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目的 为明确我国畜禽源单核细胞增生李斯特菌（单增李斯特菌）的流行特性，本文通过荟萃（MeJNJ-42756493ta）分析对我国畜禽源食品单增李斯特菌污染与流行情况进行了系统回顾，以期为我国畜禽肉生产过程中单增李斯特菌的防控提供参考依据。方法 首先在PubMed、Web of Science、万方数据库、中国知网等数据平台通过输入关键检索词检索2001—2022年发表的有关我国畜禽食品中单增李斯特菌检出率的文献，之后利用Stata软件对文献数据进行Meta分析。结果 共纳入中、英文研究文献277篇，总样本数据为110 066例，单增李斯特菌的合并检出率为7.2%(95%CI:6.4%～8.0%)。不同区域的亚组分析发现，吉林和黑龙江等地的non-medicine therapy检出率高于其他地区；不同时间的亚组分析发现单增李斯特菌的检出率随着时间的推移而降低。熟肉食品中Baf-A1生产商单增李斯特菌的检出率（2.9%,95%CI:2.4%～3.5%）远低于生肉（10.7%,95%CI:9.5%～12.0%）；生肉中鸡肉的检出率为11.0%(95%CI:8.3%～14.0%)与猪肉的检出率10.9%(95%CI:7.9%～14.2%)略高于其他种类的生肉。结论 我国畜禽源食品单增李斯特菌检出率依然处于比较高的水平。

目的 为明确我国畜禽源单核细胞增生李斯特菌（单增李斯特菌）的流行特性，本文通过荟萃（MeJNJ-42756493ta）分析对我国畜禽源食品单增李斯特菌污染与流行情况进行了系统回顾，以期为我国畜禽肉生产过程中单增李斯特菌的防控提供参考依据。方法 首先在PubMed、Web of Science、万方数据库、中国知网等数据平台通过输入关键检索词检索2001—2022年发表的有关我国畜禽食品中单增李斯特菌检出率的文献，之后利用Stata软件对文献数据进行Meta分析。结果 共纳入中、英文研究文献277篇，总样本数据为110 066例，单增李斯特菌的合并检出率为7.2%(95%CI:6.4%～8.0%)。不同区域的亚组分析发现，吉林和黑龙江等地的non-medicine therapy检出率高于其他地区；不同时间的亚组分析发现单增李斯特菌的检出率随着时间的推移而降低。熟肉食品中Baf-A1生产商单增李斯特菌的检出率（2.9%,95%CI:2.4%～3.5%）远低于生肉（10.7%,95%CI:9.5%～12.0%）；生肉中鸡肉的检出率为11.0%(95%CI:8.3%～14.0%)与猪肉的检出率10.9%(95%CI:7.9%～14.2%)略高于其他种类的生肉。结论 我国畜禽源食品单增李斯特菌检出率依然处于比较高的水平。

目的 探讨阿司匹林治疗高龄心脑血管病的临床疗效及安全性评价。方法 将2021年1月-2021年12月在本院心内科及神经内科治疗的114例高龄心脑血管病患者随机分为两组，每组57例。对照Alpelisib作用组使用常规药物治疗，观察组加用阿司匹林治疗，对比两组的血栓性事件、凝血指标、血小板指标、不良反应。结果观察组急性心肌梗死、急性脑梗死、无症状脑梗死、短暂性脑缺血发作、心绞痛等血栓性事件发生率明显低于对照组（P<0.05），两组血管性死亡发生率相当（P>0.05）；观察组治疗后PT、APTT、TT与对照组相当（P>0.05），观察组Fadult-onset immunodeficiencyIB、PLT低于对照组（P<0.05）；观察组治疗后血小板聚集率中ADP诱导、AA诱导均低于对照组，治疗前后差值高于对照组（P<0.05）；观察组牙龈出血、皮下出血、消化道出血、血尿、上腹不适、血糖降低、头晕头痛等不良反应发生率稍高于对照组（P>0.05）。结论 阿司匹林治疗高龄心D-Lin-MC3-DMA脑血管病的疗效显著，能有效抗血小板聚集，降低血栓形成风险，减少血栓性事件，且对凝血功能影响小、不良反应发生率低，具有较好的安全性。

研究目的:非酒精性脂肪肝病(Nonalcoholic fatty liverCL13900配制 disease,NAFLD)是以肝细胞内脂肪过度沉积为主要特征的临床病理综合征,脂质代谢紊乱被认为是发病的主要因素之一。脂联素在运动改善肝脏代谢紊乱中发挥重要作用。但其作用机制尚未完全清楚。最新研究显示,miR-130b-5p在NAFLD小鼠肝脏中过表达,并可以促进肝脏脂质积累。生物信息学分析也显示,miR-130b-5p可以靶向脂联素的重要下游因子PPARα。但尚未发现脂联素与miR-130b-5p的关系研究,运动与miR-130b-5p的研究也未见报道。基于此,本研究目的:1.