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研究背景:在全球范围内,胃癌的发病率在所有肿瘤中位居第五位。由于胃癌早期症状不明显,且胃镜筛查普及率低等原因,大多数患者确诊时已是晚期,治疗选择有限且预后不佳。探索胃癌的早期诊断标志物和治疗新靶点,从而改善胃癌患者预后、延长其生存期,有重要的临床意义。然而,胃癌发生和发展的机制仍不清楚。因此,研究胃癌发生、发展的生物过程及其分子机制可以为胃癌治疗提供新的思路和理论依据。组氨酸磷酸酶LHPP是近年发现的一种抑癌分子。LHPP的作用在多种类型的癌症中得到了广Y-27632体外泛研究,其中包括口腔鳞状细胞癌、甲状腺癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌等。研究人员发现,LHPP既可以通过调节AKT相关信号通路抑制胰腺癌,膀胱癌和宫颈癌的增殖,也可以通过TGF-β信号通路抑制结直肠癌和胆管癌的转移。此外,在胶质瘤中,LHPP通过PKM2阻碍糖酵解来调节癌细胞代谢。然而,LHPP作为抑癌分子在胃癌中的功能和潜在机制仍有待进一步探索。本研究旨在发现LHPP在胃癌中的biologic drugs作用以及可能的调控机制。研究方法:通过公共数据库数据与90例胃癌患者的样本,分析LHPP在胃癌及癌旁组织中的表达情况,结合相应的临床资料分析LHPP与胃癌患者预后的关系。qPCR和Western blot检测LHPP在胃癌及对照细胞系的内源性表达。在AGS和MKN-45细胞系中转染LHPP过表达及降表达慢病毒,构建LHPP过表达、LHPP降表达稳转株。qPCR及Western blot检测LHPP表达,确认转染效率。活细胞工作站分析、克隆形成、划痕、Transwell实验检测LHPP表达对细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。根据生物信息学分析和转录组测序数据预测LHPP调控的下游信号通路和潜在下游基因。细胞黏附和脱落实验检测LHPP表达对细胞黏附能力的影响。qPCR检测LHPP过表达组、LHPP降表达组与对照组中PTPRF、NLK、WASF2、IQGAP1、IGF1R 和 PTPRJ 的 RNA 表达差异,Western blot检测IGF1R蛋白表达差异Empagliflozin试剂。在LHPP降表达组细胞中转染小干扰RNA降低IGF1R的表达,并通过qPCR和Western blot检测小干扰RNA的转染效率。选取LHPP和IGF 1R双降表达细胞进行回复实验,通过细胞黏附、细胞脱落、活细胞工作站分析实验验证胃癌细胞的黏附和增殖能力的变化;并使用Western blot检测黏附和增殖相关蛋白的表达,如ITGB1,p-FAK,FAK,SRC,YAP,c-MYC。最后,构建裸鼠皮下移植瘤模型,比较LHPP对胃癌细胞体内成瘤能力的影响。研究结果:1.LHPP在胃癌组织中表达降低,LHPP的表达水平与胃癌患者预后相关。2.LHPP在胃癌细胞中表达降低,且过表达LHPP抑制了胃癌细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力以及黏附能力。降表达LHPP促进了胃癌细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力以及黏附能力。3.LHPP通过调控IGF1R表达抑制胃癌细胞黏附和增殖能力。4.LHPP通过IGF1R调控ITGB1-FAK-SRC/YAP-c-MYC通路抑制胃癌细胞黏附和增殖能力。研究结论:LHPP作为抑癌分子,在胃癌组织和细胞系中的表达降低。LHPP可以作为胃癌患者的独立风险因素,其表达量与患者预后呈正相关。LHPP通过抑制IGF1R的表达调控ITGB1-FAK-SRC/YAP-c-MYC信号通路,来抑制胃癌细胞的黏附和增殖能力。

