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巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibiFerrostatin-1说明书ting factor,MIF)是一种促炎细胞因子,作为一种高度保守的分泌性蛋白,在炎症和免疫反应、肿瘤的发生发展等一些生物学过程中具有重要作用。CD74又称为恒定链(Ii),是MIF的受体,MIF通过与CD74的细胞外结构域结合,使PI3K-Akt信号转导级联、NF-κB和AMP活化蛋白激酶(AMPK)通路以及细胞外信号调节激酶(ERK)通路激活。本研究将鸡CD74基因通过跨膜区及信号肽序列分析后,截取其第62-175位氨基酸作为目的片段,通过BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切将其克隆至pET-28a载体上,构建出重组质粒pET-28a-CD74(62-175 aa),并将重组质粒pET-28a-CD74(62-175 aa)和本实验室构建的pET-11b-MIF分别转化E.coli BL21(DE3),进行MIF和CD74重组蛋白的诱导表达,获得的重组蛋白进行镍柱亲和层析纯化后,SDS-PAGE和Western blot鉴定,结果表明成功获得鸡重组MIF和CD74蛋白。获得的重组蛋白分别进行小鼠皮下多次注射免疫,免疫三次后,按照建立的间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbeVX-765nt assay,ELISA)方法进行效价的测定,选取免疫MIF蛋白后效价达到1:51200的一只小鼠进行脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)的融合,融合后的杂交瘤细胞采用间接免疫荧光(immunofluorescenceassay,IFA)和间接ELISA两种方法进行筛选,阳性的细胞株运用有限稀释法进行三次亚克隆,获得了3株能稳定分泌抗鸡MIF蛋白的杂交瘤细胞株,分别命名为2G11、2E7、4Chronic bioassayE8,将2E7细胞株注射到提前用液体石蜡致敏的经产母鼠腹腔中制得腹水,测定效价为1:64000。免疫CD74重组蛋白的小鼠效价达到1:25600后摘眼球采血,离心后的血清即为抗鸡CD74的多克隆抗体,将CD74(62-175 aa)通过Xho Ⅰ和BamH Ⅰ克隆至慢病毒载体pLVX-AcGFP-N1 中,构建重组表达质粒 pLVX-AcGFP-N1-CD74(62-175 aa),并将重组质粒转染生长状态良好的293T细胞中,制样后分别以IFA和Western blot试验进行抗鸡CD74多克隆抗体的反应性鉴定,结果表明制备的抗鸡CD74多克隆抗体反应性良好。对3株抗MIF单克隆抗体进行抗原表位的鉴定,采用交互重叠多肽法将MIF全长截短为X1(MIF 1-80 aa)、X2(MIF 63-115 aa)、Y1(MIF 1-37aa)、Y2(MIF 37-76 aa)、Y3(MIF 13-76aa)、Y4(MIF 17-76 aa)6个片段,结果表明3株单克隆抗体细胞株针对相同的抗原表位,即13DAVPD17。采用本实验室已制备的另一株针对MIF不同抗原表位的单克隆抗体1F6和2E7的腹水共同建立MIF双抗体夹心ELISA检测方法,已知1F6和2E7分别针对重组MIF蛋白不同的抗原表位,将腹水采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后进行HRP标记,当1F6作为捕获抗体,2E7作为检测抗体,反应参数分别为包被方式4℃12 h,封闭液选择5%脱脂奶封闭2 h,重组MIF蛋白37℃孵育1 h,检测抗体2E7-HRP37℃孵育1 h,显色时间为37℃,15 min时,建立的检测方法检测效果较好,并测得该方法检测的线性范围为 0.039-5 μg/mL,Y=0.7062X+0.1252,R2=0.9954,检测极限值为 0.021 μg/mL,进行该方法的重复性测定,无论是批次内重复性测定还是批次间重复性测定,其变异系数(CV)均小于10%,表明建立的方法重复性良好。

