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目的 探讨乙肝扶正胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片治疗慢性乙型肝炎的临床疗效。方法 选取2019年11月—2022年10月在四川省第三人民医院就诊的118例慢性更多乙型肝炎患者,按照计算机随机排列分为对照组和治疗组,每组各59例。对照组口服富马酸丙酚替诺福韦片,25 mg/次,1次/d。治疗组在对照组基础上口服乙肝扶正胶囊,4粒/次,3次/d。两组患者连续口服6个月。观察两组的临床疗效,比较肝纤维化指标、肝功能指标和炎症反应指标。结果 治疗immune sensor后,治疗组总有效率明显高于对照组(91.53%vs 77.97%,P<0.05)。治疗后,两组的脾静脉门径(SVD)、门静脉主干内径(mPVD)、肝脏硬度值(LSM)均显著下降(P<0.05),治疗组SVD、mPVD、LSM较对照组降低更明显(P<0.05)。治疗后,两组的谷氨酰转肽酶(GGT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、乙肝病毒的脱氧核糖核酸(HBV-DNA)明显低于治疗前(P<0.05),且治疗组的GGT、ALT、HBV-DNA低于对照组(P<0.05)。治疗后,两组的血清结缔组织生长因子(CTGF)、白细胞介素-17(IL-17)、透明质酸(HA)水平均低于治疗前(P<0.05),治疗组血清CTGF、IL-17、HA水平明显低于对照组(P<0.05)。结论 乙肝扶正胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦片治疗慢性乙型肝炎的疗效确切,能显著改善患者肝纤维化程度和肝功能,降低NSC 125973临床试验炎症反应指标水平,且治疗安全性良好。

目的：探讨高凝状态的实验室指标与喉鳞癌形成和发展的关系。方法：回顾性分析我科2018年1月至2021年12收治的168例喉癌及40例喉良性病变者的临床资料，分析凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）、D-二聚体（D-D）、血小板（PLT）凝血指标在喉癌组与喉良性病变组、喉癌的临床分期、是否转移、是否复发、病理分级中的差异。结果：168例喉癌患者中，78.0%患者存在高凝状态，38.7%D-D、35.7%FIB、22.6%PLT高于正常，16.1%PT、13.7%APTT、1.8%TT低于正常。喉癌组PT、APTT低于喉良性病变组，FIB、D-D高于喉良性病变组，差异均有统计学意义（P<0.此网站05）,TT、PLT比较无统计学差异（P<0.05）；喉癌Ⅲ～Ⅳ期与Ⅰ～Ⅱ期比较、转移组与非转移组比较，PT、APTT均延长，FIB、D-D均升高，差异均有统计学意义（P<PLX33970.05）,FIB在喉鳞癌是否复发、分化程度中Hepatic organoids比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：喉癌患者普遍存在高凝状态，PT、APTT、FIB、D-D与喉癌的发生发展及转移有关，FIB的含量与喉癌的病理分化及肿瘤复发紧密相关，临床上应密切检测高凝状态的凝血指标，为喉癌的诊治提供依据。

旨在对从树莓粗多糖中分离纯化出的树莓多糖组分RPP-6进行结构表征及体外免疫活性和抗氧化活性研究。采用DEAE-Sepharose Fast Flow和Sephadex G-200对树莓粗多糖进行分离纯化。结合高效凝胶渗透色谱法(High-Performance Gel Permeation Chromatography, HPGPC)、傅里叶红外光谱法(Fourier Transform Infrared Spectroscopy, FT-IR)、气相色谱-质谱联用(Gas Chromatography and Mass SpectroTibetan medicinemetry, GC-MS)和甲基化等方法对RPP-6的结构进行表征。利用小鼠巨噬细胞RAW264.7和自由基清除试验研究RPP-6的体外免疫与抗氧化活性。