目的:探讨肾素-血管紧张素系统抑制剂(RASI)联合羟氯喹治疗IgA肾病的疗购买PF-02341066效及肾保护作用影响。方法:研究对象选择为2018年1月至2022年12月期间收治的IgA肾病患者共84例，采用简单随机分组法将研究对象分为对照组(42例)和观察组(42例),对照组患者服用RASI,观察组在对照组的基础上服用硫酸羟氯喹片，观察时间为3个月。比较两组患者的临床疗效。比较两组患者治疗前后肾功能指标及治疗安全性情况。结果:观察组治疗总有效率为92.86%SBE-β-CD,高于对照组76.19%(P<0.05);治疗后两组24-UPro水平低于治疗前(P<0.05),Scr水平高于治疗前(P<0.05),治疗后观察组血清24-Medically-assisted reproductionUPro含量与治疗前的差值明显大于对照组(P<0.05),治疗后观察组血清Scr水平与治疗前的差值和UA水平与治疗前的差值比较差异无统计学意义(P>0.05);两组患者不良反应的发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:肾素-血管紧张素系统抑制剂联合羟氯喹对于IgA肾病患者疗效较好，有助于控制蛋白尿、保护肾脏，维持肾功能稳定。

目的:马齿苋(Portulaca oleracea L.,POL),是国内分布广泛的一种药食同源性中草药,具有清热解毒、调节免疫等作用。近年来,本课题组从马齿苋中提取、分离和纯化得到马齿苋多糖(POL-Polysaccharide,POL-P)。前期研究表明,POL-P能提高机体免疫力,降低体内毒素,同时也发现,POL-P的免疫增强作用存在生物利用度低,且结合新型给药系统的研究相对薄弱等问题,致使POL-P的应用受到FUT-175体内实验剂量局限。脂质体是由磷脂双分子层包裹形成的水相核心微囊泡,作为一种优良的药物载体,具有提高生物利用度并降低毒副作用等特性。本研究综合考虑POL-P具有免疫增强的作用以及脂质体作为药物载体的良好特性,建立马齿苋多糖脂质体(POL-P Li确认细节posome,POL-PL)的最佳制备工艺并对其免疫增强活性进行初步评价,通过二者的共同作用,解决POL-P的应用局限且进一步提高其免疫增强活性。方法:首先,采用单因素实验-响应面优化的方法得到POL-PL的最佳制备工艺。利用逆相蒸发-微孔滤膜挤压法制备POL-PL,在六因素五水平的单因素实验基础上,选择影响包封率最大的三个单因素条件,即旋蒸温度、载药比、膜材比3个因素进行响应面优化,其他因素选用最优条件。利用响应面法进行工艺优化后得到最佳制备工艺条件,可行性调整后进行验证,最终得到最佳的POL-PL制备工艺。其次,对最优工艺制备的POL-PL进行形态学及理化性质分析。通过形态学、透射电镜观察,粒径分布、多分散系数(Polydispersity,PDI)及电势的测定,红外吸收光谱分析以及缓释性、储存稳定性实验等方法,明确POL-PL的形态及理化性质。再次,初步评价POL-PL对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强活性。利用CCK-8法探究POL-P、空白脂质体、POL-PL对小鼠脾淋巴细胞的最大安全浓度,并选择最适浓度检测POL-PL对小鼠脾淋巴B、T细胞增殖、B淋巴细胞IgG分泌及T淋巴细胞亚群分化的影响,确定POL-PL对小鼠脾淋巴细胞免疫增强活性的初步评价。最后,初步评价POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的免疫增强活性。利用CCK-8法确定POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的最大安全浓度,并选择最适浓度检测POL-PL对Raw264.7细胞增殖、吞噬活性、细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(Interleukin 6,IL-6)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)、白细胞介素-1β(Interleukin 1β,IL-1β)水平影响,确定POL-PL对小鼠脾淋巴细胞免疫增强活性的初步评价。结果:1、POL-PL最佳制备工艺条件为:磷脂浓度为5 mg·m L~(-1);超声时间为5 min;卵磷脂与吐温80质量比为15:1;膜材比为5:1;旋蒸温度40℃;脂药比为27:1。验证实验测定其包封率为37.83±1.49%,符合模型预测。2、POL-PL外观透明清亮并呈淡蓝色乳光,透射电镜下呈球形或椭圆形的囊泡,平均粒径和PDI分别为100.037±1.990 nm、0.232±0.003(n=3),Zeta电位为(-23.033±1.686)m V(n=3)。红外结果表明,POL-PL形成过程中没有形成新的化学键,是通过静电力作用结合形成;POL-PL的缓释性良好,4℃储存一个月包封率下降5%。