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研究背景:不良孕产史发生率约占临CX-5461研究购买床妊娠的20%,其中出生缺陷和复发性流产是临床上最常见的类型,其病因和机理尚不完全清楚。随着分子生物学与遗传学检测技术的发展,越来越多的出生缺陷和复发性流产患者得到明确诊断。我国新生儿出生缺陷发生率约为6%,染色体异常是其已知的主要病因。降低出生缺陷的主要手段是产前筛查和产前诊断,染色体核型分析仍然是产前诊断的金标准。近年来,随着染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)、拷贝数变异测序(copy number variation sequencing,CNV-seq)等分子遗传技术的应用,使得许多核型分析无法检出的染色体微重复/微缺失得以诊断。虽然新技术的应用大大提高了产前染色体异常检出率,但同时也增加了产前遗传咨询的难度。产前检出的拷贝数变异(copy number variations,CNVs),特别是高频致病CNVs的基因型-表型关系有待进一步深入研究。复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)发生率占临床妊娠的2%～5%,其病因十分复杂。遗传学因素在RSA中起着关键作用,当前临床上针对RSA常用的遗传学病因筛查主要是流产组织CNVs检测和父母染色体核型分析。然而,即使经过全面病因排查,仍有约50%的RSA患者发病原因不明。近年来,虽然全外显子测序(whole exome sequencing,WES)技术被用于探索RSA的遗传学病因,但研究多单独集中父母或者流产物,缺乏对RSA家系整体评估。此外,由于WES技术的局限性无法检测基因组非编码区。随着测序技术的发展,全基因组测序技术(whole genome sequencing,WGS)在癌症和精准医学领域被用于探索各类复杂疾病的病因,但WGS对于RSA遗传学病因的研究有待进一步深入。研究目的:1.研究CMA与核型分析在产前诊断中检测结果差异性及对妊娠结局影响,评估二者联合应用的临床价值。2.研究产前检出高频致病CNVs的基因型-表型关系。3.基于高通量测序技术对于RSA流产组织遗传学异常检出结果,研究RSA不同高危因素与流产组织CNVs之间的关系。4.基于trios-WGS对RSA家系检测结果,探索RSA的遗传学病因,发掘与RSA相关候选基因,为RSA夫妇再妊娠的遗传咨询及基因功能研究提供基础。研究方法:本研究纳入2018年10月至2022年6月于吉林大学第一医院生殖产前中心行羊膜腔穿刺术单胎孕妇,共计6785例。所有孕妇均抽取30 m L羊水,其中20 m L羊水进行原代培养7-10天后进行细胞收获、染色体制片、G显带及核型分析;另外10 m L羊水提取基因组DNA后于Cyto Scan 750K Array染色体微阵列芯片系统检测全基因组拷贝数变异,最后通过SPSS 21.0软件比较两种技术检测染色体异常一致性。收集1345例羊水核型分析未见异常且CMA检出微重复/微缺失的单胎孕妇,通过基于QT编写的基因芯片软件对所有重复/缺失片段绘制CNVs分布图;结合文献检索归纳高频致病CNVs位点产前表型,基于DECIPHER数据库(https://decipher.sanger.ac.uselleckchem Smoothened Agonistk/browser)绘制高频致病CNVs模式图,分析其基因型-表型关系,筛选相关致病基因。收集2016年10月至2022年9月到我中心就诊的RSA夫妇流产组织共计1939例。提取流产组织基因组DNA后构建文库,在Proton测序平台上进行高通量测序,分析流产组织中检出的非整倍体及CNVs与RSA不同高危因素的关系。收集105个样本亲缘关系质控合格的RSA家系,提取RSA夫妇外周血及流产组织基因组DNA后,使用BGISEQ-500进行PE100全基因组测序。