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目的 ：研究长链非编码RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1簇宿主基因（long non-coding RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1 cluster host gene,LncRNA MIR100HG）调控miR-142-5p/SRY相关的高迁移率族盒蛋白5(SRY-related high mobility group box 5,SOX5)轴对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 ：采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC细胞CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、miR-142-5p与SOX5表达。体外培养CAL27细胞，随机分为对照组、LncRNA MIR100HG敲低组（转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒）、miR-142-5p mimics组（转染miR-142-5p mimics）、共转染阴性对照组（转染空载质粒和miR-142-5p阴性对照）、LncRNA MIR100HG敲低+miR-142-5p inhibitor组（转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒和miR-142-5p inhibitor），分组转染后，采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞LncRNA MIR100HG、miR-142-5p及SOX5表达；采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷染色及集落形成实验检测各组细胞增殖；采用Transwell侵袭实验检测各组CAL27细胞侵袭；采用免疫印迹检测各组CAL27细胞上皮间质转化相关蛋白表达。将各组细胞接种在裸鼠背部右侧腋窝附近皮下构建selleck化学OSCC移植瘤模型，饲养3周后检测各组移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量。采用双荧光素酶报告实验检测CAL27细胞LncRNA MIR100HG对miR-142-5p、miR-142-5p对SOX5的靶向调控。结果 ：与人口腔上皮细胞相比，CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、SOX5蛋白与mRNA表达升高，miR-Torin 1小鼠142-5p表达降低。Marine biomaterials与对照组相比，LncRNA MIR100HG敲低组、miR-142-5p mimics组细胞SOX5蛋白与mRNA表达、细胞活力、增殖率、集落形成比例、移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低，miR-142-5p表达、E-cadherin蛋白表达升高。下调miR-142-5p可减弱LncRNA MIR100HG敲低对CAL27细胞各指标的作用。CAL27细胞中LncRNA MIR100HG靶向下调miR-142-5p、miR-142-5p靶向下调SOX5。结论 ：敲低LncRNA MIR100HG可通过调控miR-142-5p/SOX5轴而抑制OSCC细胞增殖、上皮间质转化及侵袭，并可延缓其体内肿瘤生长。

目的 研究环状RNA yippee样2(CircYPEL2)通过miR-498/甲基甾醇单加氧酶1(MSMO1)轴调节宫颈癌细胞放射敏感性的机制。方法 检测人宫颈癌细胞株C33A及其放射线抵抗细胞C33A-RR中CircYPEL2、miR-498、MSMO1的表达。将体外培养的C33A-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组，分组转染后，检测各组细胞CircYPEL2、miR-498及MSMO1的表达、增殖、凋亡及蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。检测C33A-RR中CircYPEL2对miR-498的靶向调节与miR-498对MSMO1的靶向调节。结果 与C33A细胞相比，C33A-RR细胞中CircYPEL2的表达、MSMO1 mRselleck HPLCNA与蛋白表达升高(t值分别为-8.125、-11.600、-11.267,P<0.05),miR-498表达降低(t=8.104,P<0.05)。对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射Alisertib试剂+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组之间的CircYPEL2、miR-498、MSMO1 mRNA表达、MSMO1蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率Reclaimed water、凋亡细胞比例、细胞凋亡率比较差异均有统计学意义(F值分别为44.747、34.977、16.762、7.460、18.603、16.039、161.266、174.878,P<0.05);C33A-RR细胞增殖与凋亡相关蛋白表达比较，各组PCNA、CCND1、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白比较差异均有统计学意义(F值分别为15.777、13.693、81.133、78.133、51.587,P<0.05)。