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目的 评估数字减影血管造影术（DSA）后经椎动脉灌冲常温生理盐水（IVNI）的可行性和安全性，为IVNI用于后循环脑梗死患者提供研究基础。方法 对接受脑动脉DSA的14例非脑卒中受试者进行IVNI（流速30～50 mL/mINCB018424体内实验剂量in，持续6～10 min），期间监测受试者各项生genetic marker理指标并记录患者主观症状。使用selleck HPLCDSA或经颅多普勒超声（TCD）检测脑动脉血流速度，评估血管痉挛情况。结果 14例受试者均成功完成IVNI，其中7例（50%）受试者在IVNI期间出现短暂的头晕、头面肢体麻木无力或高血压，1例患者在IVNI后即刻的DSA中发现脑血管痉挛。IVNI后平均动脉压、心率和呼吸节律与基线相比均出现显著变化，但均在正常范围。IVNI后TCD检查发现基底动脉血流速度减慢，但未发现神经功能缺损和意识程度改变。结论 经椎动脉灌冲常温生理盐水安全可行，有望成为后循环缺血性脑卒中患者超早期神经保护的新方法。

姜黄素类似物是一类以天然多酚类物质的姜黄素为基础而合成的化学小分子,因其具有抗炎、抗肿瘤以及抗病毒等功效而广泛受到关注。5-双(2-氟苯基)亚甲基-4-哌啶酮(分子式:C_(19)H_(15)F_2NO;分子量:311;缩写为EF-24)是一https://www.selleck.cn/products/XL184.html种姜黄素类似物,已鉴定发现其具有多样化的药理功能。在此基础上,本课题继续研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖作用以及抗鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)的复制。乳腺癌已成为全球女性肿瘤死亡的主要因素,目前已超肺癌成为世界第一大癌症,其治疗手段多样但效果不佳,开发更多具有肿瘤细胞抑KD025制效应和影响肿瘤发生的化合物成为关注热点。因此,本研究首先通过MTT、细胞划痕以及transwell实验发现EF-24(5μM)对两株乳腺癌细胞(MCF-7和MDA-MB-231)均具有抗增殖和抗迁移活性。进一步通过吖啶橙染色检测到自噬小泡,透射电镜观察到自噬小体的双膜或多膜结构。同时,利用Western blot检测到自噬关键蛋白LC3和p62的上调表达。免疫荧光实验还发现EF-24能通过阻断自噬体与溶酶体的融合来抑制MCF-7细胞中自噬小体的降解。相反在MDA-MB-231细胞中,EF-24可以诱导自噬的启动,而不是阻止自噬小体的降解。为深入研究EF-24抗乳腺癌细胞增殖的分子机制,通过Hoechst染色、流式细胞术和Western blot实验发现,EF-24(5μM)诱导了MCF-7和MDA-MB-231细胞的凋亡。自噬抑制剂3-MA能进一步增强EF-24诱HIV unexposed infected导的MCF-7细胞凋亡,而在MDA-MB-231细胞中,3-MA却缓解了EF-24诱导的细胞凋亡。此外,EF-24处理上调了MDA-MB-231细胞中Caspase-3和Caspase-9的酶活性,并诱导ROS积累,下调线粒体膜电位。这些结果证实EF-24激活了MDA-MB-231细胞线粒体凋亡途径。此外,进一步研究了EF-24抗病毒效应,本文以SCRV为研究对象,首先通过CPE观察、病毒滴度测定、RT-q PCR和Western blot实验发现EF-24与SCRV共孵育对子代病毒的抑制效果最佳。此外,流式细胞术实验发现EF-24能有效减少SCRV诱导的EPC细胞凋亡信号。进一步酶活检测发现,EF-24处理能够下调SCRV感染激起的Caspase-3和Caspase-9酶活性,初步证实EF-24通过影响线粒体凋亡途径达到抗SCRV的作用。综上,当前的研究证实了EF-24(5μM)具有抗乳腺癌细胞增殖和抗SCRV病毒复制的作用。为该化合物潜在的体内抗癌活性和抗病毒药物的开发提供了坚实的基础。

