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目的 探讨辣椒素受体(TRPV1)及瞬时性受体电点击此处位通道香草酸受体4(TRPV4)与癌胚抗原相关细胞黏附分子6(CEACAM6)共表达对结直肠癌(CRC)患者预后的影响。方法 使用GEPIA交互分析软件根据基因表达中值将620例CRC患者分为高表达和低表达两组(中值1例不入组),以设定阈值对TCGA和GTEX数据库中TRPV1和TRPV4基因的表达量进行log_2(TPM+1)转换及差异分析，采用Wilcoxon检验分析TRPV1/TRPV4和CEACAM6基因共表达与CRC患者总体生存期(OS)的关系，采用基因组数据分析及免疫组化染色法对上述结果进行验证。结果 CRC患者癌组织中TRPV1的表达量显著低于癌旁组织(1.70±0.51 Tezacaftor分子量vs topical immunosuppression3.10±0.46,t=-53.56,P<0.01),而TRPV4显著高于癌旁组织(1.47±0.78 vs 0.67±0.33,t=25.98,P<0.01)。TRPV1和CEACAM6双高表达组CRC患者的OS显著高于CEACAM6单高表达患者(中位OS:6.8年vs 5.5年，log-rank P=0.047 9)。结论 检测TRPV1及TRPV4水平可有效评估CEACAM6高表达CRC患者的预后。

目的：探讨中药蜚蠊改善氟尿嘧啶对错配修复基因缺失（dMMR）肠癌细胞敏感性的相关机制。方法：选择dMMR肠癌细胞，予以不同浓度氟尿嘧啶和蜚蠊作用后www.selleck.cn/products/s63845，利用MTT法检测两药联合的抑瘤性，根据抑制率计算出治疗指数（CI）值，明确MS-275 molecular weight联合增效作用，应用二代基因测序及脂质代谢分析，挖掘出差异代谢基因，数据库分析差异基因与相关机制通路。结果：中药蜚蠊可以改善氟尿嘧啶在HCT116和DLD1肠癌细胞中的疗效，GO功能富集分析和KEGG分析结果显示脂质代谢lung viral infection、自噬调控和凋亡通路发生主要改变，利用LC/MS进行脂质组学检测，共有153个脂质分子发生变化，包括脂肪类、鞘脂代谢物、磷脂代谢物和甘油酯。结论：蜚蠊与氟尿嘧啶联合用于dMMR肠癌细胞具有协同增效作用，可能通过调控代谢通路、自噬及凋亡通路机制改善药物疗效。

【目的】黑素瘤具有高度恶性、进展迅速、早期转移、对放疗和化疗不敏感以及高死亡率等特点。转移性黑素瘤患者的生存率极低,深入研究黑素瘤转移的分子机制是提高疗效的关键。越来越多的证据表明,棕榈酸(palmitic acid,PA)参与肿瘤发生发展过程,而Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在肿瘤信号转导过程中同样发挥重要作用。然而,在人和小鼠黑素瘤中,PA是否能介导TLR4以及下游信号未见相关报道。故本课题旨在研究PA是否激活TLR4介导其下游信号影响小鼠黑素瘤肺转移,为阐明高PA饮食促进肿瘤的发生发展提供科学依据,为后期临床治疗提供理论依据以及新的方向。【方法】1.随机将20只雄性C57BL/6小鼠(6 W龄)分为正常饮食组、高PA饮食组,饮食干预8 W后,检测小鼠血清胆regular medication固醇以及甘油三酯水平。尾静脉注射B16细胞,构建黑素瘤的肺转移模型。用HE染色检测肺转移灶的大小以及数量;用Western Blot检测肺转移灶组织的E-cadherin、MMP2和Vimentin蛋白表达情况,用Western Blot以及免疫荧光检测小鼠肺转移灶组织的TLR4、TRIF、Peli1和p NF-κB蛋白表达。2.选用人黑素瘤A375细胞、小鼠黑素瘤B16细胞进行CCK-8实验,筛选PA促进黑素瘤细胞增殖的最佳浓度(12.5μM、25μM和50μM)。用最佳PA(25μM)浓度作用A375及B16细胞,通过Transwell实验及Western Blot检测E-cadherin、MMCaptisol配制P2和Vimentin蛋白表达水平,评估细胞侵袭能力。使用Western Blot以及免疫荧光检测PA处理细胞后TLR4、TRIF、Peli1、p NF-κB蛋白表达。3.