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荧光素酶在科学研究中具有广泛的应用,其中作为报告基因研究最多,大多在细胞内发生,还可以应用于ATP检测、焦磷酸测序等。许多突变北美萤火虫荧光素酶已经被开发出来产生不同的生物发光颜色、提高酶稳定性或催化效率,然而,这些并没有实现发光强度及热稳定性的显著提高。本课题主要通过理性设计的方法对北美萤火虫荧光素酶进行分子改造,以获得在酶活性较原始酶活性不下降的前提下,酶热稳定性显著提高的突变体,并将其应用于药物筛选。本课题基于共识序列查找和表面氨基酸替换的理性设计方法,构建了35个单位点突变体,进行实验验证发现了6个与野生型相比热稳定性和酶活性提高的单位点突变体,分别为T214N、S201T、L530I、A532R、T290P、K28R,其中对应突变体在35℃金属浴10min后的热稳定性与野生型相比均分别提高了20.31、0.72、1.82、1.16、4.75、0.83倍。室温下测Ceralasertib作用定了对应突变体的酶活,酶的活性相比野生型分别提高了4.5、1.3、1.3、1.0、0.7、0.3倍。对它们进行迭代组合突变,获得了27个多位点组合突变体荧光素酶,测定其在35℃金属浴不同时间(5-25 min)后的Single Cell Analysis残余活性,结果发现金属浴5 min后,野生型荧光素酶的残余活性不到5%,而L530I/T214N/T290P、S201T/L530I/T214N/T290P、A532R/T214N/T290P、T214N/T290P组合突变体在金属浴5 min后残余活性仍然比较高,分别为82%、80%、57%、47%。然后将得到的最优突变体L530I/T214N/T290P应用于药物筛选细胞系构建中,结果显示,L530I/T214N/T290P突变体在selleck FG-4592药物筛选中具有更高的灵敏度,相比野生酶,其测定药物IL-6的IC50值从1.309变为1.034,证实了优化荧光素酶突变体酶活性的提高。

目的 探讨不全羧化骨钙素（ucOCN）对Erastin诱导小鼠海马神经元HT22铁死亡的作用。方法 以HT22海马神经元为研究对象，采用Erastin处理HT22细胞诱导铁死亡，实验分为CON组、ucOCN组、Erastin组、Erastin+ucOCN组。采用CCK-8细胞活力分析实验检测各组细胞的增殖情况，光学显微镜下观察不同组细胞形gibberellin biosynthesis态变化，Live/Dead染色检测细胞存活情况，超氧化物阴离子荧光探针（DHE）检测细胞活性氧确认细节（ROS）含量，TMRE探针检测线粒体膜电位，实时荧光定量PCRABT-263体外(qRT-PCR)检测siRNA序列对OCN的干扰效率，Western印迹实验检测不同组细胞铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白的表达水平。结果 以30μmol/l Erastin作用于HT22细胞24 h后明显降低了细胞活力，诱导细胞死亡，增加细胞内活性氧含量并降低了线粒体膜电位。与Erastin组相比，Erastin+ucOCN组细胞存活率有所升高，细胞内ROS水平显著降低，线粒体膜电位有所恢复；Western印迹实验结果显示，ucOCN能够促进铁死亡细胞内GPX4和SLC7A11蛋白的表达。结论 ucOCN对Erastin诱导细胞铁死亡具有抑制作用。