免疫检查点抑制剂的应用是癌症免疫疗法的热点之一,免疫检查点受体和配体的相互作用可以影响免疫系统的激活和抑制,而抗体药物的临床成功证明,阻断抑制性免疫检查点通路对于癌症免疫治疗是一种有前途的策略。B和T淋巴细胞弱化因子(BTLA)是JQ1化学结构一种类似于细胞毒性淋巴细胞抗4(CTLA-4)和程序性死亡受体1(PD-1)的抑制性受体,BTLA蛋白通过与其唯一配体疱疹病毒进入介质(HVEM)结合来调控T细胞的活化,而癌细胞通常过表达HVEM蛋白实现免疫逃逸现象。这一特征使其具备作为新型免疫疗法的靶标的潜力。在这里,我们利用噬菌体展示技术筛选出了四条多肽后,通过表面等离子体共振(SPR)测定多肽与HVEM间的结合,并用竞争性酶联免疫吸附试验(ELISA)测试了多肽抑制BTLA/HVEM复合物形成的能力。其中多肽P1(其序列为GCTCPRGWVCLAREPC)效果最佳。进一步对P1进行研究,发现P1的线性、P1-c_((1-3,2-4))和P1-c_((1-4,2-3))三种构型与HVEM均具有较高的结合亲和力,均能有效干扰BTLA/HVEM间相互作MK-4827 IC50用,其中P1-c_((1-4,2-3))与HVEM间亲和解离常数最低为1.46×10~(-7)M,但在竞争性抑制方面,P1-l更占据优势,在相同实验条件下,P1-l半抑制浓度为P1-c_((1-4,2-3))的1/5,我们认为线性多肽上游离的半胱氨酸对多肽与HVEM结合存在促进作用。P1对于人外周血单核细胞(PBMC)没有细胞毒性,同时不存在溶血性。此外,P1的三种构型均能够解除HVEM蛋bone biopsy白带来的免疫抑制现象,刺激PBMC的增殖和活化。综上,P1能够通过阻断BTLA/HVEM相互作用表现出解除免疫抑制的能力,释放免疫系统的功能,P1可作为癌症的免疫治疗的潜在药物前体。

解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)是一种公认安全的非常规酵母。由于具有独特的生理特征,目前已被广泛的用于细胞工厂的构建。在解脂耶氏酵母的代谢工程中,筛选标记基因是遗传转化载体所必备的基本元件,构建细胞工厂需要筛选标记来选择具有所需基因修饰的细胞。此外,对代谢途径中的关键基因进行精确修饰也是至关重要的。然而由于解脂耶氏酵母中可用的筛选标记数量少,使得对解脂耶氏酵母的迭代遗传修饰受限于筛选标记的数量。虽然簇状有规律间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)基因编辑系统由于具备准确、高效的特性,已被广泛的应用于各个物种,但是在解脂耶氏酵母中进行基因编辑时,依然存在Cas9编辑效率低、解脂耶氏酵母同源重组能力差等问题,导致对基因组的精准改造效率较低。因此开发解脂耶氏酵母的筛选标记,以及在解脂耶氏酵母中构建高效的CRISPR基因编辑系统,对实现其迭代基因编辑,构建高效的细胞工厂具有重要意义。本论文首先通过测试不同类型的显性筛选标记以及相应的抗生素等药物的抑制浓度,确定了四种可应用于解脂耶氏酵母的筛选标记。我们首先开发了一种显性筛选标记dsdA,该基因编码D-丝氨酸脱氨酶,可赋予解脂耶氏酵母利用D-丝氨酸作为唯一氮源的能力。另外,我们进一步分析了四个在解脂耶获悉更多氏酵母中不常用的抗性筛选标记及筛选条件,包括发现bleoR(博来霉素抗性基因),kanMX(G418抗性基因)以及guaB(霉酚酸抗性基因)的表达,可以使酵母获得对于相应药物的抗性,但铜离子抗性基因CRF1的表达没有使酵母获得相应的抗性。因此我们成功获得了四种显性筛选标记。其次,我们对CRISPR/Cas9系统的各个元件进行了优化,以实现在解脂耶氏酵母中高效的基因编辑。首先通过非同源末端连接介导的基因敲除来测试Cas9的切割效率。研究发现利用启动子SCR1p-tRNA表达sgRNA,Cas9的基因敲除效率比利用TEFin启动子高37.5%,另外,Cas9整合到基因组YAL11_E15321g位置时,比游离质粒表达Cas9的敲除效率高22.5%。通过Cas9的基因组整合和sgRNA的启动子优化,显著提高了 Cas9的编辑效率,达到92.5%。除此之外,我们利用内源的tRNAGly加工机制,通过串联tRNAGly-sgRNA的方式,构建了双重靶向的基因编辑系统,实现同时敲除TRP1、URA3的效率达到57.5%。