验证并探寻脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号通路在脂质代谢中的作用及可能机制。2.探索脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号途径在运动改善NAFLD中的作用和机制。研究方法:离体部分:用miR-363-3p的模拟物处理AML12肝实质细胞,并收集处理后的细胞;通过计算机生物信息学软件预测miR-130b-5p和PPARα的结合序列,构建野生型和突变型PPARα的重组质粒后,在293T细胞中进行双荧光素酶报告基因实验。在体部分:10只C57BL/6背景12周龄的雄性脂联素敲除(Adipoq-/-)小鼠及其同窝野生型(WT)小鼠分别随机分为:野生对照(WT+Vehicle,n=5)组、野生运动(WT+EXE,n=5)组、敲除对照(Adipoq-/-+Vehicle,n=5)组和敲除运动(Adipoq-/-+EXE,n=5)组。40只C57BL/6雄性小鼠在标准的实验动物房适应性饲养一周后,随机分为两组,分别接受标准饲料和高脂饲料(HFD)喂养。8只小鼠进食标准饲料(ND,NC组,n=8),32只小鼠进食高脂饲料(HFD,n=32)。经过10周喂养后再将HFD组小鼠再被随机分成4组:高脂对照(HFselleck NSC 119875D+Vehicle,n=8)组、高脂运动干预(HFD+EXE+Vehicle,n=8)组、高脂脂联素干预(HFD+Acrp30,n=8)组、高脂运动脂联素干预(HFD+EXE+Acrp30,n=8)组。Adipoq-/-、WT和HFD的运动组进行8周的跑台运动,并且HFD的4组在训练最后一周接受为期一周的腹腔注射重组脂联素(Acrp30,i.p.28g/kg-1day-1)或相应赋形剂(i.p.0.9%氯化钠[生理盐水]注射液,0.5ml/day)干预。跑台运动的具体方案为:2天的适应性训练后,小鼠以20m/min、60min/d的运动负荷,每周训练6天,休息1天,共训练8周。所有干预结束后,禁食12小时,使用血糖监测系统从尾静脉测量血糖。并在最后一次运动后36-48小时收集血浆和肝脏组织。之后通过HE染色观察小鼠肝脏形态学变化;用ELISA法测定肝功转氨酶、血脂指标、肝匀浆FFA、TG和血清脂联素的含量;制样后通过RT-PCR的方法检测小鼠肝组织中miR-130b-5p和脂质代谢相关指标的基因表达水平。研究结果:1.在AML12细胞中过表达miR-130b-5p后,PPARα的mRNA和蛋白表达均显著下降(P均<0.01)。荧光素酶报告基因结果分析表明,与突变型3'-UTR(MUT PPARα 3'-UTR)相比,miR-130b-5p模拟物可以抑制具有野生型PPARα3'-UTR(WT PPARα 3'-UTR)的荧光素酶活性(P<0.01)2.WT、Adipoq-/-小鼠分别进行8周跑台运动。结果显示,与WT组相比,Adipoq-/-组小鼠肝脏的miR-130b-5p的表达显著升高(P<0.01),PPARA、CPT1A、ACOX1和FABP1的mRNA表达明显下降(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.01);与WT组相比,WT+EXE组小鼠肝脏的miR-130b-5p的表达显著降低(P<0.05),PPARA、CPT1A、ACOX1、FABP1和CD36的mRNA表达显著升高(P<0.05,P<0.01,P<0.05,P<0.01,P<0.01),SREBP1和FASN的mRNA表达显著下降(P均<0.01);与Adipoq-/-相比,Adipoq-/-+EXE组小鼠肝脏的PPARA、CPT1A、ACOX1、FABP1和CD36的mRNA表达显著上升(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05),FASN的mRNA表达显著下降(P<0.01);与WT+EXE组相比,Adipoq-/-+EXE组小鼠肝脏的miR-130b-5p的表达显著升高(P<0.01),PPARA、CPT1A、ACOX1和CD36的mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05,P<0.05,P<0.05)。3.18周HFD喂养构建NAFLD小鼠模型,并同时进行脂联素、运动以及脂联素运动联合干预。结果显示:NC组小鼠的肝脏形态正常,表面abiotic stress呈光泽的红褐色,质地柔韧;HFD+Vehicle组小鼠的肝脏体积、重量明显增加,表面呈粗糙的红黄相间色,质地软脆,包膜紧张,切开后有油腻感。