Author: admin

目的 探讨苦碟子注射液联合血管紧张素转化酶抑R428纯度制剂/血管紧张素受体阻滞剂(Angiotensin converting enzyme inhibitors/Angiotensin receptor blockers, ACEI/ARB)类药物治疗糖尿病肾病(Diabetic nephropathy, DN)的临床疗效及作用机制。方法 选取2021年11月—2022年5月期间衡水市第四人民医院收治的100例DN患者作为研究对象，采用随机数字表法分为非暴露组与暴露组，每组各50例。非暴露组给予常规西医联合ACEI/ARB类药物治疗，在此基础上，暴露组联合苦碟子注射液治疗，两组患者均治疗2周。观察比较两组患者临床疗效、enzyme-linked immunosorbent assay不良反应情况，治疗前后血糖指标[糖化血红蛋白(GlycosylQ-VD-Oph细胞培养ated hemoglobin, HbA1c)、空腹血糖(Fasting blood glucose, FPG)、餐后2 h血糖(2 h postprandial blood glucose, 2h PG)]、肾功能指标[血清肌酐(Serum creatinine, Scr)、尿素氮(Blood urea nitrogen, BUN)、尿白蛋白排泄率(Urinary albumin excretion rate, UAER)、尿微量白蛋白(microalbuminuria, m-Alb)]、血液流变学指标[全血黏度(高切、中切、低切)、血浆黏度、纤维蛋白原(Fibrinogen, FIB)]、氧化应激指标[谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GSH-Px)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)]、炎症因子指标[肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)、可溶性细胞间黏附分子-1(Soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)]水平变化。结果 治疗后暴露组临床总有效率96.0%(48/50)明显高于非暴露组82.0%(41/50),差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血糖指标HbA1c、FPG、2 h PG水平均较治疗前降低，差异有统计学意义(P>0.05);且暴露组血糖指标HbA1c、FPG、2 h PG水平均明显低于非暴露组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者肾功能相关指标血清Scr、BUN水平及尿UAER、m-Alb水平均较治疗前降低，差异有统计学意义(P<0.05);且暴露组低于非暴露组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血液流变学指标全血黏度、血浆黏度及FIB水平均较治疗前降低，差异有统计学意义(P<0.05);且暴露组血液流变学指标全血黏度、血浆黏度及FIB水平均明显低于非暴露组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清GSH-Px、SOD水平较治疗前升高，MDA水平较治疗前降低，差异有统计学意义(P<0.05);且暴露组氧化应激指标均优于非暴露组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后两组患者血清TNF-α、IL-6、IL-8、sICAM-1水平均较治疗前降低，差异有统计学意义(P<0.05);且暴露组血清TNF-α、IL-6、IL-8、sICAM-1水平均明显低于非暴露组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗期间，两组患者不良反应发生率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 苦碟子注射液联合ACEI/ARB类药物治疗DN安全、有效，有利于改善患者肾功能，降低血糖，可能与调节血液流变学及抑制氧化应激反应、炎症反应等机制有关。