在优化切割效率的基础上,为了在解脂耶氏酵母中利用CRISPR实现高效的定点整合,我们对解脂耶氏酵母的DNA内源修复机制进行改造来增强同源重组能力。但是过表达同源重组相关基因RAD52、SAE2并未提高整合效率,通过敲除非同源末端连接关键基因KU70提高了定点整合效率,达到92.5%。然而研究发现,在KU70缺失的基础上,将野生型Cas9利用游离质粒表达其定点整合的效率比整合在基因组上低45%。为进一步提高利用游离质粒表达CRoxadustat IC50as9时的定点整合效率,我们在Cas9中引入D147Y和P411T双点pulmonary medicine突变,使定点整合效率在不敲除KU70的菌株中提高至75%,比野生型Cas9提高了 32.5%,而KU70的敲除并未进一步提高整合效率。本文开发的筛选标记将有助于扩充解脂耶氏酵母的遗传工具库,有利于对解脂耶氏酵母的遗传操作。另外,本研究在解脂耶氏酵母中,通过基因编辑元件及酵母重组系统的改造,构建CRISPR基因编辑系统,实现了高效的基因敲除和定点整合。研究结果对于促进解脂耶氏酵母菌株的工程改造,构建高效的细胞工厂,生产各种各样的化学品具有较好的促进意义。

近些年,由于人们生活水平的不断提高,肥胖和长期高脂饮食(High-fatdiet,HFD)日益增多。肥胖和HFD导致血液游离饱和脂肪酸(Saturated fatty acid,SFA)含量升高,而机体白色脂肪细胞数目有限,当包括SFA在内的脂质含量超过脂肪组织贮存能力和组织氧化利用能力时,游离SFA在血液中不断累积增多,继而进入并沉积于非脂肪细胞,引起这些组织细胞损伤,最终导致靶器官功能障碍。这种由于脂质的积累导致的细胞内稳态失调就是脂毒性(Lipid toxicity)。脂毒性主要影响肝脏、骨骼肌和胰岛β细胞,通过引起代谢障碍、炎症和氧化应激和内质网应激途径的激活,并可引发细胞死亡。这些改变会引起Ⅱ型糖尿病、心脏病和脂肪肝等疾病。越来越多的研究表明,脂毒性对神经元具有同样的危害,导致糖尿病脑病、阿尔茨海默病和抑郁症等疾病的发生。目前,针对脂毒性的危害,仍然是尚待解决的临床问题。未分级肝素(Unfractionatedheparin,UFH)是由O-硫酸化糖醛酸(α-L-艾杜糖醛酸或β-D-葡萄糖醛酸)和α-D-氨基葡萄糖(N-硫酸化,O-硫酸化或N-乙酰化)交替连接形成聚合物,由不同分子量的糖链组成的混合物。UFH具有抗凝、抗炎、抗铁调素和糖萼保护等多种生物学作用。由于其极性强、分子量大和带大量负电荷,所以不能通过血脑屏障。超顺磁氧化铁纳米颗粒(Superparamagnetic iron oxide nanoparticles,SPIONs)具有独特的物理化学性质,在各领域被广泛应用。裸露的SPIONs存在半衰期短、稳定性差的缺点,因此需要对其进行修饰。本课题组前期研制了肝素修饰超顺磁氧化铁纳米颗粒(Unfractionated heparin modified superparamagnetic iron oxide nanoparticles,UFH-SPIONs),是以UFH为表面修饰剂通过静电作用对SPIONs进行修饰所获得的纳米体系,发现UFH-SPION粒径均一、稳定性好,无细胞毒性,具有类酶活性,能跨过癫痫动物大鼠血脑屏障、通过抗炎、抗氧化应激和抑制神经元凋亡机制发挥治疗大鼠颞叶癫痫的作用。SFA对神经元的脂毒性也同样存在炎症、氧化应激和神经元凋亡机制,因此我们猜测UFH-SPIONs或可以拮抗SFA所导致的神经元脂毒性。本课题以棕榈酸(Palmitic acid,PA)为SFA的代表,利用其作用于神经元细胞建立神经元脂毒性模型,从神经元能量代谢障碍、氧化应激及神经元活性三个方面探讨UFH-SPIONs抑制棕榈酸致神经元脂毒性的可能性,为研发拮抗SFA神经元脂毒性的新药奠定基础。研究主要内容及结果如下:1.UFH-SPIONs的制备、表征及细胞毒性的研究1.1 UFH-SPIONs 的制备本实验采用化学共沉淀法制备SPIONs和UFH-SPIONs。1.2 UFH-SPION中总铁离子含量测定采用邻菲啰啉分光光度法测量SPIONs和UFH-SPIONs的总铁离子浓度。SPIONs的总铁离子浓度为28 μg/mL。UFH-SPIONs的总铁离子浓度在100～160 μg/mL之间。