HE染色也显示,NC组肝脏正常,没有出现明显的脂肪肝变化;HFD+Vehicle组出现了明显的脂肪变性(细胞体积增大,出现大量脂滴,一些细胞核被挤偏移,出现肝细胞破裂融合的脂肪囊肿。);与NC组相比,HFD+Vehicle组小鼠体重、腹腔脂肪重量、体脂百分率、肝指数和血清ALT、AST(P均<0.01)。血清TG、TC、HDL-C、LDL-C及肝组织的TG、FFA含量均显著升高(P均<0.01)。提示NAFLD造模成功,并出现肝脏脂质代谢紊乱。形态学肝脏观察显示,HFD+Acrp30组肉眼观察体积近似正常组,表面光泽的奶黄色或淡黄色,质地较脆,但韧性好于HFD组;HFD+EXE+Vehicle组和HFD+EXE+Acrp30组小鼠的肝脏形态正常,与正常组几乎没有区别;HE染色显示三个干预组肝脏脂肪变性程度显著降低。与HFD+Vehicle相比,HFD+EXE组、HFD+Acrp30、HFD+EXE+Vehicle组体重、腹腔脂肪重量、体脂百分率、肝指数和血清ALT、AST、血清TG、TC、HDL-C、LDL-C及肝组织的TG、FFA均出现显著下降(P<0.01或P<0.05)。提示三种干预均能显著改善NAFLD和肝脏脂质代谢紊乱。4.基于3的模型下,脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号通路的表达情况:与NC组相比,HFD+Vehicle组小鼠血清脂联素含量显著降低(P<0.01)。肝脏miR-130b-5p水平显著升高(P<0.01),PPARA、CPT1A和ACOX1的mRNA表达显著降低(P均<0.01),FABP1、CD36、SREBP1和FASN的mRNA表达显著升高(P均<0.01)。与HFD+Vehicle组相比,HFD+EXE+Vehicle组小鼠血清脂联素含量显著升高(P<0.01),肝脏miR-130b-5p水平显著降低(P<0.01),PPARA和CPT1A的mRNA表达显著升高(P<0.01,P<0.05),FABP1、CD36、SREBP1和FASN的mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.01,P<0.01,P<0.05)。与HFD+Vehicle组相比,HFD+Acrp30组小鼠血清脂联素含量显著升高(P<0.01),肝脏miR-130b-5p水平显著降低(P<0.01),PPARA A的mRNA表达显著升高(P<0.01),FABP1和CD36的mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05)。与HFD+Vehicle组相比,HFD+EXE+Acrp30组小鼠血清脂联素含量显著升高(P<0.01),肝脏miR-130b-5p水平显著降低(P<0.01),PPARACPT1A和ACOX1的mRNA表达显著升高(P均<0.01),FABP1、CD36、SREBP1和FASN的mRNA表达显著降低(P均<0.01)。与HFD+EXE+Acrp30组相比,HFD+EXE+Vehicle组小鼠肝脏miR-130b-5p显著升高(P<0.01),肝脏PPARA和ACOX1的mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.01);与HFD+EXE+Acrp30组相比,HFD+Acrp30组小鼠肝脏miR-130b-5p显著升高(P<0.01),肝脏CPT1和FABP1的mRNA表达显著降低(P<0.01,P<0.05),CD36、SREBP1和FASN的mRNA表达显著升高(P均<0.05)。提示且联合干预对各个指标的改善效果都要优于单一干预效果。研究结论:1、脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号通路参与调控肝脏脂肪酸β-氧化、脂肪酸摄取和从头脂肪生成。2、运动通过脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号通路调控肝脏脂质代谢。3、长期高脂饮食引起肝脏脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号受损,肝脏脂质代谢异常,可能是诱发非酒精性脂肪肝病的原因之一。4、运动和脂联素干预可能通过改善肝脏脂联素/miR-130b-5p/PPARα信号通路,缓解脂质代谢异常,防治非酒精性脂肪肝病。