背景:目前我国结直肠癌的复发率和死亡率居高不下,其中最重要原因是癌细胞对化疗药物的耐药性。顺铂作为结直肠癌治疗的一线抗癌药物,近年来由于耐药性的产生导致患者的治疗效果随时间的延长而逐渐减弱甚至无效,增强结肠癌顺铂敏感性可成为降低结肠癌患者死亡率的有效策略。罗哌卡因被证实可以抑制肿瘤细胞增殖,但其是否能够增敏结肠癌对顺铂的敏感性目前尚不清楚。目的:体外实验探究罗哌卡因是否能够通过诱导细胞铁死亡来增强人结直肠癌细胞的顺铂敏感性。方法:采用浓度递增法将LOVO细胞暴露于顺铂Gefitinib-based PROTAC 3体外中诱导顺铂耐药株LOVO/DDP形成。光学显微镜下观测细胞形CP-690550配制态,Cell Counting Kit-8检测细胞活力;平板克隆、Transwell、细胞划痕和Annexin V/PI流式细胞术分别检测细胞增值、迁移和凋亡;JC-1和ROS检测试剂盒测定罗哌卡因、顺铂单独及联合作用下细胞gold medicine线粒体膜电位和活性氧水平。Western-blot和免疫荧光测定细胞迁移和铁死亡相关蛋白的表达,并通过亚铁离子荧光染色评价罗哌卡因联合顺铂对人结肠癌细胞铁死亡的影响。结果:光学显微镜下观察LOVO与LOVO/DDP细胞形态存在差异。与对照组相比,LOVO细胞活力随顺铂浓度增加显著下降,LOVO/DDP细胞活力下降平缓,联合罗哌卡因处理后,LOVO/DDP细胞活力较顺铂单独作用明显下降(P>0.05)。与单独顺铂治疗组相比,罗哌卡因联合顺铂处理后,LOVO细胞和LOVO/DDP细胞增殖、迁移明显受限,罗哌卡因增强了顺铂诱导的细胞凋亡,活性氧的增多以及线粒体功能障碍。进一步检测铁死亡相关蛋白的表达,结果显示罗哌卡因联合顺铂组通过下调GPX4,SLC7A11的表达促进LOVO细胞以及LOVO/DDP细胞铁死亡。结论:罗哌卡因能够增强已耐药人结肠癌细胞对顺铂的化学敏感性,其作用可能是通过促进癌细胞铁死亡实现。

目的:探索miR-100-5p靶向下游靶基因FGFR3调控甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制。方法:1.利用R语言通过微阵列数据库筛选得到甲状腺乳头状癌中差异表达miR-100-5p。2.qRT-PCR检测甲状腺乳头状癌临床组织与细胞中miR-100-5p的表达趋势。探讨甲状腺乳头状癌临床组织与癌旁组织中miR-100-5p表达水平与甲状腺乳头状癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期等临床资料的相关性。3.mimics-100-5p、mimics-NC、inhibitor-100-5p、inhibitor-NC分别转染至TPC-1细胞株。利用qRT-PCR验证转染是否成功。CCK-8、划痕愈合实验、平板克隆、Ed U、Transwell实验明确miR-100-5p对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响。4.进一步筛选miR-100-5p下游靶基因,并验证其作用机制:1)通过数据库miRDB、mir DIP、DIANATOOLs预测miR-100-5p下游靶基因。生物信息学深度挖掘TCGA-THCA数据库,得到差异表达的THCADEmRNA。通过韦恩图将THCADEmRNA与预测下游靶基因结果通过韦恩图进行交集,四种数据库共同交集于FGFR3、NOX4和KBTBD寻找更多8。2)生物信息学预测候选靶基因富集信号通路。利用TCGA数据库、在线数据库ENCORI和qRT-PCR验证候选下游靶基因的表达趋势,筛选出miR-100-5p下游靶基因FGFR3。3)双重荧光素酶确定miR-100-5p与FGFR3之间的调控关系。4)下调FGFR3验证其对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响:将siFGFR3、siFGFR3-NC转染至TPC-1细胞株。通过qRT-PCR验证转染是否成功。CCK-8、划痕愈合实验、Ed U、平板克隆及Transwell实验明确下调FGFR3对PTC细胞增殖、迁移及侵袭的影响,免疫印迹实验检测PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白表达趋势。5.