3、POL-PL对小鼠淋巴细胞最大安全浓度为62.5μg·m L~(-1),最佳培养时间为24 h。与POL-P、BL、BC组相比,POL-PL可显著促进小鼠脾淋巴B、T细胞增殖(P<0.05),最佳剂量为16μg·m L~(-1)。POL-PL对小鼠脾淋巴B细胞IgG分泌量显著增加(P<0.05);流式细胞术测定POL-PL对小鼠脾淋巴T细胞亚群CD4~+/CD8~+的比值最显著(P<0.05)。4、POL-PL对小鼠巨噬细胞Raw264.7的最大安全浓度为62.5μg·m L~(-1),最佳培养时间为24 h。与POL-P、BL、BC组相比,POL-Pthree dimensional bioprintingL可以显著促进Raw264.7细胞增殖和吞噬活性(P<0.05),最佳剂量为16μg·m L~(-1)。POL-PL可显著上调Raw264.7细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6及NO水平(P<0.05)。结论:综上所述,本研究采用逆相蒸发-微孔滤膜挤压法制备POL-PL,单因素-响应面法优化其最佳制备工艺。按照最佳制备工艺制备POL-PL进行形态学及理化性质分析并进一步进行体外实验,明确了POL-P经过脂质体包被后增加了缓释性,并验证了其对小鼠脾淋巴细胞及巨噬细胞Raw264.7的免疫增强活性。该实验结果为提高中药活性成分的研究提供思路,且为研发多糖类免疫增强剂提供理论依据。

研究目的:力量训练效果表现出较大的个体差异,这种个体差异是由遗传决定的。本实验选取ACE基因的rs1799752(I/D)位点、rs4309位点、rs4291位点和CYP11B2基因的rs1799998位点、rs6410位点、rs3802230位点进行实验研究,通过力量训练效果,探寻解释肌肉厚度、等速肌力和血脂个体差异及训练敏感性的遗传学标记,讨论分析基因位点多态性与力量训练表型效果和力量训练健康促进效果的关联性,为制定科学系统的个体化训练体系提供一定的理论依据。研究方法:从三所大学招募194名大学生,均为汉族且符合实验受试者要求。因受伤、个人原因、DNA提取等多方面原因,最后完整参与整个实验过程的受试者共152名。所有受试者进行为期12周,每周2次的力量训练。训练采用中等负荷力量强度,为70%的深蹲/卧推1RM,10次一组,重复5组,组间间歇2分钟。力量训练前和力量训练后对肌肉厚度、最大力量、纵跳、等速和血脂指标进行测试,并分别进行比较分析。抽取受试者静脉血提取DNA进行基因型分析。实验数据采用Spss18.0进行分析,x2检验评估本研究选取的6个位点的Hardy-Weinberg平衡。训练后与训练前的数据差异用配对样本t检验,基因型之间的指标差异采用单因素方差分析。研究结果:(1)经过12周抗阻训练,肌肉厚度、最大力量、纵跳、等速峰值力、等速最大功、总胆固醇和低密度脂蛋白指标出现显著性上升(P<0.05)。(2)ACCH-223191纯度E基因和CYP11B2基因所选6个位点频率符合H-W平衡(P>0.05)。(3)ACE基因rs1799752位点三种基因型训练后深蹲/卧推1RM和纵跳指标出现显著性上升(P<0.05),生理指标、等速指标、血脂指标显著性II型优于ID型和DD型。(4)ACE基因rs4291位点三种基因型在深蹲/卧推1RM和纵跳指标出现显著性上升(P<0.05),生理指标、等速指标、血脂指标变化显著性AANon-HIV-immunocompromised patients型和AT型优于TT型。(5)ACE基因rs4309位点三种基因型在深蹲/卧推1RM和纵跳指标出现显著上升(P<0.05),生理指标中上升变化显著性CT型和TT型优于CC型,等速指标上升变化显著性CC型和CT型优于TT型,血脂指标TT型优于CC型和CT型。(6)CYP11B2基因rs1799998位点在生理指标、深蹲卧推1RM、纵跳指标、等速指标中AA型和AG型优于GG型,血脂指标中AA型优于AG型和GGVP-16 molecular weight型,G等位基因具有优势。(7)CYP11B2基因rs6410位点在生理指标、深蹲卧推1RM、纵跳、等速指标、血脂指标CC型和CT型优于TT型。(8)CYP11B2基因rs3802230位点三种基因型在深蹲卧推1RM和纵跳指标出现显著性上升(P<0.05),生理指标、等速指标、血脂指标变化显著性CC型优于AC型和AA型,A等位基因更敏感。研究结论:(1)受试者ACE基因和CYP11B2基因所选取的6个位点基因频率满足遗传平衡要求,受试者具有群体代表性。(2)ACE基因rs1799752、rs4291、rs4309位点和CYP11B2 rs1799998、rs6410、rs3802230位点与中等强度(70%1RM)力量训练效果的敏感性存在关联。(3)CYP11B2基因rs1799998位点G等位基因和rs3802230位点A等位基因可以作为我国汉族成年人中等负荷(70%1RM)力量训练影响血脂指标的遗传分子标记。