使用TAK-242(TLR4抑制剂)和/或PA处理细胞,采用CCK-8检测细胞增殖能力。Western Blot检测TAK-242处理细胞后对E-cadherin、MMP2和Vimentin蛋白表达的影响,用Western Blot以及免疫荧光检测TAK-242处理对TLR4、TRIF、Peli1、p NF-κB蛋白表达的影响。4.使用靶向Peli1的si-RNA和/或PA处理细胞,通过CCK-8检测细胞增殖能力,用Western Blot检测沉默Peli1对黑素瘤细胞的E-cadherin、MMP2和Vimentin蛋白表达影响,进一步通过Western Blot以及免疫荧光检测TLR4、TRIF、Peli1、p NF-κB蛋白的表达水平。【结果】1.与正常饮食组相比,高PA饮食组小鼠血清胆固醇水平升高了48%。高PA饮食组小鼠肺转移灶数量明显增多、体积明显增大,转移灶组织中TLR4、TRIF、Peli1和p P65蛋白的表达升高,同时E-cadherin表达下调,MMP2和Vimentin的表达上调。2.梯度浓度PA作用A375和B16细胞后,PA(25μM)具有最佳的促增殖效果,分别为46%(A375细胞)和20%(B16细胞)。PA(25μM)作用A375和B16细胞后,A375和B16细胞的侵袭能力分别提升了58%和54%,同时E-cadherin表达下调、MMP2和Vimentin的表达上调,并伴随着TLR4、TRIF、Peli1、p P65蛋白的表达上调。3.TAK-242(TLR4抑制剂)剂量依赖性地抑制了A375细胞和B16细胞的增殖,最佳抑制浓度为50 n M,分别抑制了44%(A375细胞)和39%(B16细胞)。TAK-242(50 n M)单独作用A375和B16细胞后,E-cadherin的表达上调,Vimentin、MMP2的表达下调,以及TRIF、Peli1、p P65蛋白的表达下调。此外,TAK-242(50 n M)也可显著减少PA(25μM)诱导的细胞增殖,不同程度逆转了MMP2、Vimentin、TRIF、Peli1、p P65的高表达以及E-cadherin的低表达。4.3条靶向Peli1的si-RNA作用A375和B16细胞24h后,序列1号具有最佳的沉默效果,分别为65%(A375细胞)和45%(B16细胞)。si-RNA(序列1号)单独作用A375和B16细胞后,细胞增殖减少、E-cadherin表达上调,Vimentin、MMP2以及p P65蛋白的表达下调,而TLR4和TRIF表达不变。此外,si-RNA(序列1号)也可显著减轻PA(25μM)诱导的细胞增殖,不同程度逆转了MMP2、Vimentin和p P65高表达以及E-cadherin低表达,但不能逆转TLR4和TRIF的高表达。【结论】PA通过激活TLR4/TRIF-Peli1-p P65信号通路从而促进小鼠黑素瘤肺转移以及黑素瘤细胞的增殖以Gefitinib及侵袭。

目的 探讨原发性高血压患者血清中miR-192表达与左心室肥厚的相关性。方法 收集2018年6月至2019年12月期间治疗的187例原发性高血压患者临床资料，行超声心动图检查获得LVPWd、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVEF和LVMI等指标，并根据超声心动图检查结果将患者分为肥厚组和对照组。实时荧光定量PCR检测血清中miR-192表达，ELISA法测定TGF-β1、Ⅰ型前胶原羧基末端肽（PⅠCP）和Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）水平。结果 经超声心动图检查，187例原发性高血压患者中，76例出现左心室肥厚（肥厚组），111例未发现左心室肥厚（对照组）；肥厚组患者LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI和hs-CRP均较对照组升高（P <0.Pexidartinib05）；肥厚组患者血清中miR-192、TGF-β1、PⅢNP和PⅠimmune cytolytic activityCP水Torin 1抑制剂平较对照组升高（P <0.05）;Pearson相关分析结果显示，原发性高血压患者血清中miR-192水平与LVPWT、IVST、LVEDD、LVESD、LVEDV、LVESV、LAD、LVMI、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP呈正相关（P <0.05）；多元线性回归分析结果显示，LVPWT、IVST、LVEDD、LVESV、TGF-β1、PⅠCP和PⅢNP是影响原发性高血压患者血清中miR-192水平的相关因素（P <0.05）。结论 血清miR-192水平在原发性高血压左心室肥厚患者中升高，且与左心室肥厚程度及心肌纤维化有关。