进一步比较发现，与对照组相比，放射组细胞各指标无明显变化(P>0.05);与对照组、放射组分别相比，放射+阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05);放射+CircYPEL2敲低组细胞增殖率、集落生成率、CircYPEL2表达、MSMO1 mRNA及蛋白表达、PCNA及CCND1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡细胞比例、细胞凋亡率、miR-498表达、Bax及caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-498 inhibitor可减弱CircYPEL2敲低对放射下细胞各指标的作用。CircYPEL2可靶向下调C33A-RR细胞的miR-498表达，而miR-498可靶向下调C33A-RR细胞MSMO1表达。结论 敲低CircYPEL2可通过上调miR-498而降低MSMO1表达，从而增强宫颈癌细胞的放射敏感性，最终促进其凋亡。

研究目的:人体摄取血液中葡萄糖的主要器官是骨骼肌。骨骼肌组织中富含线粒体,线粒体是骨骼肌细胞的主要供能场所,是骨骼肌摄取和利用能源物质的主要细胞器。线粒体的数量和正常生理功能是骨骼肌摄取葡萄糖和体内葡萄糖代谢平衡的保证。2型糖尿病(T2DM)是胰岛素分泌不足或利用功能受损、导致人体血糖过高的常见慢性病。因此,骨骼肌线粒体生物合成与功能受损与2型糖尿病(T2DM)的发生发展有着密切关系。研究表明,miR-133a在调节骨骼肌线粒体生物合Emricasan化学结构成中起着重要的作用。本研究拟通过间歇性有氧运动干预T2DM GK大鼠,探讨运动对T2DM GK大鼠骨骼肌线粒体生物合成的影响及其与miR-133a表达之间的关系。研究方法:适应性喂养1周后,16只Wistar健康雄性大鼠随机均分成正常对照组(A组)与正常运动组(B组),每组8只;T2DM GK雄性大鼠先检测随机血糖和进行口服糖耐量实验,将口服糖耐量实验降低且随机血糖≥11.1 mmol/L的GK大鼠随机均分成T2DM对照组(C组)和T2DM运动组(D组),每组8只。大鼠分笼饲养,每笼4只,自由饮食饮水,环境温度18-22℃,相对湿度50-60%,12h光照,12h黑暗。正常运动组(B组)和T2DM运动组(D组)大鼠先进行1周的递增负荷的适应性运动,适应性运动的方案为:第1天,10 m/min,运动20 min;第2天,15m/min,运动30 min;第3天,18 m/min,运动40 min;第4天,20 m/min 7 min和15 m/min 3min之间交替进行5个循环共50 min;第5天,22 m/min 7 min和15 m/min 3min之间交替进行5个循环共50 min。1周的适应性运动结束后,开始进行为期8周的正式的间歇性有氧跑台运动干预,正式运动的具体运动方案为:大鼠首先进行15 m/min 10 min的热身运动,然后进行22 m/min 7 min和15 m/min 3min之间交替进行5个循环、共50 min的运动。每天共运动60 min,每周5d,共8周。运动干预结束后,空腹12h后,大鼠进行口服糖耐量实验(OGTT):用血糖仪先测空腹血糖,然后称体重,按体重1g/kg的标准灌胃葡萄糖溶液,测取灌胃后30min、60min、90min、120min尾尖血糖,制作血糖曲线,计算糖耐量曲线下面积(AUC)。大鼠腹腔麻醉处死,腹主动脉采血、离心后,-80℃冰箱保存,用于检测大鼠血糖(GLU)、胰岛素(INS);取大鼠左后肢比目鱼肌放入2.5%戊二醛和4%多聚甲醛进行生物固定,以备制作切片观察骨骼肌显微结构和超微结构;取大鼠右后肢比目鱼肌,迅速进行液氮低温冷冻后,存放于-80℃冰箱,进行荧光半定量PCR(RT-PCR)和免疫印迹(WB)实验,分别检测线粒体生物合成与代谢相关基因和蛋白的表达情况。研究结果:(1)与正常对照组(A组)相比,正常运动组(B组)大鼠空腹血糖(GLU,5.32±0.54 mmol/L VS 4.96±0.49 mmol/L)、糖耐量曲线下面积(AUC,1041.60±156.58 VS 990.90±100.16)、空腹胰岛素水平(INS,20.67±3.57 ng/ml VS19.01±2.29 ng/ml)和骨骼肌miR-133a(0.86±0.13 VS 1.22±0.21)表达均无显著差异(P>0.05);但线粒体生物合成与代谢相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α,0.18±0.02 VS 0.31±0.01)、线粒体转录因子(mtTFA,0.46±0.10 VS 0.92±0.11)、核呼吸因子1(NRF1,0.73±0.08 VS 1.42±0.15)、柠檬酸合成酶(CS,0.43±0.09 VS0.80±0.10)、泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1,0.20±0.03 VS 0.45±0.05)、前列腺素内氧化酶还原酶1(COX1,2.78±0.18 VS 4.69±0.41)蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),正常运动组(B组)大鼠骨骼肌HE染色提示大鼠骨骼肌肌纤维横截面积增大,电镜结果显示骨骼肌线粒体数量增多增大、线粒体结构完整、排列规律。