生物信息学分析应用人类表型本体(Human Phenotype Ontology,HPO)数据库、OMIM及小鼠基因组信息(Mouse Genome Information,MGI)数据库,整理与RSA相关的候选基因列表,筛选出RSA候选基因并进行Sanger验证。通过RCSB PDB、Alpha Fold Protein Structure database、Py MOL等数据库/软件绘制野生型和突变型蛋白模型结构图,分析候选基因突变对蛋白构象影响。研究结果:1.6785例羊膜腔穿刺孕妇中核型分析检出染色体异常634例,占9.34%。CMA检出染色体异常1280例,占18.87%。遗传学变异总检出率CMA相比核型分析增加了9.53%。2.随着孕妇年龄的增加,染色体数目异常检出率升高,致病/可能致病CNVs检出率降低(P<0.05),染色体结构异常及意义不明CNVs检出率在各年龄组间差异无统计学意义(P>0.05)。两项指征组及三项指征组的染色体数目异常检出率均高于单项指征组,差异有统计学意义(P<0.05),但染色体结构异常、致病/可能致病及意义不明CNVs在不同产前诊断指征数量分组中检出率无差异(P>0.05)。3.CMA与核型分析对于非整倍体检出率一致,但对于染色体嵌合体均存在不同程度漏诊,联合应用有利于提高嵌合体异常的检出率。CMA在染色体平衡性结构重antibiotic-bacteriophage combination排、染色体多态性、额外小标记染色体中能够额外检出致病/可能致病CNVs。4.胎儿核型正常但携带致病/可能致病及意义不明CNVs时,CNVs遗传自父母时终止妊娠率低,CNVs为新发突变时,终止妊娠率高(P<0.001)。5.1q21.1微重复产前表型与心血管系统畸形、鼻骨发育不良和NT增厚等有关。心血管系统异常可能与GJA5和GJA8基因拷贝数增加有关。1q21.1微缺失产前表型与泌尿系统异常、心脏畸形和NT增厚等有关。6.16p13.11微重复产前表型以NT增厚为主。16p11.2微缺失产前表型与脊柱/肋骨异常、心血管系统畸形和软指标异常等有关。其中,脊柱/肋骨发育不良可能与TBX6基因有关。7.17q12微重复产前表型与十二指肠梗阻,心脏畸形等有关。十二指肠梗阻可能与HNF1B基因有关。8.22q11.2微重复产前表型与NT增厚、侧脑室增宽等有关。22q11.2微缺失产前表型与心脏结构畸形、足内翻、羊水过多、NT增厚等有关。心脏结构畸形可能与TBX1基因有关。9.高通量测序对RSA流产组织遗传学异常检出率为50.03%。RSA胚胎染色体异常以非整倍体为主,以16-三体,X-单体和22-三体为主。流产组织片段性重复/缺失中,8号染色体频次最高。10.4p16.2p16.3、8p22p23、8q23q34、15q26和17p13位点CNVs可能与RSA相关。11.RSA流产组织中CNVs检测结果显示,高龄组、早期组染色体异常检出率均高于非高龄组、晚期组,差异有统计学意义(P<0.05)。不同受孕方式(自然受孕与辅助生殖)、复发流产次数、胚胎性别与RSA流产组织染色体异常相关性还有待进一步研究。12.Trios-WGS对RSA家系中遗传学异常总检出率为38.1%,致病性CNVs检出率为29.52%,致病性SNV检出率为8.57%。Trios-WGS对于染色体非整倍体检出率与高通量测序一致,对于亚显微CNVs检出率高于高通量测序,还可以检测单亲二体。13.Trios-WGS结合RSA相关候选基因列表筛选出与RSA相关9个候选基因,其中胚胎源性2个(TLE3、SLC35A2);母源性5个(PPP2R3C、TRIM37、SYCP3、CBX2、ATP7B);父源性2个(NME8、CFAP65)。蛋白三维结构预测模型显示,SYCP3、ATP7B和NME8基因突变改变了蛋白的结构。结论:1.CMA与核型分析联合更有助于提高产前遗传学异常检出率;CMA可以在染色体平衡性结构重排、多态性及额外小标记染色体胎儿中的检出致病性的微重复/微缺失。2.产前1q21.1微重复心血管系统畸形可能与GJA5和GJA8基因拷贝数增加有关;16p11.2微缺失中脊柱/肋骨发育不良可能与TBX6基因有关;17q12微重复中十二指肠梗阻主要与HNF1B基因有关;22q11.2微缺失中心脏结构畸形主要与TBX1基因有关。3.高通量测序技术对RSA流产组织染色体异常检出率为50.03%,以16-三体,X-单体和22-三体为主。RSA流产组织染色体异常与母亲年龄、流产孕周等因素有相关性。4.WGS对RSA家系中致病性SNV检出率为8.57%。检出9个与RSA相关候选基因,其中胚胎源性2个(TLE3、SLC35A2);母源性5个(PPP2R3C、TRIM37、SYCP3、CBX2、ATP7B);父源性2个(NME8、CFAP65)。