研究背景与目的:急性肺损伤(ALI)是一种由多因素引起的临床综合征,通常是由炎症诱发的进行性肺损伤,主要表现为弥漫性肺泡损伤、低氧血症和呼吸窘迫。ALI的死亡率高达30%-40%。ALI的发病机制复杂,目前尚未完全阐明,尽管当前ALI的治疗技术取得了长足进步,但临床除了基础支持治疗外,仍缺乏特效治疗手段和药物,其治疗仍是棘手问题。ALI的发生常伴随着强烈的炎症反应和氧化应激,大量炎性细胞被活化分泌各种炎性介质,破坏了肺泡-毛细血管内皮屏障结构的完整性,同时,诱导肺组织细胞线粒体损伤及功能障碍,导致大量活性氧(ROS)累积。当ROS超过机体抗氧化系统清除能力时,呈现氧化应激状态。研究表明潜在的抗炎和抗氧化途径可被内源性或外源性化合物调节,将为控制急性肺损伤的发生发展提供新的治疗方法。多项研究已明确,铁死亡与炎症和氧化应激MC3引起的疾病的发生发展密切相关。铁死亡是一种新型细胞死亡形式,区别于细胞凋亡和自噬等常见死亡模式,主要以铁依赖性的活性氧(ROS)积累、细胞抗氧化剂失活以及线粒体收缩为特征。研究表明,铁死亡也是ALI发病的重要原因。通过抑制铁死亡可降低炎症反应,从而减轻急性肺组织损伤,有望成为治疗ALI的潜在手段。槲皮素是一种常见的黄酮类化合物,存在于多种水果和蔬菜中,具有广泛的药理作用,传统上被认为是一种有效的抗氧化和抗炎的天然生物活性化合物。目前,槲皮素在动物模型中已被证实可有效缓解急性肺损伤。然而,铁死亡在槲皮素治疗脂多糖诱导急性肺损伤中的作用及机制尚不清楚。因此,本研究通过构建急性肺损伤细胞及动物模型,探讨槲皮素对急性肺损伤的保护效应,并阐明槲皮素通过调控铁死亡进而保护急性肺损伤的分子机制,以期为急性肺损伤的防治提供新的策略。材料与方法:1.槲皮素对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用细胞实验:不同剂量LPS(0、5、10、20μg/ml)处理Ⅱ型肺泡上皮细胞(AT2),构建急性细胞损伤模型。在处理6、12、24h后,通过CCK-8和LDH评价LPS对AT2细胞的损伤作用。为明确槲皮素在急性肺泡上皮细胞损伤中的作用,利用不同浓度的槲皮素(0、5、10、20μM)预处理AT2细胞,在预处理2h后,LPS诱导急性细胞损伤模型,通过CCK-8和LDH释放实验评价细胞受损情况,选取最佳给药浓度,ELISA检测细胞培养上清液中炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的表达水平,利用Ed U实验检测细胞增殖情况,流式细胞术评价细胞死亡情况。动物实验:采用不同浓度槲皮素(0、20、40、60mg/kg)灌胃预处理C57BL/6J小鼠,在槲皮素预处理1h后,气管滴注LPS(5mg/kg)诱导急性肺损伤小鼠模型,通过HE染色、病理评分以及检测肺泡灌洗液中炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的表达水平来评估小鼠肺部炎性浸润情况,通过肺组织湿/干比值评估肺组织水肿情况,通过检测肺泡灌洗液中细胞计数和总蛋白浓度以及肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性评估中性粒细胞浸润程度以及肺泡-毛细血管屏障完整性。2.铁死亡在槲皮素治疗急性肺损伤中的作用研究脂多糖诱导构建急性肺损伤细胞和动物模型,组织水平上检测谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和铁离子的浓度,采用Dihydroethidium(DHE)荧光染色评价槲皮素处理前后各组ROS释放情况,并通过免疫组化检测GPX4和4HNE的表达水平。此外,在细胞水平上,通过检测GSH、MDA和铁离子的表达水平评估铁死亡的发生情况,利用流式细胞术对ROS的累积情况进行检测,并分析槲皮素对GPX4和4HNE的表达影响,通过透射电镜检测细胞线粒体形态变化及其损伤情况。3.槲皮素调控SIRT1/NRF2/GPX4通路抑制铁死亡保护急性肺损伤的机制研究为了进一步探究槲皮素抑制铁死亡的具体机制,在细胞和动物水平,通过western blot检测了SIRT1、NRF2和GPX4的表达水平。槲皮素联合EX527(SIRT1的抑制剂,5mg/kg)预处理小鼠,将C57小鼠分为四组(对照组、LPS组、LPS+槲皮素组、LPS+槲皮素+EX527组)。收集各组肺组织及肺泡灌洗液用于后续实验。通过HE染色、炎性损伤评分以及肺泡灌洗液中总蛋白浓度和细胞数量评估肺组织损伤情况,计算肺湿/干重比评价肺水肿程度,通过试剂盒检测肺组织MPO活性和铁离子浓度,组织免疫荧光检测肺组织中ROS水平,western blot检测铁死亡相关蛋白的表达情况。购买si-SIRT1干扰序列,利用q RT-PCR和western blot实验筛选出最佳干扰序列。通过CCK-8实验和流式细胞术实验评估沉默SIRT1后铁死亡的发生情况,流式细胞术检测ROS水平,试剂盒检测细胞中脂质过氧产物MDA的水平和铁离子浓度,透射电镜检测线粒体损伤情况。