1.3 UFH-SPIONs 中 UFH 含量测定采用甲苯胺蓝法测定了 UFH-SPIONs的UFH浓度。UFH-SPIONs的UFH浓度在110 μg/mL 左右。1.4 UFH-SPIONs聚集状态测定采用透射电镜(Transmission electron microscope,TEM)检测,SPIONs 聚集明显,呈多颗粒团簇状态,而UFH修饰后的SPIONs呈分散状态,表明UFH-SPIONs稳定性好、分散性良好。1.5 UFH-SPIONs水动力学直径、多分散系数及Zeta电位测定采用动态光散射法(Dynamic light scattering,DLS)检测 SPIONs 和 UFH-SPIONs 的水动力学直径、多分散系数(Polymerdispersity index,PDI)和 Zeta 电位。UFH-SPIONs的水动力学直径和PDI均小于SPIONs;Zeta电位的绝对值显著高于SPIONs,表明UFH-SPIONs粒径均一、稳定性更好。1.6 UFH-SPIONs红外光谱表征采用傅里叶变换红外光谱仪(Fourier transform Infrared spectrometer,FT-IR)对SPIONs和UFH-SPIONs在波长2000～600 cm-1范围进行扫描并记录红外光谱图,表明UFH与SPIONs成功结合。1.7 UFH-SPIONs对神经元细胞毒性研究采用CCK-8法检测了 UFH和UFH-SPIONs对小鼠海马神经元细胞的影响,结果显示,50 μg/mL和100 μg/mL UFH均对小鼠海马神经元细胞增殖有抑制作用(P<0.01),细胞活性分别为68.24%和52.59%;而50 μg/mL和100 μg/mLUFH-SPIONs对小鼠海马神经元细胞增殖有促进作用(P<0.01),细胞活性分别为124.92%和119.74%。2.UFH-SPIONs对棕榈酸致神经元能量代谢障碍的影响2.1脂滴的检测利用棕榈酸建立小鼠海马神经元HT22细胞脂毒性细胞模型,利用油红O染色剂对脂质染色。结果显示,模型组细胞状态差,形态呈三角或不规则型,膜仁边界不清晰,细胞内有大量脂质沉积;与模型组相比,UFH-SPIONs组细胞状态良好,形态规则且细胞内只有极少数脂质沉积;UFH组细胞状态良好,形态规则,但细胞中有大量脂质沉积。2.2神经元膜流动性利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,采用NBD-C6-HPC细胞膜染液标记细胞膜,利用荧光漂白技术,检测小鼠海马神经元细胞膜流动性。结果显示,与对照组相比,模型组小鼠海马神经元细胞的膜流动性显著下降(P<0.01);与模型组相比,UFH-SPIONs组小鼠海马神经元细胞的膜流动性有显著提高(P<0.01),UFH组对棕榈酸引起的小鼠海马神经元细胞膜流动性下降没有显著的影响(P>0.05)。2.3神经元葡萄糖摄取的研究利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,采用2-NBDG作为葡萄糖摄取示踪剂。结果显示,与对照组相比,模型组小鼠海马神经元细胞葡萄糖摄取显著下降(P<0.01);与模型组相比,UFH-SPIONs组和UFH组小鼠海马神经元细胞葡萄糖摄取明显升高(P<0.0.1);UFH-SPIONs组与UFH组相比,前者促进葡萄糖摄取作用更强(P<0.01)。2.4神经元内ATP含量的测定利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,采用酶联免疫吸附实验法检测ATP含量。与对照组相比,模型组小鼠海马神经元产生的ATP含量显著下降(P<0.01);与模型组相比,UFH-SPIONs组与UFH组小鼠海马神经元产生ATP显著升高(P<0.01);UFH-SPIONs组与UFH组相比,前者保护神经元能量代谢系统作用更显著(P<0.05)。