Author: admin

目的 基于心脏磁共振电影及心肌延迟强化（LGE）扫描技术，探讨肥厚型心肌病（HCM）患者左心房射血分数与左心室LGE及左心室流出道梗阻的相关性。资料与方法 回顾性纳入2017年3月—2022年3月在成都市第五人民医院经临床诊断的HCM患者119例，同期纳入31名健康体检者为对照组。患者均接受心脏磁共振检查，扫描序列包括心脏电影及LGE序列。将上述序列导入心脏后处理软件中获得左心房、左心室功能参数，并判定是否存在LGE，分析左心房射血分数与左心室LGE的关系。结果 HCM组左心寻找更多房三期射血功能均较对照组降低[左心房总射血分数（47.22±11.89）%比（59.01±6.37）%,t=-4.377,P<0.001；左心房被动射血分数（21VX-445核磁.25±7.97）%比（32.97±8.03）%,t=-5.996,P<0.001；左心房主动射血分数（32.88±13.96）%比（38.animal pathology38±9.73）%,t=-1.705,P=0.041]；左心房总射血分数与左心室LGE(OR=0.859)及左心室流出道梗阻（OR=0.908）均呈负相关（P<0.001），左心房主动射血分数与左心室LGE(OR=0.868)及左心室流出道梗阻（OR=0.936）均呈负相关（P<0.001）；左心房总射血分数、左心房主动射血分数分别提示左心室LGE的曲线下面积分别为0.856、0.874。结论 即使HCM患者左心室射血功能处于保留状态，合并左心室心肌纤维化的患者左心房功能存在损伤，左心房泵血期功能受损更为明显。

目的：分析5种血管紧张素转换酶抑制剂(ACEIs)治疗原发性高血压(EH)的药物经济学。方法：选择EH病人400例，分别采用国产卡托普利(A组)、合资卡托普利(开博通)(B组)、福辛普利钠(C组)、盐酸贝那普利(D组)、马来酸依那普利(E组)治疗，各80例。测定治疗前后各组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)水平，比较5种ACEIs用于EH的治疗效果及Nonalcoholic steatohepatitis*成本。结果：治疗前，各组SBP和DBP差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后，各组SBP、DBP均较治疗前明显降低(P<0.01),且C、D、E组Barasertib均明显低于A、B组(P<0.05～P<0.01)。各组疗效差异有统计学意义(P<0.01),其中C、D、E组治疗效果均优于A、B组(P<0.05CL13900说明书)。各组成本与效果差异均有统计学意义(P<0.01),其中B、C、D组成本、效果和C/E均高于A、E组，C、D组△C/△E均高于E组(P<0.05～P<0.01)。各组不良反应发生率差异有统计学意义(P<0.01),其中C、E组不良反应总发生率均低于A、B组(P<0.05)。结论：采用马来酸依那普利治疗EH总有效率高，安全性高，药物经济性高。

目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)外泌体对肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法 取洛阳市中心医院胸外科收治的肺腺癌患者的癌组织和癌旁组织标本，并分离培养原代CAFs和正常成纤维细胞(NFs);收集CAFs和NFs细胞培养上清液，使用差速离心法提取CAFs外泌体和NFs外泌体。取对数生长期的A549细胞，随机分为对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组，NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别加入NFs外泌体、CAFs外泌体孵育，对照组细胞常规培养。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力Modeling HIV infection and reservoir，Western bselleck激酶抑制剂lot法检测细胞中磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白PTEN、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cad)、神经钙黏素(N-cad)、波形蛋白(VIM)表达。