通过回复实验探讨过表达FGFR3对转染mimics-100-5p的TPC-1细胞增殖、迁移及侵袭的影响,以及PI3K/AKT和MAPK信号通路相关蛋白表达趋势。结果:1.生物信息学确定miR-100-5p在三种GEO甲状腺乳头状癌miRNA微阵列中差异表达下调。TCGA数据库和ENCORI数据库验证miR-100-5p在甲状腺乳头状癌组织中低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。2.qRT-PCR检测显示miR-100-5p在甲状腺乳头状癌临床组织(n=42)和细胞系(TPC-1和B-CPAP)中低表达。临床相关性分析显示miR-100-5p与PTC患者的肿瘤大小(P=0.028)、性别(P=0.038)、TNM分期(P=0.001)存在相关性。过表达miR-selleck合成100-5p可以抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭,抑制miR-100-5p可以逆转这一过程。3.生物信息学预测FGFR3是miR-100-5p下游靶基因。KEGG分析FGFR3下游富集信号通路为PI3K/AKT和MAPK。双重荧光素酶确定FGFR3与miR-100-5p存在直接调控关系。敲低FGFR3通过PI3K/AKT和MAPK信号通路抑制TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭的能力。4.回复实验验证过表达FGFR3可以部分恢复mimics-100-5p对TPC-1细胞的增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:1.过表达miR-100-5p抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭。2.过表达miR-100-5p通过靶向FGFR3抑制PI3K/AKT和MAPK信号通Flavivirus infection路激活,抑制PTC细胞的增殖、迁移及侵袭。

研究目的:在脓毒症肺损伤体内外模型中,初步探讨NETs调控肺泡巨噬细胞氧化应激,诱导细胞焦亡的分子机制。方法:1、通过盲肠穿刺结扎技术构建小鼠脓毒症模型,采用苏木精—伊红(HE)染色检测小鼠Sham组、CLP组、CLP+DnaseΙ组肺损伤的严重程度,用Western Blot检测上述分组肺组织NLRP3、GSDMD、Caspase-1、GPX4、Cit H3的蛋白表达情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液IL-1β、TNF-α的表达含量,用qRT-PCR检测肺组织GPX4 m RNA的表达量。2、使用试剂盒提取大鼠外周血中性粒细胞并诱导产生NETs,免疫荧光技术进行鉴定。3、将大鼠肺泡巨噬细胞(AM)细胞分组为CON、LPS、LPS+NETs、LPS+NETs+DnaseΙ组,Western Blot、qRT-PCR检测NETs刺激AM细胞后NLRP3、GSDMD、Caspase-1的表达量,试剂盒及荧光技术检测活性氧(ROS)的变化,试剂盒检测MDA的含量,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18的含量,CCK-8检测细胞活力。4、实验分组为CON、LPS、LPS+NETs、LPS+NETs+NAC组,Western Blot检测用ROS清除剂NAC调控活性氧后,NETs再刺激AM细胞后NLRP3、GSDMD、Caspase-1的含量,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18的含量,CCK-8检测细胞活力,试剂盒及荧光技术检测活性氧(ROS)的变化。5、提取质粒,包装GPX4过表达慢病毒,感染并筛选GPX4过表达Plant symbioses的AM细胞稳转株。6、实验分组为CON、LPS、LPS+NETs+NC-GPX4、LPS+NETs+OE-GPX4组,Western Blot、qRT-PCR检测NETs刺激AM细胞后NLRP3、GSDMD、Caspase-1的表达量,试剂盒及荧光技术检测活性氧(ROS)的变化,试剂盒检测MDA的含量,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-18的含量,CCK-8检测细胞活力。