目的研究肠道菌群紊乱对次级胆汁酸代谢、Th17/Treg免疫平衡、自身炎症水平、SLE疾病活动度的影响以及解毒祛瘀滋阴方的疗效机制。方法1.动物实验:将42只MRL/lpr狼疮样小鼠分为模型、激素、中药、中西药、3-oxoLCA、isoalloLCA 及 3-oxoLCA+isoalloLCA 等 7 个组(6 只/组),另选 6 只 MRL/MpJ 小鼠做为正常对照。于第7周开始采取相应药物干预,持续7周。分析脾脏和淋巴结指数,肾脏病理切片进行HE染色、免疫组化C3、免疫荧光IgG分析;ELISA检测血清中抗ds-DNA、ANA、IL-17A和IL-6含量,流式检测脾脏中Th17、Treg细胞比例并计算Th17/Treg 比值;RT-qPCR检测脾脏中ROR-γt、Foxp3 mRNA表达水平及结肠中3α/β-HSD mRNA表达水平;16sRNA基因测序检测小鼠肠道菌群变化;脂质组学检测粪便中3-oxoLCA和isoalloLCA 含量。2.次级胆汁酸3-oxoLCA和isoalloLCA分别调节Th17、Treg分化的体外细胞实验:从MRL/lpr小鼠脾脏分选Na?ve CD4+T细胞,在刺激其分化为Th17或Treg细胞条件下培养,分为激素组、中药组、3-oxoLCA和isoalloLCA组,采用相应药物进行干预96 h后,流式检测Th17、Treg 比例,Western Blot和RT-qPCR分别检测ROR-γt、Foxp3表达和mRNA转录水平。3.肠道菌群调控3-oxoLCA和isoalloLCA代谢的菌群移植实验:12只MRL/lpr小鼠分为模型和SLE粪菌组,另选6只MRL/MpJ小鼠作为正常对照。于第4周用抗生素进行肠道预处理隔日一次,持续3次,于第5周进行菌群移植,隔日一次,持续5次。分析脾脏及淋巴结指数;肾脏病理切片进行HE染色、免疫组化C3、免疫荧光IgG分析;ELISA检测血清中抗ds-DNA、IL-10和TNF-α含量;RT-qPCR检测结肠中3α/β-HSD mRNA表达;16sRUbiquitin-mediated proteolysisNA基因测序检测小鼠肠道菌群的变化;脂质组学检测粪便中3-oxoLCA 和 isoalloLCA 含量。结果1.动物实验结果:与模型组比较,各组小鼠病情缓解(脾脏、淋巴指数降低;肾脏病理损伤减轻);自身性抗体和炎症水平总体显著降低;流式结果表明,各组小鼠脾R428说明书脏Th17、Treg 比例减少,Th17/Treg比值显著降低,相应的ROR-yt mRNA表达下降,Foxp3 mRNA表达升高;16sRNA测序结果表明各组小鼠Beta多样性差异显著,菌群结构存在显著差异,同时3α-HSD mRNA表达升高,3β-HSD mRNA表达无显著差异;另外,脂质组学结果表明,解毒祛瘀滋阴方干预可以增加3-oxoLCA和isoalloLCA含量。2.体外细胞实验结果:流式结果表明,3-oxoLCA可以抑制Th17分化,isoalloLCA可以促进Treg分化;Western Blot结果表明,3-oxoLCA组ROR-yt表达降低,isoalloLCA组 Foxp3 表达升高;RT-qPCR 结果表明,3-oxoLCA 抑制 ROR-yt mRNA 表达,isoalloLCA促进Foxp3 mRNA的表MCC950价格达。另外,复方干预组Th17、Treg分化均无显著变化。3.菌群移植实验结果:与模型组比较,SLE粪菌组小鼠病情加重(脾脏、淋巴指数升高;肾脏病理损伤加重);自身性抗体和炎症水平总体显著升高;16sRNA测序结果表明,各组之间Beta多样性差异显著,肠道菌群结构存在差异;RT-qPCR结果表明,SLE粪菌组3α/β-HSD mRNA表达降低;脂质组学结果表明,SLE粪菌组3-oxoLCA含量有下降趋势。