采用随机数字表法将15只裸鼠分为A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组，每组5只，将对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别移植到A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组小鼠左侧腋下，移植6周内每周测量小鼠肿瘤体积。结果 培养24 h时，3组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时，CAFs外泌体组细胞的增殖能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养48、72 h时，对照组与NFs外泌体组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48 h时，CAFs外泌体组细胞的迁移能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养24、48 h时，NFs外泌体组与对照组细胞的迁移能力比较差异3-MA分子式无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组侵袭细胞数显著多于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组的侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中N-cad、VIM蛋白相对表达量显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),E-cad蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中PTEN蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中PTEN蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比较差异无统计学意义(P>0.05)。移植第1周，3组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);移植第2～6周，CAFs外泌体裸鼠组小鼠的肿瘤体积显著大于A549裸鼠组和NFs外泌体裸鼠组(P<0.05);移植第2～6周，NFs外泌体裸鼠组与A549裸鼠组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CAFs外泌体可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，在小鼠体内促进肺腺癌的生长，其机制可能与EMT和PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

目的 探讨肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)外泌体对肺腺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响及机制。方法 取洛阳市中心医院胸外科收治的肺腺癌患者的癌组织和癌旁组织标本，并分离培养原代CAFs和正常成纤维细胞(NFs);收集CAFs和NFs细胞培养上清液，使用差速离心法提取CAFs外泌体和NFs外泌体。取对数生长期的A549细胞，随机分为对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组，NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别加入NFs外泌体、CAFs外泌体孵育，对照组细胞常规培养。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell小室实验检测细胞侵袭能力Modeling HIV infection and reservoir，Western bselleck激酶抑制剂lot法检测细胞中磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白PTEN、PI3K、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、Akt、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)及上皮-间质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏素(E-cad)、神经钙黏素(N-cad)、波形蛋白(VIM)表达。