结果:1.槲皮素对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用细胞水平上,肺泡上皮细胞经LPS(0、5、10、20μg/ml)处理6、12、24h后,CCK-8和LDH检测显示,LPS处理显著抑制细胞活性,LDH释放增加,且呈一定时间和剂量依赖。据上述实验结果,我们选择了LPS浓度为10μg/ml处理12h构建细胞模型用于后续实验。为了筛选槲皮素的有效浓度,将实验分为以下5组:对照组(生理盐水)、LPS组和LPS+槲皮素组(0、5、10、20μM)。CCK-8和LDH检测结果表明,10μM和20μM槲皮素的保护效果类似且两者间无显著差异,基于这些数据,我们选择浓度为10μM的槲皮素进行后续细胞实验。Ed U细胞增殖实验和流式细胞术检测结果表明槲皮素预处理促进了肺泡上皮细胞的增殖。此外,ELISA检测结果表明槲皮素显著抑制了促炎细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)分泌水平。由此可知,槲皮素能够有效缓解脂多糖诱导的急性肺泡上皮细胞损伤。动物水平,成功构建ALI小鼠模型,在该模型上分别用不同浓度的槲皮素(0、20、40、60mg/kg)预处理。HE染色和肺损伤评分提示,槲皮素可以显著抑制LPS诱导产生的急性肺组织损伤和炎性细胞浸润。肺湿/干重比结果表明槲皮素(40、60mg/kg)有效的缓解了肺组织水肿。相比于LPS组,LPS+槲皮素组肺组织MPO活性明显下降,同时,肺泡灌洗液中细胞数量、总蛋白浓度和炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)的表达水平也显著降低。另外,LPS+槲皮素(40mg/kg)和LPS+槲皮素(60mg/kg)两组比较,无显著差别,因此选择40mg/kg为槲皮素作用的最佳浓度,并用于后续实验。以上实验结果表明,槲皮素能有效改善急性肺损伤小鼠模型的病理损伤。2.铁死亡在槲皮素治疗急性肺损伤中的作用研究分别用LPS和槲皮素干预C57小鼠和AT2细胞,与对照组相比,LPS诱导后小鼠正常肺组织结构丢失,间质充血水肿,肺间隔增厚,肺泡腔中出现炎症细胞和红细胞,肺组织炎性损伤评分也明显升高,而槲皮素治疗则显著改善了上述病理现象。无hospital-acquired infection论是体内体外,槲皮素可明显改善LPS诱导氧化应激相关蛋白水平的变化。与对照组相比,LPS组铁死亡相关指标铁离子浓度、ROS、4HNE和MDA水平显著升高,GSH活性水平及GPX4的表达均明显降低,提示随着铁死亡水平升高,急性肺损伤加重,而槲皮素处理后则明显逆转了上述现象。同时,LPS处理下调小鼠肺组织中SIRT1、NRF2、GPX4蛋白表达,而槲皮素则消除了LPS对SIRT1/NRF2/GPX4信号通路相关蛋白的抑制作用。此外,槲皮素可有效缓解肺泡上皮细胞线粒体的损伤情况。由此可知,急性肺损伤发生过程中伴随着明显的铁死亡,且槲皮素能有效抑制铁死亡的发生。3.槲皮素调控SIRT1/NRF2/GPX4通路抑制铁死亡保护急性肺损伤的机制研究基于以上实验结果,细胞水平上,我们构建稳定沉默SIRT1的肺泡上皮细胞。与对照组相比,沉默SIRT1组的肺泡上皮细胞增殖能力减弱,且铁死亡相关指标铁离子浓度、ROS水平和MDA含量明显升高,线粒体嵴减少或消失。由此可知,SIRT1是槲皮素抑制铁死亡发挥其抗炎和抗氧化作用的关键作用靶点。随后,在急性肺损伤动物模型上,我们采用SIRT1抑制剂EX527处理小鼠,以进一步证实槲皮素调控铁死亡改善急性肺损伤的分子机制。与LPS+槲皮素组相比,EX527处理使肺组织结构病变更明显,肺间质增厚、肺泡有出血和炎性细胞浸润,肺损伤评分升高。另外,肺水肿指标BALF中总蛋白及肺W/D比和肺组织MPO活性明显升高。同时,铁死亡相关指标铁离子浓度、4HNE和ROS水平显著升高,GPX4蛋白表达明显降低,提示在体内槲皮素可通过调控SIRT1进而抑制铁死亡的发生,缓解炎性细胞浸润,改善急性肺损伤。结论:我们的研究表明,槲皮素能够通过减https://www.selleck.cn/products/Verteporfin(Visudyne).html轻脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤,抑制炎症反应和氧化应激来实现对急性肺损伤小鼠的保护作用,其作用机理与上调SIRT1/NRF2/GPX4信号通路进而抑制铁死亡密切相关。槲皮素显著改善了肺组织病理变化,提高肺泡上皮细胞增殖能力,抑制促炎细胞因子释放和活性氧(ROS)的生成,有效地改善了脂多糖诱导的肺损伤。在机制上,槲皮素有效地上调SIRT1/NRF2/GPX4信号通路,体内体外选择性抑制SIRT1则显著逆转了槲皮素对脂多糖诱导急性肺损伤的保护作用。综上所述,槲皮素可通过上调SIRT1/NRF2/GPX4信号通路抑制脂多糖诱导铁死亡的发生,从而发挥保护急性肺损伤的作用。