结论1.肠道微生态紊乱导致次级胆汁酸3-oxoLCA、isoalloLCA代谢异常,引起Th17/Treg免疫失衡,在SLE发生发展过程中具有重要的作用。2.解毒祛瘀滋阴方通过有效调节肠道菌群结构和功能,提高3α/β-HSD表达,恢复次级胆汁酸3-oxoLCA、isoalloLCA代谢水平,调控Th17/Treg免疫失衡,降低炎症反应,降低疾病活动度,从而有效缓解病情。

目的 观察分阶段健康教育应用于早期食管癌患者的效果。方法 选取2021年3月至2022年10月郑州大学第一附属医院郑东院区消化内科收治的96例早期食管癌患者纳入研究，按随机数表法分为对照组和观察组，每组48例。术前至术后放化疗期间，对照组患者实施常规健康教育，观察组患者实施分阶段健康教育。比较两组干预前、放化疗结束后的疾病认知度、健康状态、自我管理效能感、应对策略和生存质量。结果 放化疗结束后，观察组患者的疾病知识、围手术期知识和放化疗知识评分分别为(14.38±3.52)分、(34.22±3.39)分、(32.89±4.41)分，明显高于对照组的(12.06±2.74)分、(31.18±2.75)分、(29.10±3.80)分，差异均有统计学意义(P<0.05)；放化疗结束后，观察组患者的健康状态优良率为95.83%，明显高于对照组的79.17%，差异有统计学意义(P<0.05)；放化疗结束后，观察组患Cell Culture者的健康促进策略量表(SUPPH)评分为(118.46±8.51)分，明显高于对照组的(114.37±7.23)分，差异有统计学意义(P<0.05)；放化疗结束后，观察组患者的回避评分、屈服评分CP-456773试剂分别为(12.56±2.47)分、(8.45±2.60)分，明显低于对照组的(15.30±3.11)分、(11.07±3.16)分，面对评分为(24.19±3.54)分，明显高于对照组的(21.确认细节25±2.87)分，差异均有统计学意义(P<0.05)；放化疗结束后，观察组患者的癌症患者生活质量测定量表(QOL-C30)评分为(81.35±5.20)分，明显低于对照组的(86.04±6.82)分，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 早期食管癌患者实施分阶段健康教育，一方面能提升患者疾病认知和健康状态，增强患者自我管理效能感，同时能改善患者应对策略，提升其生存质量。

采用高效液相色谱法测定磺Belumosudil价格胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉共5种磺胺类药物在动物源性食品中的残留量。动物源性样品经甲酸乙腈提取，正己烷除脂、固相萃取柱净化；用高效液相色谱法同时测定磺胺类药物残留量，采用Agilent Pursuit 5 C18(150mm×4.6mm, 5.0μm),柱温为35℃,流动相A为0.1%甲酸水，B为乙腈，流MK-1775速1.0mL·min~(-1),紫外检测器，检测波长为270nm。结果表明：在最优试验条件下，该方法测定5种磺胺类药物残留的线性范围在0.02～1.0mg·L~(-1),线性相关系数R>0.9999,方法检出限为0.003mg·kg~(-1)、0.005mg·kg~(-1),回收率达到80.1%～108%,相对标准偏差介于2.48%～10.0%。样品前处理方法简单快捷，能够高效、灵敏地同时检测出动物源性食品中的磺胺二甲基嘧啶等5种磺plant virology胺类药物的残留量。