结果表明，RPP-6是一种酸性杂多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖组成，摩尔比为37.8∶30.8∶21.4∶6.0∶3.9。RPP-6的峰位分子质量为7.645 ku、重均分子质量为7.FUT-175纯度769 ku、数均分子质量为6.VX-661抑制剂310 ku。RPP-6中存在15种单糖连接方式，其中Araf-(1→、→4,6)-Glcp-(1→、→4)-Galp-(1→和→4)-Xylp-(1→为主要连接方式，含量分别为20.64%、8.59%、24.04%和16.92%。RPP-6能明显提高小鼠巨噬细胞RAW264.7的活力和吞噬能力，并促进细胞中TNF-α(Tumor Necrosis Factor, TNF)、IL-6(Interleukin-6,IL-6)、IL-1β(Interleukin-1β,IL-1β)和NO(Nitric Oxide, NO)释放。RPP-6对ABTS·~+具有较高的清除作用，对DPPH·的清除作用不明显。表明RPP-6是一种多支链的均一酸性杂多糖，具有显著的免疫增强活性和一定的抗氧化活性。

目的抑郁症又称抑郁障碍,是指各种shoulder pathology原因引起的以显著而持久的心境低落为主要临床特征的一类心境障碍。然而,现有药物复发率高,仅对约30%的抑郁症患者有良好的治疗效果。由于在治疗过程中产生的多种不良反应进一步降低了患者的药物依存性。同时这些药物不可用于抑郁症的预防性治疗。因此,临床上还需要开发Blebbistatin半抑制浓度具有预防效果且不良反应弱的抑郁症辅助治疗手段。近年来,抑郁症的炎症致病途径与肠道微生物在抑郁症的病理机制中发挥的重要作用受到了越来越多的重视,通过调节肠道微生物预防或减轻抑郁PS-341价格症状有旷阔的应用前景。枸杞作为药食同源类药材,其安全性与滋补作用被广泛认可。枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)是枸杞的主要活性成分,因其具有抗炎特性及神经保护作用使其在抗抑郁防治中有良好的应用前景。因此,本研究旨在探讨枸杞多糖通过调节肠道微生物及短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)发挥的抗抑郁功能及潜在分子机制,为临床开发安全有效的抑郁症防治手段提供研究基础。方法1.构建脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)抑郁症动物模型,对比空白对照组与LPS模型组小鼠的抑郁行为。通过糖水偏爱实验(sucrose preference test,SPT)、悬尾实验(tail suspension test,TST)等行为学实验评价小鼠的抑郁状态;通过实时荧光定量PCR法检测小鼠海马体中炎症因子的水平,验证模型的效果。2.对空白对照组与LPS模型小鼠肠道微生物进行测序,通过16s核糖体RNA扩增子测序分析检测LPS抑郁小鼠结肠内容物的微生物群的特征,探究LPS抑郁模型对小鼠肠道微生物的影响,发掘关键的微生物种群。3.将实验小鼠分为空白对照组、LPS模型组、LBP(40mg/kg)、LBP(80mg/kg)治疗组、氟西汀治疗组。基于LPS抑郁症动物模型,对抑郁小鼠采取LBP预防性用药,以常用药物氟西汀为阳性对照药物。通过行为学实验以及实时荧光定量PCR法评价小鼠的抑郁状态与海马体中炎症因子的水平,以此评价LBP的抗抑郁效果。4.通过16s核糖体RNA扩增子测序分析检测LBP治疗后小鼠结肠内容物的微生物群的特征,探究LBP治疗过程中对抑郁小鼠肠道微生物产生的影响,发掘治疗过程中发生改变的关键微生物种群,并与氟西汀治疗组进行比较。5.通过气相色谱-质谱联用法测定LBP治疗后小鼠结肠内容物中SCFAs的水平,并与氟西汀治疗组进行比较。同时结合微生物组学测序结果,探究LBP通过改善小鼠肠道微生物组发挥抗抑郁作用的功能。结果1.通过腹腔注射LPS构建的抑郁症小鼠成功表现出了快感缺乏、行为绝望的抑郁样行为,并诱发了小鼠的神经炎症。