研究背景由结核分枝杆菌(Mtb)引起的结核病一直以来对于全球公共卫生系统而言都是严重的挑战,在世界范围内导致了严重的发病率和死亡率。巨噬细胞作为Mtb的主要栖息场所在抗结核感染中有着不可撼动的地位,而IFN-γ信号对于巨噬细胞激活清除Mtb至关重要。许多临床SCH772984说明书研究已经证明了 IFN-γ对结核病(包括耐多药结核病)的有效性,且改善了对一线抗结核用药治疗反应差的患者的巨噬细胞活性,加速患者的康复。干扰素诱导的干扰素刺激基因(ISGs)已被证实除了有广泛的抗病毒作用外,还具有抗真菌和细菌的效应。Viperin作为最易诱导的ISGs之一,前期课题组研究发现在巨噬细胞中Viperin能抑制宿主免疫反应促进Mtb感染,但Viperin与IFN-γ产生及其对Mtb感染之间的关系以及机制还有待研究。研究方法1.qRT-PCR和Westernblot检测Rsad2+/+小鼠和Rsad2-/-小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中Viperin的表达;2.CFU检测Viperin对BMDM中Mtb感染的影响;3.qRT-PCR和ELISA检测Viperin对不同时间以及不同感染复数感染Mtb的BMDM中IFN-α、IFN-β和IFN-γ产生的影响;4.IHC检测小鼠Mtb感染后肺脏和脾脏巨噬细胞中Viperin对IFN-γ表达的影响5.CFU检测IFN-y antibody预处理后Viperin对BMDM中Mtb感染的影响;6.Western Blot 检测 Mtb短时间感染的 BMDM 中TBK1/IKK-ε、IRF3、JAK1、STAT1信号通路的变化情况;7.qRT-PCR和 ELISA 检测上述相关通路对应抑制剂(BX-795、BAY-985、Abrocitinib、8.Fludarbine预处理后Mtb感染BMDM中IFN-γ的产生水平;9.CFU 检测述相关通路对应抑制剂(BX-795、BAY-985、Abrocitinib、Fludarabine)预处理后Viperin对BMDM中Mtb感染的影响;10.Western Blot 检测中和 IFN-γ 后 Viperin 对 Mtb 感染的 BMDM 中 JAKselleckchem1 和 STAT1信号通路变化情况;11.Confocol检测感染Mtb的BMDM中Viperin对STAT1信号通路入核的影响;12.在Rsad2-/-小鼠的BMDM中与INH合用检测其对Mtb的抑菌效应。研究结果1.Mtb感染促进BMDM中Viperin mRNA以及蛋白的表达;2.Viperin促进BMDM胞内Mtb的感染;3biologic agent.Viperin不影响IFN-α、IFN-β的产生,但通过抑制IFN-γ的产生发挥促菌效应;4.Viperin通过TBK1/IKK-ε信号通路抑制BMDM中IFN-γ的产生促进Mtb感染5.Viperin通过IRF3信号通路抑制BMDM中IFN-γ的产生促进Mtb感染;6.Viperin通过JAK1-STAT1信号通路抑制BMDM中IFN-γ的产生促进Mtb感染;7.Viperin抑制Mtb感染的BMDM中p-STAT1的入核;8.Viperin通过直接或间接的途径调控JAK1-STAT1信号通路;9.INH增强Rsad2-/-小鼠BMDM的抑菌效应。结论本研究证实了在BMDN中Mtb诱导的Viperin可以通过TBK1/IKK-ε-IRF3和JAK1-STAT1信号通路轴抑制IFN-γ的表达从而促进胞内Mtb感染,并与INH合用具有更高的疗效,这项研究给临床治疗多重耐药性结核病提供了崭新的思路和靶点。

