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目的 临床分析正念认知疗法用于抑郁症患者对其的影响。方法 本研究是随机对照试验，选取本院于2022年2月～2022年11月收治的68例抑郁症患者作为此anti-hepatitis B次研究对象，根据护理方法分为对照组BMS-907351分子式（34例）与研究组（34例），前一组患者采用常规护理干预，后一组患者在对照组基础之上给予正念认知疗法，比较两组患者汉Tofacitinib分子量密尔顿抑郁量表（HAMD）、匹兹堡睡眠质量指数（PSQI）、健康调查简表（SF-36）、满意度。正态计量资料采用t检验，计数资料采用x~2检验。结果 护理前，两组的HAMD评分、PSQI分数、SF-36评分无显著差异（P>0.05）；护理后，研究组的HAMD评分、PSQI分数低于对照组，SF-36评分高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。研究组的满意度高于对照组，差异显著（P<0.05）。结论 抑郁症患者采用正念认知疗法结合常规护理可改善抑郁情绪、睡眠质量，提高生命质量及护理满意度。

背景脊髓损伤后机体反应机制复杂,如何提高脊髓损伤的治疗效果具有较高的临床价值。脊髓损伤发生后神经细胞死亡,原有的神经信号传递通路遭到破坏,使得冲动电信号无法越过损伤部位传递到另一侧。虽然在损伤发生后机体会产生内源性电场,刺激内源性神经干细胞(neural stem cell,NSCs)selleckchem Lapatinib增殖分化来启动内源性修复机制,但在炎性微环境和氧化应激等不利因素的影响下,机体的内源性修复效果并不明显。电刺激可以通过多种离子通道激活体内信号通路,调节机体内的分子转运和信号转导,对多种组织和器官具有明显的促进修复和再生作用。利用材料和外界刺激来增强损伤局部电刺激的效果可以进一步促进神经信号传递通路的重建,有利于脊髓损伤后的功能恢复。聚乳酸羟基乙酸(polylactic-co-glycolic acid,PLGA)是一种拥有良好组织相容性和机械性能的高分子化合物,在组织工程中有广泛的应用,但单独应用PLGA并不足以满足脊髓损伤修复的需求。金纳米粒子(Au NPs)作为一种具有良好导电性和生物相容性的金属粒子,能够改善材料的理化性能,提升电刺激的治疗效果。因此,为了最大化提升材料和电刺激联合对脊髓损伤的治疗效果,本研究旨在构建一种负载金纳米粒子的聚多巴胺涂层修饰PLGA多功能复合材料(Au NPs@PDA-PLGA),赋予材料良好的导电能力和生物性能,联合电刺激共同治疗最大化促进脊髓损伤的修复。目的本研究计划构建一种负载金纳米粒子的聚多巴胺涂层修饰PLGA复合材料,并对复合材料的理化性质和生物学特性进行调控使其满足脊髓损伤修复的需求。通过细胞实验验证复合材料联合电刺激对于NSCs增殖的促进作用和NSCs向神经细胞分化的定向调控作用。并将复合材料原位移植到大鼠脊髓损伤部位,联合电刺激促进损伤区域的神经细胞再生和传导通路重建,减少炎细胞浸润和胶质瘢痕形成,实现脊髓损伤后运动和感觉功能的有效恢复。方法1.Au NPs@PDA-PLGA复合材料的制备。利用聚多巴胺(Polydopamine,PDA)的还原性和粘附性构建负载Au NPs的聚多巴胺涂层修饰PLGA复合材料,使用能量色散光谱仪(EDS),X射线衍射仪(XRD)对复合材料的组分构成进行鉴定。通过扫描电镜(SEM),原子力显微镜(AFM),接触角测量仪,四探针电导仪等仪器对Au NPs@PDA-PLGA复合材料的表面形貌,亲水性和导电性等理化性能进行检测。2.Au NPs@PDA-PLGA复合材料的生物性能探究。利用BCA试剂盒,ROS试剂盒分别检测Au NPs@PDA-PLGA复合材料的蛋白吸附能力和活性氧清除能力。将NSCs接种在复合材料表面,通过CCK-8,细胞活死染色评估Au NPs@PDA-PLGA复合材料的LGX818浓度细胞毒性;将Au NPs@PDA-PLGA复合材料植入到动物体内,通过HE染色评估复合材料在植入局部的炎症反应情况和脏器病理学改变情况。3.Au NPs@PDA-PLGA复合材料联合电刺激对NSCs的调控作用。从胎鼠海马中提取NSCs,将NSCs接种在不同材料中培养,使用CCK-8和免疫荧光染色探究NSCs在不同复合材料和电刺激参数下的增殖情况和细胞活性;利用免疫荧光染色探究NSCs在Au NPs@PDA-PLGA复合材料和电刺激作用下的分化情况和神经细胞生长情况;最后通过RT-PCR技术探究Au NPs@PDA-PLGA复合材料和电刺激对于NSCs分化趋势的作用影响。