行为学检测结果显示,与空白对照组相比,LPS组小鼠的SPT值显著降低(P<0.001),TST值显著增加(P<0.01);实时荧光定量PCR结果显示LPS模型小鼠海马体中IL-β(P<0.01)、TNF-α(P<0.001)的表达水平显著升高。2.LPS可以明显改变小鼠肠道微生物群落,与空白对照组相比,LPS模型组小鼠肠道中拟杆菌门的丰度上调,厚壁菌门与拟杆菌门丰度的比值降低;丹毒丝菌科的丰度显著降低,而乳杆菌科的丰度异常升高。在物种水平上,LPS组中uncultured＿bacterium＿g＿Dubosiella、Lactobaillus＿acidophilus、Bifidobacterium＿animalis丰度水平较空白对照组而言降低。而Lactobacillus＿reuteri、Lactobacill us＿murinus、Lacobaillus＿johnsonii、Lacobacilus＿intestinalis的物种丰度显著较高。3.LBP预防治疗可以缓解LPS模型小鼠的抑郁状态,与LPS组相比,LBP(40mg/kg)组、LBP(80mg/kg)组小鼠SPT显著上升(P<0.05、P=0.12),TST值显著下降(P<0.01、P<0.05);并缓解其海马体中的炎症因子IL-β、TNF-α的表达水平(P<0.01、P<0.001)(P<0.01、P<0.0001);同时恢复了海马体中TLR4、IKKα、p65的表达水平(P<0.05、P<0.01)(P<0.01、P=0.05)(P<0.05、P<0.01)。4.LBP治疗明显改变小鼠肠道微生物群落构成,相较于LPS模型组与氟西汀治疗组,LBP治疗组肠道微生物的β-多样性与空白对照组更为接近,而氟西汀治疗组与LPS模型组肠道微生物的β-多样性更为接近。在群落组成上,与L PS组相比LBP小鼠肠道中丹毒丝菌科的丰度明显上升,而乳杆菌科的丰度下降。物种水平上,LBP的治疗可以恢复小鼠肠道中unultured＿baterim＿g＿Dubosila、L actobacillus＿murinus、Lactobacillus＿reuteri以及Bifidobacterium＿animalis的丰度,使其更接近于空白对照组中的水平。5.LBP治疗可以缓解LPS引起的肠道SCFAs水平下降,LPS的诱导下小鼠肠道丁酸(P=0.0889)、异戊酸、己酸的水平与对照组相比表现出下降趋势,LBP治疗后丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸、己酸、异己酸呈现出了不同程度的上调,与LPS模型组相比,LBP(80mg/kg)组小鼠肠道中的丁酸(P<0.05)、异丁酸(P<0.01)、戊酸(P<0.05),LBP(40mg/kg)组中异丁酸(P<0.05)的水平有显著上升。而氟西汀治疗后小鼠肠道中乙酸、丁酸被进一步消耗,与空白对照组相比乙酸(P<0.001)、丁酸(P<0.05)水平显著降低。结论1.构建LPS抑郁模型可以成功诱导出小鼠抑郁样症状,并引发小鼠的神经炎症。2.LPS抑郁模型可以显著改变小鼠的肠道微生物结构,在引发抑郁症小鼠神经炎症的同时可以破坏小鼠肠道微生物的稳态。3.LBP预防性用药可以有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁样行为并改善小鼠海马体中炎症因子水平,这为枸杞多糖作为防治抑郁症的天然药物的应用提供了依据。4.LBP的治疗可以改善抑郁症小鼠的肠道微生物群落结构,恢复小鼠肠道微生物群落组成使其更接近空白对照组。氟西汀治疗不能恢复鼠肠道微生物群落的结构。5.LBP作用于肠道微生物群后可能通过调节肠道微生物的代谢增加SCFAs在肠道中的水平。不同于氟西汀对肠道中SCFAs表现出的持续消耗,LBP表现出的恢复作用更有利于构建一个健康的肠道环境。