目的 构建基于多模态超声的原发性甲状腺淋巴瘤诊断预测模型,并分析其预测效能。方法 回顾性选取2015年1月至2020年3月衢州市人民医院收治的30例原发性甲状腺淋巴瘤(primary thyroid lymphoma,PTL)患者(PTL组)和30例桥本甲状腺炎(hashimoto thyroiditis,NHT)患者(NHT组)为研究对象,所有患者均接受组织病理学检查及多模态超声检查,评估PTL和NHT结节在多模态超声检查上的成像特征参数差异,对有价值的参数进行多因素Logistic回归分析,绘制受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,分析预测模型的诊断效能。结果C59生产商 多模态超声检查显示,PTL组和NHT组成像特征参数比较,结节最大直径、达峰时间(time to peak,TTP)比、时间-强度曲线(time-sINCB28060ignal intensity curve,TIC)面积比、血管分布、峰值强度(peak intensity,PI)比及向心增强型,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示结节最大直径、TTP比、TIC面积比、血管分布、PI比是PTL的诊断因子。ROC曲线显示诊断模型曲线下面积为0.940,特异性为93.43%,敏感度为92.74%。结论 在原发性甲状腺淋巴瘤诊断中,通过多模态超声检查患者甲状腺结节最大直径、TTP比、TIC面积比、Myoglobin immunohistochemistry血管分布、PI比建立的预测模型可用于鉴别诊断PTL和NHT。

乳腺癌是全球女Baf-A1抑制剂性常见的癌症,发病率和死亡率一直高居不下。确定临床靶点并揭示乳腺癌的潜在机制对我们来说是当务之急。微小RNA(miRNA)在肿瘤进展中起着重要作用。据报道,miR-99b-3p可促进肝癌细胞的侵袭和增殖。然而,miR-99b-3p在乳腺癌癌中的作用仍未被发现。因此,我Ayurvedic medicine们的研究是为了研究miR-99b-3p在乳腺癌中的作用。在我们目前的研究中,我们已经证明,与亲本细胞相比,miR-99b-3p在乳腺癌耐药细胞中显著上调。此外,miR-99b-3p可以促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,并提高其对紫杉醇的敏感性。然后,通过生物信息学工具、荧光素酶报告基因测定以及互补实验,证实PPP2CA是miR-99b-3p的新靶点,并且miR-99b-3p明显抑制了PPP2CA在乳腺癌细胞中的蛋白质表达。总之,我们的研究表明,miR-99b-3p/PPP2Smoothened Agonist配制CA轴可能是乳腺癌的诊断标志物和治疗靶点。

背景:胶质母细胞瘤(Gliomablastoma,GBM)是成人中最常见的原发性恶性脑肿瘤,具有侵袭性强、预后差、复发率高等特点,其五年生存率仅为5%。由于胶质母细胞瘤向周围组织浸润性弥漫性生长的生物学特性,目前采用最大程度手术切除并辅以放疗和口服替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)化疗的综合治疗方案,患者的中位生存时间也仅延长至16-18个月。TMZ为治疗GBM最有效的抗肿瘤活性的烷化剂。研究表明,不敏感的GBM细胞在长期应用TMZ后会逐渐产生耐药性,残留的耐药细胞是术后复发的关键原因。因此,探索针对浸润性GBM细胞并克服耐药性的有效治疗策略具有重要的理论价值和临床意义。铁死亡(Ferroptosis)是一种依赖铁离子参与,区别于细胞坏死、细胞凋亡、细胞自噬的新型细胞程序性死亡方式。