3.UFH-SPIONs对棕榈酸致神经元氧化应激的影响3.1 P-JNK/NADH脱氢酶氧化应激通路的研究利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,利用酶联免疫吸附实验法检测磷酸化c-JNK氨基末端激酶(P-JUN N-terminal kinase,P-JNK)、NADH脱氢酶含量,采用DCfolk medicineFH-DA荧光探针标记活性氧(Reactive oxygen species,ROS),检测细胞内荧光强度。结果显示,与对照组相比,模型组小鼠海马神经元细胞P-JNK含量、胞内ROS荧光强度均显著升高(P<0.01),同时NADH脱氢酶含量显著下降(P<0.01);与模型组相比,UFH-SPIONs组和UFH组小鼠海马神经元细胞P-JNK含量(分别为P<0.01、P<0.05)和胞内ROS荧光强度均显著降低(分别为P<0.01、P<0.05),同时,NADH脱氢酶显著升高(分别为P<0.01、P<0.05)。结果表明,UFH-SPIONs通过调控P-JNK/NADH脱氢酶通路抑制氧化应激水平。3.2 UFH-SPIONs对氧化还原酶保护作用的研究利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,利用ELISA检测超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮合酶(Nitric oxide synthetase one,NOS1)和过氧化物酶(Peroxidase,Pselleck HPLCOD)。结果显示,与对照组相比,模型组小鼠海马神经元细胞中SOD酶和POD酶含量均下降(P<0.01),同时NOS1酶含量升高(P<0.01);与模型组相比,UFH-SPIONs组与UFH组的SOD酶(P<0.01和P<0.05)和POD酶含量明显升高(P<0.01),NOS1酶含量也明显下降(P<0.01)。这表明UFH-SPIONs对小鼠海马神经元细胞的抗氧化酶具有保护作用,具有抗氧化应激作用。4.UFH-SPIONs对棕榈酸致神经元凋亡的影响利用棕榈酸建立小鼠海马神经元脂毒性细胞模型,利用CCK-8法检测UFH-SPIONs和UFH对脂毒性小鼠海马神经元细胞活性的影响,采用酶联免疫吸附实验法检测细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C),采用Fluo-4荧光探针标记胞内钙离子,采用JC-1荧光探针检测细胞内线粒体膜电位。结果显示,棕榈酸对小鼠海马神经元细胞有细胞毒性(P<0.01);棕榈酸作用于HT22细胞还引起细胞内钙离子含量、Cyt-C含量均显著升高(P<0.01);与对照组(383.81%)相比,JC-1聚合物/单体荧光强度比值(14.68%)显著降低(P<0.01),线粒体主要呈绿色荧光,表现出非常低的线粒体膜电位。UFH-SPIONs对棕榈酸致小鼠海马神经元细胞毒性有显著的抑制作用,并显示出显著的促进HT22细胞增殖的作用(P<0.01);与模型组相比,UFH-SAG-221价格PIONs组细胞内钙离子含量、Cyt-C含量均显著降低(P<0.01);UFH-SPIONs可以使棕榈酸引起的下降的线粒体膜电位明显升高,JC-1聚合物/单体荧光强度比值显著升高(184.67%,P<0.01)。UFH组对棕榈酸致小鼠海马神经元细胞毒性没有保护作用,显示出对神经元增殖的进一步抑制作用(P<0.01),与模型组相比,UFH组细胞内钙离子含量、Cyt-C含量显著降低(P<0.01);UFH对棕榈酸引起的下降的线粒体膜电位有显著恢复作用,JC-1聚合物/单体荧光强度比值显著升高(69.74%,P<0.01)。总之,本课题采用化学共沉淀法制备了粒径均一、稳定性好且无神经元细胞毒性的UFH-SPIONs,并证实UFH-SPIONs可以通过调节能量代谢障碍、氧化应激和细胞活性三条通路,发挥拮抗棕榈酸所引起的这些神经元脂毒性作用。这表明,UFH-SPIONs对存在神经元脂毒性损伤的疾病,如糖尿病脑病、早老性痴呆方面的潜在应用值得深入研究。

