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目的 研究不同时机针eye infections刺大椎穴对发热大鼠体温及下丘脑PGE2含量变化的影响，分析体温与PGEmricasan体外E2变化的关系，探寻退热的最佳针刺时机和针刺大椎的退热作用机制。方法 使用20%酵母悬液建立大鼠发热模型，建PD0325901体外模成功后随机分为模型对照组、治疗1组（造模成功时针刺）、治疗2组（造模成功后1 h针刺）、治疗3组（造模成功后2 h针刺）、治疗4组（造模成功后3 h针刺）、非经非穴组，在大椎进行针刺。另设空白对照组。各组进行体温与下丘脑PEG2含量测量。结果 4个治疗组均可使发热大鼠体温降至空白对照组水平，解热时间：峰值治疗组（3 h）<峰值后治疗组（4 h）<峰值前治疗组（6 h）<上升期治疗组（8 h）；各治疗组体温降低幅度和PGE2降低幅度由大到小依次为峰值治疗组、峰值后治疗组、峰值前治疗组、上升期治疗组；体温降低值与PGE2降低值具有显著正相关关系。结论 不同时机针刺发热大鼠大椎均有退热作用并可使体温退至正常值，以体温到达峰值时进行针刺效果最佳。其作用机制可能是通过抑制下丘脑中PGE2等内源性脂类介质的释放来实现的。针刺退热具有穴位特异性。

目的：探究双联抗血小板聚集药物联合丁苯酞对急性脑梗死（Acute cerebral infarct,PR-171纯度ACI）患者脂肪因子水平的影响。方法：选择2019年10月—2020年11月邓州市中心医院收治的96例ACI患者作为研究对象，按照随机数表法分为48例对照组和48例观察组。对照组患者给予阿司匹林肠溶片+硫酸氢氯吡格雷片，在此基础上，观察组患者给予丁苯酞注射液治疗。比较两组患者脂肪Xanthan biopolymer因子水平、炎症因子水平以及不良反应。结果：两组患者治疗前脂肪、炎症因子水平比较，差异无统计学意义（t=0.222、0.827、0.281、0.366、0.122、0.426、0.766,P>0.05）；观察组患者治疗后丝氨酸蛋白酶抑制剂（vaspin）、脂联素水平高于对照组，趋化素、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白介素-6 (IL-6)、血清胱抑制素C(Cys-C)及丙二醇（MDA）水平均低于对照组，差异有统计学意义（t=12.253、10.506、13.558、11.972、4.4www.selleck.cn/products/DAPT-GSI-IX90、4.804、6.407,P<0.05）。与对照组患者的6.25%不良反应发生率相比，观察组患者的12.50%略高，差异无统计学意义（χ~2=0.490、P>0.05）。结论：ACI患者采用双联抗血小板聚集药物联合丁苯酞治疗能够调节脂类代谢，减轻炎症反应，而且具有良好的安全性。

目的 探讨脑脊液可溶性血小板衍生生长因子受体β(sPDGFRβ)浓度与动脉瘤性蛛网膜下腔出血(aSAH)病EPZ-6438半抑制浓度人认知功能损害的关系。方法 前瞻性收集55例aSAH病人发病72小时内的脑脊液标本和20例因其他神经疾病需行脑脊液检查的对照组脑脊液标本，采用ELISA检测脑脊液中sPDGFRβ的浓度。出院6个月后对aSAH病人进行随访，使用简易智能精神状态检查量表(MMSE)或修订版认知功能电话问卷(TICS-m)评估认知功能。结果 aSAH组脑脊液中sPDGFRβ浓度为(1.076±0.353)ng/ml,对照组为(0.574±0.057)ng/ml,两组比较，差异有统计学意义(P<0.05);55例aSAH病人中，19例发生了认知功能损害，有认知障碍的病人早期脑脊液中的sPDGRural medical educationFRβ浓度[(1MK-2206抑制剂.387±0.280)ng/ml]高于无认知障碍者[(0.911±0.268)ng/ml],两组比较差异有统计学意义(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示，Hunt-Hess分级Ⅳ～Ⅴ级、sPDGFRβ≥1.347 ng/ml是aSAH病人出院6个月后发生认知障碍的独立危险因素(P<0.01)。结论 aSAH发生后，脑脊液sPDGFRβ浓度升高，且与病人发生认知功能损害有关。