目的:本课题主要分析延安大学附属医院心脑血管病医院成立高级卒中中心并开通脑卒中绿色通道以来接受rt-PA静脉溶栓治疗的AIS患者的延误现状,主要探讨从症状出现到接受治疗这一过程中各主要环节发生延迟的影响因素,针对导致溶栓延迟发生的因素提出针对性的解决办法,提高我院AIS患者静脉溶栓率,改善卒中患者预后。方法:通过对2021年1月1日-2022年10月31日在延安大学附属医院心脑Biostatistics & Bioinformatics血管病医院接受rt-PA静脉溶栓治疗并在神经内科住院患者的临床资料进行分析。了解院内主要诊疗环节用时的达标率,分析我院开通卒中绿色通道后高级卒中中心的运行现状。针对性的收集AIS患者发病后主要时间节点,主要有(1)发病时间(2)到院时间(3)治疗时间(接诊时间、检查时间、签字时间、取药时间、溶栓时间),根据各主要环节(院前环节、院内环节、接诊环节、检查环节、签字环节、取药环节)是否发生延迟分为无延迟组和延迟组。单因素方差分析或卡方检验比较无延迟组与延迟组在基线资料上有无差异,在此基础上进行多因素二元logistic回归分析各主要诊疗环节发生延迟的独立影响因素;探索出本地区AIS患者rt-PA溶栓治疗延迟的影响因素,并提出改善建议,为优化诊疗流程、提高本地区溶栓率提供参考。结果:1.本研究中整体院内环节的达标率为83.74%,接诊、检查这两个环节的达标率分别为92.61%、86.70%,签字、取药这两个环节的达标率分别为71.43%、72.91%。2.入院NIHSS评分是AIS静脉溶栓患者院内延迟的独立保护因素(OR=0.233,CI:0.124-0.438,P<0.001),首发症状中的意识障碍是AIS静脉溶栓患者院内延迟的独立危险因素(OR=18.326,CI:2.020-166.254,P=0.010)。既往高血压病史是AIS静脉溶栓患者院内接诊延迟的独立危险因素(OR=14.867,CI:1.828-120.890,P=0.012)。既往高血压病史、首发症状中的意识障碍、既往少见的恶心呕吐、完善MRI检查是AIS静脉溶栓患者检查延迟的独立危险因素(OR=20.481,CI:2GNE-140生产商.255-186.053,P=0.007;OR=11.220,CI:2.131-59.061,P=0.004;OR=412.510,CI:3.352-50769.983,P=0.014;OR=9.5FUT-175供应商84,CI:2.490-36.898,P=0.001);急诊途径入院、入院NIHSS评分是AIS静脉溶栓患者检查延迟的独立保护因素(OR=0.193,CI:0.046-0.813,P=0.025;OR=0.677,CI:0.566-0.809,P<0.001)。工作日到达是AIS静脉溶栓患者签字延迟的保护因素(OR=0.447,CI:0.214-0.936,P=0.033);完善MRI检查是AIS静脉溶栓患者签字延迟的独立危险因素(OR=3.421,CI:1.397-8.380,P=0.007)。急诊途径入院是AIS静脉溶栓患者取药延迟的独立危险因素(OR=4.444,CI:1.650-11.965,P=0.003)。结论:1.本院的AIS患者进行rt-PA静脉溶栓治疗的主要诊疗环节用时均短于国家脑防委对于高级卒中中心各诊疗环节用时最低要求,溶栓效率高。2.本院的AIS患者进行rt-PA静脉溶栓治疗主要诊疗环节中的签字环节、取药环节用时达标率较整体院内诊疗环节用时达标率低,还存在较大提升空间。3.入院途径、是否工作日到达、入院NIHSS评分、是否完善MRI检查、首发症状为意识障碍、既往少见的恶心呕吐以及既往高血压病史的有无可以影响院内主要诊疗环节的用时。

目的 探讨盐酸药根碱(Jatrorrhizine hydrochloride, JH)在细胞水平上对宫颈癌细胞增殖能力、平板克隆、细胞伤口愈合、侵袭、迁移、细胞凋亡和坏死的影响及作用机制研究。方法 通过MTT、平板克隆实验研究不同浓度的盐酸药根碱48h后对宫颈癌Hela细胞培养过程中的增殖及克隆形成的影响。为获得更准确的结果，通过细胞伤口愈合实验和Transwell细胞迁移实验来检测盐酸药根碱对selleck产品Hela细胞横向和纵向迁移能力的影响，并采用Transwell细胞侵袭实验来检测其对Hela细胞侵袭能力的影响。使用YO-PRO-1/PI检测试剂盒进行荧光染色，用来检测细胞凋亡与坏死情况。通过Western blot检测不同浓度的盐酸药根碱对Hela细胞中坏死与凋亡相关蛋白表达水平的影响。结果 MTT、平板克隆实验IACS-10759试剂结果显示盐酸药根碱抑制宫颈癌Hela细胞增殖，呈现时间和剂量依赖；细胞伤口愈合实验和迁移、侵袭实验显示盐酸药根碱能够以剂量依赖性的方式抑Botanical biorational insecticides制Hela细胞的横向及纵向迁移以及侵袭能力。结论 体外细胞实验表明，盐酸药根碱可抑制Hela细胞增殖、侵袭、迁移能力，有望作为抗癌潜在药物在临床上进一步研究。