(2)与正常对照组(A组)相比,T2DM对照组(C组)大鼠空腹血糖(GLU,5.32±0.54 mmol/L VS 12.43±1.74 mmol/L)、糖耐量曲线下面积(AUC,1041.60±156.58 VS 2073.76±191.43)显著升高(P<0.01),空腹胰岛素水平(INS,20.67±3.57 ng/ml VS 12.74±1.68 ng/ml)、骨骼肌miR-133a(0.86±0.13 VS 0.66±0.01)表达及线粒体生物合成与代谢相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α,0.18±0.02 VS 0.09±0.01)、线粒体转录因子(mtTFA,0.46±0.10 VS 0.26±0.04)、核呼吸因子1(NRF1,0.73±0.08 VS 0.31±0.08)、柠檬酸合成酶(CS,0.43±0.09 VS 0.33±0.04)、泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1,0.20±0.03 VS 0.16±0.03)、前列腺素内氧化酶还原酶1(COX1,2.78±0.18 VS 0.90±0.12)表达显著降低(P<0.05或P<0.01),T2DM对照组(C组)大鼠骨骼肌HE染色提示大鼠骨骼肌肌纤维横截面积变化不大,但电镜结寻找更多果显示骨骼肌线粒体数量减少、部分线粒体结构欠缺、线粒体肿胀并呈现空泡化。(3)与T2DM对照组(C组)相比,T2DM运动组(D组)大鼠空腹血糖(GLU,12.43±1.74 mmol/L VS 11.25±1.26 mmol/L)、糖耐量曲线下面积(AUC,2073.76±191.43 VS 1823.95±203.81)显著下降(P<0.05),空腹胰岛素水平(INS,12.74±1.68 ng/ml VS 15.68±3.22 ng/ml)、骨骼肌miR-133a(0.66±0.01VS 1.14±0.45)及线粒体生物合成与代谢相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α,0.09±0.01 VS 0.17±0.02)、线粒体转录因子(mtTFA,0.26±0.04 VS0.62±0.06)、核呼吸因子1(NRF1,0.31±0.08 VS 0.77±0.19)、柠檬酸合成酶(CS,0.33±0.04 VS 0.62±0.06)、泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1,0.16±0.03 VS0.31±0.05)、前列腺素内氧化酶还原酶1(COX1,0.90±0.12 VS 3.06±0.29)表达显著升高(P<0.05或P<0.01),T2DM运动组(D组)大鼠骨骼肌HE染色提示大鼠骨骼肌肌纤维横截面积增大,电镜结果显示骨骼肌线粒体数量增多增大、线粒体结构基本完整、线粒体肿胀与空泡化现象明显减轻。(4)Pearson相关性分析结果表明,骨骼肌线粒体合成与代谢相关蛋白线粒体转录因子(mtTFA,r=0.6140)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α,r=0.6426)、核呼吸因子1(NRF1,r=0.5826)、柠檬酸合成酶(CS,r=0.7423)、泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1,r=0.5943)、前列腺素内氧化酶还原酶1(COX1,r=0.6993)表达与miR-1Anti-biotic prophylaxis33a表达水平均呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。研究结论:本研究所采用的有氧间歇运动可以增加正常大鼠和T2DM GK大鼠骨骼肌线粒体的数量和体积,提高骨骼肌线粒体合成与代谢相关蛋白线粒体转录因子(mtTFA)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF1)、柠檬酸合成酶(CS)、泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(NDUFS1)、前列腺素内氧化酶还原酶1(COX1)的表达水平,且这种作用可能与有氧间歇运动可以提高miR-133a表达有关,具体机制需要进一步研究。

芫根(Brassica rapa L.),学名为芜菁或蔓菁,味辛、性温,生长在青藏高原。千百年来,芫根作为青藏高原药、食、饲三用的植物,主要用于缓解当地人、畜的高原反应。研究表明,芫根中含有的多糖、黄酮、多酚、三萜和皂苷等是其主要功能成分,这些化合物表现出了如耐缺氧、抗疲劳、抗辐射和免疫调节等功能活性;其中含有的特征性成分:硫代葡萄糖苷和异硫氰酸酯类化合物具有显著的抗肿瘤、抗病毒和抑菌等活性。研究发现芫根的粗提物具有一定的缓解急性运动疲劳和脑保护作用,能有效缓解氧化应激和炎症造成的外周或中枢神经系统损伤。但尚未报道芫根在干预慢性疲劳方面的作用。疲劳作为一种负面状态,可以影响任何人。慢性疲劳会随着疲劳症状的延长而形成,且往往伴随着各种疾病。慢性疲劳作为一种病因不明的衰弱综合征,从目前来看,慢性疲劳的形成原因主要包括以下几个方面:免疫系统异常Immunoassay Stabilizers、中枢神经系统功能异常、神经内分泌系统异常和肌肉能量代谢异常等。另外,肠道Barasertib IC50菌群在慢性疲劳中也发挥了重要的作用,肠道菌群的失调,肠屏障受损会诱导多种疾病包括慢性疲劳。由于慢性疲劳发病机制具有多靶点性,用富含多种活性化合物的草药干预正成为一种对抗慢性疲劳的主流手段。因此本研究采用持续游泳诱发疲劳的小鼠模拟慢性疲劳状态,运用芫根提取液进行干预,主要研究内容如下:(1)本实验中,通过分级萃取,共鉴定出了有机酸27种、硫苷15种、糖苷12种,黄酮苷16种、黄酮5种、酚类3种、酯类6种和异硫氰酸酯7种等物质,且与标品具有同质性,具有参考意义。体外抗氧化能力排序依次为:芫根水提液(AEB)>芫根水相萃取物(AET)>芫根正丁醇相萃取物(SBET)>芫根石油醚相萃取物(PET)>芫根乙酸乙酯相萃取物(CET)>芫根氯仿相萃取物(EAET),AEB效果最佳。通过分子对接发现萝卜硫素与Nrf2、trans-6-shogaol与MAPK、triandrin与PGC-1α均具有良好的结合能力。推测AEB具有提高抗氧化能力、刺激免疫活性和促进线粒体功能的效果。(2)建立过度运动诱导的慢性疲劳小鼠模型,探究AEB对缓解慢性疲劳的效果和机制。