越来越多的研究表明,溶质载体家族7成员11(Solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶 4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)等作为铁死亡的关键调节因子,在克服GBM细胞耐药及抑制GBM复发中发挥不可或缺的作用。爱拉斯汀(Erastin)是第一个被发现可通过胱氨酸/谷氨酸反向转运蛋白(the cystine/glutamate antiporter system,System Xc-)、电压依赖性阴离子通道(voltage-dependent anion channel,VDAC)和肿瘤蛋白 p53(TP53)等选择性且有效地介导铁死亡的小分子诱导剂。这也表明Erastin作为新型放射增敏剂和化学增敏剂具有良好的应用前景。然而,Erastin在普通溶剂中极差的溶解性限制了其在GBM治疗中的有效应用。脂质体(Liposomes)作为一个纳米载体,它的膜结构主要由胆固醇和磷脂组成,具有封装不同理化性质药物的能力。甲基丙烯化明胶(GelMA)为双键改性明胶,是具有光敏性的生物材料。基于上述理念,我们为了成功实现药物递送并抑制术后胶质母细胞瘤复发,构建了一种3D打印光固化水凝胶(Hydrogel)作为药物库,用于递送含有TMZ和Erastin的RGD环状肽(cRGD)修饰的脂质体(T+E@LPs-cRGD+GelMA)。cRGD可以识别肿瘤细胞过表达的ανβ3整合素受体以实现靶向治疗胶质母细胞瘤策略。Erastin激活铁死亡并与TMZ协同对耐药的GBM细胞表现出显著的抗肿瘤效果。另外,GelMA-脂质体递药系统通过IFN/PD-L1信号通路调节肿瘤免疫微环境,抑制术后胶质母细胞瘤复发。方法:将氢化大豆磷脂酰胆碱、胆固醇、DSPE-PEG2000-cRGD和Erastin以一定比例溶解在氯仿中,蒸发成膜,加入替莫唑胺溶液,经超声和脂质体挤出仪处理形成脂质体制剂。将合成的脂质体与GelMA溶液以一定比例混合,经3D打印光固化形成GelMA-脂质体系统。我们通过诱导筛选建立TMZ耐药细胞系U251TR和LN229TR。通过CCK-8、EdU、流式细胞术、Transwell实验及细胞划痕实验检测了不同纳米制剂对胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。通过实时定量PCR(RT-qPCR)技术与Western Blot实验检测了铁死亡相关调控因子的表达量。通过谷胱甘肽(glutathione,r-glutamyl cysteingl+glycine,GSH)检测、活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测、丙二醛(malondialdehyde,MDA)检测、JC-1探针检测线粒体膜电位变化等实验检测了铁死亡的典型特征变化。RNA-Seq测序揭示了递药系统(T+E@LPs-cRGD+GelMA)参与的潜在机制,确定了 GelMA-脂质体系统通过IFN/PD-L1通路参与了胶质母细胞瘤的免疫调节。此外,我们通过建立原位脑胶质瘤动物模型对GelMA-脂质体系统体内抗肿瘤效果进行评价。结果:(1)水凝胶-脂质体纳米制剂的表征通过粒径电位检测仪、透射电镜对纳米粒进行理化表征,显示TNirmatrelvir+E@LPs-cRGD具有良好的球形纳米形态,平均水合粒径为164±3.05nm,平均电位为21.24±1.27mV,在磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)及胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)中 7 日内纳米粒径基本保持不变。傅里叶红外光谱表明脂质体成功载入水凝胶,T+E@LPs-cRGD+GelMA的总体平均杨氏模量约为500 kPa。(2)水凝胶-脂质体纳米制剂的释放与细胞摄取以U252TR、LN229TR、NHA细胞系为模型,通过细胞摄取实验证明cRGD介导的主动靶向显著提高了肿瘤细胞的药物摄取效率;将荧光染料Sulfo-Cyanine5.5(Cy5.5)装载入脂质体(LPs-cRGD+GelMA)可以在PBS中持续释放14天。动物活体成像观察荧光标记的Cy5.5@LPs-cRGD+GelMA在C57BL/6J小鼠颅内可以稳定存在14天。