采用随机数字表法将15只裸鼠分为A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组，每组5只，将对照组、NFs外泌体组、CAFs外泌体组细胞分别移植到A549裸鼠组、NFs外泌体裸鼠组、CAFs外泌体裸鼠组小鼠左侧腋下，移植6周内每周测量小鼠肿瘤体积。结果 培养24 h时，3组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);培养48、72 h时，CAFs外泌体组细胞的增殖能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养48、72 h时，对照组与NFs外泌体组细胞的增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养24、48 h时，CAFs外泌体组细胞的迁移能力显著高于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);培养24、48 h时，NFs外泌体组与对照组细胞的迁移能力比较差异3-MA分子式无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组侵袭细胞数显著多于NFs外泌体组和对照组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组的侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中N-cad、VIM蛋白相对表达量显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),E-cad蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中N-cad、VIM、E-cad蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。CAFs外泌体组细胞中PTEN蛋白相对表达量显著低于对照组和NFs外泌体组(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值显著高于对照组和NFs外泌体组(P<0.05);NFs外泌体组与对照组细胞中PTEN蛋白相对表达量及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt值比较差异无统计学意义(P>0.05)。移植第1周，3组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05);移植第2～6周，CAFs外泌体裸鼠组小鼠的肿瘤体积显著大于A549裸鼠组和NFs外泌体裸鼠组(P<0.05);移植第2～6周，NFs外泌体裸鼠组与A549裸鼠组小鼠的肿瘤体积比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CAFs外泌体可促进肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，在小鼠体内促进肺腺癌的生长，其机制可能与EMT和PTEN/PI3K/Akt信号通路有关。

目的:为了获得稳定可控的多联载药磷烯温敏水凝胶抗骨肉瘤递药系统,利用壳聚糖,羟基磷灰石和黑磷纳米片制备壳聚糖-羟基磷灰石-黑磷纳米片复合水凝胶来载带阿霉素和顺铂化疗药物,形成局部注射多联载药化疗-放疗-促骨再生修复三效协点击此处同抗骨肉瘤的新型药物新剂型。并对制备的多联载药磷烯温敏水凝胶进行一系列表征、稳定性考察、光热效应评价、体外药物释放、体外细胞学水平以及体内动物学水平考察,综合评价对骨肉瘤的协同治疗效果。方法:(1)利用壳聚糖,羟基磷灰石和黑磷纳米片制备壳聚糖-羟基磷灰石-黑磷纳米片复合水凝胶,并以凝胶温度,凝胶时间为指标优化处方中壳聚糖和羟基磷灰石之间的比列;(2)用透射电子显微镜、扫描电子显微镜、紫外可见光光谱、流变学参数对其进行表征;(3)外观性状、p H值变化、紫外可见光光谱初步评价其稳定;(4)对其ABT-263试剂光热效应进行考察,进一步的对多联载药磷烯温敏水凝胶在不同相态(液态,固态)、不同p H(健康组织p H=7.2,肿瘤组织p H=5.0)、不同时间(新鲜配置0 d,静置7 d)、单载药和多联载药的体外释药情况进行评价;(5)体外细胞学考察其在肿瘤细胞的杀伤human gut microbiome作用、对细胞凋亡周期影响、细胞微环境原位生物矿化作用方面的作用;(6)体内动物学评价其对肿瘤生长抑制作用、对主要组织器官的毒副作用。