目的 探讨重组人血小板生成素(rhTPO)联合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)对急Urinary tract infection性髓系白血病(AMCaptisol价格L)患者血小板恢复的影响。方法 选取2020年1月—2021年12月本院收治的74例AML患者为研究对象，随机分为对照组和观察组，每组37例。对照组予以allo-HSCT治疗，观察组予以rhTPO联合allo-HSCT治疗。比较治疗后两组血小板重建时间和血小板恢复时间、凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白(FIB)、部分凝血活酶时间(APTT)]、炎症因子指标[降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及白细胞介素-6(IL-6)]、血管指标[血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子C(VEGF-C)]以及治疗期间的不良反应发生情况。结果 治疗后，观察组血小板重建时间和血小板恢复时间均短于对照组(P<0.05);观察组APTT和PT水平低于对照组，FIB水平高于对照组(均P<0.05);观察组PCT、CRP及IL-6水平低于对照组(P<0.05);观察组VEGF和VEGF-C水平高于对照组(P<0.05RP56976分子式)。治疗期间，对照组不良反应总发生率低于观察组(P>0.05)。结论 rhTPO联合造血干细胞移植治疗AML可以缩短血小板重建时间和血小板恢复时间，增强凝血功能，缓解炎症反应，提高造血微环境的血流供应，安全性好。

目的 设计化疗相关问题药学监护路径并评估其是否有助于发现并干预化疗患者的药物相关问题（DRPs）。方法 GSK1349572半抑制浓度通过药学监护Plant biology实践经验建立并实施化疗相关问题药学监护路径表与流程图。将该药学监护路径实施前后入住我院接受化疗的患者分为对照组（实施前，60例）与观察组（实施后，64例），提取对照组患者相关病历用以评估DRPs，对观察组患者进行化疗相关问题药学监护并提取DRPs。比较两组患者的基本情况、化疗情况、DRPs类别与干预情况、化疗所致不良反应、DRPs的欧洲医药保健网（PCNE）分类、DRPs发生时间、DRPs涉及的药物类别。结果 两组患者的基本情况、化疗方案与化疗药物类别比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。对照组与观察组分别有46、37例患者发生DRPs。两组DRPs均主要发生在化疗期间，且主要为化疗前期。利用化疗相关问题药学监护路径，DRPs的识别率从对照组的52.17%显著提高至观察组的91.89%(P<0.05)，干预率从对照组的32.61%显著提高至观察组的72.97%(P<0.05)，不良反应发生率从对照组的28.33%显著降低至观察组的12.50%(P<0.05)。对照组DRPs的主要问题类型为治疗有效性，主要涉及药物为辅助抗肿瘤药，主要发生原因为超适应证JQ1体外给予辅助抗肿瘤药；观察组DRPs的主要问题类型为治疗有效性和治疗安全性，主要涉及药物为止吐药，主要发生原因为预防化疗所致恶心呕吐用药不足。结论 化疗相关问题药学监护路径的实施有助于临床药师更好地识别与干预化疗患者的DRPs，减少化疗所致不良反应的发生。

目的：探讨屈螺酮炔雌醇片联合左炔诺孕酮宫内缓释系统（LNG-IUS）hepatitis C virus infection治疗子宫内膜增生（EH）的效果及安全性。方法：选取2020年1月─2022年1月福州市长乐区妇幼保健院收治的60例EH患者为研究对象，按随机数表法将其分为两组，各30例。对照组予以LNG-IUS治疗，观察组予以屈螺酮炔雌醇片联合LNG-IUS治疗。比较两组临床疗效、性激素水平、子宫内膜厚度、月经量及安全性。结果：观察组总有效率为GSK12693.33%，高于对照组的70.00%，差HIF抑制剂异有统计学意义（P<0.05）。治疗3个月后，两组孕激素受体m RNA相对表达量、雌激素受体m RNA相对表达量与治疗前比较均下调，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗3个月后，两组子宫内膜厚度与月经量均较治疗前降低，且观察组低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。观察组不良反应发生率为3.33%，低于对照组的20.00%，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：屈螺酮炔雌醇片联合LNG-IUS治疗EH可取得显著效果，不仅能提高临床疗效，改善性激素水平，降低子宫内膜厚度与月经量，而且还能促进患者治疗安全性进一步提高。

