V1-GMR-ABE的S63845核磁编辑窗口与5V1-ABE相同为A3-A8,活性窗口内平均编辑效率提高了1.5～3.4倍,并且没有sgRNA依赖性DNA脱靶的产生。它比ABE8e的编辑范围更小,在A5、A6和A8位的编辑活性媲美ABE8e。其次,将新型脱氧腺苷脱氨酶和TadA8e脱氨酶插入到Cas9n蛋白内部的相关耐受位点,构建新型融合表达的碱基编辑器。在测试的11个耐受位点中,1249位点的结果最优。与腺苷脱氨酶位于N-末端的对照编辑器相比,位于1249位点Laduviglusib体内融合表达的碱基编辑器的编辑窗口发生改变,编辑活性提高。其中,ABE8e-1249变体编辑活性提升最为明显,而5V1-1249-ABE和5V1-GMR-1249-ABE突变体的改善效果减弱。此外,本课题研究了ABE8e在小鼠肝脏中进行体内编辑的有效性,搭建了使用脂质纳米颗粒(Lipid Nanoparticle,LNP)体内递送碱基编辑器及sgRNA的可行方法,可用于在体内验证更多新型碱基编辑器的工作特性。综上所述,本研究成功开发新型ABE工具,实现了在哺乳动物细胞的高效编辑,进一步丰富碱基编辑工具库。研究证实LNP介导的ABE8e在小鼠肝脏内高效编辑,为家族性高胆固醇血症提供一种有价值的治疗策略。

背景与目的:体细胞突变在整个肿瘤进化过程中逐步积累。肿瘤基因组表现出特定突变模式,称为突变特征,其反映了外源性和内源性突变过程的印迹。载脂蛋白 B mRNA 编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide,APOBEC)相关突变特征,即SBS2和SBS13,在至少22种类型的肿瘤中存在。据报道SBS2和SBS13在食管鳞癌中几乎普遍存在,这表明APOBEC突变模式在食管鳞癌中是一个必不可少的强制性过程。此外,SBS2和SBS13存在于大多数食管鳞癌样本中,占总突变负荷的25%,揭示了 APOBEC突变模式是食管鳞癌进化过程中的关键一步。APOBEC突变模式以TCW序列中C>T或C>G的改变(其中W指A或T)为特点。APOBEC3亚家族成员可催化胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶,对于APOBEC突变模式的形成具有重要作用,但是其中哪一个成员在食管鳞癌中作为APOBEC突变模式的主要来源目前仍然是未知的。免疫治疗已在食管鳞癌中取得较大进展,已成为局部晚期或转移性患者的一线治疗方案。Y-27632体外肿瘤免疫微环境的特点是患者免疫治疗疗效分层的先决条件。APOBEC突变模式的生物学功能在不同类型肿瘤中差异较大,但它在食管鳞癌中对肿瘤免疫原性和免疫治疗应答中的作用及其机制尚未得到充分了解。方法:在本研究中,我们从三个已发表的队列中收集了 169例食管鳞癌患者的配对的多组学数据,包括体细胞突变数据、bulk转录组数据和单细胞转录组数据。为了剖析APOBEC突变模式对肿瘤免疫浸润的影响,我们使用体细胞突变数据进行突变SAG小鼠富集分析,利用ESTIMATE和TMEscore算法对bulk RNA测序(RNABiosynthesized cellulose sequencing,RNA-seq)数据进行肿瘤微环境反卷积计算,并使用单细胞RNA测序(single-cell RNA sequencing,scRNA-seq)数据和多重免疫荧光进行验证。更重要的是,我们通过T>C和T>G的突变在突变碱基上下游20bp的碱基序列以及APOBEC3亚家族各个成员的表达情况确定了食管鳞癌中介导APOBEC突变模式的主要突变来源,阐明了食管鳞癌中APOBEC突变模式激活免疫的潜在分子机制。结果:我们发现APOBEC突变模式的富集可使食管鳞癌患者的总生存时间(overall survival,OS)延长,造成这种结果的原因可能是由于较高的抗肿瘤免疫细胞浸润,免疫检查点表达和抗肿瘤免疫相关通路的富集,包括干扰素(interferon,IFN)信号通路,固有免疫系统和适应性免疫系统的活化。A3A的活性升高对APOBEC突变模式至关重要。从机制上讲,A3A的表达上调会加剧胞质中双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)的积累,从而激活 cGAS-STING 通路。同时,使用肿瘤免疫功能异常和免疫逃避(Tumor Immune Dysfunction and Exclusion,TIDE)算法预测A3A的表达水平与免疫治疗应答之间的关系,发现A3A高表达的患者免疫治疗效果好。另外我们在一个临床队列中验证了这个结论。这些结果系统阐明了APOBEC突变模式在食管鳞癌中的临床相关性、免疫学特征、免疫治疗的预后价值以及潜在机制,在临床应用上具有促进临床决策的巨大潜力。结论:总之,我们使用全基因组/全外显子组数据(whole genome/exome sequencing,WGS/WES),bulk转录组和单细胞转录组数据以及功能实验阐明了APOBEC突变模式是否激活免疫及其潜在的具体机制。同时,我们揭示了A3A作为一种新的生物标志物,用于预测食管鳞癌免疫治疗效果。