目的:探究尺神经皮下前置术联合术中尺神经电刺激仪治疗肘管综合征(Cu TS)的疗效。方法:选取2020年1月~2022年3月我院骨显微手外科Cu TS患者符合纳入标准者37例。按入院时间顺序先选取19例纳为对照组,后选取18例纳为刺激组。对照组行单纯肘部尺神经皮下前置术,刺激组行肘部尺神经皮下前置术联合术中尺神经电刺激治疗,刺激频率为3.5Hz,刺激强度以引起神经支配肌肉发生明显收缩为准,刺激时间为10分钟。术后两组患者分别在2个月和6个月时随访。比较两组患者术前术后患侧手指皮肤麻木concomitant pathology症状变化;术前术后患侧手握力变化;术前术后患侧手指皮肤两点辨别觉变化;术前术后爪形手变化;术前术后患侧手骨间肌及拇收肌肌力,点击此处分别以Wartenberg征和Fromant征表现;术前术后患侧手小鱼际肌、第一骨间背侧肌及拇收肌萎缩程度变化。结果:治疗后两组患侧手握力值在术后6个月随访时均较术前明diABZI STING agonist纯度显提高,术后2个月随访时与术前比较无明显变化,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组握力值无统计学意义(P>0.05)。两组患侧手指皮肤两点辨别觉术后2个月和6个月随访时均较术前改善,刺激组比对照组两点辨别觉改善明显,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组两点辨别觉有统计学意义(P<0.05)。两组患侧手肌萎缩在术后6个月随访时(可/差)比率均较术前明显提高,术后2个月随访时与术前比较无变化,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组患侧手肌萎缩改善程度无统计学意义(P>0.05)。两组患侧手指皮肤麻木症状术后2个月和6个月随访时均较术前明显改善,刺激组比对照组手指皮肤麻木症状改善明显,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组皮肤麻木症状改善有统计学意义(P<0.05)。两组患侧手爪形手变化在术后6个月随访时(可/差)比率均较术前明显提高,术后2个月随访时与术前比较无变化,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组患侧手爪形手变化无统计学意义(P>0.05)。两组患侧手骨间肌及拇收肌肌力在术后2个月和6个月随访时均较术前改善,刺激组比对照组骨间肌及拇收肌肌力改善明显,对刺激组和对照组术后2个月和6个月时行统计学分析,两组患侧手骨间肌及拇收肌肌力改善无统计学意义(P>0.05)。随访期间对照组有1例症状加重重新行尺神经松解术。结论:尺神经皮下前置术联合术中尺神经电刺激治疗肘管综合征比单纯尺神经皮下前置术改善皮肤麻木症状及皮肤两点辨别觉有明显优势。

目的 分析体素内不相干运动弥散加权成像（IVIPD-0332991临床试验M-DWI）在儿童腹部良恶性肿瘤诊断中的应用价值。方法 选取2020年1月～2022年12月我院收治的110例腹部肿瘤患儿为研究对象，其中良性肿瘤42例，恶性肿瘤68例，所有患儿均接受腹部MRI平扫、多弥散敏感系数（b）值IVIM-DWI扫描，分析腹部良恶性肿瘤的IVIM-DWI参数，并对参数敏感度、诊断界值、特异度等进行分析。结果 42例良性肿瘤患者中良性成熟畸胎瘤20例，肝血管瘤10例，节细胞神经瘤8例，肝脏局灶性结节增生4例。68例恶性肿瘤患者中Infection prevention神经母细胞瘤30例，肝母细胞瘤14例，肾母细胞瘤10例，淋巴瘤8例，未成熟畸胎瘤、横纹肌肉瘤、肾透明细胞肉瘤各2例；良性肿瘤与KD025化学结构恶性肿瘤患儿f值比较，差异无统计学意义（P>0.05），良性组患儿表观弥散系数（ADC）、真实弥散系数（D）值高于恶性组（P<0.05），灌注相关弥散系数（D*）值低于恶性组（P<0.05）；受试者工作特征（ROC）曲线分析结果显示，ADC值诊断良恶性肿瘤的ROC曲线下面积（AUC）、特异度和准确率明显高于D、D*值。结论 在儿童腹部实体肿瘤良恶性鉴别的IVIM-DWI参数中，ADC值的AUC、特异度和准确率较高，可以作为小儿腹部实体肿瘤良恶性鉴别的重要参考依据。