结果:1、脓毒症小鼠肺组织焦亡相关蛋白、炎症因Serine Protease抑制剂子及NETs标志性蛋白Cit H3与肺损伤程度有关,GPX4基因及蛋白IACS-010759表达量与肺损伤程度呈现负相关,抑制NETs后可降低脓毒症小鼠肺组织焦亡水平,同时GPX4表达量会升高。2、使用细胞染色方法、免疫荧光技术验证,成功从大鼠血液中提取中性粒细胞并诱发产生NETs。3、体外实验中,NETs会放大LPS诱导的AM细胞焦亡水平,同时影响GPX4基因、蛋白的表达,细胞活力会下降,氧化应激水平上升,用DnaseⅠ抑制NETs后细胞的焦亡水平与氧化应激水平得到改善。4、与对照组相比,NAC清除活性氧后,NETs再刺激AM细胞,焦亡水平会下降,细胞活力上升。5、通过荧光技术、qRT-PCR、Western Blot验证GPX4过表达稳转株构建成功。6、与对照组相比,NETs刺激过表达GPX4组细胞,焦亡水平、活性氧、MDA含量显著降低,细胞活性得到改善。结论:1、脓毒症肺损伤过程中,NETs会促进肺泡巨噬细胞氧化应激水平,并诱导细胞焦亡。2、NETs通过抑制GPX4诱导肺泡巨噬细胞焦亡,加重脓毒症肺损伤。

目的:RepSox研究购买通过生物信息学分析筛选出表阿霉素耐药乳腺癌细胞(MCF-7/EPI)和敏感乳腺癌细胞(MCF-7)外泌体中差异表达miRNA,并对其靶基因功能进行分析预测；探讨氧化前胡素逆转表阿霉素乳腺癌耐药的作用及其对MCF-7/EPI外泌体中靶基因miRNAs表达的影响。方法:采用CCK-8法确证氧化前胡素逆转表阿霉素乳腺癌耐药的作用，结合鼠源乳腺癌4T1细胞移植瘤模型验证氧化前胡素联合表阿霉素的抗肿瘤作用；差速离心法分离提取MCF-7/EPI和MCF-7外selleckchem Regorafenib泌体，利用微阵列技术评估两种外泌体中miRNA的表达，通过生物信息分析预测失调miRNAs的靶基因；激光共聚焦分析MCF-7对MCF-7/EPI外泌体摄取情况、摄取MCF-7/EPI外泌体后MCF-7细胞增殖的变化及氧化前胡素对其变化的影响；RT-qPCR技术考察氧化前胡素对MCF-7/EPI外泌体中靶基因miRNAs表达的影响。结果:体外实验中建立的MCF-7/EPI对表阿霉素耐药倍数为6.30倍，氧化前胡素可逆转MCF-7/EPI对表阿霉素耐药；体内试验结果也显示，与单独的表阿霉素组相比，用氧化前胡素联合表阿霉素治疗2 w后，肿瘤质量显著降低(P<0.01),进一步的结果表明MCF-7可摄取MCF-7/EPI外泌体，且摄取耐药外泌体后的MCF-7细胞在表阿霉host immune response素干预下细胞增殖能力增强，氧化前胡素可抑制MCF-7细胞对MCF-7/EPI外泌体摄取，抑制MCF-7细胞在表阿霉素干预下细胞增殖能力(P<0.01);生物分析发现miRNA-222-3p为MCF-7与MCF-7/EPI两种外泌体中差异显著的基因，miRNA-222-3p在MCF-7/EPI外泌体中表达显著上调，而氧化前胡素可下调miRNA-222-3p基因表达(P<0.01)。结论:外泌体miR-222-3p可能是预测乳腺癌患者表阿霉素敏感性的潜在预后生物标志物。氧化前胡素可能通过抑制MCF-7对MCF-7/EPI外泌体的摄取，下调miRNA-222-3p表达逆转表阿霉素乳腺癌耐药。

<正>毛细胞白血病变异型（hairy cell leukemia variant,HCL-V）是一种罕见的B细胞慢性淋巴增殖性疾病，发病的中位年龄为71岁，男女比例6∶1，中位生存期9年，在2008年世界卫生组织淋巴肿瘤分类中暂定为脾B细胞淋巴瘤/白血病不能分类，认为和毛细胞白血病（hairy cell leukemia,Peri-prosthetic infectionHCL）在生物学上不再有关联，2016年版分类维持原状~([1-2])。HCL-V缺乏特异性临床表现和生物分子标志物，容易误诊，此次报道1例利妥昔单抗联合克拉屈滨治AZD1152-HQPA体内实验剂量疗HCL-V，并进行相关文献回顾。1病历资料女性，65岁，既往体健。患者2018年查体发现白细胞升高（17.3×10~9/L），后渐出现乏力、脾大，外院诊断为边缘区淋巴瘤，未行治疗。患者乏力进行性加重，并出现盗汗、纳差，于2020年10月来我院就诊。入院查体：左侧颈部、双侧腋窝、左侧腹股沟可触及多个肿大淋巴结，最大者位于左侧颈部，长径约2.5 cm，质韧，无压痛，脾脏肋下4 cm触及，质硬，无压痛。血常规：白细胞48.8×10~9/L，淋巴细胞43.9×10~9/L，血红蛋白124 g/L，血小板127.0EPZ-6438×10~9/L。异常白细胞形态检查：淋巴细胞90%。肝肾功、离子未见明显异常。