目的:高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)是国内外一个常见的公共卫生问题,可造成痛风、心血管疾病、慢性肾脏病等疾病。高尿酸血症病因复杂,大致可分为尿酸生成增多、排泄减少两大方面,与饮食、生活习惯、遗传等相关,但深入机制尚不明确。应激(stress)是当外界负面因素影响超越了个体的心理、生理承受能力并产生负面影响时,个体产生的一种特殊反应,可增加多种精神、躯体疾病的患病风险。多项研究已证明应激及应激激素与尿酸生成有密切联系。四逆散为中医抗抑郁名方,除了焦虑抑郁等疾病外,四逆散在高脂血症、糖尿病等多种代谢性疾病均有应用。研究应激对高尿酸血症的影响及四逆散在其中的作用,可探讨高尿酸血症的深入机制,并提供一个全新的治疗思路。方法:通过腹腔注射肌苷(inosine)成功构建急性高尿酸血症小鼠模型,并通过束缚水应激(waterrestrain,WR)造成应激状态,通过多种应激激素及相关受体阻滞剂探讨激素、受体在其中的影响。通过对小鼠进行14天应激操作的方式造成慢性应激模型,并给予普萘洛尔、四逆散等干预,进行行为学检测,收集粪便以进行微生物组学检测,最后对各组进行一次腹腔注射肌苷的干预,一定时间后取材,对血清进行代谢组学研究,检测相关脏器中黄嘌呤脱氢酶(尿酸生成的关键酶)的变化,以观察应激对尿酸生成的影响及四逆散的干预作用。结果:束缚水应激这一应激模型能使肌苷模型的尿酸明显升高。在肌苷模型的基础上,肾上腺素可使尿酸升高更加明显。普萘洛尔可明显拮抗应激、肾上腺素等在急性模型中的升尿酸作用,而酚妥拉明对此无明显影响。14天的应激操作可使小鼠尿酸明显升高,产生一定程度的抑郁样改变,而四逆散可抵抗应激引起的尿酸升高、抑郁样translation-targeting antibiotics改变等现象。此外,各组肝脏中黄嘌呤脱氢酶染色阳性区域无明显区别,但应激可使小肠中黄嘌呤脱氢酶染色阳性更加明显,且在绒毛、乳糜管等处发现染色阳性聚集的Pexidartinib细胞培养现象。小鼠粪便的微生物组学分析结果提示应激可明显改变小鼠肠道菌群的组成结构,并影响肠道菌群的嘌呤代谢、氨基酸代谢等功能。血清代谢组学结果提示应激可明显改变小鼠血清中嘌呤相关、氨基酸相关代谢物,这两种代谢物之间存在许多正相关关系,提示应激可能通过调节肠道菌群的氨基酸代谢,进而影响小鼠的嘌呤代谢,导致尿酸升高。四逆散可使血清中嘌呤、氨基酸相关代谢物恢复到对照组水平。此外,四逆散干预可明显提高小鼠血清中Proteases抑制剂胍基乙酸、鸟氨酸含量,降低血清中甘氨酸、精氨酸含量,减少嘌呤合成过程中的关键氨基酸供给。结论:应激及应激相关的肾上腺素具有明显的促进尿酸升高的作用。应激可使小肠黄嘌呤脱氢酶表达明显增加,改变肠道菌群的嘌呤代谢、氨基酸代谢等功能,进而改变血清中嘌呤、氨基酸相关代谢物水平。四逆散调节肠道菌群的嘌吟代谢、氨基酸代谢等功能,提高血清中胍基乙酸等肌酸代谢相关原料,影响嘌呤代谢过程中氨基酸原料的供给,进而起到抵抗应激导致的尿酸升高的作用。

目的:胶质瘤是中枢神经系统(CNS)中最常见的原发性恶性肿瘤类型,预后不佳,尤其是胶质母细胞瘤(WHO IV型胶质瘤,GBM),其中位生存时间不到2年。近一半的胶质瘤病例被诊断为胶质母细胞瘤,被认为是最具侵略性和致命性的脑肿瘤,病情发展迅速,不可避免地会复发,预后极差。虽然采用了手术切除后化疗和放疗的策略,但效果不佳。因此,迫切需要基于胶质瘤生物学属性的新型治疗方法。硫氧还蛋白相关跨膜蛋白1(TMX1)是编码内质网(ER)蛋白二硫异构酶(PDI)家族的成员,目前研究发现在黑色素瘤及乳腺癌中发挥作用。但TMX1在胶质瘤中的作用未见报道。本研究探索TMX1在胶质瘤细胞生物学行为中的作用及相关机制。方法:1本研究使用癌症基因组图谱(TCGA)和中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库,目的是为了明确在胶质瘤中TMX1的表达情况及其与预后的关系。2我们对数据库中TMX1的表达情况进行了验证,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印记法(WB)方法,检测了正常脑组织和胶质瘤样本中TMX1的mRNA以及蛋白的表达水平;并使用NHA、U87、LN229、T98细胞系进行细胞实验。3利用慢病毒在胶质瘤细胞系LN229中构建TMX1敲减细胞(Sh TMX1)以及对应的对照细胞。