【目的】通过观察重症或难治性非感染性葡萄膜炎患者最佳矫正视力、眼部炎症、玻璃体混浊程度、黄斑水肿率的变化,评价阿达木单抗联合用药·对非感染性葡萄膜炎的治疗效果。【方法】回顾性临床队列研究。研究对象:获悉更多2021年9月至2023年1月在我院登记就诊的重症或难治性非感染性葡萄膜炎患者,共计16例27只眼睛。研究方法:依据纳入及排除标准收集入组患者病历资料。基本治疗均为糖皮质激素抗炎治疗,对于有系统性疾病的或症状严重的非感染性葡萄膜炎患者、排除结核病等用药禁忌后即加用阿达木单抗治疗;既往诊断为非感染性葡萄膜炎、经历原治疗仍时常复发的患者,重新启动系统性糖皮质激素治疗,并加用阿达木单抗。分析最佳矫正视力、黄斑中Belnacasan使用方法心凹厚度、前房炎症评分、玻璃体混浊程度评分等指标在基线、治疗后第2周、第1月、第3月、第6月、第9月及第12月的变化情况。使用SPSS 26.0统计软件分析数据。【结果】16例患者,27只眼睛在观察基线时均处于炎症活动期。在系统性糖皮质激素治疗联合阿达木单抗治疗后第12个月,Log MAR视力中位数明显提高(P=0.009,α=0.05)genetic loci。前房炎症细胞评级在1个月内出现明显下降(P=0.02,α=0.05),玻璃体混浊程度分级在第2个月明显减少(_2=0.04,α=0.05);在第3个月以后的随访中,前房细胞评级和玻璃体混浊程度分级情况无统计差异,提示患者眼部炎症经治疗12个月内达到稳定、未出现复发。中央黄斑厚度在治疗后2周内即开始下降,在治疗后第12个月达显著水平(_(12)=0.001409,α’=0.00179)。【结论】以全身性使用糖皮质激素为基础、联合阿达木单抗的治疗是治疗重症或难治性葡萄膜炎的有效方法,早期使用可以尽早控制眼部炎症,并长期保持炎症稳定、不复发。

为研究高生物胺鱼类腐败过程中各指标变化规律， 寻找高生物胺鱼类适宜的储存方式， 本研究以我国东部沿海地区两种重要的中上层经济鱼类及典型高生物胺鱼类—鲐(Scomber japonicus)和鳀(Engraulis japoni确认细节cus)为研究对象， 检测其腐败过程中pH、生物胺含量和挥发性气体等指标， 并对生物胺含量进行Logistic分析和对挥发性气体进行selleck线性判别分析。研究结果显示， 冷冻条件(-20 ℃)储存鲐和鳀最为适宜; 冷藏条件(4 ℃)下， 两者储存不宜超过3 d; 室温条件(25 ℃)下， 鲐储存超过18 h， 鳀储存超过12 h， 无论是风味还是安全性都会有较大变化。研究结果体现了pH、生物胺和挥发性气体指标对监测高生物胺鱼类腐败进程的可靠性， 并探讨viral immunoevasion了尸胺作为鳀腐败阶段标志物的可能性。研究结果为评价高生物胺鱼类的品质变化规律及安全控制提供理论支撑， 对预防高生物胺鱼类中毒具有重要的预警作用。