4.Au NPs@PDA-PLGA复合材料联合电刺激对脊髓损伤功能恢复的探究。构建大鼠脊髓全切损伤模型,将复合材料分别植入到损伤处并在术后给予电刺激治疗。通过BBB评分,步态分析和肌电图评估脊髓损伤后运动和感觉功能恢复情况;脊髓组织取材后用HE、LFB染色和透射电镜(TEM)评估脊髓组织恢复和髓鞘再生情况;最后通过免疫荧光染色观察脊髓损伤后神经细胞和髓鞘再生情况,损伤区域炎细胞浸润和胶质瘢痕形成情况,探究Au NPs@PDA-PLGA复合材料联合电刺激治疗促进脊髓损伤修复的潜在机制。结果1.通过EDS和XRD的检测分析,在制备的复合材料中发现了金元素的存在,证明Au NPs被成功接枝在材料表面,成功制备出负载Au NPs的Au NPs@PDAPLGA复合材料。经Au NPs改性的Au NPs@PDA-PLGA复合材料亲水性和导电性与PLGA和PDA-PLGA相比显著提高;在SEM和AFM检测中观察到Au NPs@PDA-PLGA复合材料具有粗糙的表面形貌,有利于细胞的粘附生长和电刺激作用效果的提升。2.细胞活死染色结果显示接种在Au NPs@PDA-PLGA复合材料上的NSCs生长情况良好,植入复合材料的大鼠脏器组织HE染色未见明显病理改变,证明Au NPs@PDA-PLGA复合材料具有良好的生物相容性,为后续细胞实验和动物实验的顺利实施奠定了基础。BCA蛋白吸附实验结果显示PDA能够提高材料的蛋白吸附能力,负载Au NPs能够进一步提高材料的蛋白吸附性能。ROS检测结果显示与PLGA和PDA-PLGA相比,Au NPs@PDA-PLGA能够有效清除活性氧,显著降低细胞活性氧水平。3.Nestin免疫荧光染色证明从胎鼠海马中成功提取了NSCs。细胞增殖实验结果显示生长在Au NPs@PDA-PLGA复合材料表面的NSCs和在电刺激干预下的NSCs活性明显提高,增殖能力明显增强,同时将Au NPs@PDA-PLGA和电刺激联合应用能够进一步促进NSCs的增殖。免疫荧光染色和RT-PCR结果显示Au NPs@PDA-PLGA联合电刺激能够定向调控NSCs分化,促进NSCs向神经细胞分化,抑制NSCs向星形胶质细胞分化;二者联合能够促进神经细胞轴突生长,加速细胞间联系的建立。4.通过构建大鼠脊髓损伤模型并予以相应治疗,我们发现Au NPs@PDAPLGA联合电刺激能够显著改善大鼠后肢运动功能,后肢步态足迹与术前最为接近。肌电图结果显示Au NPs@PDA-PLGA联合电刺激能够缩短神经电信号传导的潜伏期,提高振幅。脊髓HE,LFB和TEM染色结果显示Au NPs@PDA-PLGA联合电刺激能够明显促进损伤区域组织再生和髓鞘生长。免疫荧光染色结果显示复合材料和电刺激联合治疗能够显著促进损伤区域神经细胞的再生和轴突的生长,抑制炎细胞浸润和胶质瘢痕的聚集,促进脊髓损伤的功能恢复。结论本研究课题成功构建了具有亲水性,导电性和粗糙表面结构的Au NPs@PDA-PLGA复合材料。这种复合材料能够有效清除活性氧,促进蛋白吸附,为神经细胞生长营造出适宜的微环境。Au NPs@PDA-PLGA复合材料与电刺激能够发挥协同作用,促进体外NSCs增殖并调控NSCs向神经细胞定向分化,抑制星形胶质细胞的形成。通过大鼠脊髓损伤动物模型证明Au NPs@PDA-PLGA联合电刺激能够促进损伤区域神经细胞的再生和轴突生长,同时减少炎细胞浸润,抑制胶质瘢痕聚集,促进脊髓损伤的运动和感觉功能恢复。这Non-immune hydrops fetalis一创新性的联合治疗手段将为脊髓损伤的治疗提供新的思路。

目的:建立高胆固醇饮食诱导的大鼠高胆固醇血症模型,采用植物甾醇(PS)和卵磷脂(PC)联合干预,研究PS与PC联合补充对高胆固醇血症大鼠的改善效果及其红细胞膜流动性的影响,以及通过红细胞脂质组学研究相关代谢通路的变化。方法:雄性SD大鼠适应性喂养1周后,按体重和胆固醇水平随机分为8组(12只/组),空白对照组给予对照饲料(D12102C),其余组均给予高胆固醇饲料(D12109T)。对照组CON、模型组HCD、阳性对照组SIM(4mg/kg辛伐他汀)、植物甾醇组PS(0.3g/kg PS)、卵磷脂组PC(1g/kg PC)、植物甾醇+低剂量卵磷脂组LPC-PS(0.3g/kg PS+0.5g/kg PC)、植物甾醇+中剂量卵磷脂组PC-PS(0.3g/kg PS+1g/kg PC)、植物甾醇+高剂量卵磷脂组HPC-PS(0.3g/kg PS+1.5g/kg PC)。