在外周疲劳方面:AEB可以显著提高疲劳小鼠的运动状态,调节体内尿素氮(BUN)、乳酸(LD)等疲劳相关代谢物,调节乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)等酶活性。并调节NAD+/NADH促进ATP合成,维持了肝肌糖原的水平。并且通过调节mTOR和AMPK之间的平衡促进细胞能量代谢,并促进下游通路PGC-1α/TFAM的表达,改善线粒体功能和生物发生。通过调节Nrf2/HO-1通路促进了体内抗氧化酶超过氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的合成,强化了抗氧化防御系统,减少了氧化应激。并且有效促进骨骼肌纤维的生长,减少损伤,有效减少白细胞浸润。(3)探究AEB对慢性疲劳小鼠的中枢疲劳干预作用发现:有效增强了Y迷宫中的表现。AEB提高了下丘脑、纹状体中的神经递质多巴胺(DA),抑制了下丘脑中5-羟色胺(5-HT)以及下丘脑和纹状体中的神经递质谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA),优化了慢性疲劳小鼠的精神状态。AEB上调了疲劳小鼠海马体的SIRT1/PGC-1α/TFAM通路表达,维持了小鼠海马体线粒体功能。通过建立Glu诱导HT22细胞模型,发现A寻找更多EB可以有效减少Glu引起的ROS积累,维持了细胞的稳定生长,并有效维持了细胞的线粒体膜电位和线粒体形态稳定,通过提高AMPK/PPARγ表达促进线粒体生物发生。说明线粒体可能是AEB干预慢性疲劳的潜在靶点之一。(4)探究AEB对慢性疲劳小鼠的细胞因子的作用发现:芫根通过抑制各组织器官中TLR4/NF-κB信号通路,调节了白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素2(IL-2)、白介素10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)等促炎细胞因子的表达,缓解了肌肉、纹状体、结肠的炎症。并且通过调节转化生长因子β(TFG-β)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB),对机体的肌纤维再生、屏障功能可能产生保护作用。(5)芫根对小鼠肠道菌群的影响。芫根提高了慢性疲劳小鼠肠道中如:Firmicutes(厚壁菌)、Roseburia、Faecalibacterium,Clostridioides、Ruminococcus、Lactobacillus和Bacteroides等有益菌的丰度,抑制了如:Proteobacteria(变形菌)、Enterococcus、Mucispirillum、Pseudomonas和Enterobacteriaceae等有害菌的丰度。促进乙酸、丙酸、异戊酸以及总短链脂肪酸的产生。并通过上调Occludin、HO-1的表达保护结肠屏障,降低了血清内毒素的水平,调节了PGC-1α/TFAM。对菌群的功能富集,预测出芫根可以提高小鼠的维生素B_(12)合成通路。(6)芫根复配维生素饮料的抗疲劳效果。利用单因素和响应面优化实验确定了最优的芫根饮料口感配方,即:芫根原液80%、白砂糖12%、柠檬酸0.50%,并分别复配维生素B_3、维生素B_6、维生素B_(12),18mg/L、1.6 mg/L和1.6μg/L。可以有效提高疲劳小鼠的运动能力、优化疲劳代谢物并提高糖原储备。

目的 探讨组织多普勒成像技术（TDI）对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者R-CHOP方案多次化疗后左心室舒张功能的定量评估。方法 纳入60例经病理确诊为DLBCL、并接受R-CHOP方案多次化疗的患者，分别于化疗前（T0）、第1～6次化疗（记为T1～T6）后进行常规心脏超声检查，所有参数均测量3次取平均值，收集室间隔厚度（IVSd）、左心室收缩末期内径（LVESd）、左心室舒张末期后壁厚度（LVPWd）、左心室舒张末期内径（更多LVEDd）、左心室射血分数（LVEF）、二尖瓣舒张早期速度峰值（E）及舒张晚期速度峰值（A）,E/A值；进入TDI模式，取得室间隔e’、侧壁e’、室间隔E/e’、侧壁E/e’及平均E/e’，比较7次左心室常规心脏超声参数与左心室TDI参数差异。结果60例患者T0～T6阶段IVSd、LVEDd、LVPWd、Lsmall bioactive moleculesVESd、LVEF参数比较，差异均无统计学意义（F分别=0.95、0.58、1.23、0.86、2.15,P均>0.05），但T0～T6时，患者E峰、A峰、E/A值呈下降趋势，差异均有统计学意义（F分别=9.65、2.75、4.02,P均<0.05）。T0～T6阶段的室间隔e'、侧壁e'及平均e'呈逐步下降趋势，室间隔E/e'、侧壁E/e'、平均E/e'呈逐步上升趋势，差异均有统计学意义（F分别=37.60、50.24、49.35、2.41、2.60、2.61,P均<0.05）。结论 R-CHOP方案多次化疗后DLBCL患者左心室舒张功能下降，TDI技术可用selleckchem PF-6463922于监测R-CHOP方案化疗后早期左心室舒张功能障碍。

目的 研究程序性死亡受体1(PD-1)抑制剂联合化疗在非小细胞肺癌(NSCLC)中的临床效果及其对T淋巴细胞亚群的影响。方法 回顾性选取2020年7月至2022年6月就诊于九江市第一人民医院的98例NSCLC患者为研究对象，按照不同治疗方式分为对照组(n=49)和观察组(n=49)。对照组静脉滴注白蛋白紫杉醇+卡铂，观察组基于对照组加用帕博利珠单抗。比较两组患者selleck激酶抑制剂的疗效、治疗前后的肺功能指标、T淋巴细胞亚群水平、Burn wound infection卡氏功能状态评分及不良反应。结果 治疗后，观察组的客观缓解率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。观察组治疗后的第1秒用力呼气量(FEV_1)、FEV_1/用MK-1775体内实验剂量力肺活量(FVC)、卡氏功能状态评分均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，观察组CD3~+、CD4~+水平均高于对照组，CD8~+水平低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组的不良反应总发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PD-1抑制剂联合化疗在NSCLC中的疗效较好，有利于改善肺部健康、提高免疫功能、改善患者的生存质量，且安全性较高。