目的 探讨电刺激疗法联合康复训练在产后盆底修复中应用效果。方法 选取2020年1月至2021年6月在呼和浩特市妇幼保健院盆底修复科进行产后康复的67名产妇作为研究对象，采用掷硬币法分为对照组（28名）与试验组（39名）。对照组接受康复训练疗法，试验组接受电刺激疗法配合康复训练进行产后盆底功能康复治疗，以阴道动态压力值、Ⅰ类肌纤维肌力、Ⅰ类肌纤维疲劳度、Ⅱ类肌纤维肌力、Ⅱ类肌纤维疲劳度以及盆底障碍性疾病发生率为判断指标，考察产妇经治疗干预前后盆底功能修复状况。结果 治疗前，两组产妇的阴道动态压力值、Ⅰ类肌纤维肌力、Ⅰ类肌纤维疲劳度、Ⅱ类肌纤维肌力、Ⅱ类肌纤维疲劳度比较，差异无统计学意义（P>0.05）；治疗后，试验组的阴道动态压力、Ⅰ类肌纤维肌力、Ⅱ类肌纤维肌力及Ⅱ类肌纤维疲劳度均高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。试验组治疗后的盆底障碍性疾病总发生率低于本组治疗前，差异有统计学意义（P<0.05）。结论selleck产品 电刺激疗Medical apps法联合康复训练在产妇产后康复中发挥显著效用，可使其盆底肌恢复正获悉更多常功能，有效降低盆底功能障碍性疾病发生率。

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是目前全球范围内致死率第二的消化道恶性肿瘤,其发生发展过程受多重环节调控,但对其驱动性分子事件及机制远未阐明。近年来学界提出肿瘤干细胞是包括结直肠癌在内的肿瘤发生发展的根源,肿瘤干细胞具有自我更新和分化能力,可驱动产生异质性肿瘤群体。结直肠癌干细胞受Wnt、NF-κB、Notch等信号通路的调控,但关键性调控分子以及机制尚未明确,进一步深入研究,可帮助研究者HDAC抑制剂设计靶向结直肠癌干细胞的结直肠癌治疗新策略。此外,较多研究表明,肿瘤相关中性粒细胞可促进或抑制肿瘤的发生发展,但结直肠癌中其作用及机制有待探究。迁移侵袭抑制蛋白MIIP是一新近发现的抑癌基因,已被证明在多种肿瘤中发挥抑癌功能。课题组前期研究表明MIIP缺失促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭等行为,同时我们利用MIIP杂合缺失的结肠癌细胞进行转录组测序,提示MIIP负向调控肿瘤干细胞和NF-κB信号途径,并且可参与调控中性粒细胞。因此本研究拟深入探究MIIP在结肠癌发生发展中的作用与机制。目的:1.明确MIIP缺失在结直肠癌发生中的作用;2.分析MIIP对结直肠癌干细胞干性的调控作用;3.研究MIIP对NF-κB信号途径的调控作用;4Z-IETD-FMK分子式.探索MIIP对结直肠癌肿瘤微环境中中性粒细胞浸润的影响。方法:1.使用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立Miip~(flox+/-)小鼠,分别与野生型小鼠、Villin-Cre小鼠杂交后再自交;提取两种基因型小鼠肠道上皮细胞及其余组织RNA,q PCR检测Miip表达水平;正常饲养及使用AOM-DSS法诱导两种基因型小鼠结直肠癌肿瘤,记录其体重曲线,观察肿瘤生成情况,HE染色检测组织形态学改变。2.使用Miip过表达或敲低的慢病毒感染CMT-93细胞,提取细胞系RNA,q PCR鉴定Miip表达水平;使用CMT-93 Miip稳转细胞系进行干细胞成球实验、有限稀释法成瘤实验;Western-blot以及免疫组织化学染色检测小鼠结直肠癌组织中CSC干性标志物和基因。3.通过双荧光素酶报告基因实验、Western blot、免疫组化染色,检测MIIP过表达或敲减对NF-κB信号途径的影响;利用免疫共沉淀实验检测MIIP相互作用分子。4.利用q-PCR、ELISA,检测MIIP过表达或杂合缺失对CXCL-1、CXCL-8表达的影响;HE染色以及免疫组化染色,检测Miip~(ΔIEC)小鼠和对照小鼠结直肠癌组织中中性粒细胞浸润。结果:1.Miip~(flox+/-)小鼠分别与野生型小鼠、Villin-Cre小鼠杂交再自交后获得Miip~(flox/flox)小鼠以及Miip~(flox/flox,p Villin-Cre)(简写Miip~(ΔIEC))小鼠,q-PCR结果显示Miip~(ΔIEC)小鼠仅肠道上皮细胞不表达Miip,说明肠道上皮特异性Miip敲除小鼠构建成功。正常饲养小鼠发现肠上皮Miip特异性敲除对小鼠生长无明显影响,AOM-DSS法诱导后Miip~(ΔIEC)小鼠出现便血,且形成肿瘤数量较对照组更多,HE染色显示Miip~(flox/flox)小鼠多见腺瘤和息肉样改变,偶见低级别上皮内瘤变,而Miip~(ΔIEC)小鼠肿瘤除上述改变外,多见高级别上皮内瘤变和浸润癌。