[目的]本文旨在研究不同淀粉来源及其糊化程度对团头鲂(Megalobrama amblycephala)生长性能、养分消化率和糖脂代谢的影响。[方法]采用2×2双因素试验设计，选取小麦淀粉和玉米淀粉2种淀粉源，以其是否糊化为因素，配制成4种试验饲料。试验选取320尾初始体重为(19.95±0.concomitant pathology14)g的团头鲂幼鱼，随机分成4组(即生小麦淀粉组、糊化小麦淀粉组、生玉米淀粉组、糊化玉米淀粉组),每组5个重selleck复，养殖期为10周。[结果]不同淀粉来源仅对肝脏脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,fas)基因表达有显著影响，且玉米淀粉组表达显著高于小麦淀粉组。在糊化程度方面，生淀粉组采食量、增重率和特定生长率均显著高于糊化淀粉组，但干物质消化率、血糖与肝糖原含量及肝脏葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate,g6pdh)、fas和乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase α,accα)基因表达量均显著低于糊化淀粉组。此外，不同淀粉来源及其加工方式的交互作用对增重率、特定生长率、干物质消化率、血糖与肝糖原含量及g6pdh和fas的表达均有显著影响。其中，生玉米淀粉组增重率和特定生长率最高；生小麦淀粉组干物质消化率最低；而糊化玉米淀粉组血糖、肝糖原含量及g6pdh和fas表达最高。[结论]淀粉糊化程度对团头鲂的生长性能、养分消化率和糖脂代谢均有显著影响，而淀粉来源的影响相对较小。综合来看，生玉米淀粉组增重VX-765配制率和干物质消化率较高，而血糖水平及糖原与脂肪沉积较低，更适合作为团头鲂的糖源。

目的:非酒精性脂MLN4924作用肪肝病(Nonalcoholicfatty liver disease,NAFLD)是指除酒精和其它损肝因素所导致的以肝脏中脂肪过度沉积为主要特征的病理综合征,其发病机制复杂,目前尚不明确。铁死亡作为一种新的细胞死亡方式,研究发现细胞内脂质异常堆积导致的氧化还原失衡引起的铁死亡可能是加剧脂代谢紊乱的重要环节。流行病学证据发现维生素D(VD)的缺乏与NAFLD的发生率和严重程度相关,但其中的具体调节机制尚不清楚,且相关基础研究缺乏。因此,本研究以高脂饮食(High fat diet,HFD)喂养的C57BL/6J小鼠及棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导的小鼠正常肝细胞AML12作为体内、外脂肪变性模型,探究VD对NAFLD的影响及其潜在机制。方法:1.体内实验:4周龄的SPF级雄LY-188011溶解度性C57BL/6J小鼠适应性喂养一周后随机分成4组进行造模:正常对照组(CON,n=10)和正常干预组(CON+VD,n=10),给予普通饲料;模型组(HFD,n=10)和模型干预组(HFD+VD,n=10),给予高脂饲料,周期为8周。造模结束后,CON组和HFD组每周给予0.1ml玉米油腹腔注射,CON+VD组和HFD+VD组每周给予1.68 IU/gVD腹腔注射,周期为16周。试验结束后,收集小鼠的血液和肝脏样本,观察VD对NAFLD小鼠的干预效果,包括体重、肝指数、血脂、肝功能指标、肝脏脂质蓄积、氧化应激指标以及铁沉积情况。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝组织中脂代谢相关信号分子(CD36、LPL、SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT1)的mR NA表达情况;蛋白免疫印迹法(WB)检测肝组织中VDR和铁死亡相关分子(ACSL4、TFR1、SLC7A11、GPX4)的蛋白表达水平。2.体外实验:1)取0.2m M PA及10nM1,25(OH)2D3同时处理AML12细胞24h,RT-PCR法检测肝细胞中CD36、LPL、SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT1的mRNA表达情况;WB法检测肝细胞中VDR、ACSL4、TFR1、SLC7A11和GPX4的蛋白表达水平;3)合成si-VDR序列,借助GP-siRNA-Mate plus转染AML12细胞,检测VDR下调后AML12中CD36、LPL、SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT1的mR NA和VDR、GPX4、SLC7A11、ACSL4和TFR1的蛋白表达水平。3.符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示,两组之间的均数比较采用独立样本t检Intra-articular pathology验,多组之间均数比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA),P<0.05认为差异有统计学意义结果:1.与HFD组相比,干预16周后HFD+VD组小鼠体重、肝指数、肝脏脂质蓄积、血脂(TC、TG、LDL-C)、肝功能指标(AST和ALT)、氧化应激指标(MDA)以及铁沉积水平均显著下降(P<0.05),HDL-C、SOD和GSH水平均显著上升(P<0.05);分子水平上,与HFD组相比,HFD+VD组小鼠肝脏中CD36、LPL、SREBP-1c和FAS的mR NA水平显著下调(P<0.05),PPARα和CPT1的mRNA水平显著上调(P<0.05);WB结果显示,与HFD组相比,HFD+VD组VDR、GPX4和SLC7A11蛋白水平显著上调(P<0.05),ACSL4和TFR1的蛋白水平显著下调(P<0.05)。2.与PA组相比,1,25(OH)2D3和PA共培养AML12细胞24h后,CD36、LPL、SREBP-1c和FAS的mRNA水平显著下调(P<0.05),PPARα和CPT1的m RNA水平显著上调(P<0.05);WB结果显示,与PA组相比,1,25(OH)2D3+PA组VDR、GPX4和SLC7A11蛋白水平显著上调(P<0.05),ACSL4和TFR1的蛋白水平显著下调(P<0.05)。3.与阴性对照组相比,si-VDR组CD36、LPL、SREBP-1c和FAS的mR NA水平显著上调(P<0.05),PPARα和CPT1的mRNA水平显著下调(P<0.05);WB结果显示,与阴性对照组相比,si-VDR组GPX4和SLC7A11蛋白水平显著下调(P<0.05),ACSL4和TFR1的蛋白水平显著上调(P<0.05)。结论:维生素D干预对HFD/PA诱导的肝损伤具有保护作用,其机制可能与VDR介导的铁死亡有关。