目的:左心耳封堵术(Left atrial appendage closure,LAAC)已经越来越多地用于非瓣膜性房颤患者以预防血栓栓塞。左心耳结构复杂多变,对左心耳开口直径和深度的精确测量是选择封堵器型号的关键,关系到LAAC的成败。本研究通过比较基于心脏计算机断层血管造影(Cardiac computed tomography angiography,CCTA)影像的人工测量、智能测量和数字减影血管造影(Digital subtraction angiography,DSA)三种方法测量左心耳开口直径和深度的结果,分析其相关性、一致性及对选择封堵器型号的指导意义,同时比较术后CCTA影像人工评估、智能评估对LAAC术后器械周围漏(Peri-device leaks,PDL)、再内皮化(Neo-endothelialization,NE)程度的评估结果,探讨基于人工智能(Artificial intelligence,AI)的左心耳CT图像分析技术在LAAC术中的应用价值。方法:以2020年1月1日至2022年2月28日在济南市中心医院心内科行LAAC且术前行CCTA评估左心耳的69例患者为研究对象,收集其临床资料及影像学资料进行回顾性分析。所有患者的术前CCTA影像均使用常规CT图像分析软件对左心耳进行人工测量,同时使用ANYTHINKβ左心耳智能分析系统对左心耳开口直径和深度进行智能测量,并分别根据测量结果预测封堵器型号。同时,收集术中DSA测量结果及最终植入封堵器型号。以术中DSA测量结果为标准,比较CT人工测量、CT智能测量与DSA测量的左心耳开口直径和深度,分析它们的相关性及一致性和对封堵器型号选择的指导意义。患者术后随访均行CCTA检查,分别进行人工评估和智能评估以评估LAAC术后并发症情况(有无PDL、DRT,NE是否完全,有无封堵器移位、脱落)。P<0.05表示差异有统计学意义,相关系数r≥0.8为高度相关,r<0.3为不相关。结果:(1)患者一般资料:共有69例患者进行了术前评估,67例患者成功植入WATCHMAN封堵器,手术成功率97.10%;69例患者CCTA三维重建LAA形态分类最多的是鸡翅型,共44例,占63.77%;最少的是菜花型,共6例,占8.70%;风向标型和仙人掌型分别为9例和10例,分别占13.04%和14.49%。(2)术前测量结果:三种方法测量LAA开口最大直径,CT人工测量数值最大,平均(26.38±4.19)mm;其次为CT智能测量,平均(24.66±4.06)mm;DSA测量结果最小,平均(24.61±4.21)mm。三种方法测量LAA深度,DSA测量数值最大,平均(24.26±4.45)mm;其次为CT智能测量,平均(23.43±4.36)mm;CT人工测量平均值(23.35±4.30)mm。(3)相关性分析:CT人工测量和CT智能测量开口直径的结果相关系数r=0.866,CT智能测量和DSA测量开口直径的结果相关系数r=0.968,CT人工测量和DSA测量开口直径的结果相关系数r=0.909,均具有显著相关性。CT智能测量与DSA测量深度、CT人工测量与DSA测量深度的结果相关系数r分别为0.906、0.954,均具有显著相关性。(4)一致性分析:使用Bland-Altman回归分析不同方法测量LAA开口直径及深度的一致性。CT人工测量和CT智能测量开口直径的结果P=0.00、CT人工测量和DSA的测量结果P=0.00,不可计算一致性界限。CT智能测量和DSA测量开口直径的结果的P=0.635,即差值与均值独立,可计算一致性界限,4%(3/69)位于一致性界限外,未超出规定的允许误差范围±25%,一致性较好。CT人工测量和DSA测量深度的结果P=0.00,CT智能测量和DSA的测量结果P=0.00,不可计算一致性界限。CT人工测量和CT智能测量深度的结果P=0.497,即差值与均值独立,可计算一致性界限3%(2/69)位于一致性界限外,未超出规定的允许误差范围±25%,一致性较好。