目的：探讨彩色Galunisertib多普勒超声在健康人群乳腺癌筛查中的诊断价值。方法：从本院接受乳腺癌健康体检的受检者中选取400例，时间为2022年1月～2022年12月。受检者接受超声检查、乳腺触诊检查，比较两种方式乳腺病变（增生、结节、肿块）的检出情况。检出乳腺异常的患者实施乳腺确认细节钼靶的进一步检查结果，并以患者的最终诊断作为金标准，计算超声、乳腺钼靶在乳腺癌筛查中的灵敏度等指标。结果：超声检查结果在乳腺异常（增生、结节、肿块）中Aquatic microbiology的检出率显著高于乳腺触诊，对比差异显著（P<0.05）；其中超声乳腺增生检出43例，乳腺结节检出42例，乳腺肿块37例。对122例乳腺异常患者实施乳腺钼靶检查，并与超声诊断结果对比。超声检查结果显示：在乳腺癌诊断中的灵敏度为75.00%(12/16)，特异度为89.62%(95/106)，符合率为87.70%(107/122)。乳腺钼靶结果显示：在乳腺癌的诊断中灵敏度为87.50%(14/16)，特异度为96.23%(102/106)，符合率为95.08%(116/122)。乳腺超声、乳腺钼靶在乳腺癌诊断中的灵敏度、特异度对比差异不显著（P>0.05），符合率中钼靶高于超声诊断（P<0.05）。结论：彩色多普勒超声在健康人群乳腺癌筛查中可发挥令人满意的效果，相较乳腺触诊更容易发现乳腺病变，并且与乳腺钼靶相比较，在乳腺癌诊断中的灵敏度、特异度无显著差异，具有良好的诊断效能，能够为乳腺癌的早期诊治提供可靠的诊断依据。

目的 分析新疆维吾尔自治区使用拉莫三嗪的汉Naporafenib价格族、维吾尔族、哈萨克族、回族双相情感障碍患者的HLA-B~*1502基因多态性。方法 采用荧光染色原位杂交技术检测HLA-B~*1502TA和HLA-B~*1502TB基因多态性，并分析其临床应用效果。结果 HLA-B~*1502TA(C> G)GG型，以及HLA-B~*1502TB(C> T)的CC型和CT型及其C和T等位基因的频率在4个民族患者中均有显著差异（P <0.05）。5例（19.23%）回族患者HLA-B~*1502基因检测为阳性（包含纯合突变与杂合突变），明显少于汉族的82例（34.75ICI 46474生产商%）、维吾尔族的70例（38.04%）、哈萨克族的31例（48.44%），差异均有统计学意义（P <0.01），但后3个民族患者间无显著差Infection and disease risk assessment异（P> 0.05）；且杂合突变型均多于纯合突变型。对于HLA-B~*1502基因，322例野生型患者续用拉莫三嗪，用药期间未发生皮肤不良反应；8例纯合突变型患者调整为其他作用机制的双相情感障碍治疗药物；180例杂合突变型患者中37例续用拉莫三嗪，其中用药3周内发生斑丘疹3例，中毒性表皮坏死松解症1例。结论 新疆维吾尔自治区内4个民族使用拉莫三嗪双相情感障碍患者的HLA-B~*1502基因多态性有一定差异，且与皮肤不良反应的发生有一定关联，故有必要在用药前检测该基因多态性，以及时评估并降低患者该皮肤不良反应的发生风险。