目的 探究神经细胞铁死亡在蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage, SAH)大鼠早期脑损伤(early brain injury, EBI)期间的表达情况及其神经功能损害的关系。方法 48只AG-221化学结构健康雄性SD大鼠被随机分为4组：假手术组(Sham组)、蛛网膜下腔出血组(按造模后取材时间不同分为3个亚组：SAH 6 h组、SAH 24 h组、SAH 72 h组),每组12只。用血管内穿刺法进行SAH造模，Sham组大鼠仅行血管穿刺，但不刺破血管。参照Garcia评分表检测各组大鼠的神经功能评分，干湿重法脑组织含水量；HE染色观察神经细胞形态并统计坏死数量，普鲁士蓝染色观察脑组织中铁沉积情况；吸光光度法检测各组大鼠脑组织铁含量、脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)活性，标准曲线法检测谷胱甘肽(glutathione, GSH)含量。结果 与Sham组比较，SAH 6 h、24 h、72 h组大鼠的神经功能评分显著降低(P<0.05)。与Sham组比较，SAH 24 h、72 h组大鼠脑组织含水量明显升高(P<0.05),但SAH 6 h组差异无统计regular medication学意义(P>0.05)。与Sham组比较，SAH 24 h、72 h组大鼠脑组织海马CA1区神经元细胞坏死数明显增多(P<0.05),SAH 6 h组神经元细胞坏死数量差异无统计学意义(P>0.05)。普鲁士蓝染色结果显示，在Sham组脑皮质组织中，没有发现明显的铁沉积，SAH 6 h组脑皮质组织中有少量铁沉积；与Sham组比较，SAH 24 h、72 h组大鼠脑组织中铁沉积明显增多(P<0.05)。与Sham组比较，SAH 24 h、72 h组大鼠脑组织中铁含量、MDA含量明显增加(P<0.05),GSH含量和GPX4活性显著降低(P<0.05)。结论 神经细胞铁死亡在SAH大鼠EBI期间出现，且呈时间依赖性，72 Dolutegravir生产商h最为严重；其可能与神经功能损害有关。