(5)预测封堵器型号与实际植入封堵器型号比较:67例成功植入WATCHMAN封堵器患者,依据CT人工测量和CT智能测量的开口直径和深度预测植入封堵器大小,人工预测封堵器大小平均29.46±3.06mm,智能预测封堵器大小平均为28.97±3.30mm,实际植入封堵器大小平均为29.15±3.39mm。人工预测与实际植入封堵器型号具有良好的相关性(r=0.86),智能预测与实际植入封堵器型号两者具有良好的相关性(r=0.96)。人工预测与实际植入封堵器型号两者不同,差异有统计学意义(P=0.17);智能预测与实际Q-VD-Oph细胞培养植入差异无统计学意义(P=0.58)。(6)PDL评估:术后45天随访,人工评估发现PDL22例,智能评估发现PDL22例,两种检测方法对PDL检出率无明显差异(P<0.05)。65名患者完成术后1年随访,人工评估发现PDL19例,智能评估发现PDL19例,两种检测方法对PDL检出率无明显差异(P<0.05)。(7)NE评估:术后45天随访无PDL的45例患者中,25例再内皮化完全,占55.55%,术后1年随访,无PDL的46例患者中39例完全再内皮化,占84.78%。两种检测方法对判断NEPI3K/Akt/mTOR抑制剂程度无明显差异(P<0.05)。结论:(1)基于AI的左心耳CT图像分析技术在术前测量左心耳开natural medicine口直径的结果与术中DSA测量有较好的相关性和一致性;在术前测量左心耳深度的结果与术中DSA测量有较好的相关性,但一致性较差,需要进一步改进;CT智能测量可以较好地指导封堵器型号的选择。(2)基于AI的左心耳CT图像分析技术可以较好的评估LAAC术后PDL和NE情况。(3)基于AI的左心耳CT图像分析技术在LAAC术前、术后评估方面具有较高的应用价值。

目的：探讨和厚朴酚在黑素细胞铁死亡中的作用及分子机制。方法：构建erastin诱导的正常人黑素细胞系PIG1和白癜风黑素细胞系PIG3V铁死亡模型，检测细胞活性、细胞死亡率、细胞脂质过氧化物水平及胞内Fe~(2+)购买PR-171含量，观察黑素细胞线粒体超微结构，检测铁死亡关键分子mRNA及蛋白表达水平。结果：使用erastin成功构建黑素细胞铁死亡模型，脂质过氧化物水平及细胞内Fe~(2+)含量升高，线粒体超微结构损伤，细FUT-175作用胞死亡增加。和厚朴酚预处理可显著降低脂质过氧化物水平及细胞内Fe~(2+)含量，恢复线粒体超微结构，减少细胞死亡。此外，和厚朴酚预处理能显著抑制铁死亡诱导分子转铁蛋白受体（TFR）1、酰基辅酶A合成酶长链家族Cathodic photoelectrochemical biosensor成员（ACSL）4、环氧合酶（COX）2的表达及促进铁死亡抑制分子铁蛋白重链（FTH）1的表达。结论：和厚朴酚通过调控铁死亡关键分子的表达，降低黑素细胞脂质过氧化物水平，从而减少黑素细胞的铁死亡，对白癜风黑素细胞发挥保护作用。

基于氧化应激介导的程序性细胞死亡探讨心肌缺购买Naporafenib血再灌RP56976价格注损伤的发病机制，及基于PKCβⅡ/NOX2/ROS信号通路探讨柴胡三参胶囊调节心肌缺血再灌注损伤的机制及作用靶点。结扎左前降支建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型，随机分为6组：假手术组，模型组，柴胡三参胶囊临床等效、高剂量组，N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine)组，蛋白激酶C抑制剂(CGP53353)组。柴胡三参胶囊各剂量组连续给药7 d后，检测各组大鼠心肌梗死面积；苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态；TUNEL染色观察大鼠心脏组织凋亡情况；酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测大鼠心肌损伤指标和氧化应激相关指标；流式细胞仪检测心脏组织中活性氧(ROS)水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测大鼠心脏组织相关蛋白及mRNA相对表达水平。