丹参酮类化合物是丹参主要有效成分之一，在心血管类疾病治疗中发挥重要作用，丹参酮类化合物的微生物异源生产能够为含丹参中药制剂生产提供大量原材料，降低提取成本，缓解临床用药压力。丹参酮生物合成途径包含多个P450酶，高效优势的催化元件是丹参酮微生物生产的基础，该研究以丹参酮途径关键P450-C20位羟化酶CYP76AK1为研究对象，使用SWISS-MODEL、Robetta和AlphaFold2这3种蛋白建模方法，对所得蛋白模型进行分析，获取可靠蛋白结构，以分子对接和同源比对进行突变体蛋白的半理性设计。筛选发现了影响CYP76AK1氧化活性的关键氨基酸位点，通过真核Telaglenastat MW表达对所得突变体进行体外功能研究。研究获得了对11-羟基柳杉酚具有连续氧化功能的CYP76AK1突变体元件，解析了影响其氧化活性的4个关键氨基酸位点，并根据突变结果分析Medical Doctor (MD)3种蛋白建模方法的可靠性。研究首次报道了丹参中CYP76AK1的有效蛋白改造位点，为丹参酮类化合物合成生物学研究提供了C20位不同氧化活性的Baf-A1溶解度催化元件，为解析C20位修饰P450蛋白的连续氧化机制奠定基础。

元宝枫(Acer truncatum Bunge)是我国重要的木本油料树种,因其种仁油脂含一种超长链单不饱和脂肪酸—神经酸而越来越受到关注。为建立高产、稳产、优质、高效的油用型良种繁育体系,本论文在调查收集内蒙古、辽宁、新疆、陕西4个省(自治区)1Ras抑制剂1个不同产地的天然优良元宝枫株系种质资源的基础上,进一步对陕西杨凌油用型优株种子不同发育时期的脂肪酸含量进行测定,分析油脂中各脂肪酸组分之间相关性。联合基因组和转录组数据筛选出与神经酸积累有关的SSR位点,并开发了SSR标记。具体研究结果如下:(1)根据神经酸含量高低,将采集的11个地区的元宝枫种质分为高中低神经酸种质,其中神经酸含量7.5%以上的为高神经酸种质,有3个,分别为辽宁建平(LJP)、内蒙古赤峰市(NCF)和辽宁阜新(LFX)种质;神经酸含量在6%～7.5%之间为中神经酸种质,有6个,分别为内蒙古翁牛特旗种质(NWN)、内蒙古乌旦塔拉林场(NWD)、陕西electronic media use扶风(SFF)、辽宁喀左(LKZ)、辽宁彰武(LZW)和内蒙古科尔沁右翼中旗(NYZ)种质;神经酸含量低于6%的为低神经酸种质,有2个,分别陕西杨凌元宝枫种质(SYL)和新疆喀什(XKS)种质。此外,相关性分析表明神经酸的积累与多种脂肪酸显著相关,其中与芥酸和花生一烯酸显著正相关,此外也与油酸、亚油酸、α-亚麻酸、花生二烯酸、花生五烯酸具有显著的相关性。(2)通过对陕西杨凌元宝枫油用型优株的基因组SSR位点分析,表明元宝枫基因组中SSR微卫星位点具有独特的AT密码子偏好性,SSR标记非常丰富,有高多态标记103,699个,潜在多态标记88,943个。(3)利用转录组分析鉴定了10个脂肪酸从头合成关键酶基因,17个脂肪酸延伸相关酶编码基因、4个脂肪酸去饱和酶编码基因、6个三酰甘油(TAG)合成相关酶基因和12个脂肪酸合成与组装相关的重要的转录因子。筛选了神经酸合成相关基因与转录因子25个,分别为FATA＿Ace0157910.1、LACS＿Ace0091930.1、LACS＿Ace0117350.1、LACS＿Ace0050030.1、LACS＿Ace0260820.1、LACS＿Ace0141860.1、KCS＿Ace0090450.1、KCS＿Ace0253040.1、KCS＿Ace0118450.1、KCS＿Ace0090510.1、KCS＿Ace0090490.1、KCS＿Ace0094550.1、KCS＿Ace0133430.1、KCS＿Ace0148540.1、KCR＿Ace0218780.1、HCD＿Ace0057730.1、HCD＿Ace0070370.1、ABI3＿Ace011273更多0.1、LEC1＿Ace0030680.1、LEC1＿Ace0180140.1、LEC1＿Ace0142490.1、WRI1＿Ace0242120.1、VAL1＿Ace0163960.1、VAL1＿Ace0213010.1、VAL2＿Ace0209280.1。利用这些关键基因开发了78个元宝枫脂肪酸生物合成基因相关的SSR分子标记,并设计了34对神经酸生物合成关键基因SSR标记引物,用于后续多态性引物的验证以及元宝枫遗传多样性评价。