目的 基于公共数据库分析驱动蛋白家族成员26B(kinesin family member 26B, KIF26B)在膀胱癌中的表达水平，并探讨沉默KIF26B对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 基于GEO和UaLcan数据库分析KIF26B在膀胱癌中的表达及与患者生存预后的关系；实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和Western blot法检测膀胱癌细胞系(T24、J82)及膀胱正常上皮细胞SV-HUV-1中KIF26B的表达水平；将si-KIF26B、si-NC片段转染至T24细胞，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法、Transwell实验和划痕实验检测沉默KIF26B后对T24细胞增殖、侵袭和迁移的影响；Western blot法检测沉默KIF26B后丝裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase, MEK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(phosphorylated mitogen-actisandwich immunoassayvated protein kinase NN2211浓度kinase p-MEK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase, p-ERK)蛋白的表达水平。结果 KIF26B在膀胱癌组织中高表达，KIF26B高表达患者的预后更差(P<0.05)。KIF26B在膀胱癌细胞系T24、J82中的表达水平显著高于膀胱正常上皮细胞SV-HUV-1(P<0.05)。沉默KIF26B基因后，MTT、Transwell和划痕实验结果显示，T24细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显下降(P<0.05);沉默KIF26B后，E7080半抑制浓度T24细胞中p-MEK、p-ERK蛋白的表达下调(P<0.05),而MEK、ERK蛋白无明显变化(P>0.05)。结论 KIF26B在膀胱癌组织和细胞中高表达，与患者预后不良相关，沉默KIF26B可抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移，其机制可能通过MEK/ERK通路发挥作用。

目的 基于公共数据库分析驱动蛋白家族成员26B(kinesin family member 26B, KIF26B)在膀胱癌中的表达水平，并探讨沉默KIF26B对膀胱癌细胞增殖、侵袭、迁移的影响。方法 基于GEO和UaLcan数据库分析KIF26B在膀胱癌中的表达及与患者生存预后的关系；实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)和Western blot法检测膀胱癌细胞系(T24、J82)及膀胱正常上皮细胞SV-HUV-1中KIF26B的表达水平；将si-KIF26B、si-NC片段转染至T24细胞，采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)法、Transwell实验和划痕实验检测沉默KIF26B后对T24细胞增殖、侵袭和迁移的影响；Western blot法检测沉默KIF26B后丝裂原活化蛋白激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase, MEK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶(phosphorylated mitogen-actisandwich immunoassayvated protein kinase NN2211浓度kinase p-MEK)、细胞外调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinases, ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase, p-ERK)蛋白的表达水平。结果 KIF26B在膀胱癌组织中高表达，KIF26B高表达患者的预后更差(P<0.05)。KIF26B在膀胱癌细胞系T24、J82中的表达水平显著高于膀胱正常上皮细胞SV-HUV-1(P<0.05)。沉默KIF26B基因后，MTT、Transwell和划痕实验结果显示，T24细胞的增殖、侵袭、迁移能力明显下降(P<0.05);沉默KIF26B后，E7080半抑制浓度T24细胞中p-MEK、p-ERK蛋白的表达下调(P<0.05),而MEK、ERK蛋白无明显变化(P>0.05)。结论 KIF26B在膀胱癌组织和细胞中高表达，与患者预后不良相关，沉默KIF26B可抑制膀胱癌细胞增殖、侵袭和迁移，其机制可能通过MEK/ERK通路发挥作用。