2.q PCR结果显示CMT-93 Miip稳转细胞系构建成功,利用上述细胞进行干细胞成球实验及有限稀释法成瘤实验,结果显示Miip抑制干细胞成球、有限稀释法成瘤,在肠上皮Miip特异性敲除小鼠结直肠癌肿瘤中,干性基因表达增加。3.双荧光素酶报告基因实验以及Western-blot实验,显示Miip过表达抑制NF-κB信号途径,小鼠结直肠癌免疫组织化学染色结果显示Miip敲除促进p65核转位;进一步免疫共沉淀实验显示MIIP与IKKα相互作用。4.q PCR及ELISA结果均显示MIIP抑制趋化因子CXCL-1、CXCL-8的表达;且HE染色以及免疫组化结果显示Miip特异性敲除小鼠结直肠癌肿瘤中中性粒细胞浸润增加。结论:1.Miip~(ΔIEC)较对照小鼠更易被AOM-DSS法诱发小鼠结直肠癌,初步提示Miip缺失促进结直肠癌的发生。2.Miip抑制结直肠癌细胞成球、最小细胞数成瘤以及干性Marker表达,androgen biosynthesis表明Miip抑制结直肠癌CSC特性;3.MIIP抑制NF-κB信号途径且与IKKα存在相互作用,提示MIIP可能通过负向调控IKK/NF-κB信号途径发挥其抑制结直肠癌干细胞干性的作用。4.MIIP抑制招募中性粒细胞的趋化因子表达,且Miip~(ΔIEC)小鼠结直肠癌中性粒细胞浸润增加,提示MIIP缺失可能通过促进趋化因子表达而招募中性粒细胞。

结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是目前全球范围内致死率第二的消化道恶性肿瘤,其发生发展过程受多重环节调控,但对其驱动性分子事件及机制远未阐明。近年来学界提出肿瘤干细胞是包括结直肠癌在内的肿瘤发生发展的根源,肿瘤干细胞具有自我更新和分化能力,可驱动产生异质性肿瘤群体。结直肠癌干细胞受Wnt、NF-κB、Notch等信号通路的调控,但关键性调控分子以及机制尚未明确,进一步深入研究,可帮助研究者HDAC抑制剂设计靶向结直肠癌干细胞的结直肠癌治疗新策略。此外,较多研究表明,肿瘤相关中性粒细胞可促进或抑制肿瘤的发生发展,但结直肠癌中其作用及机制有待探究。迁移侵袭抑制蛋白MIIP是一新近发现的抑癌基因,已被证明在多种肿瘤中发挥抑癌功能。课题组前期研究表明MIIP缺失促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭等行为,同时我们利用MIIP杂合缺失的结肠癌细胞进行转录组测序,提示MIIP负向调控肿瘤干细胞和NF-κB信号途径,并且可参与调控中性粒细胞。因此本研究拟深入探究MIIP在结肠癌发生发展中的作用与机制。目的:1.明确MIIP缺失在结直肠癌发生中的作用;2.分析MIIP对结直肠癌干细胞干性的调控作用;3.研究MIIP对NF-κB信号途径的调控作用;4Z-IETD-FMK分子式.探索MIIP对结直肠癌肿瘤微环境中中性粒细胞浸润的影响。方法:1.使用CRISPR/Cas 9基因编辑技术建立Miip~(flox+/-)小鼠,分别与野生型小鼠、Villin-Cre小鼠杂交后再自交;提取两种基因型小鼠肠道上皮细胞及其余组织RNA,q PCR检测Miip表达水平;正常饲养及使用AOM-DSS法诱导两种基因型小鼠结直肠癌肿瘤,记录其体重曲线,观察肿瘤生成情况,HE染色检测组织形态学改变。2.使用Miip过表达或敲低的慢病毒感染CMT-93细胞,提取细胞系RNA,q PCR鉴定Miip表达水平;使用CMT-93 Miip稳转细胞系进行干细胞成球实验、有限稀释法成瘤实验;Western-blot以及免疫组织化学染色检测小鼠结直肠癌组织中CSC干性标志物和基因。3.通过双荧光素酶报告基因实验、Western blot、免疫组化染色,检测MIIP过表达或敲减对NF-κB信号途径的影响;利用免疫共沉淀实验检测MIIP相互作用分子。4.利用q-PCR、ELISA,检测MIIP过表达或杂合缺失对CXCL-1、CXCL-8表达的影响;HE染色以及免疫组化染色,检测Miip~(ΔIEC)小鼠和对照小鼠结直肠癌组织中中性粒细胞浸润。结果:1.Miip~(flox+/-)小鼠分别与野生型小鼠、Villin-Cre小鼠杂交再自交后获得Miip~(flox/flox)小鼠以及Miip~(flox/flox,p Villin-Cre)(简写Miip~(ΔIEC))小鼠,q-PCR结果显示Miip~(ΔIEC)小鼠仅肠道上皮细胞不表达Miip,说明肠道上皮特异性Miip敲除小鼠构建成功。