目的:Fulvestrant说明书探讨鼻罩式无创通气治疗婴幼儿重症社区获得性肺炎失败的危险因素,进一步评估PELOD-2评分、PRISMMCC950体内实验剂量 III评分和改良PIRO量表对无创通气失败的预测价值。研究方法:本研究是在儿科重症监护病房进行的一项回顾性研究。收集2017年1月至2021年12月期间,患有重症社区获得性肺炎并接受鼻罩式无创通气治疗婴幼儿的综合性数据。根据无创通气结局是否为气管插管,分为无创通气成功组和无创通气失败组。ROX指数是Sp O_2/Fi O_2与呼吸频率的比值。ΔROX指数为实际ROX指数与校正呼吸频率ROX指数的差值。应用二元logistic回归模型分析临床资料与无创通气结局的相关性,利用受试者工作特征曲线衡量PELOD-2评分、PRISM III评分和改良PIRO量表对气管插管的预测价值。结果:共纳入168名婴幼儿,鼻罩式无创通气的失败率为47.0%。经二元logistic回归模型分析,神经肌肉疾病史(OR=6.47,95%CI:1.06-39.56)、丙氨酸转氨酶升高倍数(2.25,1.15-4.39)、ΔROX指数<-0.41(2.20,1.06-4.55)、无创通气前时长(0.97,0.94-0.99)、无创通气初始氧浓度(1.05,1.02-1.09)与无创通气失败独立相关(P值均小于0.05)。PRISM III评分(AUC=0.588,P=0.049)和改良PIRO量表(AUC=0.615,P=0.010)可用于预测无创通气失败,最佳截断值均为3分。无创通气失败组中,19.0%的气管插管发生于入院72小时后,其不良临床结局的比例较早期插Knee biomechanics管(入院72小时内)明显升高(76.6%vs 40.0%,P=0.011)。结论:神经肌肉病史、ΔROX指数降低、ALT水平升高,以及需要更早使用无创通气和需要高水平的初始氧浓度是鼻罩式无创通气失败的危险因素。PRISM III评分和改良PIRO量表可用于预测无创通气治疗时的气管插管。

目的 探讨聚多巴胺(PDA)并木犀草素(LUT)通过光热治疗对细胞毒性淋巴细胞(CTL)肿瘤杀伤作用的影响。方法 通过扫描电子显微镜(SEM)和接触角测定仪观察和测定合成PDA的表征。将RAW264.7细胞分为Control组、LPS组(2μg/L)、PDA′组(50 000μg/L),常规培养48 h,采用CCK8实验检测细胞活力，通过流式细胞术检测LUT对RAW264.7细胞分化的影响。将雌性C57BL/6小鼠随机分为模型组、PDA组、LUT组以及PDA+LUT组，各组小鼠的后背部均皮下注射B16F10黑色素瘤细胞，建模后第10天在PDA组和PDA+LUT组建模小鼠肿瘤处注射PDA行光热治疗1次后，对建模小鼠右大腿肌肉分别注射PBS、PDA(2.5μg/只)、LUT(500μg/只)、PDA(2.5μg/只)+LUT(500μg/只),观察建模小鼠肿瘤生长以及存活情况。在治疗后第3、7天，取各组建模小鼠脾脏制备单细胞悬液，采用流式细胞术检测小鼠体内巨噬细胞分化和T细胞表达情况。结果SEM观察到合成的PDA具有较强的吸附能力和亲水性，并且CCK8实验检测结果显示PDA对细胞活力无影响(P>0.05)。各组RAW264.7细胞的CD206和iNOS平均荧光强度差异有显著性(F=30.72、1 516.00,P<0.HIV phylogenetics05)。注射或不注射PDA时，则注射或不注射LUT小Nirogacestat体外鼠的肿瘤大小和体内免疫细胞iNOS、CD206、IFN-γ~+CD4~+、TNF-α~+CD8~+表达水平比较差异均有显著性(F=23.10～235.52,P<0.05);注射或不注射LUT时，则注射或不注射SB203580作用PDA小鼠的肿瘤大小和体内免疫细胞iNOS、CD206、CD4~+IFN-γ~+、CD8~+TNF-α~+表达水平比较差异均有显著性(F=8.98～200.67,P<0.05);建模小鼠中PDA+LUT组存活率与其他组相比显著提高(χ~2=9.70,P<0.01)。结论 LUT具有抑制小鼠巨噬细胞向M2分化并促进其向M1分化的作用，PDA并LUT治疗可以有效抑制小鼠肿瘤生长，提高生存率，增强CTL的肿瘤杀伤作用。