综上,本研究从空间和时间两个角度挖掘出与神经酸显著正相关的组分—芥酸,同时从时间的角度发现脂肪酸变化规律:油酸和亚油酸是主要脂肪酸,其变化趋势相反,油酸含量逐渐降低,亚油酸含量逐渐升高;神经酸和芥酸含量变化趋势一致,130～160 DAP显著升高;此外,其他脂肪酸含量逐渐升高的有棕榈油酸、硬脂酸、亚麻酸、花生酸、二十碳二烯酸、二十碳五烯酸和木蜡酸,含量逐渐降低的脂肪酸有肉豆蔻酸、软脂酸、花生一烯酸。利用基因组数据和转录组数据,发现元宝枫SSR具有AT偏好性,预测发现有大量多态标记。同时鉴定了脂肪酸合成的78个位点,从中筛选了34个神经酸生物合成相关位点并设计了相应位点的引物,为后续引物多态性验证以及神经酸含量EST-SSR分子标记的开发奠定基础。

目的 分析甲苯磺酸瑞马唑仑联合瑞芬太尼全身麻醉对胸腔镜肺叶切除患者术后应激反应及血清血小板活化因子(PAF)、γ干扰素(IFN-γ)的影响。方法 选取20selleck PF-0732133221年7月至2022年10月我院收治的69例行胸腔镜肺叶切除术的肺癌患者，根据麻醉方式不同分丙泊酚联合瑞芬太尼为对照组36例和甲苯磺酸瑞马唑仑联合瑞芬太尼为观察组33例。比较两组心率、平均动脉压、手术时间、麻醉时间、苏醒时间、视Mirdametinib分子式觉模拟(VAS)评分、Ramsay镇静评分、应激指标、PAF、IFN-γ水平及简易精神状态检查量表(MMSE)评分。结果 观察组平均动脉压低于对照组(P<0.05);观察组苏醒时间短于对照组(P<0.05);术后12 h观察组VAS评分低于对照组患者(P<0.05),观察组Ramsay镇静评分高于对照组(P<0.05);两组醛固酮(ALD)、去甲肾上腺素(NE)及空腹血糖(FPG)上升，观察组上升幅度低于对照组(P<0.05);两组麻醉后、手术结束时PAF比麻醉前升高(P<0.05),两组麻醉后、手术结束时两组IFNsystems biochemistry-γ较麻醉前下降，观察组降低幅度大于对照组(P<0.05);术前两组MMSE评分对比，无差异(P>0.05),术后12 h两组MMSE评分比术前降低，观察组高于对照组(P<0.05)。结论 甲苯磺酸瑞马唑仑联合瑞芬太尼全身麻醉用于胸腔镜肺叶切除术中，镇静效果更好，可有效稳定患者血流动力学、缩短患者苏醒时间、减轻患者应激反应，IFN-γ水平低，认知功能好。

目的 分析高场强磁共振成像（high field strength magnetic resonance imaging, MRI）对前列腺良恶性病变的鉴别诊断价值。方法 选Gefitinib分子量取2016年1月—2021年12月盐城市第三人民医院影像科收治的疑似前列腺病变患者60例，均Biomimetic scaffold以高场强MRI检查，以手术穿刺活检病理诊断结果为金标准，分析高场强MRI诊断效能及影像学特征。结果 NVP-TNKS656化学结构手术病理确诊30例为良性前列腺增生（阴性）、30例为前列腺癌（阳性）。高场强MRI诊断准确度为95.00%，敏感度为93.33%，特异度为96.67%，阳性预测值为96.55%，阴性预测值为93.55%。经一致性系数分析，高场强与MRI诊断一致性为0.900，一致性良好。前列腺增生：前列腺体积弥漫性增大，T2WI显示前列腺中央叶明显增大，信号不均匀，呈类圆形高信号/低信号，外周带受压变窄。前列腺癌：癌组织呈弥漫性浸润性生长，T2WI移行带呈低信号，边界模糊，病变位于包膜内或突破包膜、侵犯精囊腺或血管神经束，或合并淋巴结肿大、骨盆骨转移。结论 高场强MRI在前列腺良恶性病变鉴别诊断中的准确性和可靠性较高，具有推广应用价值。

鹅具有耐粗饲,适应力强,肉质鲜嫩营养丰富的特点,广受养殖户和消费者的欢迎。但由于鹅产蛋量低严重阻碍了我国鹅产业的发展与壮大。因此提高鹅产蛋量已成为目前养鹅业中迫切需要解决的问题之一。产蛋性能的高低主要由卵泡发育与选择的结果决定,家禽卵泡发育严格遵循等级发育体系,研究表明,大量卵泡颗粒细胞(Granulosa cells,GCs)的程序性死亡是引起卵泡发生闭锁进而不能进入等级阶段的关键因素。因此探讨鹅卵泡发育与选择过程中GCs程序性死亡的调控机制对于提高鹅产蛋量至关重要。卵泡液中包含丰富的生物活性物质(脂质、miRNA、mRNA和蛋白质),这些生物活性物质是否影响GCs增殖或程序性死亡过程?有研究表明,卵泡液中某些活性物质可通过外泌体载体作用于GCs,从而影响卵泡发育和卵泡闭锁的进程。鹅作为产蛋量低的家禽,其卵泡发育是否也受卵泡液外泌体介导的某些活性物质对GCs程序性死亡过程发挥作用,从而导致卵泡大量闭锁,目前尚不清楚。