正常饲养小鼠发现肠上皮Miip特异性敲除对小鼠生长无明显影响,AOM-DSS法诱导后Miip~(ΔIEC)小鼠出现便血,且形成肿瘤数量较对照组更多,HE染色显示Miip~(flox/flox)小鼠多见腺瘤和息肉样改变,偶见低级别上皮内瘤变,而Miip~(ΔIEC)小鼠肿瘤除上述改变外,多见高级别上皮内瘤变和浸润癌。2.q PCR结果显示CMT-93 Miip稳转细胞系构建成功,利用上述细胞进行干细胞成球实验及有限稀释法成瘤实验,结果显示Miip抑制干细胞成球、有限稀释法成瘤,在肠上皮Miip特异性敲除小鼠结直肠癌肿瘤中,干性基因表达增加。3.双荧光素酶报告基因实验以及Western-blot实验,显示Miip过表达抑制NF-κB信号途径,小鼠结直肠癌免疫组织化学染色结果显示Miip敲除促进p65核转位;进一步免疫共沉淀实验显示MIIP与IKKα相互作用。4.q PCR及ELISA结果均显示MIIP抑制趋化因子CXCL-1、CXCL-8的表达;且HE染色以及免疫组化结果显示Miip特异性敲除小鼠结直肠癌肿瘤中中性粒细胞浸润增加。结论:1.Miip~(ΔIEC)较对照小鼠更易被AOM-DSS法诱发小鼠结直肠癌,初步提示Miip缺失促进结直肠癌的发生。2.Miip抑制结直肠癌细胞成球、最小细胞数成瘤以及干性Marker表达,androgen biosynthesis表明Miip抑制结直肠癌CSC特性;3.MIIP抑制NF-κB信号途径且与IKKα存在相互作用,提示MIIP可能通过负向调控IKK/NF-κB信号途径发挥其抑制结直肠癌干细胞干性的作用。4.MIIP抑制招募中性粒细胞的趋化因子表达,且Miip~(ΔIEC)小鼠结直肠癌中性粒细胞浸润增加,提示MIIP缺失可能通过促进趋化因子表达而招募中性粒细胞。

目的 ：研究长链非编码RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1簇宿主基因（long non-coding RNA mir-100-let-7a-2-mir-125b-1 cluster host gene,LncRNA MIR100HG）调控miR-142-5p/SRY相关的高迁移率族盒蛋白5(SRY-related high mobility group box 5,SOX5)轴对口腔鳞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）细胞增殖、侵袭能力的影响。方法 ：采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测体外培养的人口腔上皮细胞和人OSCC细胞CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、miR-142-5p与SOX5表达。体外培养CAL27细胞，随机分为对照组、LncRNA MIR100HG敲低组（转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒）、miR-142-5p mimics组（转染miR-142-5p mimics）、共转染阴性对照组（转染空载质粒和miR-142-5p阴性对照）、LncRNA MIR100HG敲低+miR-142-5p inhibitor组（转染LncRNA MIR100HG siRNA质粒和miR-142-5p inhibitor），分组转染后，采用实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞LncRNA MIR100HG、miR-142-5p及SOX5表达；采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐法、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷染色及集落形成实验检测各组细胞增殖；采用Transwell侵袭实验检测各组CAL27细胞侵袭；采用免疫印迹检测各组CAL27细胞上皮间质转化相关蛋白表达。将各组细胞接种在裸鼠背部右侧腋窝附近皮下构建selleck化学OSCC移植瘤模型，饲养3周后检测各组移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量。