结果显示，与假手术组比较，模型组大鼠心肌梗死面积明显，心肌结构紊乱、quantitative biology间质水肿及出血，可见大量空泡，心肌损伤标志物及心肌凋亡水平明显升高，ROS及丙二醛(MDA)水平明显升高，超氧化物歧化酶(SOD)水平明显下降，心肌组织中蛋白激酶C(PKCβⅡ)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2(NOX2)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)蛋白及mRNA表达水平明显升高。与模型组比较，柴胡三参胶囊可改善大鼠心肌梗死面积和心脏组织病理形态，改善心肌损伤标志物和氧化应激相关指标，减少心肌组织凋亡水平，降低心肌组织中PKCβⅡ、NOX2、caspase-3、ACSL4蛋白及mRNA的表达。结果表明，柴胡三参胶囊可通过调控PKCβⅡ/NOX2/ROS信号通路，抑制氧化应激和程序性细胞死亡(凋亡、铁死亡),从而减轻心肌缺血再灌注损伤。

脑梗死严重威胁着人类健康,但有效的治疗措施非常有限。因此,在脑梗死发病机制的基础上寻求新的治疗方法对减轻脑梗死后的神经损伤具有十分重要的意义。程序性细胞死亡主要包括凋亡、程序性坏死等,广泛参与多种疾病的发病过程,也是导致脑梗死后神经损伤的重要因素。多年来细胞凋亡信号通路在脑梗死的发病机制已得到了广泛研究,但程序性坏死通路的分子机制尚不清楚。经典的程序性坏死通路是由肿瘤坏死因子(Tumour necrosis factor alpha,TNF-α)等触发激活,受体相互作用蛋白1(Receptor-interacting protein 1,RIP1)和受体相互作用蛋白3(Receptor-interacting protein 3,RIP3)相互磷酸化,形成“坏死体”,进一步磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白(Mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL),最终导致细胞死亡。RIP1,RIP3和MLKL通常用作程序性坏死的分子标志物。最近的一项研究发现,RIP1和RIP3缺失可通过减少程序性坏死以减轻小鼠缺血再灌注后的脑损伤,但具体分子机制尚未阐明。一项小鼠心肌缺血再灌注模型的研究发现,RIP3介导非典型程序性坏死信号通路中钙调蛋白依赖性激酶II(Calmodulin-dependent kinase II,CaMKⅡ)的活化,最终导致程序性坏死和细胞凋亡。但尚不清楚RIP3/CaMKⅡ途径是否参与脑梗死模型中的细胞死亡。我们团队前期研究发现,富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)和线粒体钙单向转运蛋白(Mitochondrial calcium uniporter,MCU)的表达在大鼠脑梗死模型中上调,伴随着线粒体损伤、钙内流增加、活性氧产生和细胞凋亡增加等。另一项研究发现在软骨细胞中的CaMKⅡ/Pyk2信号级联途径可以促进软骨细胞增殖和基质合成。这些研究提示,RIP3/CaMKⅡ/Pyk2信号通路可能在脑梗死细胞死亡的发生发展过程中具有重要作用,但其分子调控机制及与程序性坏死的关系有待进一步探讨。我们在第一部分,采用RIP3敲除小鼠探讨了RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路是否参与小鼠脑梗死模型的程序性细胞死亡,并对其分子调控机制进行了研究;在第二部分,培养原代皮层神经元建立体外神经元缺氧模型,在此模型中验证RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路对缺氧后原代神经元的影响;在第三部分,收集急性脑梗死住院患者及健康对照人群血浆,比较大面积脑梗死组、非大面积脑梗死组和对照组三组人群血浆中程序性坏死标志物RIP1、RIP3和MLKL的表达水平差异,为急性脑梗死的诊断和预后评估寻找合适的外周血标志物。第一部分RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路在小鼠d MCAO模型中参与程序性细胞死亡的作用机制研究目的:明确RIP3敲除对小鼠脑梗死模型的脑梗死体积和运动功能障碍以及神经元超微结构影响;分析RIP3敲除对线粒体膜电位、钙水平和活性氧生成,以及程序性细胞死亡的影响;探讨RIP3/CaMKⅡ/Pyk2级联反应是否参与小鼠脑梗死模型的程序性坏死和细胞凋亡。