干预10周后,大鼠腹主动脉取血,分别采用非抗凝管和抗凝管收集血液,离心后获得血清和红细胞。采用全自动生化分析仪检测血清脂质水平和肝功能指标。低渗一步溶血法获得红细胞膜,并采用荧光偏振法以TMA-DPH为探针,检测细胞膜的流动性。采用UPLC-MS/MS(QE Plus?)液相色谱质谱系统进行红细胞非靶向脂质组学检测,并结合MSDAIL软件进行脂质鉴定与数据处理。电喷雾离子源(selleckchem CrizotinibESI)正负离子模式下检测,并用主成分分electrodialytic remediation析(PCA)、偏最小二乘判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)进行差异研究,结合单变量分析计算的变异倍数(FC)、P值和多维统计分析计算的变量投影重要度(VIP)来筛选显著差异脂质,并通过KEGG通路富集来研究差异脂质参与的代谢通路。结果:给予高胆固醇饮食后,与CON组相比,HCD组的大鼠血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平显著上升(P<0.05);经过10周PS和(或)PC的干预后,与HCD组相比,LPC-PS、PC-PS、HPC-PS组的TC、LDL-C、ALT和AST水平均显著降低(P<0.05)。与CON组相比,HCD组的红细胞膜偏振度(P)和微粘度(η)显著升高(P<0.05),表明高胆固醇血症大鼠红细胞膜流动性降低;PC组和PC-PS组的P和η显著降低(P<0.05),表明PC或PC-PS联合干预可以增加红细胞膜流动性。采用Person相关分析评估脂质水平与膜流动性的相关性,结果表明TC与P、η成正相关(相关系数r=0.32,P<0.05);LDL-C与P、η成正相关(r=0.26,P<0.05)。参考LIPID MAPS对检测到的脂质进行了分类,共检测出5大类脂质,即脂肪酰类、甘油酯类、甘油磷脂类、鞘脂类和固醇脂类,包括66种脂质亚类(1758个脂质代谢分子);总体样本的PCA分析表明质控样本紧密聚集在一起,不同组别之间出现明显分离趋势,表明本次实验重复性好,仪器分析系统稳定,实验数据可靠。PLSDA、OPLS-DA模型建立成功且稳定可靠,按照VIP>1.5、P<0.05、FC>2或FC<0.5筛选差异脂质,组间比较后发生变化的脂质主要集中在神经酰胺、磷脂酰胆碱、醚联磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂和甘油三酯等脂类;经KEGG通路富集分析发现上述差异脂质参与的主要通路是鞘脂信号通路、鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、醚脂质代谢、脂肪消化吸收、胆固醇代谢等。结论:PS与PC联合补充可以改善高胆固醇血症大鼠的血清脂质水平及高胆固醇饮食引起的肝损伤;经PZ-VAD-FMK化学结构C或者PC-PS联合干预可以增加高胆固醇血症大鼠的红细胞膜流动性;PS和(或)PC干预,可以调节鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、胆固醇代谢等与高胆固醇血症密切相关的代谢通路,从而改善因高胆固醇饮食引起的大鼠脂代谢紊乱。

水稻产量由产量三要素构成,包括粒重、穗粒数、有效穗数。粒重又由籽粒形状和籽粒灌浆程度决定,而籽粒形状是由籽粒长度、宽度、以及厚度决定。定位和克隆水稻粒型相关基因有助于研究水稻籽粒形成的机制并为提高水稻产量提供理论基础以及基因资源。本研究通过筛选60CO-γ辐射诱变中花11的突变体库,获得一个小粒突变体命名为sg7。对该突变体进行了农艺性状考察、细胞学组织观察、基因的表达分析、遗传分析及基因定位等研究。主要结果如下:1.对突变体sg7和野生型ZH11的主要农艺性状考察结果表明:与野生型ZH11相比突变体株高显著降低,分蘖减少;穗长变短,二次枝梗数LBH589显著减少needle prostatic biopsy,着粒密度降低;种子长度变短,宽度变窄。2.颖壳细胞扫描电镜观察结果表明,突变体种子变小的原因是MLN4924细胞数目变少,而不是细胞长度的变化。3.