4我们采用EdU标记、集落形成、CCK8等实验评估细胞的增殖能力;5采用流式细胞凋亡检测、WB蛋白检测评估细胞凋亡;6进一步检测了ROS、JC-1和seahorse了解TMX1对线粒体的功能的影响;7体内实验中,我们用BALB/C裸鼠构建异种皮下成瘤模型评估TMX1对于胶质瘤体内成瘤能力的影响。8最后利用蛋白免疫印迹进行分子机制研究。结果:1我们发现在数据库TCGA中显示胶质瘤样本中TMX1 mRNA表达水平比正常脑组织上调,而在CGGA数据库中显示TMX1 mRNA的表达水平随着胶质瘤级别的升高而呈现递增,这两个数据库均显示胶质瘤患者的总生存率与TMX1的表达呈负相关。2通过RT-qPCR、IHC和WB的结果发现,TMX1的mRNA和蛋白的表达水平在胶质瘤标本中均比正常脑组织高。TMX1在胶质瘤细胞系(U87,LN229,T98)中的蛋白表达水平也比正常人星形胶质细胞(NHA)高。3经慢病毒转染后,行Western blotting检测,其结果显示TMX1蛋白表达水平在胶质瘤细胞系LN229中显著抑制。4在体外实验中,EdU染色实验结果显示TMX1敲减组的EdU染色细胞比例低于对照组细胞;phage biocontrolCCK-8实验显示TMX1敲减组细胞的增殖能力低于对照组;TMX1敲减组细胞的集落形成能力下降。以上结果表明TMX1敲减后抑制胶质瘤细胞的增殖能力。5流式细胞术分析显示,TMX1敲减组的胶质瘤细胞表现出更高水平的凋亡;在TMX1敲减后,促凋亡蛋白Bax、caspase 3和caspase 9的表达上调,抑更多制凋亡蛋白Bcl-2表达下调。以上结果表明TMX1敲减后促进了胶质瘤细胞的凋亡。6 DCFH-DA探针检测提示TMX1敲减组胶质瘤细胞内ROS产生减少;荧光探针JC-1检测TMX1敲减组中线粒体膜电位下降;Seahorse检测研究代谢表型的改变,发现TMX1敲减组中OCR无变化,而ECAR下降。以上结果表明TMX1敲减后影响了线粒体的功能。7在体内实验中,我们用BALB/C裸鼠构建异种皮下成瘤模型,发现TMX1敲减后抑制了体内肿瘤的生长。8为了探究TMX1是否通过PI3K/AKT通路调节胶质瘤增殖,我们进行了蛋白质印迹鉴定PI3K/AKT相关蛋白的表达,发现总PI3K和AKT表达没有改变,但在TMX1的敲低组,磷酸化PI3K和磷酸化AKT水平降低。结论:胶质瘤组织中TMX1的表达水平高于正常脑组织,且随着恶性程度的增加其表达量增高。TMX1促进胶质瘤的进展,缩短患者的生存期。TMX1敲减后抑制胶质瘤细胞的增殖,并促进凋确认细节亡。使ROS降低,线粒体膜电位下降,有氧糖酵解(ECAR)下降,影响了线粒体的功能。机制研究表明TMX1通过调控ROS/PI3K/AKT影响细胞增殖和凋亡并影响线粒体功能。

目的：探讨在顺铂诱导的急性肾损伤(AKI)中8-氧PLX4032配制代鸟嘌呤DNA糖基化酶(OGG1)的作用及机制。方法：48只8～10周龄C57BL/6雄性小鼠构建动物模型。24只分为4组，每组6只，分别经腹注射顺铂干预0 h、24 h、48 h和72 h。剩余小鼠也随机分为4组，即生理盐水对照组、顺铂组、OGGVE-8221抑制剂组(Th5487组)和顺铂+Th5487组。分别在腹腔注射生理盐水或顺铂和Th5487。留取血液测定肌酐、尿素氮，取肾组织进行病理分析，检测肾组织8-氧代鸟嘌呤含量和超氧化物歧化酶活力，RT-qPCR测定mRNA水平，Western Blot验证OGG1和炎症蛋白表达情况。利用顺铂诱导小鼠肾小管上皮细胞建立体外模型，检测线粒体膜电位改变、活性氧生成情况和蛋白表达变化。结果：在顺铂诱导的AKI模型中，OGG1表达上调，环鸟苷酸-腺苷酸合成酶-干扰素基因刺激因子(cGAS-STING)信号轴及炎症反应激活；Th5487可抑制顺铂诱导的组织损伤、cGAS-STING信号轴的激活及炎性反personalized dental medicine应；在体外，Th5487可减少顺铂诱导的细胞中ROS含量升高及线粒体膜去极化。结论：在顺铂诱导的AKI过程中，OGG1可通过cGAS-STING信号促进肾脏损伤及炎症反应。