目的 制备一种花生四烯酸脂质体(liposomes containing arachidonic acid, Lipo-DAPE),研究该脂质体的活性氧(reactive oxygen species, ROS)响应性和毒性情况，考察其促进肿瘤细胞发生铁死亡的能力。方法 以粒径、Zeta电位为评价指标优化Lipo-DAPE的处方；通过透射电子显微镜和动态光散射表征脂质体的形貌、稳定性等理化性质，考察其ROS响应性及药物释放速率；通过激光扫描共聚焦显微镜观察4T1细胞对脂质体的摄取行为；通过MTT实验考察Lipo-DAPE的抗肿瘤活性；以细胞内ROS、脂质过氧化物及谷胱甘肽水平考察Lipo-DAPE促进肿瘤细胞铁死亡的能力。结果 Lipo-DAPE粒径为(74.4±1.0)nm, Zeta电位为(29.4±1.2)mV,可在48 h内维持稳定；在模拟肿瘤微环境ROS条Biogenic VOCs件下脂质体骨架崩解，促进药物释放；Lipo-DAPE能够被4T1细胞Liproxstatin-1半抑制浓度摄取并抑制细胞活力；此外，Lipo-DAPE促进了细胞中ROS及脂质过氧化物含量，降低了GSH水平。结论 Lipo-DAPE具有促进肿瘤细胞发selleckchem Colforsin生铁死亡的效果，为新型全活性纳米药物递送载体的设计提供了新思路与理论依据。

目的：评估Cox迷宫IV手术治疗慢性瓣膜病合并心房颤动患者的疗效，使用机器学习算法识别心房颤动复发的潜在风险因素，构建Cox迷宫IV手术后房颤复发预测模型，强化个体化房颤治疗方案。方法：纳入2012年1月至2019年12月来自中南大学湘雅二医院和陆军军医大学附属新桥医院符合条件的慢性瓣膜病合并房颤行瓣膜手术合并Cox迷宫IV手术患者555例，年龄57.948±7.964岁，其中房颤复发组117例，房颤未复发组438例。Kaplan-Meier法分析窦性心律维持率，构建9个机器学习模型，包括：随机森林(Random Forest)，梯度提升决策树(GBDT)，极限梯度提升(XGBoost)，引导聚集算法(Bagging)，逻辑回归 (Logistic Regression)，类别提www.selleck.cn/products/kpt-330升(CatBoost)，支持向量机(SVM)，自适应增强(AdaBoost)，多层感知机(MLP)。使用五折交叉验证和模型评估指标评估模型性能，评估指标包括准确度、精确度、召回率、F1分数和ROC曲线下面积，筛选出2个表现最佳的模型进行进一步分析，包括特征重要性评估和SHAP分析，识别房颤复发风险因素，以此构建房颤复发风险预测模型。结果：患者术后5年窦性心律维持率为 82.13% (95% CI：78.51%，85.9Docetaxel抑制剂3%)。9个机器学习模型中，XGBoost和CatBoost模型表现最好，ROC曲线下面积为0.768 (Innate and adaptative immune95% CI：0.742，0.786)和0.762(95% CI：0.723，0.801)，且在9个模型中有较高的准确率、精确率、召回率和F1值。特征重要性和SHAP分析显示房颤病史时长、术前左心室射血分数、术后心律、术前左心房内径、术前中性粒细胞淋巴细胞比值(NLR)、术前心率和术前白细胞计数等是房颤复发的重要因素，成功构建房颤复发风险预测模型。结论：Cox迷宫IV手术治疗房颤具有良好的窦性心律维持率，本研究通过机器学习算法成功识别多种Cox迷宫IV手术后房颤复发风险因素，成功构建了2个房颤复发风险预测模型，这可能有助于临床决策和优化房颤的个体化手术管理。

目的:阿霉素(doxorubicin,DOX)是一种具备深刻临床应用价值的抗肿瘤药物,它严重的心脏毒性可能会引起患者心功能障碍,这是该种药物应用的局限性所在。黄芪甲苷(astragalosides IV,ASIV)是黄芪的核心成分,ASIV能通过多种机制发挥心脏保护作用。本研究在细胞学水平建立DOX心肌损伤模型,明确ASIV对DOX诱导的心肌损伤中焦亡的作用及分子机制。方法:(1)选用不同浓度DOX和ASIV干预H9c2细胞,细胞计数检测试剂盒8法检测H9c2心肌细胞活力,选择药物适宜干预浓度及时间。(2)实验分为四组:对照组(control组)、ASIV组(100μmol/L ASIV)、DOX组(1μmSB203580ol/L DOX)、DOX+ASIV组(1μmol/L DOX+100μmol/L ASIV)。光学显微镜下观察细胞形态、酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、荧光倒置显微镜观察细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光强度、测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;电子显微镜下观察细胞亚显微结构;测定三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate,ATP)水平;ELISA法测定白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)测定NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、细胞凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like proteins,ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase 1,caspase-1)、消皮素D(Gasdermin D,GSDMD)m RNA表达情况;免疫荧光分析法观察NLRP3、GSDMD荧光表达强度;免疫印迹法(Western Blot,WB)检测焦亡经典途径相关蛋白表达水平(NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、GSDMD-N、cleaved IL-1β、cleaved IL-18);(3)给予NLRP3激动剂尼日利亚菌素(Nigericin),分组为:Control组、DOX组、DOX+ASIV组、DOX+ASIV+Nigericin组;ELISA法测定IL-1β、IL-18水平,并以WB法检测焦亡经典通路相关蛋白表达水平。