通过对细胞周期相关基因在突变体中的定量表达分析发现,在突变体5mm幼穗中,细胞分裂相关的细胞周期蛋白基因CAK1、CDT2q、CYCOS2、CYCA2.3以及植物特有的依赖周期蛋白的激酶CDKB2表达量明显下降;细胞周期蛋白依赖的蛋白激酶CDAK1、CDAK2和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子CDKI在野生型与突变体5mm幼穗中表达没有明显差异,4.已克隆粒形相关的基因的表达分析表明GS5、DEP1和DEP2,在ZH11和sg7的幼穗中的表达量没有显著差异;GW8、GPW2和GL3在突变体幼穗中表达量显著降低。5.遗传分析表明,sg7是隐性单基因。6.利用sg7与ZS97B杂交得到的的F2群体,通过BSA关联分析初步将基因定位在第七染色体上18.255 Mb和21.519 Mb之间。同时利用QTL定位,在第七染色体标记LInD7-280和LInD7-331之间扫描一个控制粒长的QTL,与BSA定位结果重叠。7.利用BC1F2群体,从该群体中取出1500株突变体表型的单株进行精细定位,最终将sg7进一步定位于483 Kb范围内。

宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关。治疗HPV感染可有效预防宫颈癌PF-03084014细胞培养。洛匹那韦(LPV)是Food and Drug Administration(FDA)批准的抗艾滋病病毒的治疗药物，研究发现洛匹那韦具有抗HPV病毒的活性。本工作旨在制备一种负载LPV的纳米胶束复合水凝胶载药系统，探究其通过阴道黏膜局部给药的性能。采用两亲性聚合物维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)和助渗透剂牛磺脱氧胆酸钠(STDC)自组装制备混合载药胶束(TPGS-STDC/LPV),混合胶束分散在温敏凝胶中形成载药纳米胶束复合温敏水凝胶(NMCH)。对TPGS-STDC/LPV的粒径、ZETA电位、形貌、包封率、载药量和immediate weightbearing释药等进行了检测，还测试了NMCH的黏膜粘附性、药物释放、透皮渗透和抗病毒活性等。实验更多结果表明，TPGS-STDC/LPV具有高药物包封率、高载药量，累积释放率达(96.82±2.93)%(pH=4.5,72 h),表现出酸响应释放性能；复合水凝胶具有适宜人体的温敏特性，对阴道上皮黏膜具有优异的粘附性，所制备的NMCH的LPV渗透率最好，为(54.05±2.74)%,约为游离LPV的7.4倍；NMCH具有显著的抗HPV病毒活性。该体系适合用于阴道局部给药。

背景与目的脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)是一种罕见的遗传性神经肌肉病,通常是由染色体5q13.2上的运动神经元存活基因1(Survival motor neuron 1,SMN1)发生纯合缺失或其他双等位基因致病性变异,导致SMN蛋白水平不足、脊髓前角α运动神经元及低位脑干运动神经元退行性变。主要表现为进行性肌无力、肌张力低下和肌肉萎缩,发病率约为1/11000,人群携带率为1/72～1/47,是最常见的婴幼儿致死性遗传性神经肌肉病。SMA的药物治疗取得了极大进展,诺西那生(Nusinersen)是一种改良的反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO),通过增加SMN1的补救基因SMN2的完整表达以增加SMN蛋白量,从而达到治疗目的。该药已获得美国FDA批准用于SMA患者的治疗,并在2019年在我国全年龄段的SMA患者中获得批准。然而,由于价格高昂,其临床应用受到了限制,直至2022年1月,诺西那生大幅度降价并进入我国国家医保,越来越多的SMA患者接受了该药治疗。本研究的主要目的是获取我国青少年及成人SMA患者接受诺西那生治疗的真实数据,以评估其疗效和安全性,并为我国SMA患者的诊疗管理提供重要参考。对象与方法本项为双中心、前瞻性、观察性研究。纳入2022年1月至2022年10月在山东大学齐鲁医院中心院区及青岛院区神经内科接受诺西那生规范治疗的青少年及成人SMA患者,治疗随访时间至少为6个月,最长为10个月。