结果:(1)优化了制备工艺,可稳定制备多联载药磷烯温敏水凝胶抗骨肉瘤,处方条件壳聚糖4%-6%,羟基磷灰石:壳聚糖=1:10-20;(2)其具有良好的稳定性和生物安全性,具有优秀的光热效应;(3)在体外模拟的多种释放条件下,均能进行稳定的释放;(4)动物实验表明具有良好的体内抗肿瘤作用及组织低毒副作用。结论:通过优化后的制备工艺,可稳定制备多联载药磷烯温敏水凝胶抗骨肉瘤递药系统,制备方法简单,具有明显的近红外光释药特性以及良好光热性能,可利用光热/化疗协同以达到肿瘤治疗的要求,在二维纳米材料药物递送系统中具有广阔的应用前景。

目的:通过戊四氮(PTZ)点燃的癫痫小鼠模型研究surrogate medical decision maker富马酸二甲酯(DMF)的抗氧化应激保护作用,其机制可能与核因MG132 MW子E2相关因子2(Nrf2)介导的抗氧化信号通路有关。方法:1.将30只2周龄的Balb/C雄性小鼠随机平均分成对照组,癫痫模型组(以下简称模型组)和DMF组。模型组通过每日腹腔注射PTZ建造癫痫动物模型,DMF组则在注射PTZ前30分钟组予以DMF灌胃进行干预,对照组以0.9%Na Cl溶液灌胃和腹腔注射。期间对实验小鼠进行行为学观察,记录每次处置后小鼠癫痫发作的潜伏期、程度及频率,在实验结束后统计模型组和DMF组小鼠的造模成功率,分析DMF干预对小鼠癫痫发作情况的影响。2.通过酶联免疫吸附试验(Elisa)检测小鼠血清中丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活力值,取小鼠脑组织通过免疫荧光法检测活性氧簇(ROS)含量,来比较对照组、模型组和DMF组小鼠体内的氧化应激水平;3.用Elisa试剂盒测定三组小鼠血清中的8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量,分析对照组、模型组和DMF组小鼠线粒体DNA(mt DNA)损伤程度;4.取小鼠大脑海马组织,在电镜下观察对照组、模型组与DMF组的线粒体形态;5.用免疫荧光法检测对照组、模型组和DMF组小鼠海马组织内Nrf2含量,比较各组荧光图平均光密度值,进一步探讨DMF抗氧化应激途径与Nrf2信号通路的联系。结果:1.行为学观察:DMF组小鼠癫痫发作的潜伏期140.70±45.06秒较模型组99.90±22.25秒明显延长(P<0.05),在发作程度、发作频率及造模成功率上无明显差异(P>0.05);2.氧化应激水平指标:DMF组MDA含量、ROS水平低于模型组(P<0.0001),SOD活力高于模型组(P<0.0001);与对照组相比,模型组和DMF组MDA、ROS值均升高,SOD活力下降;3.mt DNA损伤结果:DMF组8-OHRepSoxd G含量明显低于模型组(P<0.0001);但两组均高于对照组;4.电镜下脑组织线粒体形态观察:对照组每高倍镜视野下可见正常形态线粒体居多,嵴清晰,排列规整,偶见破裂等异形线粒体;模型组则异常线粒体多见,以变形、破裂状态为主,但DMF组的异常线粒体少见,以水肿、排列紊乱为主;5.Nrf2含量检测:DMF组Nrf2平均光密度值高于模型组,即DMF组小鼠海马组织内Nrf2含量高于模型组(P<0.0001),且两组均高于对照组。结论:1、癫痫小鼠体内氧化应激水平明显升高,DMF有效降低了癫痫小鼠机体的氧化应激水平;2、DMF对癫痫小鼠的抗氧化应激保护作用可能与Nrf2介导的信号通路有关;3、抗氧化应激可有效减轻癫痫小鼠海马组织线粒体损伤,发挥脑保护作用。

研究目的:目前国内外关于青少年力量训练的研究多集中在训练后运动表现的提升上,对支撑运动表现的生理机制研究却相对较少。且儿童期与青春期跨度较长,都属于生长突增期,练习者的生理状态可能在较短时间内就会发生改变。所以想要制定科学且有效的训练计划,需要评估练习者不同发育阶段的生理和心理状态。基于此,本文的研究目的是从动态的视角总结青春期前青少年力量增长的生理机制,并针对青春期前青少年力量训练提出建议,为青春期前青少年进行科学的力量训练以及体能训练体系化建设提供理论支持。