结果:(1)DOX降低H9c2心肌细胞相对活性(P<0.05),ASIV对H9c2心肌细Enfermedad de Monge胞相对活性无显著影响(P>0.05),选择DOX 1μmol/L24h、ASIV 100μmol/L 24h作为干预条件。(2)相较对照组,DOX组H9c2细胞发生细胞损伤,光学显微镜下可观察细胞形态受损,LDH水平升高(P<0.01),DOX+ASIV组LDH水平相对降低(P<0.05)。(3)DOX可使H9c2细胞ROS、MDA水平升高(P<0.05),DOX+ASIV组心肌细胞ROS、MDA水平显著降低(P<0.05)。(4)DOX抑制心肌细胞能量代谢,DOX+ASIV组能量代谢较DOX组部分恢复。电子显微镜下观察到H9c2细胞DOX组线粒体肿胀、线粒体嵴部分消失,DOX+ASIV组线粒体形态较DOX组好转。与对照组相比,DOX可导致心肌细胞ATP水平下降(P<0.01),ASIV部分恢复DOX损害心肌细胞ATP水平(P<0.05)。(5)ELISA法测定IL-1β、IL-18水平升高(P<0.01),经ASIV治疗后降低(P<0.05)。电子显微镜下可观察DOX组细胞膜部分消失、连续性中断,胞浆脱离胞体,ASIV一定程度上恢复上述改变。与对照组相比,DOX组焦亡相关m RNA水平(NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD),NLRP3、GSDMD荧光强度及相关蛋白表达水平(点击此处NLRP3、ASC、cleaved caspase-1、GSDMD-N、cleaved IL-1β、cleaved IL-18)升高(P<0.05),ASIV治疗后抑制上述变化(P<0.05);(6)与治疗组相比,NLRP3激动剂部分减弱了ASIV对DOX诱导心肌损伤的保护作用,IL-1β、IL-18水平升高(P<0.05)及焦亡经典途径相关蛋白表达升高(P<0.05)。结论:(1)DOX通过NLRP3炎症小体介导焦亡经典途径诱导心肌细胞损伤。(2)ASIV抑制NLRP3炎症小体介导焦亡减轻DOX诱导的心肌细胞损伤。

卵巢癌(Ovarian cancer,OC)已成为一种严重威胁女性的癌症,其发病率年年递增。因发病隐匿,发现时2/3卵巢癌患者已达中晚期,往往还伴随远处转移,预后极差,复发率也高达70%。亟待寻找理想的治疗方案改善卵巢癌患者的现状。一直以来,西医治疗卵巢癌的标准方法是将肿瘤细胞减灭术与以铂类为基础的化疗相结合,但随之带来的手术创伤、药物副反应、铂类等化疗药物耐药也不容忽视。近年来,新型靶向药物的研究成为卵巢癌领域的新热点,多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP)抑制剂就是卵巢癌靶向药物的典型代表。PARP参与细胞周期调节、细胞分化、细胞复制等多种生物学过程,其中最重要的是参与DNA单链的损伤修复。PARP抑制剂主要作用机制是阻止了肿瘤细胞单链DNA的自我损伤修复,造成复制分叉时DNA双链的断裂,若此时肿瘤细胞乳腺癌易感基因BRCA缺失,肿瘤细胞既无法进行同源重组修复,也无法依赖PARP单链修复,将对肿瘤细胞产生“合成致死”效应,导致肿瘤细胞的死亡。奥拉帕利(Olaparib)是目前应用最广泛,也是最早应用的PARP抑制剂。大量临床前瞻性及回顾性数据证实奥拉帕利可显著延长卵巢癌患者无进展生存期,尤其是存在BRCA1/2突变的卵巢癌患者获益最大,已被欧洲委员会批准用于铂敏感、BRCA1/2突变的高级别卵巢癌复发患者。然而,仅有5%～10%卵巢癌患者先天性BRCA1/2突变,如何扩大PARP抑制剂使用范围成为新的研究领域。有临床试验发现,PARP抑制剂与烷化剂等化疗药物联合治疗实体肿瘤,依靠烷化剂直接损伤DNA链,PARP抑制剂能取得协同增效的作用。资料显示,PARP抑制剂同DNA损伤修复抑制剂联用可使肿瘤细胞对PARP抑制剂的敏感性增加,改善PARP抑制剂的耐药性,协同抑制肿瘤细胞的生长。另有研究表明,血管内皮生长因子抑制剂能诱导同源重组修复相关蛋白BRCA1/2和RAD51的下调,若与PARP抑制剂联合使用,能增强PARP抑制剂的敏感性,且这种作用的发挥和BRCA状态无关。这些都为PARP抑制剂联合用药提供可行性依据。随着祖国中医药的发展,中药提纯技术的进步,中药经典方剂的挖掘及临床应用,让中药在疾病治疗方面不断进步。三年的新冠疫情更让中药得到了前所未有的重视,我们十分清楚地看到中药发挥的广阔天地以及未被发现的潜在价值。目前,西医治疗仍为主要方法,可以发挥中药多靶点、高效低毒、经济便宜的优势来辅助西医治疗。中医里没有“卵巢癌”这一诊断名称,但根据卵巢癌的临床表现可将之归于“癥瘕”“积聚”“石瘕”“肠蕈”等范畴。hypoxia-induced immune dysfunction许多中医大家认为卵巢癌的病机为“正气不足”“正虚邪侵”,治法当以“扶正祛邪”为本,“扶正固本”或“益气清毒”为治法,所以治疗卵巢癌的中医方剂中大量使用补气类药物,尤以黄芪为重。因此,我们首选黄芪(Astragalus membranaceus,AM)作为研究的对象,目前关于黄芪治疗卵巢癌的分子作用机制、发挥抗癌作用的主要活性成分鲜少报道。