目的 探讨miR-506-3p在肝癌的诊断及预后评估中的作用。方法 通过实时定量PCR(qRT-PPEG300CR)检测92例肝癌患者组织及血清样本中miR-506-3p的表达，分析血清miR-506-3p与肝癌患者病理特征的关系。工作特征曲线(ROC)分析miR-506-3p在肝癌中的诊断效能。通过随访，确认mBiomass accumulationiR-506-3p在肝癌预后中的意义。通过CCK-8试验分析miR-506-3p对肝癌细胞增殖能力的影响。结果 miR-506-3p在肝癌患者组织及血清样本中均呈低表达。血清miR-506-3p表达降低提示患者TNM分期较高或分化较差。此外，血清miR-506-3p的表达诊断肝癌的曲线下面积(AUC)值为0.911,区分肝癌患者Angiogenesis抑制剂肿瘤大小、TNM分期、病理分化程度的AUC值分别为0.751,0.825,0.777。Kaplan-Meier生存分析显示，血清中miR-506-3p表达降低，肝癌患者的总体生存率明显降低。Cox比例风险回归模型分析显示出TNM分期、血清miR-506-3p低表达是肝癌患者的独立预后因素。体外实验上调miR-506-3p后肝癌细胞的增殖能力明显降低。结论miR-506-3p能够抑制肿瘤细胞的增殖能力，可作为肝癌诊断及预后判断的生物标志物。

目的:本研究旨在探究低强度耳屏迷走神经刺激(LL-VNS)对长程起搏诱导的心房颤动(AF)犬模型中的作用及潜在机制。方法:18只成年健康比格犬随机分为3组:Sham组、AF组、AF+LL-VNS组,每组6只。所有实验犬均植入右心房快速起搏器,Sham组不予起搏,AFGNE-140溶解度组及AF+LL-VNS组快速起搏4周,起搏参数600次/分。4周后AF+LL-VNS组给予LL-VNS至8周末,其余组给予假刺激。分别于基线期、4周末、8周末检测三组ERP、WOV、AF诱发率及AF持续时间等电生理指标。分析心率变异性参数并采集静脉血检测神经递质浓度。评估LAD,RAD及LVEF等心脏超声指标。实验结束LBH589 molecular weight后取心房组织行透射电镜、液相质谱、TUNEL及MASStem Cell CultureSON染色并检测内质网应激相关蛋白表达情况。结果:LL-VNS可有效降低AF模型犬的WOV、AF诱发率、AF持续时间并恢复ERP(均P<0.05);降低心率变异性LF水平及LF/HF比值(均P<0.05);降低LAD,RAD并恢复LVEF等超声指标(均P<0.05);降低心房组织及血浆E、NE并增加ACH含量(均P<0.05)。透射电镜显示AF+LL-VNS组内质网结构相较于AF组明显改善。分子生物学显示AF+LL-VNS组可有效减轻心肌纤维化,抑制GRP78、p-PERK/PERK、p-e IF2α/e IF2α、CHOP等内质网应激相关蛋白表达和心肌细胞凋亡(均P<0.05)。结论:低强度耳迷走神经刺激可通过抑制内质网应激及心肌细胞凋亡等保护长程起搏诱导的心房重塑。