研究方法:本文采用文献资料法和专家访谈法,通过在中国知网(CNKI)、万方数据知识服务平台以”青春期前青少年”、”力量训练””儿童青少年””生长成熟”为中文检索词;以”resistance training”、”prepubertal””Growth and Maturation”为英文检索词Web of Science、PubMed数据库中进行检索,共获取符合要求的73篇文献作为依据,并在相关专家学者的指导下对青春期前青少年力量增长的机制进行理论探讨与叙述。研究结果:(1)生长成熟使青春期前青少年的肌肉形态与结构、神经系统均发生一定程度的改变。肌肉形态与结构方面,肌肉横截面积(CSA)与肌肉体积在生长成熟过程有不明显的增加,且这种改变多发生在大肌肉群中,这为力量增长提供了基础。肌束的长度也会随骨骼的生长而逐渐增加,由于它强烈影响产生力的距离和收购买MK-1775缩速度,束长的增加将促进运动成绩的改善。肌肉羽状角的变化因不同部位肌肉的体积而产生不同的变化,将导致更多的收缩组织能够附着到给定的腱膜或肌腱区域,导致更大的生理横截面积,这反过来促进肌肉产生更大的力量。肌腱的结构与刚度也会随着成熟度的增加而得到改善,从而增加牵张反射的振幅,在一定程度上提升了力量传导的速率。在神经系统方面,年龄和生长成熟度的增长会使得运动单元激活数量增多,并且随着运动单元最大自愿激活水平和Ⅱ型肌纤维募集程度的提高,这反映了中枢神经系统对于肌肉的控制能力得到了加强,力量素质也会产生一定程度的增益。预激活等前馈机制的加强使得肌肉生成速率增加,同时神经系统的成熟使得牵张反射效应得到加强。且在成熟过程中,高尔基腱器官脱敏过程中了减少主动肌-拮抗肌协同收缩的强Child psychopathology度,这不仅增加关节的稳定性,也降低受体激动肌抑制,允许更有效地运作拉长-缩短周期(SSC)和增加合力,肌肉的收缩效率也随之增加。这些肌肉形态与结构、神经系统的改变均在一定程度上促进了青春期前青少年力量的自然增长。(2)抗阻训练主要通过改变机体的肌肉适应与神经适应来达到提升力量的目的。以往的研究只观察到肌肉形态在训练后有轻微到较小的改变,也没有充分的证据表明抗阻训练后青春期前青少年肌肉羽状角和肌束、肌腱长度会发生改变。但外部负荷的增强会使得肌腱的刚度增加,研究已经报道了在儿童中在阻力训练后腱硬度的增加伴随着肌电延迟(EMD)的平行降低,鉴于肌腱僵硬与EMD减少以及肌肉力量转移和牵张反射幅度的速度和效率提高的相关性,在阻力训练后肌腱硬度的这种增加可能允许更大的力量生成效率(RFD)。虽然抗阻训练后肌肉形态和结构的改变能够在一定程度上被观察到,但是这种改变造成的力量增益远小于青春期前青少年力量增加的幅度,所以抗阻训练引起的青春期前青少年力量的增长必须归因于神经适应的增强。抗阻训练会使得肌肉最大自愿激活水平得到提高,这与Ⅱ型肌纤维运动单位募集数量增加和更高的运动单位同步性有关。募集更高阈值运动单位的能力和这种训练相关的改善将导致EMD的减少和肌肉快速产生高水平力量的能力增强。可能反映在儿童在阻力训练后观察到的跳跃和冲刺能力的改善。虽然其他因素,如预激活水平,牵张反射控制程度,主动肌-拮抗肌协同收缩水平和不同类型肌纤维运动单位激活数量占比也会影响支撑性能的力量产生能力,它们对阻力训练的反应还需要进一步的研究。研究结论:(1)生长成熟可使青春期前青少年的肌肉结构与功能、神经系统功能趋于成熟,这为机体力量素质的自然增长提供了生理基础。(2)抗阻训练能促进青春期前青少年的肌肉适应与神经适应,但力量素质的Liraglutide临床试验提高主要归因于神经适应。

目的 探讨LINC01094在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌Alpelisib浓度细胞增殖、侵袭、迁移和血管形成能力的影响。方法 应用GSE数据集分析LINC01094的表达水平。采用qRT-PCR检测LINC01094在胰腺癌细胞中的相对表达量。构建LINC01094过表达及敲低的稳转株，qRT-PCR验证转染效率。克隆形成实验、Transwell实验、划痕实验检测LINC01094对MIA PaCa-2和PANC-1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响，血管形成实验检测LINC01094对血管形成的影响。结果 LINC01094在胰腺癌组织中表达增高，且与患者的不良预后相关。LINC010https://www.selleck.cn/products/epz-6438.html94上调后细胞增殖、侵袭、迁移以及血管形成能Lung microbiome力增强，LINC01094下调后细胞增殖、侵袭、迁移以及血管形成能力减弱。结论 LINC01094在胰腺癌中高表达，发挥促细胞增殖、侵袭、迁移和血管形成的作用。