收集纳入患者的一般临床资料、临床特点及基因检查报告,并在应用诺西那生治疗的第0、2、6和10月时对其完善Hammersmith 功能性运动扩展量表(Hammersmith Functional Motor Scale Expanded,HFMSE)、修订版上肢模块(Revised Upper Limb Module,RULM)、肌萎缩侧索硬化症功能评分量表(Amyotrophic lateral Sclerosis Functional Rating scale revised,ALSFRS-r)评估,另外对可行走的患者进行6分钟步行测试(6-Minute Walk Test,6MWT)。同时进行肺功能、复合肌肉动作电位(Compound Muscle Action Potential,CMAP)波幅、脑脊液蛋白、骨密度及身体成分的检测。将收集到的数据整理后进行统计学分析。结果:1.截至2023年2月28日,完成6个月随访评估的患者有共有29例,其中有19例患者治疗达10个月。主要临床特征:男性21例,女性8例;临床分型:2型9例(31.0%),3型18例(62.1%),4型2例(6.9%)。平均起始治疗年龄为26岁。可行走的患者有8例(27.6%),可维持站立有2名(6.9%),可保持独坐的有8例(27.6%),只能卧床的有11例(27.9%)Biocontrol fungi。中重度脊柱侧弯患者15例(51.7%),舌肌纤颤的患者有11例(37.9%)。2.对比基线HFMSE中位评分13.00(3.00-36.00),治疗开始后第2个月16.00(6.00-38.50)、第6个月中位评分为22.00(9.00-33.50)和第10个月中位数为16.00(7.00-44.00),均有明显提升。治疗第2个月时29例患者中有9例(31%),6个月时29例患者中有13例(44.8%),10个月时19例患者中有7例(36.8%)的HFMSE评分有临床意义改善。3.与基线RULM中位评分22.00(9.00-33.50)对比,治疗开始后的第2个月24.00(11.50-35.00)、第 6 个月 27.00(13.50-36.00)和第 10 个月 23.00(17.00-36.00),均有明显提升。在治疗2个月时,29例患者中有11例(37.9%)的RULM评分有临床有意义的改善,治疗6月时有14例(48.3%),10个月时19例患者中有8例(42.1%)。4.根据患者的临床分型,有无行走能力,脊柱侧弯程度,有无关节挛缩,有无舌肌震颤分成了各亚组,对其治疗2月、6月、10月的运动功能评分变化进行对确认细节比,组间并未见明显差异性。5.共9名可行走的SMA患者在治疗2月和治疗6月时与基线相对比,患者6MWT的步行距离平均提升分别为33.11米和52.33米。其中有7例患者完成了治疗10月的评估,与基线对比平均提升55.94米。6.患者基线时ALSFRS-r平均评分34.3±8.5,治疗后第2个月平均评分为34.96(平均差值 0.62[95%CI[0.98-1.14]),在治疗第 6 个月时平均分为 35.24(0.89[0.28-1.50]),第10个月平均分为34.78(0.89;[0.10-1.68]),与基线水平相比均稍有提升。7.有21例患者完成用力肺活量(Forced Vital Capacity,FVC)治疗第6个月和基线的对比,结果无统计学差异。16例患者完成全身骨密度(Total Body Less Head Bone Mineral Density,TBLH BMD)检查对比,6月治疗后Z值出现了有统计学意义的下降;Cell Cycle抑制剂腰椎骨密度(Lumbar Spine Bone Mineral Density,LS BMD)、全身脂肪百分比变化、相对骨骼肌质量指数(Relative Skeletal Muscle Index,RSMI)检测,对比治疗6月与基线均无统计学差异。8.队列中13例患者完成了治疗前和治疗6个月后CMAP波幅对比,正中神经CMAP波幅平均值较基线水平增加1.33mV,腓总神经平均值较基线水平增加1.38mV;而尺神经和胫神经CMAP波幅对比治疗前后没有统计学意义的改变。9.有2例伴有严重脊柱侧弯的成人SMA2型患者在超声引导下多次腰椎穿刺均未成功,经患者及家属知情同意后成功实施腰椎蛛网膜下腔Ommaya囊植入术,建立了永久性皮下鞘内注射给药通道。10.治疗相关不良事件:11例(37.9%)患者发生不良事件,总计44次(26.8%),其中头痛15次(34.1%)、头晕11次(25.0%)和恶心11次(25.0%)最常见。结论:1.规律鞘内注射诺西那生能有效改善我国青少年和成人SMA患者的运动功能且相对安全,但治疗6-10个月对限制性通气功能患者FVC改善不明确。2.6-10个月诺西那生的治疗不能明显改善SMA患者骨密度及身体成分。3.有限的病例表明对于穿刺困难或穿刺失败的患者,实施腰椎蛛网膜下腔Ommaya囊植入术以建立永久性皮下鞘内注射给药通道是安全可行的。