【背景】雌激素是雌性哺乳动物卵巢组织分泌的主要激素，其对肌肉的生长发育起着重要的调控作用，circRNA已被发现参与多种与肌肉生长发育相关的信号通路。【目的】根据团队前期卵巢摘除苏尼特羊与假手术苏尼特羊全转录组整合分析发现circZNF423可作为内源性竞争RNA(ceRNA)调控oar-miR-541-3p/CALM3的表达。为进一步探究雌激素在绵羊肌肉生长中分子机制，通过体外培养绵羊原代成肌细胞，检测成肌细胞中外源添加雌激素介导circZNF423调控oar-miR-541-3p/CALM3对成肌细胞增殖的影响，为进一步研究雌激素及circRNA在绵羊生长发育性状中的作用机制提供理论依据，为绵羊分子设计育种提供新的研究思路。【方法】采集绵羊背最长肌组织，对绵羊原代成肌细胞进行体外分离培养，通过免疫荧光染色、RNA原位杂交（FISH）和核质分离试验确定circZNF423在成肌细胞中的表达位置；RNAhybrid在线软件预测circZNF423、oar-miR-5确认细节41-3p和CALM3存在结合关系，通过双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验验证circZNF423和oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p和CALM3结合情况；体外构建合成circZNF423过表达或干扰载体、oar-miR-541-3p的模拟物（mimics）或抑制剂（inhibitor）、CALM3过表达或干扰载体，在绵羊原代成肌细胞中进行转染，利用RT-qPCR、Western blot、EdU和CCK-8检测绵羊成肌细胞增殖标志因子的表达和https://www.selleck.cn/products/cx-5461.html成肌细胞增殖情况；为进一步明确雌激素在绵羊肌肉生长发育中的作用，体外添加不同浓度的外源性雌二醇（E2），利用RT-qPCR、Western blot、CCK-8和EdU检测绵羊肌细胞增殖标志基因的表达变化。【结果】免疫荧光染色显示分离的原代细胞为绵羊成肌细胞，可用于后续功能验证；RNA原位杂交和核质分离试验表明，circZNF423主要在绵羊成肌细胞质中表达。RNAhybrid、双荧光素酶活性检测和生物素标记的miRNA下拉试验结果表明，circZNF423与oar-miR-541-3p、oar-miR-541-3p与CALM3 3’UTR之间均存在显著的结合关系；抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后，绵羊成肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7 mRNA与蛋白表达水平一致，均显著上调（P<0.05或P<0.01）;EdU和CCK8结果表明，抑制circZNF423/CALM3表达或过表达oar-miR-541-3p后，绵羊成肌细胞增殖率显著上升（P<0.05）；过表达circZNF423/CALM3或抑制oar-miR-541-3p后则相反。添加不同浓度外源雌二醇（E2）后，在浓度为10 nmol·L-1时绵羊成肌细胞增殖标志因子表达最高，显著高于1和100 nmol·L-1的添加浓度（P<0.05或P<0.01）；绵羊肌细胞增殖标志因子PCNA、CDK2和Pax7mRNA和蛋白表达水Microbial biodegradation平一致，均显著上调，circZNF423和CALM3的表达量显著降低，oar-miR-541-3p的表达量显著升高（P<0.05或P<0.01）;EdU和CCK8结果显示，体外添加雌二醇后绵羊成肌细胞增殖率显著升高（P<0.05）。【结论】绵羊成肌细胞中circZNF423作为ceRNA调控oar-miR-541-3p和CALM3的结合及表达，添加外源雌激素可通过抑制circZNF423/oar-miR-541-3p/CALM3通路促进绵羊肌肉细胞的增殖。这些结果为揭示雌激素及circZNF423在绵羊骨骼肌发育性状中的分子机制提供理论基础。