目的 CHFR基因是一种抑癌基因，低表达或表达缺失可能促淋巴瘤细胞增殖，PARP-1基因参与其对淋巴瘤细胞增殖的调控，本研究旨在通过过表达CHFR基因及分别沉默CHFR、PARP-1基因，观察其对裸鼠移植瘤Raji细胞的影响，探讨CHFR基因和PARP-1基因调控裸鼠Raji淋巴瘤细胞的增殖和凋亡机制。方法 在非霍奇金B细胞裸鼠Burkitt淋巴瘤移植瘤Raji细胞中，用5-氮杂-2′PF-07321332供应商-脱氧胞苷(5-Aza-dC)过表达CHFR基因，及用慢病毒介导的shRNA分别沉默CHFR、PARP-1基因，测定各组裸鼠移植瘤的肿瘤的大小及重量；采用实时荧光定量PCR技术测定各组CHFR及PARP-1基因mRNA含量；应用MSP方法检测各组CHFR的甲基化状态；分别通过TUNEL试剂盒和免疫组化监测凋亡指数(AI)和微血管密度(MVD)。结果 5-Aza-dC组的裸鼠在非霍奇金B细胞Burkitt淋巴瘤VX-765使用方法移植瘤Raji细胞能增强CHFR基因mRNA的表达，降低PARP-1基因mRNA的表达；在体内环境中，5-Aza-dC能blood biomarker够促进移植瘤Raji细胞的凋亡，抑制移植瘤的生长(P<0.05),这些结果与shRNA-CHFR组结果相反，与shRNA-PARP-1组结果一致。而且实验中可见5-Aza-dC组的裸鼠移植瘤的CHFR基因发生去甲基化。结论 CHFR基因低表达促进肿瘤细胞增殖，PARP-1基因低表达促进肿瘤细胞凋亡，而5-Aza-dC可以去甲基化抑制肿瘤细胞增殖。

【研究背景及目的】脓毒症是指对感染反应失调导致的器官功能障碍综合症,其致病机制重点不仅是全身炎症反应综合征(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS),更是免疫系统调控紊乱,即由初始的过度免疫激活发展至后期广泛的免疫抑制~([1,2])。根据最新的脓毒症流行病学调查,全球每年脓毒症患者约5000万,其中超过1100万患者发生死亡,病死率超过20%,存活的患者中约有半数存在脓毒症后遗症~([3])。免疫系统调控紊乱是脓毒症发生的关键机制之一。病原体入侵机体后被机体固有免疫系统识别,产生先天性免疫应答;然而过度激活的炎症反应会导致血管内皮细胞损伤、白细胞浸润、免疫细胞募集、凝血系统活化、凝血相关因子快速消耗等一系列病理生理改变,导致多器官功能障碍(Multiple organ dysfunction,MODS),甚至死亡~([4,5])。随着抗生素和免疫抑制剂的大量使用,多数脓毒症患者可以从早期的过度炎症反应存活下来,进展为免疫抑制阶段。因此,改善脓毒症的免疫功能是一个新的研究方向。结合我们前期的研究成果,我们考虑白细胞介素6受体(Interleukin-6 receptor,IL-6R)抗体的疗效可能与抗体使用时机体的免疫状态有关。在脓毒症早期,机体处于免疫增强阶段时,使用IL-6R抗体可以减轻细胞因子风暴,改善预后。在机体处于免疫抑制阶段则加重继发性感染。IL-6R抗体疗效的异质性可能与其在脓毒症不同免疫状态下对适应性免疫细胞(主要为巨噬细胞、淋巴细胞)的作用机制不同有关,我们拟通过研究脓毒症不同免疫状GSKJ4溶解度态下IL-6R抗体对淋巴细胞的调控作用,探索IL-6R抗体在脓毒症临床治疗的使用时机,为脓毒症靶向治疗提供参考依据。【方法】1.收集3例脓毒症患者和3例健康人的外周血,分离外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)并进行单细胞测序数据整合分析,通过统一流形逼近与投影(Uniform Manifold Approximation and Projection for dimension reduction,UMAP)算法、基因集变异分析(Gene set variation analysis,GSVA)、基因集富集分析(Gene set enrichment analysis,GSEA)、细胞拟时分析等方法,比较脓毒症患者与健康人PBMC的差异,分析出脓毒症早期免疫系统紊乱的规律。2.用盲肠结扎穿孔术(Cecal ligation and perforation,CLP)构建脓毒症小鼠模型,观察建模后小鼠的生命体征、形态、体重等变化。