本研究主要为三部分:首先,基于网络药理学方法,找到黄芪的主要活性成分;随后进行黄芪抗卵巢癌关键作用靶点的预测,通过蛋白质-蛋白质作用分析、富集通路分析及分子对接验证进一步对相关靶点优化;探究了信号通路;最终筛选出槲皮素(Quercetin)作为后续实验的主要研究对象。第二,随后进行体外细胞实验,探讨Quercetin单药及联合PARP抑制剂Olaparib对卵巢癌A2780、SKOV3细胞的抑制作用及潜在作用机制。第三,建立裸鼠皮下移植瘤,进一步验证Quercetin单药及联合PARP抑制剂Olaparib对卵巢癌活体肿瘤生长的影响,以及对同源重组修复通路上蛋白的表达影响,为Quercetin联合Olaparib治疗卵巢癌的进一步应用提供理论依据。第一部分基于网络药理学与分子对接探讨黄芪对卵巢癌的作用机制研究目的通过中药网络药理学研究黄芪所含SAHA有的各种有效活性成分、抗卵巢癌作用靶点、信号通路及药理机制。研究方法1、TCMSP获得黄芪主要活性成分,设定条件为OB≥30%,DL≥0.18Lorlatinib细胞培养和HL≥4h。2、Uniprot数据库获得黄芪主要活性成分的作用靶点。3、Gene Cards、DisGeNET、Open Targets数据库筛选卵巢癌的相关靶点。4、在线韦恩图Venny2.1.0取得AM-OC交集靶点。5、通过Cytoscape 3.8.0软件构建“AM-成分-交集靶点-OC”关系网络图,并筛选核心成分。6、通过STRING11.5数据库,绘制交集靶点的PPI网络图,加载到Cytoscape 3.8.0软件构建网络,使用CytoHubba插件、MCODE插件,筛选关键靶点。7、David数据库进行GO生物功能和KEGG通路富集分析,并筛选核心通路。8、AutoDock Vinal.1.2进行对接,PyMOL2.3.0分析对接结果的相互作用模式,验证核心靶点与活性成分之间的亲和力。研究结果1、获得黄芪活性成分和靶点、卵巢癌相关靶点,并筛选出“AM-OC”交集靶点:从TCMSP数据库获得AM成分87个,根据设定筛选出16个黄芪主要活性成分,184个对应作用靶点;检索GeneCards,DisGeNET和Open Targets数据库,选取各个数据库排名前149位的靶点;绘制韦恩图,获得“AM-OC”交集靶点共28个。2、黄芪抗卵巢癌的最核心活性成分是槲皮素:通过分析“AM-成分-交集靶点-OC”关系网络图,得到28个靶点关联了 14个成分,主要活性成分有槲皮素、山奈酚、芒柄花黄素、异鼠李素、毛蕊异黄酮,分别与24、9、8、8、7个靶点连接。槲皮素作为核心成分,将作为后续细胞和动物实验的研究对象。3、黄芪抗卵巢癌的关键靶点为P53、PTEN、VEGFA、MYC、AKT1、CCND1:通过“AM-OC”交集靶点的PPI网络图可视化分析,根据Degree值筛选出关键靶点,提示这些靶点可能是黄芪抗卵巢癌的潜在作用靶点。并用CytoHubba、MCODE插件再次进行了关键靶点的验证。4、黄芪抗卵巢癌的生物学功能丰富且通路众多,体现了黄芪“多成分-多靶点-多通路”的抗卵巢癌作用特点:利用DAVID数据库对28个共同靶点进行GO及KEGG富集分析,各筛选出排名前10的GO生物学功能条目和排名前20的KEGG通路富集分析条目,GO功能包括酶的调节、血管生成、氧化等,KEGG通路富集包括多种癌症通路,并构建出靶标-通路网络图。5、槲皮素与MYC结合性最强、最稳定,结果间接证明槲皮素可对核心靶点发挥调控作用:核心靶点(TP53、PTEN、VEGFA、MYC、AKT1、CCND1)与核心成分槲皮素进行分子对接,结合能绝对值最大的为MYC与槲皮素,结合能为-8.1 kal/mol。研究结论1、网络药理学分析结果提示黄芪可以通过多个靶点和通路发挥抗卵巢癌的药效,这为卵巢癌的进一步抗癌研究提供参考。2、网络药理学分析结果提示槲皮素是对抗卵巢癌的最重要的黄芪活性成分,这为进一步的体外和体内生物实验提供了重要依据。3、通过GO和KEGG富集分析发现,黄芪抗卵巢癌作用的潜在通路多样且复杂。其中,癌症途径就涉及多个靶点。第二部分槲皮素联合奥拉帕利对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖、迁移、凋亡的影响及潜在机制研究研究目的通过第一部分网络药理学和分子对接得出的黄芪抗卵巢癌核心成分—槲皮素,对卵巢癌A2780、SKOV3细胞生长进行干预,同时槲皮素联合奥拉帕利共同作用,探求两药联用抗卵巢癌的作用及机制。研究方法1、卵巢癌A2780、SKOV3细胞株体外培养。2、CCK8法检测Quercetin、Olaparib单药以及两药联用对SKOV-3、A2780细胞活力的影响。3、Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测Quercetin、Olaparib单药以及两药联用对SKOV-3、A2780细胞凋亡的影响。4、划痕实验、transwell迁移实验检测Quercetin、Olaparib单药以及两药联用对SKOV-3、A2780细胞迁移能力的影响。5、克隆形成实验检测Quercetin、Olaparib单药以及两药联用对SKOV-3、A2780细胞集落形成能力的影响。6、蛋白质印迹法(Western Blot)检测Quercetin、Olaparib单药以及两药联用处理后 SKOV-3、A2780 细胞 DNA 修复相关蛋白(ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51、PARP1、OGG1)的表达水平,分析Quercetin以及联合用药对DNA损伤修复的影响,探寻作用机制。研究结果1、槲皮素、奥拉帕利以及两药联用抑制卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞的增殖:Quercetin、Olaparib抑制卵巢癌A2780、SKOV3细胞活性均呈剂量和时间依赖性,浓度越大,作用时间越长,抑制率越高。Quercetin和Olaparib联合用药处理的卵巢癌细胞抑制效果显著高于单一用药的抑制效果。