目的:初步探讨线粒体DNA(mtDNA)通过激活ZBP1诱导细胞泛凋亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应的作用机制。方法:1、使用mtDNA试剂盒分离提取mtDNA,并采用琼脂糖凝胶电泳对提取的mtDNA进行纯度检测,使用Nanno Drop2000对mtDNA进行浓度检测。2、使用终浓度1μg/ml的LPS以及终浓度为0.5μg/ml的mtDNA处理肺泡巨噬细胞12h,收集细胞,用q RT-PCR技术检测细胞IL-1β、IL-18以及TNF-α的m RNA水平变化,同时收集细胞上清液,采用ELISA检测上清液中IL-1β以及IL-18的含量变化。实验分组:Control组、LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组。3、按照上述分组,分别使用CCK8对细胞活力进行检测;LDH试剂盒对细胞上清液中的LDH水平进行检测;Calcei确认细节n/PI染色对细胞死亡情况进行检测。4、取脓毒症肺损伤小鼠的肺组织进行单细胞测序,并使用生物信息学方法对泛凋亡关键基因进行评分。5、使用Western Blot对细胞焦亡通路的Caspase-1、GSDMD蛋白,坏死性凋亡通路的p MLKL、p RIPK3蛋白以及凋亡通路的Caspase-3蛋白进行检测。6、分别使用q RT-PCR技术以及Western Blot检测上述分组中ZBP1分子的m RNA及蛋白水平变化。7、使用小干扰RNA技术转染si RNA-ZBP1抑制肺泡巨噬细胞中ZBP1的表达;按照LPS+mtDNA、si RNA-NC+LPS+mtDNA、si RNA-1+LPS+mtDNA、si RNA-2+LPS+mtDNA的实验分组,使用ELISA检测各组上清液中IL-1β、IL-18的分泌情况;通过Calcein/PI染色对细胞死亡情况进行检测;用Western Blot对Caspase-1、GSDMD、p MLKL、p RIPK3、Caspase-3蛋白进行检测。结果：1、琼脂糖凝胶电Medullary AVM泳后能看到分子量约为16.5Kb的单一条带,即为mtDNA;2、与Control相比,LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组细胞上清液中IL-1β、IL-18以及LDH水平都增高,并且LPS+mtDNA组要高于LPS组、mtDNA组;与Control相比,LPS组、mtDNA组以及LPS+mtDNA组细胞活力下降,死亡细胞比例增高,且LPS+mtDNA组要比LPS组、mtDNA组变化更为明显;与Control相比,LPS组Caspase-1、GSDMD以及磷酸化的RIPK3和MLKL蛋白表达增高,mtDNA组Caspase-1、GSDMD以及Caspase-3蛋白表达增高,LPS+mtDNA组Caspase-1、GSDMD、Caspase-3、p RIPK3、p MLKL蛋白表达均有增加;3、抑制ZBP1后,与LPS+mtDNA组相比,si RNA-1+LPS+mtDNA组与si RNA-2+LPS+mtDNA组细胞上清液中IL-1β、IL-18的含量下降;与LPS+mtDNA组相比,si RNA-1+LPS+mtDNA组与si RNA-2+LPS+mtDNA组细胞死亡比例下降,Caspase-1、GSDMD、Caspase-3Compound 3抑制剂、p RIPK3、p MLKL蛋白表达水平均下降。结论：mtDNA可能通过ZBP1诱导细胞泛凋亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应。