(3)T+E@LPs-cRGD+GelMA体外抗肿瘤效果评价通过EdU、流式细胞术、Transwell及细胞划痕实验证实T+E@LPs-cRGD+GelMA具有最佳降低细胞活力,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移和侵袭能力。(4)T+E@LPs-cRGD+GelMA 诱导铁死亡T+E@LPs-cRGD+GelMA通过诱导铁死亡,显著降低GPX4、xCT、MGMT的表达水平;GSH水平下降;MDA及ROS水平升高;与T+E@LPs-cRGD+GelMA共孵育的U52lTR与LN229TR细胞电镜下可观察到其线粒体萎缩,线粒体嵴减少或消失。(5)T+E@LPs-cRGD+GelMA参与调控肿瘤免疫RNA-seq测序筛选具有差异表达基因主要富集在干扰素相关通路。进一步实验证实T+E@LPs-cRGD+GelMA可以通过降低干扰素-γ(Interferon gamma,IFN-γ)的表达水平来逆转细胞程序性死亡-配体1(Programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)的表达水平从而抑制GBM细胞免疫逃逸。(6)T+E@LPs-cRGD+GelMA体内抗肿瘤药效评价采用原位脑肿瘤小鼠为动物模型,手术减瘤后颅内给予不同治疗组。通过动物活体实验、苏木精伊红(Hematoxylin and eosin,H&E)染色、免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色等实验表明T+E@LPs-cRGD+GelMA组有显著肿瘤抑制作用并使小鼠生存时间延长。免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测PD-LI组织表达水平降低。结论:本研究构建了一种用于颅内植入的新型3D打印水凝胶-脂质体纳米递药系统(T+E@LPs-cRGD+GelMA),实现了两种药物(TMZ和Erastin)共递送,提出了靶向清除残存GBM细胞的治疗Biomolecules策略。课题从细Alpelisib体外胞水平、分子水平、动物组织水平论证了 T+E@LPs-cRGD+GelMA递药系统可以诱导铁死亡,调控IFN/PD-L1信号通路,克服肿瘤细胞耐药。阐明了该递送系统能够协同调控肿瘤免疫微环境,有效抑制胶质瘤复发转移的分子生物学和免疫学调控机制。

目的:肝癌的死亡率仅次于胰腺癌,其中肝细胞癌是主要亚型。由于缺乏有效的早期诊断指标,患者往往在出现症状时已经晚期,导致预后极差。铁死亡是一种非凋亡形式的程序性细胞死亡方式,在肝细胞癌的发生和发展中扮演重要角色。本研究通过分析铁死亡相关的长链非编码RNAs(LncRNAs),构建了预后评估模型,用于评估肝细胞癌(HCC)患者预后生存期和对化疗药物敏感性差异。研究方法:1.数据下载:本研究从TCGA数据库下载HCC患者的表达数据和临床数据;从Ferr Db V2数据库和Gene Cards数据库下载铁死亡基因;从UCSC Xena数据库下载TCGA数据库中肝细胞癌患者无进展生存期的数据用于后续研究。2.筛选铁死亡相关lncRNAs:对样本中的铁死亡基因进行差异分析,筛选出差异表达的铁死亡基因,然后找出与铁死亡基因共表达的lncRNAs,再对lncRNAs进行差异分析,筛选出差异表达的铁死亡相关lncRNAs。3.构建铁死亡相关lncRNAs预后评估模型:对差异表达的铁死亡相关lncRNAs进行单因素COX回归分析,找到生存相关lncRNAs,然后进行LASSO-COX回归分析,构建铁死亡相关lncRNAs风险评估模型。4.验证lncRNAs高/低风险模型预测性能:对不同风险患者进行主成分分析;结合HCC患者的生存数据对患者的OS和PFS进行Kaplan-Meier生存分析;此外,对各因素进行单因素和多因素COX回归分析;绘制ROC曲线和C-index曲线比较各临床因素和预后评估模型的特异性和敏感性;绘制nomogram图把预后模型可视化;对不同风险的患者进行多重GSEA分析和ss GSEA分析。5.药物敏感性预测:本研究使用”Onco Predict”R包,根据癌症药物敏感性基因组学数据库(GDSC数据库)中癌细胞系对抗癌Dibutyryl-cAMP溶解度化合物的敏感性以及遗传或谱系特征,预测lncRNAs高/低风险模型患者对抗癌药物的药物敏感性。