方法:对野生型(wild type,WT)和RIP3敲除小鼠进行大脑中动脉远端闭塞(d MCAO)处理,比较两组小鼠脑梗死体积、运动功能障碍的差异;采用电子显微镜观察两组小鼠脑梗死后神经元超微结构损伤;采用Western blot检测脑梗死组织中RIP3、CaMKⅡ、Pyk2及其他经典程序性坏死标志蛋白和细胞凋亡蛋白的表达;采用流式细胞术分析两组小鼠脑梗死组织线粒体膜电位、钙内流和活性氧的变化。结果:RIP3敲除减少小鼠脑梗死模型的脑梗死体积,减轻运动功能障碍,减轻脑梗死后神经元超微结构损伤;RIP3敲除抑制脑梗死后线粒体膜电位降低,细胞钙内流增加和活性氧生成;RIP3敲除抑制CaMKⅡ/Pyk2级联反应活化,减少小鼠脑梗死模型程序性坏死和细胞凋亡。结论:1.RIP3敲除小鼠脑梗死模型的脑梗死体积、运动功能障碍和神经元超微结构损伤较野生型显著减少。RIP3敲除可抑制脑梗死后线粒体膜电位降低,细胞内钙内流增加和活性氧产生。2.RIP3敲除可抑制CaMKⅡ/Pyk2通路的活化,减少程序性坏死和凋亡蛋白的表达,最终减少神经元程序性坏死和凋亡。第二部分RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路在原代皮层神经元氧糖剥夺/复氧模型中的表达变化目的:体外培养原代皮层神经元,在氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型中验证RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路在程序性细胞死亡中的作用。方法:在WT和RIP3敲除胎鼠中提取原代皮层神经元并进行培养,采用激光共聚焦显微镜观察微管相关蛋白2(MAP2)染色阳性细胞以鉴定原代皮层神经元;采用CCK-8法检测两组原代皮层神经元OGD/R后的细胞活力;Western blot检测两组原代皮层神经元中RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路信号蛋白的表达水平;免疫荧光染色比较两组原代皮层神经元OGD/R后钙内流水平。结果:在OGD/R模型中,RIP3敲除胎鼠原代皮层神经元细胞活力显著高于WT组胎鼠原代皮层神经元;RIP3敲除抑制了原代皮层神经元OGD/R后CaMKⅡ、Pyk2的表达;RIP3敲除抑制了原代皮层神经元OGD/R后钙内流的增加。结论:本部分在细胞水平上验证了RIP3/CaMKⅡ/Pyk2通路对程序性细胞死亡的影响。在原代皮层神经元OGD/R模型中,RIP3敲除可通过抑制CaMKⅡ/Pyk2信号通路以及抑制钙内流,提高原代皮层神经元的细胞活力,减少程序性细胞死亡。第三部分程序性坏死标志物在急性脑梗死患者血浆中的水平检测目的:探讨急性脑梗死患者血浆中程序性坏死的标志蛋白RIP1、RIP3和MLKL的水平与急性脑梗死的关系,为急性脑梗死的诊断和预后评估寻找合适的外周血标记物。方法:收集2020年3月至2023年6月于河北医科大学第二医院神经内科住院治疗的确诊为急性前循环脑梗死患者120例的临床资料和血浆样本,包括急性大面积脑梗死患者80例和急性非大面积脑梗死患者40例。同时收集我院体检中心健康成年人40例作为健康对照组。收集患者的临床资料包括:性别,年龄,身体质量指数(BPexidartinib生产商ody Mass Index,BMI),既往基础疾病,吸烟及饮酒史,卒中家族史,入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分等。所有入组患者于入院当天抽取肘静脉血2ml制备血浆标本。利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆RIP1、RIP3和MLKL的水平。所有研究对象均自愿同意加入本次研究。结果:与健康对照组相比LY294002作用,急性大面积脑梗死组和急性非大面积脑梗死组患者血浆中RIP1、RIP3、MLKL的水平均显著升高,且急性大面积脑梗死组显著高于急性非大面积脑梗死组。但是血浆RIP1、RIP3、MLKL水平与NIHSS评分之间均无显著相关。结论:1.与健康对照组相比,急性大面积脑梗死组、急性非大面积脑梗死组患者血浆程序性坏死标志物poorly absorbed antibiotics水平显著升高。2.急性脑梗死患者血浆程序性坏死标志物水平与急性脑梗死症状严重程度之间无显著相关。