采用双荧光素酶报告实验检测CAL27细胞LncRNA MIR100HG对miR-142-5p、miR-142-5p对SOX5的靶向调控。结果 ：与人口腔上皮细胞相比，CAL27、SAS、SCC-25中LncRNA MIR100HG、SOX5蛋白与mRNA表达升高，miR-Torin 1小鼠142-5p表达降低。Marine biomaterials与对照组相比，LncRNA MIR100HG敲低组、miR-142-5p mimics组细胞SOX5蛋白与mRNA表达、细胞活力、增殖率、集落形成比例、移植瘤裸鼠肿瘤体积及重量、侵袭数、N-cadherin蛋白表达降低，miR-142-5p表达、E-cadherin蛋白表达升高。下调miR-142-5p可减弱LncRNA MIR100HG敲低对CAL27细胞各指标的作用。CAL27细胞中LncRNA MIR100HG靶向下调miR-142-5p、miR-142-5p靶向下调SOX5。结论 ：敲低LncRNA MIR100HG可通过调控miR-142-5p/SOX5轴而抑制OSCC细胞增殖、上皮间质转化及侵袭，并可延缓其体内肿瘤生长。

目的 研究环状RNA yippee样2(CircYPEL2)通过miR-498/甲基甾醇单加氧酶1(MSMO1)轴调节宫颈癌细胞放射敏感性的机制。方法 检测人宫颈癌细胞株C33A及其放射线抵抗细胞C33A-RR中CircYPEL2、miR-498、MSMO1的表达。将体外培养的C33A-RR细胞随机分为对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组，分组转染后，检测各组细胞CircYPEL2、miR-498及MSMO1的表达、增殖、凋亡及蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CCND1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)的表达。检测C33A-RR中CircYPEL2对miR-498的靶向调节与miR-498对MSMO1的靶向调节。结果 与C33A细胞相比，C33A-RR细胞中CircYPEL2的表达、MSMO1 mRselleck HPLCNA与蛋白表达升高(t值分别为-8.125、-11.600、-11.267,P<0.05),miR-498表达降低(t=8.104,P<0.05)。对照组、放射组、放射+阴性对照组、放射Alisertib试剂+CircYPEL2敲低组、放射+CircYPEL2敲低+miR-498 inhibitor组之间的CircYPEL2、miR-498、MSMO1 mRNA表达、MSMO1蛋白表达、细胞增殖率、集落生成率Reclaimed water、凋亡细胞比例、细胞凋亡率比较差异均有统计学意义(F值分别为44.747、34.977、16.762、7.460、18.603、16.039、161.266、174.878,P<0.05);C33A-RR细胞增殖与凋亡相关蛋白表达比较，各组PCNA、CCND1、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白比较差异均有统计学意义(F值分别为15.777、13.693、81.133、78.133、51.587,P<0.05)。进一步比较发现，与对照组相比，放射组细胞各指标无明显变化(P>0.05);与对照组、放射组分别相比，放射+阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05);放射+CircYPEL2敲低组细胞增殖率、集落生成率、CircYPEL2表达、MSMO1 mRNA及蛋白表达、PCNA及CCND1、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡细胞比例、细胞凋亡率、miR-498表达、Bax及caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-498 inhibitor可减弱CircYPEL2敲低对放射下细胞各指标的作用。CircYPEL2可靶向下调C33A-RR细胞的miR-498表达，而miR-498可靶向下调C33A-RR细胞MSMO1表达。结论 敲低CircYPEL2可通过上调miR-498而降低MSMO1表达，从而增强宫颈癌细胞的放射敏感性，最终促进其凋亡。