结果:1.从TCGA数据库获取了50例癌旁或正常样本以及374例HCC患者样本的表达数据和临床数据。对Ferr Db V2数据库和Gene Cards数据库的铁死亡基因进行交叉富集分析,得到187个铁死亡基因。148个铁死亡基因在样本中有表达,69个基因在肝细胞癌组织和正常或癌旁组织中的表达存在差异。经共表达分析,得到2118个铁死亡相关lncRNAs,其中1680个铁死亡相关lncRNAs在HCC患者中存在差异表达。2.本研究通过对差异表达的铁死亡相关lncRNAs进行LASSO-COX回归后,成功构建了Risk score=0.598969386·expr(NRAV)+0.818981106·expr(FAM182B)+0.440228024·expr(AC090772.3)+0.334809744·expr(AC092115.3)+2.080886975·expr(AC012313.86)+(-1.622946646)·expr(HOXB-AS1)的预后风险评估模型,用于预测HCC患者的预后生存期的情况。3.对肝细胞癌患者进行主成分分析,显示这6个铁死亡相关lnbiocontrol agentcRNAs的表达量可以有效区分不同风险的患者。Kaplan-Meier生存分析表明,风险评分和HCC患者的OS和PFS显著相关。单因素和多因素COX回归分析显示,风险评分可以作为独立于其他因素的预测指标。风险评分ROC曲线的AUC值依次为AUC_(1year)=0.765、AUC_(3year)=0.696、AUC_(5year)=0.680。4.多重GSEA分析显示,高风险组患者的基因主要富集在于癌症相关的通路中。ss GSEA分析显示,两组患者多种免疫细胞的浸润存在显著差异,低风险组患者的CD8~+T细胞、NK细胞和B细胞BAY 73-4506小鼠等免疫细胞的含量更高,高风险组患者的多种免疫检查点基因的表达量高于低风险患者。5.通过药物敏感性预测分析,发现低风险患者对Sorafenib更敏感,而高风险患者对Gemcitabine、Mitoxantrone、Camptothecin、Irinotecan、Topotecan和Ibrutinib等抗癌药物更敏感。结论:1.本研究发现由FAM182B、AC090772.3、AC092115.3、AC012313.86、HOXB-AS1和NRAV等6个铁死亡相关lncRNAs构成的风险评估模型可用于预测肝细胞癌患者的预后生存期。2.本研究发现,对于预测为低风险肝细胞癌患者,Sorafenib治疗可能有效;而预测为高风险肝细胞癌患者,Gemcitabine、Ibrutinib、Mitoxantrone、Camptothecin、Irinotecan、Topotecan治疗则可能更具潜力。

目的 探讨miR-126-3p.1对间变性甲状腺癌(ATC)细BIBW2992胞糖酵解的作用，并分析其潜在的机制。方法 通过TCGA数据库检索miR-126-3p.1在甲状腺癌中的表达及与甲状腺癌诊断、预后的关系。运用荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验检测人正常甲状腺细胞Htori-3、人间变性甲状腺癌细胞SW1736、人乳头瘤状甲状腺癌细胞TPC-1中miR-126-3p.1、溶质运载家族7成员5(SLC7A5)的表达；将TPC-1细胞分为agomiRNAshoulder pathology(转染agomiRNA)组、agomiR-126-3p.1(转染agomiR-126-3p.1)组、si-NC(转染si-NC)组、si-SLC7A5(转染si-SLC7A5)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA)组、agomiR-126-3p.1+pcDNA-SLC7A5(共转染agomiR-126-3p.1和pcDNA-SLC7A5)组，各组细胞用脂质体法转染至SW1736细胞。细胞计数试剂(CCK8)、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(EdU)法检测细胞增殖能力；ELISA法检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成能力；蛋白免疫印迹(WB)实验检测细胞SLC7A5蛋白表达；双荧光素酶报告基因实验检测细胞荧光活性。