放线菌是公认的生物合成工厂,产生广泛的次级代谢产物,它是新药的发现源泉。目前的研究大多集中于土壤放线菌,但随着研究的越发深入,发现新的候选药物的频率开始下降。为解决这一问题,越来越多的科研工作者将目光转向了特殊生境的放线菌,这些菌株由于环境的影响而具有特殊的代谢和生理功能,可能产生结构新颖,活性多样的代谢产物。该论文对三株来自西藏高海拔低纬度地区的寒旱土壤放线菌的次级代谢产物进行了分离纯化、结构鉴定以及抗炎或抗肿瘤活性研究。使用高氏一号培养基将菌株TB060207进行大型发酵,经萃取得到粗提物,采用凝胶层析、正相硅胶、反相硅胶柱层析、薄层色谱、和半制备高效液相等方法,进行单体化合物的分离,获得4个已知的蒽醌类化合物:1-hydroxy-6-meth-oxy-8-methylanthraquinone(TB01),9′-hydroxyaloesaponarin Ⅱ(TB 02),3,8-dihy-droxy-1-methylanthraquinone-2-carboxylic acid(TB04)和 aloesaponarin Ⅱ(TB 12)。对这些化合物进行了抗炎活性研究,研究发现化合物TB12具有弱抗炎活性,在浓度为40 μM时,其NO产生率为70.89%。使用高氏一号培养基将菌株TB060214进行大型发酵,从其发酵液分离得到9个多烯羧酸,包括6个新化合物,serpentemycin E-J(TB06-TB11)和3个己知类似物:serpentemycin C(TB13),serpentemycin B(TB14),(2Z,4E,6Z)-7-(2-((1E,3 E)-4-carboxybuta-1,3-dien-1-yl)phenyl)hepta-2,4,6-trienoic acid(TB15)。这些化合物均是以邻位取代苯环为中心且具有两个以上共轭双键的开链多烯。在抗炎活性探究中,化合物TB15具有中等抗炎活性,在浓度为40μM时,其NO产生率为 60.53%。利用antiSMASH 5.0软件MS-275抑制剂对Streptomycessp.TB160215的全基因序列进行分析,发现其包含了 34个生物合成基因簇,并对基Medulla oblongata因簇合成的次级代谢RSL3 IC50产物进行了预测,包括大环内酯类(filipin),金霉酸类(mithramycin)等。使用高氏一号培养基将菌株TB160215进行大型发酵,从其发酵液分离得到了 10个金霉酸类化合物,包括 2 个新化合物 mithramycin B(TB16),premithramycin C(TB22)和 8 个已知的化合物:8-mycarosyl-12a-olivos-ylchromocyclin(TB17),deoliosyl-3C-β-D-mycarosyl-mithramycin(TB18),demycarosyl-mithramycin(TB21),8-mycarosyl-12a-oliosylolivosylchromocyclin(TB23),premithramycin A3(TB24),4E-acetyl-m-ithramycin(TB25),premetathramycin(TB26),mithramycin(TB27)。4E-acetyl-mithramycin(TB25)和 mithramycin(TB27)能够有效抑制乳腺细胞 MCF-7,MDA-MB-231,MDA-MB-453,MCF-10A的细胞活性。划痕愈合实验和Transwell实验表明mithramycin(TB27)对侵袭型三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231呈现出剂量依赖性的抗迁移和抗侵袭作用。研究结果表明,来自于特殊环境的放线菌次生代谢产物丰富,能够产生结构独特且具有很好的生物活性的化合物,可作为新天然产物的重要来源,进而为将来新药开发提供重要的菌种资源。

农作物秸秆含有丰富的氮、磷和钾等营养元素,是一种重要的生物质资源。每年约40.0%的秸秆被燃烧,造成严重的资源浪费和空气污染问题。秸秆还田作为一种生态友好型处理方法被广泛应用,但在实践中发现秸秆还田干扰作物种植,滋生病原体或虫害,并使土壤和肥料中的养分固定化。研究发现堆肥过程中的高温和各种微生物介导的生化过程可消灭病原体并回收养分,但是目前关于秸秆堆肥还田的研究报道较少。本研究采用0、2.5、5和7.5 t/hm~2秸秆堆肥覆盖还田和翻埋还田,研究其对土壤理化性质、微生物群落结构和玉米生理指标的影响,进而探明最佳的还田方式以及玉米产量提升的关键因子;从秸秆堆肥还田样地玉米根际土中,筛选根际促生菌(PGPR)。