目的:为探究益气活血法治疗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用和机制,本研究通过建立氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的RAW264.7细胞泡沫化模型,观察益气活血中药芪丹通脉片对巨噬细胞泡沫化的影响及其对泡沫化过程中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR pyrin domain containing 3,NLRP3)炎症小体信号通路、下游炎性因子白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)的影响,进一步揭示其抗炎、抗动脉硬化的作用机理。方Culturing Equipment法:培养RAW264.7细胞,随机分为对照组、ox-LDL诱导组、ox-LDL诱导+益气组、ox-LDL诱导+活血组、ox-LDL诱导+复方组(QDTM)、ox-LDL诱导+复方(QDTM)+si RNA组。各组细胞干预后进行泡沫化诱导,分析各组细胞油红染色阳性面积,计算各组细胞泡沫化诱导率,收集细胞,酶联免疫吸附试验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测炎症因子IL-1β及IL-18表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time RT-PCR)分析各组细胞NLRP3、半胱氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)的表达情况;免疫印迹法(Western-blot)分析各组细胞NLRP3、caspase-1的表达情况。结果:1.油红O染色结果:对照组正常的RAW264.7细胞基本没有油红O着色,其余各组经过泡沫化诱导后均出现不同程度的油红O着色。其中ox-LDL诱导组细胞油红O着色面积/细胞总面积比值最高,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值最低;与对照组相比,ox-LDL诱导组细胞油红O着色面积/细胞总面积比值具有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL诱导组相比,益气组、活血组、复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05);与益气组相比,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05);与活血组相比,复方组及复方+si RNA组油红O着色面积/细胞总面积比值降低均具有统计学意义(P<0.05)。2.ELISA法检测结果:对照组中IL-1β及IL-18含量最低,与对照组相比其它各组的IL-1β及IL-18含量均升高;益气组、活血组、复方组、复方+si RNA组与ox-LDL诱导组相比IL-1β及IL-18含量降低具有统计学意义(P<0.05);与益气组及活血组相比,复方组与复方+si RNA组IL-1β及IL-18含量降低Berzosertib小鼠具有统计学意义(P<0.05)。3.Real-time RT-PCR检测结果:对照组的NLRP3m RNA、caspase-1m RNAPD0325901化学结构含量最低;ox-LDL诱导组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA含量均最高。与ox-LDL诱导组相比,益气组、活血组、复方组、复方+si RNA组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA水平均降低均具有统计学意义(P<0.05);与益气组、活血组相比,复方组及复方+si RNA组NLRP3m RNA、caspase-1m RNA含量均降低具有统计学意义(P<0.05)。4.Western-blot检测结果:ox-LDL诱导组NLRP3、caspase-1含量最高;与ox-LDL诱导组相比,其它各组的NLRP3、caspase-1含量均明显降低具有统计学意义(P<0.05);与益气组、活血组相比,复方组及复方+si RNA组NLRP3、caspase-1的含量降低具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.益气活血中药复方芪丹通脉片可以抑制巨噬细胞的泡沫化,降低由ox-LDL诱导的IL-1β、IL-18炎症因子的水平。2.益气活血中药复方芪丹通脉片可显著下调NLRP3、caspase-1的表达水平,抑制NLRP3介导的炎症反应,减少泡沫细胞的形成。3.益气活血中药复方芪丹通脉片的抗炎效果中,益气活血配伍作用优于单纯益气组、活血组。4.益气活血中药复方芪丹通脉片可能是通过NLRP3炎症小体抑制巨噬细胞泡沫化,减轻炎症反应,改善动脉粥样硬化斑块。