玉米穗腐病是玉米高发病害之一,严重影响玉米收获产量,而轮枝镰孢菌(Fusarium verticillioides)是玉米穗腐病的重要致病菌。对拟轮枝镰孢菌基因功能进行研究,能为控制玉米穗腐病提供有效帮助,而Crz1PLX5622溶解度对真菌的生长、代谢调控和产毒等方面都有一定的调控能力。Crz1在酿酒酵母和植物病原真菌中已有广泛研究,但在轮枝镰孢菌中的功能尚未明确。所以在轮枝镰孢菌中找到Crz1的同源基因,研究它的功能对轮枝镰孢菌的致病机制是具有很大意义的。本研究找出Crz1同源基因FvCrz1per-contact infectivityB,获得突购买Fulvestrant变体ΔFvCrz1B,观察真菌的生长速率、菌丝的生长、细胞稳态等,发现ΔFvCrz1B生长速率、菌丝长度低于WT。突变体ΔFvCrz1B能产生分生孢子,对Ca~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)和Li~+等金属阳离子有一定敏感性,在玉米上接种,致病力小于WT。ΔFvCrz1B对伏马毒素产量有一定抑制作用。

目的 成瘾潜能是限制阿片类镇痛药临床应用的重要因素。痛敏素受体/μ阿片受体双功能激动剂d_2-BU08028为具有自主知识产权的镇痛候选新药。具有与人类高度同源性的非人灵长类动物是目前研究药物成瘾最为理想的建模动物。本研究建立恒河猴吗啡静脉自身给药模型并研究d_2-BU08028的正性强化效应，为镇痛新药研发提供依据。方法 4只恒河猴股静脉置管，给予吗啡0.1 mg·kg~(-1)于FR1至FR10下训练，每天训练4 h。待动物在FR10下吗啡自身给药行为稳定后，首先采用生理盐水进行替代测试，动物稳定区分生理盐水和吗啡后，采用正交设计分别给予丁丙诺啡（1,10和30μg·kg~(-1)）、BU08028(0.3,3和30μg·kg~(-1))及d_2-BU08028(0.3,3和30μg·kg~(-1))进行替代测试，记录给药次数、有效及无效踏板次数。结果 吗啡训练后可形成稳定的自身给药行为，selleckchem生理盐水替代后，动物的给药次数由（13.10±0.98SBE-β-CD细胞培养）下降至（4.36±1.37），提示实验体系建立成功。丁丙诺啡各剂量组替代后动物的给药次数、有效踏板次数均呈倒U形曲线，与替代前吗啡相比无统计学差异。BU08028和d_2-BU08028各剂量组替代后动物的给药次数及tetrapyrrole biosynthesis有效踏板次数与替代前吗啡相比均显著降低，与生理盐水替代相比无差异。全部测试期间动物无效踏板次数低于5。结论 丁丙诺啡与吗啡类似，具有正性强化效应，而d_2-BU08028不具有正性强化效应，提示成瘾潜能较低，研发前景较好。

目的 观察养阴安神方联合艾司唑仑片治疗老年肝肾阴虚型失眠的临床疗效。方法 将60例老年肝肾阴虚失眠患者按照随机数字表法分为2组，对照组30例予艾司唑仑片治疗，治疗组30例在对照组的基础上联Triterpenoids biosynthesis合养阴安神方治疗。2组均治疗4周后统计疗效，比较2组治疗前后中医症状评分、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)(包括睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠障碍、日间功能障碍及催眠药物)评分及血清白细胞介素6(IL-6)水平变化情况。结果 治疗组总有效率90.00%(27/30),对照组总有效率70.00%(21/30),治疗组总有效率高于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较，2组治疗后中医症状评分均降低(P<0.05),且治疗组治疗后中医症状评分低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较，2组治疗后PSQI睡眠质量、入睡时间、睡眠时间、睡眠效率、睡眠Trichostatin A临床试验障碍、日间功能障碍及催眠药物评分及总分均降低(P<0.05),且治疗组治疗后PSQI各项评分及总分低于对照组(P<0.05)。与本组治疗前比较，2组治疗后血清IL-6水平均降低(P<0.05),且治疗组治疗后血清IL-6水平低于对照组(P<0.05)。结论 养阴安神方联合艾司唑仑片治疗老年肝肾阴虚型失眠临床疗效确切，可有效改善患者中医症状，提高睡眠质量，寻找更多降低血清IL-6水平，安全可靠。