目的 研究由其他胰岛素治疗转换为每日2次德谷门冬双胰岛素（IDegAsp）或门冬胰岛素30(IAsp30)在2型糖尿病患者中Ceralasertib化学结构的安全性及血糖控制效果。方法 采用回顾性队列研究方法，选择本院2021年1月1日至6月30日期间由其他胰岛素转换为IDegAsp(IDegAsp组)或IAsp30(IAsp30组)治疗的2型糖尿病住院患者资料，胰岛素剂量调整使早餐前和晚餐前血糖达4.4～7.2 mmol·L~(-1)。收集胰岛素转换前（基线）和转换12周后（终点）胰岛素剂量、血糖及低血糖发生数据。采用倾向性评分匹配（PSM），根据2组患selleckchem PLX4032者的基线资料进行1 1匹配，并统计PSM后胰岛素剂量、血糖及低血糖Invasion biology发生情况。结果 PSM前IDegAsp组患者48例，IAsp30组103例，2组年龄、体重指数、胰岛素剂量比较有显著差异（P <0.05）。PSM后2组患者各43例，基线资料比较无显著差异（P> 0.05）。PSM后，观察终点IDegAsp组餐前胰岛素、总胰岛素剂量均显著低于IAsp30组（P <0.05）;2组均无严重低血糖事件发生，虽IDegAsp组非严重低血糖事件和夜间低血糖事件发生数、频次低于IAsp30组，但发生风险组间比较无显著差异（RR=0.55,95%CI:0.30～1.04, P> 0.05和RR=0.60,95%CI:0.14～2.51, P> 0.05）;IDegAsp组空腹血糖（FPG）、早餐前、早餐后2 h血糖、午餐后2 h血糖、晚餐前和凌晨3 00血糖均低于IAsp30组（P <0.05）;2组患者体重变化无显著差异（P> 0.05）。结论 与IAsp30相比，由其他胰岛素转换为IDegAsp，患者低血糖发生次数降低，但低血糖风险无显著差异，应用IDegAsp患者的胰岛素剂量更低，FPG改善更佳，血糖曲线更平稳。

目的 制备针对严重急性呼吸综targeted immunotherapy合征冠状病毒2(severe acute respiratselleckchem Belnacasanory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)IgA单克隆抗体,对其表达条件进行优化以提高表达量,并初步探讨IgA抗体在抗SARS-CoV-2中的效应。方法 将编码IgA1-F61抗体序列的质粒与聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)转染试剂混合后转染EXPi293F~(TM)细胞,瞬时表达抗体蛋白;通过优化重链(heavy chain,Hc)、轻链(light chain,Lc)、J链(joining chain,Jc)比例、质粒与PEI比例、转染后收获时间确定单体IgA1(monomeric IgA1,mIgA1)-F61及二聚体IgA1(dimeric IgA1,dIgA1)-F61在EXPi293F~(TM)MCC950浓度细胞中的最佳培养条件以及最佳表达量。将转染后上清经亲和层析纯化后,BCA法测定浓度,SDS-PAGE及体积排阻高效液相色谱(size exclusion chromatography-high performance liquid chromatography,SEC-HPLC)法分析抗体表达完整性及纯度,假病毒中和试验检测抗体中和活性。结果 当He与Lc比例为1:2、质粒与PEI比例为1:3、转染后5d收获上清时,mIgA1-F61最高表达量为123.45μg/mL,纯化后抗体纯度达95%以上;Hc:Lc:Jc为1:2:1时,可获得最大纯度的dIgA1-F61,达90%以上。针对OmicronBA.4/5的假病毒中和试验结果 显示,dIgA1-F61呈现优于IgG-F61的中和活性,其最大半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))降低了4倍左右。结论 成功表达了重组抗SARS-CoV-2单克隆抗体mIgA1-F61和dIgA1-F61,纯度较高,且dIgA1在体外展现出优于IgG的中和活性。