目的 研究Sigirr基因缺失小鼠在慢性肾病(CKD)并发肾间质纤维化(RIF)中的作用和机制。方法 利用PCR鉴定正常基因型(Sigirr~(+/+))小鼠和Sigirr基因缺失(Sigirr~(-/-))小鼠。含0.2%高腺嘌呤饲料喂养小鼠，连续喂养12周，以建立慢性肾脏损伤并发RIF模型。收集小鼠眼框静脉血以检测肾功能；利用HE染色分析肾脏组GSI-IX试剂织病理变化，通过Masson染色观察肾脏纤维化程度，利用IHC和Western blot检测白细胞介素(IL)-1β、MyD88和NF-κB等信号分子变化，同时观察转化生长因子(TGF)-β1、E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 肾功能检测结果显示高腺嘌呤喂养小鼠的血清肌酐和尿素氮较对照组增加；HE和Mselleck产品asson染色结果显示：与Sigirr~(+/+)小鼠比较，Sigirr~(-/-)小鼠的肾组织中，炎症细胞浸润和胶原纤维沉积更明显。IHC和Western blot结果显示IL-1β及其下游的MyD88表达增加，p-P65水平显著增加；Sigirr~(-/-)小鼠的肾组织中IL-1β、MyD88、p-P65等变化较Sigirr~(+/+)小鼠显著；同时TGF-β1显著增加，且Vimentin的表达增加，E-cadherin的表达明显降低，Western blot检测Vimentin、E-cadherin结果与免疫组化一致，且α-SMA也显著升高。结论 高腺嘌呤饮食可以建立CKD并发RIF小鼠模型。Sigirr的缺失增加肾间质IL-1β介导NF-κB信号通路的活化，促进TGF-β1表达，medicinal mushrooms有利于上皮-间质细胞转分化相关RIF过程。

目的:探究放疗前预后营养指数对鼻咽癌病人放疗期口腔黏膜炎发生风险的预测价值。方法:选择我院2020年7月—2022年6月收治的鼻咽癌放疗病人108例为研究对象，采用自制一般资料问卷收集病人临床资料，统计放疗前预后营养指数、放疗期出现口腔黏膜炎的病人例数并实施分级，经单因素、多因素Logistic回归分析筛选鼻咽癌病人放疗期口腔黏膜炎发生的危险因素，绘制受试者工作特征曲线，分析放疗前预后营养指数对鼻咽癌病人放疗期口腔黏膜炎发生风险的预测效能。结果:放疗期出现口腔黏膜炎病人63例，其中1级、2级34例，3级、4级29例。Logistic回归分析结果显示，鼻咽癌病人放疗期口腔Named entity recognition黏膜炎的危险因素为吸烟史、同步化疗、口腔卫生状况较差、Apoptosis抑制剂口腔pH值≤7、未使用口腔黏膜保护剂、放疗前预后营养指数<45(P<0.05)。受试者工作特征曲线显示，受试者工作特征曲线下面积为0.751,95%置信区间为0.647～0.855,约登指数最大值为0.684。放疗前预后营养指数最佳截断值为48.64,灵敏度、特异度分别为0.827www.selleck.cn/products/Docetaxel(Taxotere),0.857。结论:鼻咽癌病人放疗期口腔黏膜炎发生风险较大，且其危险因素复杂，放疗前预后营养指数对鼻咽癌病人放疗期口腔黏膜炎发生风险有重要的预测价值。

目的 探讨高血压患者的肾素活性（plasma renin activity,PRA）水平和24 h收缩压及肱踝动脉脉搏波传导速度（pulse wave velocity,PWV）的关系。方法 选择2018年1月至2021年11月贵州医科大学附属医院高血压科住院的原发性高血压患者297例，按患者PWV值水平高低等分为PWV≤1594 cm/s组、1602≤PWV≤1892 cm/s组、>1892 cm/s组。分析PWV与PRA、24 h动Secondary autoimmune disorders态血压各参数的关系。结果 三组间年龄、空腹血糖、PRA、24 h平均收缩压（m SBP）、日间平均收缩压（dSBP）、夜间平均收缩压（nSBP）有显著差异。随着PWV值在三组间PD-0332991采购增加，年龄、空腹血糖、24 h mSBP、dSBP、nSBP亦在三组KD025价格间逐渐升高（P<0.05）。与PWV≤1594组相比，PWV>1892组PRA水平明显降低（P<0.05）。Pearson相关分析显示，PRA与PWV值呈负相关（r=-0.125,P<0.05），空腹血糖、年龄与PWV值呈正相关（r=0.164、0.436，均P<0.01）。PRA与24 h mSBP，、dSBP、nSBP呈负相关（r=-0.145、-0.144、-0.155，均P<0.05），而PWV与24 h mSBP,dSBP、nSBP呈显著正相关（r=0.391、0.401、0.353，均P<0.01）。二元Logistic回归分析显示年龄和PWV对高血压患者动态血压达标有显著影响（OR=0.997、1.091，均P<0.01）。结论 高血压患者肾素活性水平越低、24 h收缩压越高，患者动脉弹性越差。PWV值和年龄是高血压患者24 h血压不达标的独立影响因素。