研究背景弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse Large B-cell lymphoma,DLBCL)诊断时中位年龄多超过60岁,即使接受标准一线化疗方案,老年患者总体存活率仍较低,这与老年患者较差的基础健康状况、不利的生物学特征、化疗不耐受等有关。来那度胺是一种沙利度胺衍生的免疫调节药物,其通过多种途径可产生直接和间接抗肿瘤活性,与利妥昔单抗具有协同作用,且具有良好耐受性,有望改善老年DLBCL患者的预后。本研究的目的是探讨来那度胺联合利妥昔单抗非化疗联合用药治疗老年初诊DLBCL的临床疗效。研究方法本研究纳入2018年1月1日至2021年12月31日期间初诊为DLBCL,并且接受了R2方案(来那度胺联合利妥昔单抗)治疗的年龄≥80岁或≥70岁且ECOG(eastern cooperative oncology group)评分≥2分的患者。这些患者接受利妥昔单抗剂量为375mg/m~2,三周一次,来那度胺剂量为10-25mg,连续口服14天,21天为1周期,8疗程后达部分及以上selleck CL 318952缓解的患者接受来那度胺10-25mg单药维持治疗,共维持2年。将这些患者与我院2017年1月1日至2021年12月1日期间采用R-mini CHOP治疗的28例患者(即对照组)疗效进行对比。研究主要终点为1年总生存(overall survival,OS)率,次要终点为总缓解率(overall response rate,ORR)和1年无疾病进展生存(progressive-free survival,PFS)率等。结果共纳入53例患者,其中R2组25例,对照组28例。中位随访时间18.9月(范围:3.47-59.20月),R2组1年OS为77.6%,对照组1年OS为75.8%。R2组中位OS为31.6月,对照组中位OS为28.9月(HR,0.72;95%CI:0.29-1.77;P=0.48)。对OS的亚组分析显示Ann Arbor分期为III-IV期患者中,R2组中位OS为31.6月,对照组为17.7月(HR,0.41;95%CI:0.15-1.07;P=0.08)。在ECOnonalcoholic steatohepatitisG评分≥2分的患者中,R2组中位OS为31.6月,对照组中位OS为15.2月(HR,0.38;95%CI:0.14-1.04;P=0.06)。R2组和对照组1年PFS分别为5selleck激酶抑制剂2.9%、58.1%,中位PFS分别为31.0月和17.7月(HR,0.90;95%CI:0.43-1.89;P=0.77)。R2组和对照组中期评估ORR分别为72%、78.6%(P=0.13);诱导结束后R2组ORR为60%,对照组为64.2%(P=0.42)。R2组和对照组最常见的不良反应均为中性粒细胞减低,但R2组发生率较对照组小。多因素模型分析结果显示在0.05水平上未发现影响OS的独立预后因素,LDH水平(HR:0.35,95%CI:0.13-0.95)和Ki-67增殖指数(HR:0.34,95%CI:0.12-0.96)为PFS的独立预后因素。结论来那度胺联合利妥昔单抗是老年尤其高龄或虚弱而不适合一线标准方案患者的一种有效选择,安全可耐受。

目的:探究CD166对多发性骨髓瘤(MM)RPMI-8226细胞增殖、凋亡及自噬的影响。方法:选取MM细胞RPMI-8226,设计并合成靶向CD166的短发夹RNA(shRNA)和阴性对照(NC)进行细胞转染，分为sh-CD166-1组、sh-CD166-2组和NC组。采用MTT法和平板克隆实验观察CD166对RPMI-8226细胞INCB28060抑制剂增殖能力和平板克隆形成能力的影响。利用流式细胞仪检测CD166对Programmed ribosomal frameshiftingRPMI-8226细胞凋亡的影响。采用自噬实验观察CD166对RPMI-8226细胞自噬的影响。此外，将BALB/c裸鼠随机分为NC组和sh-CD166组，通过皮下移植瘤模型评估CD166对RPMI-8226细胞体内Captisol抑制剂成瘤能力的影响。结果:sh-CD166转染后，显著抑制RPMI-8226细胞的增殖能力和平板克隆形成能力(均P<0.05)。与NC组比较，sh-CD166-1组和sh-CD166-2组细胞凋亡率升高(均P<0.05),但sh-CD166-1组和sh-CD166-2组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。与NC组比较，sh-CD166组细胞中自噬小体表达量明显减少(P<0.05)。此外，体内移植瘤模型结果表明，sh-CD166组体内成瘤能力比NC组显著降低(P<0.05)。结论:CD166能促进MM细胞RPMI-8226增殖，抑制细胞凋亡，并促进皮下成瘤。