2、槲皮素、奥拉帕利以及两药联用促进卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞的细胞凋亡:流式细胞仪检测后显示,Quercetin与Olaparib联合用药组凋亡情况以晚期凋亡为主,在两种卵巢癌细胞中联合用药组的总凋亡率均显著高于单一药物组。3、槲皮素、奥拉帕利以及两药联用抑制卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞的迁移:用细胞划痕愈合、transwell实验发现,与对照组及单药组相比,Quercetin与Olaparib联合用药能明显抑制A2780和SKOV3细胞迁移能力,联合用药后细胞划痕愈合最慢,划痕面积最大,且迁移细胞数目最少。4、槲皮素、奥拉帕利以及两药联用抑制卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞的克隆形成能力:克隆形成实验结果显示,Quercetin与Olaparib联合用药能明显抑制细胞集落的形成,大大降低了 A2780细胞、SKOV3细胞的克隆形成能力。5、槲皮素下调卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞的PARP1基因的表达:Western blot结果显示,与Olaparib相对比,Quercetin的处理降低了 A2780细胞和SKOV3细胞内PARP1蛋白的表达,同时,Olaparib处理增加了 PARP1蛋白的表达水平。在影响PARP1基因表达方面,两者作用相反。6、槲皮素以及两药联用抑制卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞同源重组修复相关蛋白(ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51)的表达:Western blot结果显示,与对照组相比,Quercetin可抑制同源重组修复相关蛋白(ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51)的表达,阻碍了同源重组修复的过程,与Olaparib联合应用发挥合成致死效应。7、槲皮素上调对卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞OGG1基因表达:Western blot结果显示,在A2780细胞中,与其他三组用药组相比,Que组上调OGG1表达,表达差异均具有显著性(P<0.05或P<0.01)。在SKOV3细胞中,Que组上调OGG1表达,但各组之间表达差异不显著(P>0.05)。研究结论1、槲皮素、Olaparib单药可有效抑制卵巢癌A2780、SKOV3细胞的增殖,呈时间、浓度依赖性。2、槲皮素与Olaparib联合用药可增强单药对卵巢癌A2780、SKOV3细胞增殖、诱导细胞凋亡、抑制细胞迁移及细胞集落形成作用。3、槲皮素通过抑制PARP1蛋白表达和卵巢癌细胞的同源重组修复,与Olaparib联用对卵巢癌细胞发挥合成致死作用。第三部分槲皮素联合奥拉帕利对裸鼠卵巢癌移植瘤生长的影响及机制研究研究目的通过网络药理学和细胞实验已经证明槲皮素在卵巢癌中发挥重要的抑癌作用。为了验证槲皮素对在体卵巢癌肿瘤生长的影响,通过裸鼠皮下移植瘤实验来判断槲皮素以及槲皮素联合奥拉帕利对卵巢癌活体肿瘤生长的作用及作用机制。研究方法1、裸鼠接种A2780、SKOV3细胞进行成瘤实验。动态观察皮下移植瘤的生长状态,检测移植瘤体积及裸鼠体重变化。用药结束后处死裸鼠,将瘤体称重记录,并制成切片。2、采用HE染色观察移植瘤肿瘤组织形态,免疫组织化学染色检测槲皮素、Olaparib单药及联合用药后,各组裸鼠卵巢癌移植瘤组织中ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51、PARP1、OGG1蛋白的表达情况和表达定位。研究结果1、与对照组相比,各用药组卵巢癌移植瘤裸鼠的生长状态无明显差异:动物实验期间,各用药组成瘤裸鼠的体重增长,精神状态,饮食状况方面未见明显差异。2、槲皮素与Olaparib联合用药抑瘤作用最强:在A2780裸鼠卵巢癌移植瘤中,Olaparib组的抑瘤率为52.5%,Quercetin组的抑瘤率为35%,两药联用的抑瘤率为53.75%;在SKOV3裸鼠卵巢癌移植瘤中,Olaparib组的抑瘤率为27.27%,Quercetin组的抑瘤率为36.36%,Ola+Que组的抑瘤率为45.45%。与对照组相比,Quercetin与Olaparib联用组的肿瘤重量最小,差异有统计学意义(P<0.01)。3、槲皮素与Olaparib联合用药能明显抑制ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51在卵巢癌移植瘤组织中的表达:免疫组织化学染色结果显示:ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51蛋白在卵巢癌移植瘤中主要集中在细胞核表达,部分细胞质也表达。与对照组相比,槲皮素与Olaparib联合用药后,以上蛋白表达量明显降低,尤其是ATM、p-ATM、RAD51蛋白表达仅呈现少部分细胞核染色。4、槲皮素下调卵巢移植瘤组织中PARP1蛋白的表达:免疫组织化学染色结果显示:PARP1蛋白在卵巢癌移植瘤中集中在细胞核表达,与Olaparib相对比,Quercetin的处理降低了卵巢癌移植瘤组织内PARP1蛋白的表达,同时,Olaparib处理增加了 PARP1蛋白的表达水平。5、槲皮素上调卵巢移植瘤组织中OGG1基因表达:免疫组织化学染色结果显示:与对照组相对比,Quercetin的处理上调了卵巢癌移植瘤组织内OGG1蛋白的表达。研究结论1、动物实验证明,与单药相比,槲皮素与奥拉帕利联用对裸鼠体内卵巢癌细胞A2780、SKOV3皮下移植瘤生长抑制作用更强。2、槲皮素联合奥拉帕利可抑制移植瘤组织中PARP1、ATM、p-ATM、BRCA1、RAD51表达,发挥合成致死作用,且与肿瘤本身的同源重组状态无关。