鉴于此,本研究以产蛋高峰期的扬州鹅为研究对象,探究鹅闭锁小黄卵泡(atretic small yellow follicle,ASYF)与正常小黄卵泡(small yellow follicle,SYF)中卵泡液外泌体蛋白组分差异及其对GCs程序性死亡的调控作用机制。研究旨在揭示闭锁卵泡液外泌体对GCs程序性死亡的调控作用,结果不仅有助于揭示鹅卵泡闭锁发生的生理机制,还可为提高鹅的产蛋性能提供理论参考。1.鹅SYF与ASYF组织形态、颗粒层细胞程序性死亡标志物、性类固醇及抗氧化水平检测为了解鹅SYF与ASYF组织形态与生理差异,采用HE染色、透射电子显微镜观察、免疫组化和RT-qPCR等方法对产蛋高峰期SYF与ASYF的组织形态、颗粒层细胞程序性死亡标志物、性类固醇合成能力及抗氧化水平进行了检测。结果显示:产蛋高峰期在鹅卵泡的等级发育过程中,大量SYF发生闭锁,极大减少了进入等级卵泡池的SYF数量。与SYF相比,ASYF的颗粒层细胞间连接松散,向内脱落;ASYF凋亡小体和自噬小体数增多,线粒体发生皱缩,线粒体嵴消失;ASYF中凋亡相关基因Caspase3、Caspase8、Caspase9和BAX和自噬相关基因Atg12、Atg5、Beclin1和LC3的mRNA表达量显著高于SYF(P<0.05)。铁死亡相关基因GPX4的mRNA表达量显著低于SYF(P<0.05),COX2、HMOX1和 PROM2 的 mRNA 表达量显著高于 SYF(P<0.05),NCOA4和TXNIP的mRNA表达量极显著高于SYF(P<0.05),WB检测显示ASYF中GPX4表达量显著低于SYF(P<0.05)。类固醇相关指标检测显示ASYF中E2和P4含量以及性类固醇合成相关基因CYP19A、HSD1 7B的mRNA表达量显著低于SYF(P<0.05)。ASYF中ROS及H2O2和MDA的含量显著高于SYF(P<0.05),T-AOC、SOD和GSH活性显著低于SYF(P<0.05)。上述结果表明,鹅卵泡闭锁时大量GCs发生程序性死亡,颗粒层脱落,性类固醇和抗氧化水平显著降低。2.鹅SYF与ASYF卵泡液外泌体差异蛋白组学分析为探明鹅卵泡液外泌体在鹅卵泡发育和卵泡闭锁过程中的重要作用,本研究利用TMT标记技术对提取并鉴定的SYF与ASYF卵泡液外泌体筛选差异表达蛋白质,结果显示,外PR-171泌体中可携带蛋白质种类高达4000多种,与SYF相比,ASYF外泌体中携带的差异蛋白质有1615种,其中上调蛋白905种,下调蛋白710种。GO功能分析显示差异蛋白主要与细胞表面受体信号通路、细胞粘附、生物粘附等细胞通讯功能相关。KEGG分析显示主要富集的细胞功能包括细胞生长与程序性死亡和细胞活性等。PPI网络分析发现富集在铁死亡通路上的HMOX1位于网络调控节点中心且仅在ASYF卵泡液外泌体中大量表达。采用Western blot对SYF与ASYF卵泡液外泌体中HMOX1进行了定量验证,发现其表达情况与蛋白组测序结果一致。该结果筛选出了鹅SYF与ASYF卵泡液外泌体差异表达蛋白,为进一步研究关键差异蛋白HMOX1在GCs程序性死亡导致的卵泡闭锁中作用机制奠定了基础。3.鹅卵泡液外泌体蛋白HMOX1调控GCs铁死亡分子机制为验证外泌体蛋白HMOX1在调控GCs程序性死亡中的作用,本研究AZD1152-HQPA供应商将提取并鉴定的鹅SYF与ASYF卵泡液外泌体分别加Ready biodegradation入体外分离的鹅GCs,结果显示,卵泡液外泌体可以通过胞吞作用进入GCs内。与SYF相比,ASYF卵泡液外泌体显著降低GCs细胞活性(P<0.05),显著升高GCs的MDA和亚铁离子水平(P<0.05),显著降低GCs线粒体膜电位(P<0.05),且以上变化可以被铁离子螯合剂DFO逆转(P<0.05)。研究表明ASYF卵泡液外泌体会诱导GCs铁死亡。为了进一步检测GCs铁死亡发生是否与ASYF卵泡液外泌体HMOX1大量表达有关,进一步构建过表达HMOX1重组质粒转染GCs和添加HMOX1特异性抑制剂Znpp,分析外泌体差异蛋白HMOX1对GCs的影响。结果显示HMOX1过表达后,GCs细胞活性显著降低(P<0.05),亚铁离子含量显著升高(P<0.05),GPX4蛋白质表达量降低(P<0.05),MDA水平升高(P<0.05)。添加抑制剂Znpp显著缓解了由HMOX1升高引起的细胞活性降低,亚铁离子升高和MDA水平升高(P<0.05)。上述结果提示,外泌体蛋白HMOX1可介导铁死亡通路调控GCs程序性死亡参与卵泡闭锁。综上,鹅卵泡发育与选择中,闭锁小黄卵泡颗粒层脱落,大量的GCs发生程序性死亡。卵泡液外泌体可以通过胞吞作用进入GCs,并通过运输过载的HMOX1介导铁死亡通路诱导GCs程序性死亡参与卵泡闭锁的调控。