通过菌株间相互作用,将玉米根系定殖的PGPR构建合成菌群同时阐明合成菌群促生机制。主要研究结果如下:秸秆堆肥还田对土壤化学性质没有影响,但显著改善土壤团粒结构,尤其是7.5t/hm~2秸秆堆肥覆盖还田减少玉米花粒期土壤SARS-CoV抑制剂中>2 mm机械稳定性团聚体含量。同时,细菌群落结构比真菌群落结构对秸秆堆肥还田响应更显著。在秸秆堆肥翻埋还田和覆盖还田过程中,秸秆堆肥覆盖还田提升玉米产量,同时7.5 t/hm~2秸秆堆肥覆盖还田对玉米产量提升效果最好。最终,确定最佳的还田方式为覆盖还田,还田量采用7.5 t/hm~2。在科水平Belnacasan溶解度上,2个真菌(Trichocomaceae和Didymellaceae)和5个细菌(Xanthomonadaceae、Rhizobiaceae、Micrococcaceae、Micromonosporaceae和Microbacteriaceae)以及>2 mm机械稳定性团聚体与玉米产量提升显著相关。所有环境因子的共同作用可以解释玉米产量提升的81.36%。其中,Xanthomonadaceae科、Rhizobiaceae科和>2 mm机械稳定性团聚体的贡献率大于其他环境因子的贡献率。细菌群落结构作为玉米产量提升的关键因子。因此,采用筛选培养基,在秸秆堆肥覆盖还田样地玉米根际土中共筛选到20株不同种属的PGPR。其中,一株属于Rhizobiaceae科,其余19株PGPR属于Bacillaceae科、Sphingomonadaceae科、Moraxellaceae科、Pseudomonadaceae科和Enterobacteriaceae科。20株PGPR菌株均具有分泌IAA、赤霉素、解磷、解钾和固氮能力,并能显著促进植株生长。但是,已有的PGPR菌株中只有Pseudomonas hunanensis SM15、Enterobacter huaxiensis SM16、Klebsiella pneumoniae SM17和Klebsiella granulomatis SM18Medical law能够在玉米根系定殖。构建一个由Priestia aryabhattai SM03、Acinetobacter guerrae SM12、Klebsiella pneumoniae SM17和Klebsiella granulomatis SM18组成的合成菌群。合成菌群对玉米根部细菌群落的影响高于玉米根际土壤微生物群落,同时合成菌群成员中Klebsiella属作为优势菌属在玉米根系上定殖,其相对丰度达到30%。接种合成菌群第3天,微生物功能与细胞增殖相关,而第30天与土壤微生物营养物质转换和抗菌物质生产有关。植物激素信号途径作为与植物生长发育相关的关键通路,在玉米根系中富集。参与该通路的关键基因(AUX/IAA、SAUR、ARR-B、ABF、ERF1、TCH4、JAZ和PR-1)均上调表达。综上所述,秸秆堆肥覆盖还田通过优化土壤团粒结构,改善抗病微生物群落结构,进而提高玉米产量。该研究为解决秸秆焚烧造成的环境污染问题和保障人们粮食安全具有重要科学意义和实际应用价值。

羊传染性脓疱皮炎(Contagious ecthyma,CE),又名“羊口疮”,是由羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)引起的以感染绵羊、山羊等中小反刍动物为主的一种急性、高度接触性的传染病。尽管ORFV感染能够诱导机体强烈的免疫应答反应,但ORFV与宿主在长期进化过程形成干扰或破坏宿主免疫反应的能力,进而实现免疫逃逸,导致动物重复感染的发生,羊群一旦被感染则很难清除,成为严重危害养羊业发展的重要动物疫病之一。此外,ORFV也是一种动物源性人兽共患病原,人可通过与患病动物接触发生感染,尤其是从事饲养、屠宰、兽医等行业的工作人员,给全球公共卫生安全带来巨大挑战。疫苗接种目前仍是防控该病的重要手段,但尚缺乏有效的疫苗用于该病的防控,使得疫苗免疫效果不佳甚至免疫失败的现象时有发生。减毒活疫苗具有接种剂量小、免疫力更强、疫苗效果维持时间较长等优点,因此ORFV基因缺失减毒疫苗是未来ORFV新型、高效疫苗研发的一个重点方向。