目的·探究人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源的小细胞外囊泡(small extracellular vesicle,sEV)对小鼠破骨细胞分化和巨噬细胞极化的调控作用，以及对骨质疏松症小鼠的影响。方法·培养BMSC并通过差速离心法提取sEV，通过透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)Fer-1及纳米颗粒跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)鉴定得到的sEV。通过巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)及核因子κB受体激活蛋白配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)刺激RAW264.7细胞以诱导形成破骨细胞，通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色及鬼笔环肽染色检测sEV对破骨细胞分化的调控作用。通过荧光定量PCR检测sEV对破骨细胞标志基因环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMPresponse element binding protein,CREB)、组织蛋白酶K (cathepsin K,CTSK)及c-Jun (Jun proto-oncogene) mRNA表达量的影响。使用脂多糖刺激RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞；使用白细胞介素-4 (interleukin-4,IL-4)及IL-13刺激RAW264.7细胞极化为M2型巨噬细胞。利用流式细胞术检测sEV对M1及M2型巨噬细胞极化的影响。通过微计算机断层扫描成像(micro-computed tomography,micro-CT)及TRAP染色观察sEV对骨质疏松症小鼠模型腰椎骨组织的影响。结果·TEM及NTA结果显示分离得到的sEV具有典型的球状结构，直径为30～150 nm。TRAP染色及鬼selleck笔环肽染色结果显示，BMSC来源的sEV能够有效抑制RAW264.7细胞融合形成破骨细胞。PCR结果表明sEV能够降低CREB、CTSK和c-Jun mRNA的表达量(均P<0.05)。流式细胞术分析表明，BMSC来源的sEV能够抑制RAW264.7细胞极化为M1型巨噬细胞，促进其极化为M2型巨噬细胞。Micro-CT检测结果显示，sEV干预后模型小鼠腰椎骨小梁数量和骨体积分数显著高于未干预小鼠(均P<0.05)previous HBV infection;TRAP染色结果显示，sEV干预后腰椎组织中的破骨细胞数量减少。结论·人BMSC来源的sEV可以延缓骨质疏松小鼠的骨质流失，这可能与其抑制小鼠破骨细胞分化及促进M2型巨噬细胞极化的作用有关。

目的：探讨器官移植信息管理平台潜在捐献者预警功能模块的设计和应用，提高潜在捐献者的发现率，改善人体器plant probiotics官捐献移植的供需矛盾。方法：基于分析传统潜在捐献者上报和目前供体器官维护工作中存在的问题，研究潜在捐献者预警标准及质量管理，借助信息化手段设计并实施潜在捐献者预警功能模块，分析功能模块实施效果。结果：潜在捐献者预警功能模块实施前（2021年10月-2022年5月），南京医科大学第一附属医院人体器官获取组织（Organ procurement organizations,OPO）人工上报潜在捐献者21例次，实施后（2022年10月-2023年5月）潜在捐献者预警功能模块系统预警潜在捐献者56例次。实施后系统智能化预警符合临床判断标准的潜在捐献者发现率、器官捐献转化率、潜在捐献者资料数据完整度等质控指标CP-690550 MW均优于实施前，差异有统计学意义（P <0.05）。结论：医院OPO实现了潜在捐献者数据融通、流程信息化管理，确保获取信息的高效精准及GW-572016核磁全流程闭环质量控制，对器官捐献工作的发展发挥了积极的作用。

目的 分析双相情感障碍躁狂相予以富马酸喹硫平联合丙戊酸钠治疗的效果及不良反应发生状况。方GSK1120212供应商法 选取2020年2月至2022年2月临沂市荣军医院收治的69例双相情感障碍躁狂相患者，用随机数字表法分为探究组（35例）和对照组（34例）。对照组进行富马酸喹硫平治疗，予以探究组富马酸喹硫平联合丙戊酸钠治疗。两组均在持续用药1个月后，观察患者躁狂状态，比较血脂水平、不良反应总发生率。结KD025体内果 探究组患者贝克-拉范森躁狂状态评分低于对照组，三酰甘油和胆固醇水平均高于对照组（均P <0.05）。探究组患者不良反应总发生率小于对照组（P <0.05）。结论 双相情感障碍躁狂相患Biobased materials者进行富马酸喹硫平联合丙戊酸钠治疗，能够有效稳定患者的血脂水平，改善患者抑郁、躁狂的心境，且产生的不良反应较少，整体临床治疗价值较高，值得在临床中依据患者的状况进行应用。