目的 探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞焦亡的调控作用。方法46只SD大鼠，其中随机取6只大鼠为空白组，余40只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心衰模型，模型成功后将32只大鼠随机分为模型组12只、心康冲剂组10只、缬沙坦组10只。缬沙坦组以等效剂量0.03g/(kg·d)灌胃、心康冲剂组给予0.5g/(kg·d)等效剂量灌胃。空白组与模型组每日等量生理盐水灌胃，连续4周。实验结束后，心脏超声检测各组大鼠心功能，HE、Masson染色观察心脏组织形态，透射电镜下观察心肌组织超微结构，免疫组化法检测焦亡底物消皮素D-N端片段（gasderminD-N，GSDMD-N）表达，酶联免疫吸附法检测大鼠血清白介素1β（interleukin-1β，ILFerrostatin-1 MW-1β）、白介素18（interleukin-18，IL-18）表达，实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心肌组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体3（NOD-likereceptorthermalproteindomainassociatedprotein3，NLRP3）通路各mRNA，Westernblot法检测NLRP3通路各蛋白表达量。结果 与空白组相比，模型组大鼠左室射血分数(leftventricularejectionfractions，LVEF)、左心室短轴缩短率(leftventricularfractionalshortening，LVFS)均明显降低（P＜0.01），染色结果显示心肌细胞死亡增多、纤维化严重，且GSDMD-N焦亡蛋白表达在胞膜和胞浆，透射电镜结果显示模型组中心肌细胞膜有破裂，有孔隙形成，线粒体肿胀严重，血液中炎症因子IL-18、IL-1β明显升高（P＜0.01），心肌组织中NL确认细节RP3、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-1（cysteine-containingaspartate-specificproteases-1，Caspase-1）、GSDMDmRNA及GSDMD-N蛋白表达均明显升高（P＜0.01）。与模型组相比，心康冲剂、缬沙坦干预后心肌细胞焦亡减轻，LVEF、LVFS都不同程度地增加（P＜0Biodiesel Cryptococcus laurentii.01）；染色及电镜结果显示心肌病理学损伤减轻；炎症因子IL-18、IL-1β及细胞焦亡通路NLRP3、Caspase-1、GSDMD/GSDMD-N的mRNA及蛋白都有所降低（P＜0.01）。结论 心康冲剂可改善慢性心力衰竭大鼠心功能，抑制NLRP3细胞焦亡通路及下游产物，从而减轻心肌炎症，防止慢性心衰中的心肌细胞死亡过多。

目的 检测阴茎癌患者癌组织及其配对癌旁组织中程序性细胞死亡因4(PDCD4)的表达水平,分析其差异表达的意义,探讨其作为诊断标志物和治疗靶点的可能性。方法 收集昆明医科大学第二附属医院2018年7月至2020年12月收治的15例阴茎癌患者癌组织及其配对癌旁组织,采用免疫组化、PCR(Q-PCR)和Western blotting等分子生物学技术检测PDCD4在组织中的表达水平及细胞定位。结果 免疫组化染色结果提示所有被检测组织中PDCD4蛋白阳性呈棕黄色,定位于细胞核和细胞质,且癌组织较癌旁中PDCD4阳性比率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Q-PCR和Western blotting结果表www.selleck.cn/products/chir-99021-ct99021-hcl明阴茎癌组织中medicine managementPDCD4在转录和翻译水平的表达均比癌旁组织高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDCD4在阴茎癌组织中较癌旁组织表达明显升高,表明PDCD4与阴茎癌的发生、发展存在一定关联,PDCD4可能成为阴茎癌诊PLX3397浓度疗的新型标志物和治疗靶点,其具体机制有待进一步研究。