本研究首先利用CPE观察、电镜负染观察、PCR检测、病毒空斑形成试验和TCID_(50)测定、动物生长性能测定、病理学和病原学检测等方法对实验室前期构建的羊传染性脓疱病毒ORF120基因缺失毒株(ORFV-SY17(35)120)的毒力、复制能力、遗传稳定性等生物学特性及安全性进行检测,评估其作为减毒活疫苗候选毒株的潜力。电镜负染和光镜下的观察结果显示,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株与亲本毒株ORFV-SY17的病毒粒子形态相似,两病毒株感染细胞也呈现出半圆、皱缩等相似的CPE;空斑试验和TCID_(50)测定结果显示,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株的蚀斑形成能力和增殖能力略低于ORFV-SY17亲本毒株;ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株和ORFV-SY17亲本毒株的一步生长曲线(MOI=10)和多步生长曲线(MOI=0.1)相似,该结果表明ORF120基因缺失对病毒的复制能力无显著影响;将ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株分别连续传达12代,利用PCR技术检测各代次细胞中ORF120基因以及ORF011基因,鉴定ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株的遗传稳定性,结果显示,ORF011基因在ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株中能够稳定遗传;此外,利用TCID_(50)测定ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株各代次毒力,结果显示,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株的毒力也较为www.selleck.cn/products/pexidartinib-plx3397稳定。Decitabine配制最后,将ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株和亲本毒株ORFV-SY17分别接种羔羊,通过对各组羔羊生长性能、临床症状、病理变化等检测,与ORFV-SY17亲本毒株感染组相比,Biomass reaction kineticsORFV-SY17(35)120基因缺失毒株的致病力较弱,该结果表明,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株具有良好的安全性。上述研究结果表明,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株有望作为减毒疫苗候选毒株。活疫苗通常采用与自然感染相类似的途径接种,以往ORFV常规弱毒苗通常采用皮肤划痕的接种方式,尽管该接种途径能诱导机体较强的免疫反应,免疫保护效果较为确实,但存在操作难度大、动物应激反应强及散毒等生物安全问题。基于划痕接种方式的缺陷,本研究对ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株的免疫保护效果进行评估过程中,重点对该毒株的接种方式进行优化,分别将ORFV-SY17(35)120基因缺失减毒株采用皮肤划痕和皮下注射两种途径免疫3-4月龄羔羊,在2 w后进行加强免疫,4 w后用ORFV强毒株进行攻毒。利用ELISA、血清中和实验、Western blot、FACS等对免疫动物不同时间点血液样本中的Ig M、Ig G特异性抗体、ORFV059病毒蛋白抗体,以及细胞因子和T淋巴细胞亚群水平进行检测。结果显示,经划痕免疫和皮下免疫接种ORFV-SY17(35)120基因缺失减毒株均能诱导羔羊ORFV特异性抗体、ORFV059蛋白抗体、Th1/Th2细胞因子、以及CD4~+和CD8~+T淋巴细胞的产生。使用ORFV-SY17毒株进行攻毒,结果表明,无论划痕还是皮下免疫接种ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株,均能提供良好的免疫保护。