结果 TCGA显示miR-126-3p.1在甲状腺癌中低表达。与Htori-3相比，SW1736、TPC-1细胞miR-126-3p.1低表达，SLC7A5表达显著升高(均P<0.05)。与agomiRNA组相比，agomiR-126-3p.1组细胞miR-126-3p.1表达显著升高，TPC-1细胞增殖率、EdU阳性率、相对葡萄糖消耗率、相对乳酸生成率、TPC-1细胞SLC寻找更多7A5蛋白表达量均降低(P<0.05)。与antagomiRNA组相比，antagomiR126-3p.1组TPC-1细胞SLC7A5蛋白表达量显著升高(P<0.05)。敲减SLC7A5对TPC-1细胞具有相似作用。miR-126-3p.1靶向负调控SLC7A5,并且二者在甲状腺癌中呈负相关(R=-0.266,P<0.05)。过表达SLC7A5降低miR-126-3p.1表达，减弱miR-126-3p.1对SW1736细胞增殖、糖酵解的抑制作用(均P<0.05)。结论 miR-126-3p.1可能通过调控SLC7A5参与癌细胞的增殖、糖酵解，具有潜在的治疗价值。

目的:探究Mn~(2+)在宿主细胞抵御结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)的过程中发挥的关键作用和内在机制,进一步深入了解M.tb与宿主的相互作用,并为Mn~(2+)作为药物辅助因子治疗结核病(Tuberculosis,TB)和开发新一代疫苗佐剂提供了理论支持。方法:稀释涂布法检测M.tb H37Ra在巨噬细胞内和胞外的生存情况。核骨架染色检测巨噬细胞的细胞膜的完整性;免疫荧光检测巨噬细胞内坏死性凋亡执行蛋白MLKL的磷酸化水平。建立感染M.tb的小鼠感染模型,通过HE染色观察小鼠肺部和脾脏组织中炎性细胞的浸润情况;免疫荧光检测p65在巨噬细胞核内外的转移情况,酶联免疫吸附测定(enzyme linked immoral biopsyunosorbent assay,ELISA)检测巨噬细胞TNF-α的分泌水平,qPCR检测巨噬细胞TNF-α的基因表达情况。Western Blot检测巨噬细胞STING通路关键蛋白STING和p65的磷酸化水平,qPCR检测巨噬细胞STING通路STING和c GAS表达;用STING蛋白的激活剂c GAMP模拟Mn~(2+)在巨噬细胞中的效果。对Mn~(2+)处理/未处理感染M.tb H37Ra的巨噬细胞进行转录组分析,通过Western Blot检测转录组分析得到的TNF通路相关蛋白ERK、p38和JNK的磷酸化水平,qPCR检测TNF通路相关基因CXCL10、CCL20、CSF1、CSF2和JAG1的表达情况;STING蛋白的抑制剂H-151以及用si RNA干扰STING蛋白后检测TNF信号通路相关蛋白和基因的表达情况。结果:本研究发现,在巨噬细胞中,Mn~(2+)显著地抑制了胞内MAPK抑制剂细菌的生存能力,但是对胞外M.tb的生存能力没有明显的影响,并且Mn~(2+)提高了巨噬细胞MLKL的磷酸化水平,诱导了巨噬细胞发生了坏死性凋亡。在感染M.tb H37Ra的小鼠肺部和脾脏组织HE染色的切片中发现,Mn~(2+)增强了小鼠肺部和脾脏周围的炎性细胞浸润;细胞感染模型中,Mn~(2+)显著地提高了感染M.tb的巨噬细胞TNF-α的分泌水平,p65磷酸化水平升高并呈现细胞核外向核内转移的趋势。与感染M.tb的巨噬细胞相比,Mn~(2+)显著地提高了STING和p65的磷酸化水平,从而激活STING通路。RNA-Seq的结果显示TNF信号通路显著富集,CX点击此处CL10、CCL20、CSF1、CSF2和JAG1基因显著上调,TNF通路相关蛋白JNK、ERK和p38发生了磷酸化;STING蛋白的抑制剂H-151和小干扰RNA干扰STING使得TNF通路相关的基因表达和蛋白磷酸化水平又相应发生了下调。结论:1.Mn~(2+)通过STING-TNF通路调节感染M.tb的巨噬细胞产生TNF-α,诱导了巨噬细胞发生坏死性凋亡;2.Mn~(2+)抑制了感染M.tb的巨噬细胞内细菌的生长,在治疗TB的过程中有很大的应用前景。