目的 研究长链非编码RNA FEZ家族锌指1-反义RNA 1(lncRNA FEZF1-AS1)调控zeste同源物增强子2(EZH2)对肺间质细胞增殖、迁移、侵袭能力及上皮细胞-间质转化(EMT)的影响及其作用机制。方法 将人肺腺癌细胞系A549分为对照组(control)和模型组[model,用转化生长因子β1(Twww.selleck.cn/products/gdc-0068GF-β1) 20 ng/mL作用48 h,诱导成为肺间质细胞]。用Western blot检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。RT-qPCR检测细胞中lncRNA FEZF1-AS1和EZH2基因表达。转染组细胞分Salivary microbiome为转染si NC组、si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组和si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZH2组。CCK-8法检测细胞增殖、细胞划痕检测细胞迁移、Transwell小室法检测细胞侵袭；用Western blot检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、vimentin及EZH2的蛋白表达，用RNA免疫沉淀(RIP)测定FEZF1-AS1与EZH2的直接结合作用。结果 与对照组比较，模型组E-cadherin的蛋白表达水平减少(P<0.05);N-cadherin及vimentin的蛋Erastin化学结构白表达水平升高(P<0.05);与对照组比较，模型组lncRNA FEZF1-AS1与EZH2基因的表达水平明显升高(P<0.05);与si NC组相比，si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组细胞增殖、迁移、侵袭能力降低，E-cadherin蛋白表达升高，N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达降低(P<0.05);与si lncRNA FEZF1-AS1+OE vector组比较，si lncRNA FEZF1-AS1+OE EZHZ组细胞增殖、侵袭、迁移能力升高，E-cadherin蛋白表达降低，N-cadherin、vimentin、EZH2蛋白表达升高(P<0.05);RIP实验进一步证实了lncRNA FEZF1-AS1与EZH2具有结合作用。结论 LncRNA FEZF1-AS1通过调控EZH2促进肺间质细胞增殖、侵袭、转移和EMT过程。

目的 调查临床上纳米白蛋白结合型紫杉醇(nanoparticle albumin-bound paclitaxel,Nab-P)和传统溶剂型紫杉醇化疗相关不良反应的发生率、严重程度，分析纳米白蛋白给药系统改善化疗不良反应的效AM-2282果。方法 采用医院信息系统回顾性调查2019年7月—2021年12月在江南大学附属医Plant bioassays院肿瘤科确诊并接受Nab-P化疗的癌症患者326例和紫杉醇化疗者303例，从医疗电子病历和护理记录单中分别提取Nab-P和紫杉醇化疗相关不良反应的信息以及护理措施，探讨纳米白蛋白给药系统改善化疗不良反应的效果及临床现状。结果 Nab-P和紫杉醇相关恶心、呕吐、过敏反应、骨髓抑制、肝损伤、静脉炎等不良反应的发生率及严重程度均存在显著的差异性(P<0.05)。Nab-PNVP-TNKS656临床试验相关骨髓抑制发生率及严重程度高于紫杉醇，其余不良反应均低于紫杉醇。感觉异常的发生率不具有统计学差异。结论 除骨髓抑制外，Nab-P相关不良反应明显低于传统紫杉醇。针对Nab-P化疗的病人，在临床治疗过程中，应根据其不良反应发生的特点，更加关注患者骨髓抑制的发生情况。

目的:探究四逆泻心汤治疗非小细胞肺癌化疗相关胃肠反应的VX-445临床疗效。方法:选取60例非小细胞肺癌患者为研究对象，随机分为对照组和治疗组，每组30例。对照组采用静脉滴注顺铂注射液、多西他赛注射液、盐酸昂丹司琼注射液及AZD1152-HQPA说明书口服醋酸地塞米松片治疗，治疗组在对照组基础上给予四逆泻心汤治疗。比较两组患者恶心呕吐情况、中医症状积分、血清胃肠激素水平、化疗舒适度。结果:治疗组恶心呕吐总有效率为96.67%(29/30),高于对照Olfactomedin 4组的86.67%(26/30),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，两组患者中医症状积分均较治疗前升高，且治疗组高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者胃泌素(GAS)水平均低于治疗前，且治疗组优于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者胃动素(MTL)水平均高于治疗前，且治疗组高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组舒适度评分高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:四逆泻心汤能显著改善非小细胞肺癌化疗引起的胃肠不良反应。