上述研究结果表明,ORFV120基因的缺失不影响ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株在OFTu细胞上的复制增殖且遗传稳定,ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株对接种羔羊较为安全,确定安全免疫接种剂量为1.5×10~(6.5) TCID_(50)/只。ORFV-SY17(35)120基因缺失毒株有望作为ORFV新型疫苗候选毒株,且皮下注射免疫方式可替代传统的划痕免疫接种途径,为临床针对羊传染性脓疱皮炎的防治提供一种重要的技术手段。

海洋污损生物在船舶、管道和水产养殖网箱等多种表面的附着和繁殖,给人类与海洋相关的活动带来了一系列危害,生物污损日益受到关注。然而传统的防污涂料含有重金属离子,对非目标海洋生物也具有高毒性,不符合绿色环保的防污理念,因此开发一种环保型广谱防污手段非常必要。抗菌肽是许多生物体分泌的一种可以抑制细菌等污损生物黏附的生物分子,部分抗菌肽具有优异的细胞相容性和高度的亲和性,可用作改性船舶表面的潜在材料。本论文以304不锈钢为研究基底,通过筛选优化得到的抗菌肽修饰金属材料表面得到改性生物有机金属材料,利用表征仪器对样本表面的理化性质进行表征,选用需钠弧菌、三角褐指藻评估样本表面的防污性能,同时评测了样本在需钠弧菌培养液中浸泡不同时间段后的耐腐蚀性能,通过不断优化改性手段,建立一种新型船舶表面防污和防腐蚀手段。主要的研究内容如下:1.多巴胺/PEI/二氧化硅/抗菌肽多重修饰表面利用多巴胺(DA)、聚乙烯亚胺(PEI)和二氧化硅(SiO2)共沉积修饰DA改性后的304不锈钢(SS)表面制备纳米复合表面SS-DA/PEI/SiO2,通过接枝抗菌肽(AMPs)马盖宁(MAG Ⅱ)来制备 SS-DA/PEI/SiO2-M 复合表面。对 SS-DA/PEI/SiO2 和 SS-DA/PEI/SiO2-M表面的形貌结构、理化性质、细胞相容性、防污和防腐蚀性能等进行了详细的测试与研究。结果表明,不锈钢表面成功制备了 DA/PEI/SiO2/AMPs复合涂层,而且改性表面均表现出优异的细胞相容性。此外,防污实验结果显示,ARNAi TechnologyMPs改性前后的SS-DA/PEI/SiO2表面的抗菌效率达到78.39%和95.90%,AMPs的成功接枝有效提高了改性样品表面的防污性能。电化学和稳定性测试表明,改性样本表面具有良好的耐腐蚀性和防污稳定性。2.多巴胺与抗菌肽修饰表面在上述研究的基础上selleck化学,通过优化反应步骤,并改进抗菌肽,以DA为偶联剂将抗菌肽Turgencin BMox2(TB)接枝到304 SS表面制备了防污表面SS-DA-TB。利用红外光谱(FTIR)、X射线光电子能谱(XPS)、接触角测量仪(CA)、三维光学显微镜、椭圆偏振仪和原子力显微镜(AFM)表征了改性前后样本表面的形貌特征和理化性质。结果表明,抗菌肽成功接枝到304 SS表面,并改变了样本表面的形貌和润湿性。利用293T和E11细胞与抗菌肽TB共培养,证明了抗菌肽TB优异的细胞相容性。通过污损生物贴附测试表明了 SS-DA-TB具有优异的防污性能,对需钠弧菌和三角褐指藻表现出99.85%和67.93%的附着抑制率。此外,电化学性能测试结果表明SS-DA-TB在需纳弧菌培养液中浸泡14天后依然具备良好的耐腐蚀性能。3.抗菌肽衍生物修饰表面基于上述研究,进一步优化反应步骤和改进抗菌肽,利用从海洋生物提取的一种AMPs和多巴胺在弱酸条件下反应合成了一种抗菌肽衍生物DP,然后将其用于改性304 SS,制备了防污表面SS-DP。质谱分析证实购买NN2211了 DP的合成反应,细胞相容性测试结果表明,抗菌肽衍生物DP具有优异的细胞相容性。通过FTIR、XPS、AFM、接触角和三维光学轮廓仪,证明了 DP成功地接枝到304 SS表面。利用污损生物贴附测试表明了DP处理后的不锈钢表面具有优异的防污能力,对需钠弧菌和三角褐指藻表现出97.78%和90.01%的附着抑制率。此外,电化学性能和稳定性测试结果表明,制备的SS-DP表面具有优异的耐腐蚀性和防污稳定性。本论文结果可为海洋工业领域及其他相关领域提供一种新型绿色防污和防腐蚀策略。