目的 研究安神益智针法联合电刺激对血管性痴呆患者的认知功能、氧自由基及IL-6的影响。方法 选取2021年3月-2022年3月在我院诊治的120例血管性痴呆患者为研究对象，采用随机数字表法分为对照组（n=40）、治疗组（n=40）、药物组（n=40）。药物组采用常规药物治疗，对照组在药物组基础上给予常规头皮联合电刺激治疗，治疗组在药物组治疗基础上实施安神益智针法联合电刺激治疗，比较3组临床疗效、简易智力状态（MMSE）评分、蒙特利尔认知评估量表（MoCA）、日常生活活动能力指数（BI）、氧自由基（SOD）水平、白细胞介素-6(IL-6)水平、生活质量评分（GQOLI-74）以及不良反应发生率。结果 治疗组治疗总有效率为92.50%，高于对照组的80.00%和药物组的72.50%(P<0.05);3组治疗后MMSE评分均高于治疗前，且治疗组高于对照组、药物组（P<0.05）;3组治疗后MoCA评分、BI评分均高于治疗前，且治疗组高于对照组、药物组Apoptosis抑制剂（P<0.05）;3组治疗后血清SOD水平均高于治疗前，血清IL-6均低于治疗前，且治疗组血清SOD高于对照组、药物组，血清IL-6低于对照组、药物组（P<0.05）;3组治疗后GQOLI-74评分均高于治疗前，且治疗组高于对照组、药物组（P<0.05）；治疗组不良反应发生率为7.50%，与对照组的5.00%、药物组的5.00%比较，差异无统计学意义（P>0.05）。Telaglenastat采购结论 安神益智针法联合电刺激治疗血管性痴呆效果确切，可提高治疗总有效率，改善患者认aquatic antibiotic solution知功能、智力水平，提高氧自由基水平，降低炎症因子水平，提升日常生活能力，且不会增加不良反应发生率，是一种安全、有效的治疗方法，值得临床应用。

目的 基于网络药理学并通过动物实验验证探究小儿止哮平喘颗粒治疗儿童哮喘的潜在作用机制。方法 检索TCMSP、BATMAN-TCM、UniProt数据库并筛选小儿止哮平喘颗粒中的活性成分和相关靶点，利用GeneCards、DisGeNet、OMIM数据库筛选儿童哮喘疾病靶点，将二者交集靶点通过STRING数据库获取靶点蛋白AZD6738相互作用（PPI）关系，并导入Cytoscape软件构建PPI网络，通过Metascape平台进行GBiology of agingO和KEGG通路富集分析，得出潜在作用通路。制备卵清蛋白致敏幼龄小鼠哮喘模型，予不同浓度小儿止哮平喘颗粒进行干预，通过HE染色和PAS染色评估组织病理学改变，通过Western blot验证网络药理学预测结果。结果 筛选得到小儿止哮平喘颗粒154个活性成分，涉及儿童哮喘作用靶点283个。PPI拓扑分析获得10个关键靶点。GO和KEGG通路富集分析显示关键靶点富集度高的信号通路有PI3K/AKT信号通路、TNF信号通路、MARK信号通路等。动物实验表明，小儿止哮平喘颗粒可明显改善OVA诱导的气道炎症和杯状细胞增生，并显著下调PI3K/Akt信号通路关键蛋白表达（P<0.05）。结论 小儿止哮平喘selleckchem CL 318952颗粒治疗儿童哮喘通过多途径-多靶点发挥临床效用，其中PI3K/Akt信号通路可能是关键分子机制。