将小鼠分为IL-6KO小鼠组、WT小鼠组,CLP后采用临床疾病评分(Clinical disease score,CDS)和脓毒症小鼠评分(Murine sepsis score,MSS)系统进行评分;用酶联免疫吸附测定(Enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测两组的血清、肺泡灌洗液炎症因子白细胞介素www.selleck.cn/products/Lapatinib-Ditosylate1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素10(Interleukin-10,IL-10)和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)等的水平;用免疫荧光染色(Immunofluorescent staining,IFC)、原位末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl Transferase-mediated d UTP Nick End Labeling,TUNEL)染色观察器官、免疫细胞的变化情况。验证IL-6R抗体托珠单抗(Tocilizumab,TCZ)对脓毒症小鼠的治疗效果:根据尾静脉注射TCZ时间的不同将小鼠分为假手术组、CLP组和TCZ0+CLP组、TCZ1+CLP组和TCZ2+CLP组,通过观察小鼠72小时的生存率、临床疾病评分以及小鼠脓毒症评分。CLP成功建模后,IL-6KO小鼠和使用TCZ抗体后的小鼠处死后提取脾脏淋巴细胞,用流式细胞术检测淋巴细胞的凋亡情况。3.使用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞,检测不同时间点炎性因子m RNA表达水平。用IL-6R si RNA转染RAW264.7细胞,并用LPS刺激转然后的细胞,用ELISA检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6的表达水平;用流式细胞术检测巨噬细胞的极化水平;用小鼠脾脏淋巴细胞提取试剂盒提取小鼠脾脏淋巴细胞,用LPS刺激Raw264.7细胞,与淋巴细胞共培养,用CCK8法检测淋巴细胞增殖情况;用ELISA试剂盒检测细胞上Bio-controlling agent清液的炎症因子分泌情况,用流式细胞术和Western blot技术检测淋巴细胞的凋亡情况。【结果】1.所有细胞簇共分为14个簇,脓毒症患者PBMC中CD8+T细胞和B细胞比例明显增加,单核细胞、CD4+T细胞比例显著减少。炎症因子介导、免疫反应的调控、对IFN-γ的反应对CD14单核细胞的调控起着重要作用。CD14、CD16单核细胞还参与了凋亡过程的正向调节,IL-6在脓毒症早期的发病过程中起着重要的作用。两组中不同免疫细胞的数量分布显示。调控T细胞的许多上调基因参与了TLR信号通路,并与原始免疫反应有关。而许多下调的基因参与了c AMP信号通路的传导,该通路与T细胞受体介导的免疫激活相关。单核细胞和T细胞之间呈正相关联系。识别特定细胞群中健康组与脓毒症组之间的信号变化,结果发现在CD14和CD16单核细胞群中主要是RESISTIN信号发生巨大变化,推测此信号在脓毒症的发病过程中起着重要的作用。2.用CLP构建脓毒症小鼠模型,首先观察IL-6KO小鼠、WT小鼠CLP后存活情况、炎症因子表达水平、脏器(尤其是肺脏)损伤和细胞凋亡情况。结果显示:完全敲除IL-6会降低脓毒症小鼠的存活率,会加重脓毒症小鼠的脏器损伤,会加重炎症引起的细胞因子风暴。我们推断IL-6在脓毒症早期参与病原体的清除,完全缺乏IL-6会导致病原体无法有效清除,会加重炎症反应和脏器损伤。随后我们对脓毒症小鼠不同时间点注射TCZ,观察小鼠的存活情况和脏器损伤情况。结果显示:在脓毒症早期使用IL-6R抗体提高了脓毒症小鼠的存活率,减轻了脓毒症小鼠的脏器损伤。3.用IL-6R si RNA转染巨噬细胞,观察转染前后炎性因子和巨噬细胞极化特异性标记物的变化情况,发现IL-6R si RNA可以减轻炎症反应促进M2型巨噬细胞极化。用IL-6R si RNA转染巨噬细胞,将巨噬细胞和淋巴细胞共培养,检测细胞上清液和淋巴细胞的炎症因子表达和凋亡情况,发现IL-6R si RNA可以减轻淋巴细胞炎症反应并减少淋巴细胞凋亡。【结论】脓毒症早期T细胞、B细胞和CD14单核细胞数量减少,可能由于细胞凋亡引起的。炎症因子介导、免疫反应的调控、对IFN-γ的反应对CD14单核细胞的调控起着重要作用。单核细胞和T细胞之间呈正相关联系。IL-6-JAK-STAT3信号通路在单核细胞中激活,表明IL-6在脓毒症早期的发病过程中起着重要的作用。完全敲除IL-6后,机体无法有效清除入侵的病原体,炎症反应更加明显,脏器损伤更加严重。在脓毒症早期尽快使用IL-6R抗体TCZ可以有效减轻炎症反应,促使巨噬细胞向M2型转化并减少淋巴细胞凋亡。