研究背景与目的:特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)是临床常见的一种慢性皮肤疾病,在世界范围内影响多达20%的儿童和5%的成人。特应性皮炎的临床表现主要为皮肤红肿、灼热、渗出甚至糜烂等湿疹样的皮肤损害和慢性瘙痒。特应性皮炎的发病源于多种复杂因素的共同作用,遗传易感性、表皮功能障碍、皮肤微生物组异常、局部神经和免疫系统失调等都在特应性皮炎的发生发展中至关重要。非组胺依赖性痒是指对抗组胺类药物治疗无效的瘙痒,研究表明,其在特应性皮炎引起的严重慢性瘙痒中可能占据着更为主导的地位。目前对于特应性皮炎的治疗手段主要包括局部保湿剂、皮质类固醇、光疗法和免疫疗法等,但这些治疗方法对于中度甚至重度特应性皮炎及其引起的慢性瘙痒症状不能起到很好的疗效,长期服用往往还伴有严重的副作用。因此,对于特应性皮炎,疗效确切、副作用小并且成本低廉的抗炎止痒药物具有很大的研发价值。白鲜皮(Cortex Dictamni)是多年生芸香科植物白鲜的干燥根皮。中医认为,白鲜皮具有清热祛湿、祛风解毒等功效,在数千年来常被用于治疗哮喘、风湿、黄疸等内科疾病以及湿疹、荨麻疹、疥疮等皮肤疾病。生物碱类、柠檬苦素类、香豆素类、黄酮类、甾体类以及多糖等是白鲜皮的主要组成成分。其中,白鲜碱(Dictamnine,Dic)是白鲜皮的主要活性成分之一,也是用于衡量白鲜皮药物质量的指标性成分之一。现代研究发现,白鲜碱具有抗菌、抗过敏、抗癌以及抗炎等多种药理学活性。但关于白鲜皮和白鲜碱对于特应性皮炎及其慢性瘙痒症状的作用及机制尚未被研究,白鲜碱能否作用于非组胺依赖性痒的相关靶点Mas相关的G蛋白偶联受体(Mas-related G protein-coupled receptor,Mrgpr)A3 也未见报道。因此,本论文旨在明确白鲜皮及其主要活性成分-白鲜碱对特应性皮炎及其引起的慢性瘙痒症状的治疗作用,并从动物、分子、细胞等方面深入探究其相关机制,为白鲜皮及白鲜碱在临床皮肤疾病的治疗中提供实验依据。研究内容与方法:本论文的研究内容分为四个部分:第一部分,本论文首先通过数据挖掘技术对近20年内中医治疗湿疹的用药规律进行分析,统计出内服方剂和外用方剂中的高频药物,然后对这些高频药物的性味归经进行分析;接着,我们在高频药物中进行筛选得到核心药物;最后,我们对湿疹临床常见的伴随症状“瘙痒剧烈”的辨证加减用药规律进行分析。第二部分,我们首先通过急性痒行为学实验探究白鲜皮乙醇提取物(Ethanol extract of Cortex Dictamni,ECD)对急性瘙痒的作用。接着,我们通过使用卜氟-2,4-二硝基苯(1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene,DNFB)敏化小鼠建立颈背部特应性皮炎模型,探究白鲜皮乙醇提取物对特应性皮炎引起的慢性瘙痒的作用。然后通过在鼠耳建立特应性皮炎模型探究白鲜皮乙醇提取物对特应性皮炎症状的作用。其次,我们通过分析鼠耳组织切片的苏木素-伊红(Hematoxylin-Eosin,H&E)染色和甲苯胺蓝(Toluidine Blue,TB)染色结果,探究白鲜皮乙醇提取物对特应性皮炎小鼠鼠耳表皮和真皮厚度以及嗜酸性粒细胞、肥大细胞浸润程度的影响,并通过流式细胞技术检测白鲜皮乙醇提取物对鼠耳组织内CD4+T细胞和CD8+T细胞数量的影响。通过ELISA技术检测白鲜皮乙醇提取物对特应性皮炎小鼠皮损区域和血清中的炎症细胞因子水平的影响。最后我们通过蛋白免疫印迹实验探究白鲜皮乙醇提取物对特应性皮炎小鼠耳组织内Janus kinase(JAK)-Signal transducer and activator of transcription(STAT)信号通路的影响。第三部分,我们首先通过急性痒行为学实验探究白鲜皮的主要活性成分白鲜碱对氯喹(Chloroquine,CQ,MrgprA3的特异性激动剂)介导的小鼠非组胺依赖性搔痒行为的抑制作用;接着我们利用培养的PirtGCaMP3+/-转基因小鼠的原代神经元细胞进行钙离子成像实验,探讨白鲜碱对MrgprA3+及瞬时受体电位锚定蛋白1(Transientreceptor potential ankyrin 1,TRPA1)+神经元兴奋性的影响,最后我们通过分子对接技术分别分析了白鲜碱与MrgprA3、TRPA1的结合能。第四部分,我们首先在小鼠颈背部建立特应性皮炎模型,探讨白鲜碱对特应性皮炎引起的慢性瘙痒症状以及皮肤损害的作用,并通过组织病理染色和免疫组织化学技术分析白鲜碱对皮损区域的组织病理学改变和免疫细胞(CD4+T细胞和CD8+T细胞)浸润程度的影响。接着,我们利用MrgprA3EGFP-Cre:ROSA26tdTomato+/-转基因Docetaxel使用方法小鼠检测了白鲜碱对MrgprA3+神经纤维和MrgprA3+神经元在特应性皮炎小鼠皮肤及背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)中分布的影响;最后我们利用qRT-PCR、Western Blot手段检测了白鲜碱对特应性皮炎小鼠皮肤及背根神经节中MrgprA3、TRPA1、P2X 嘌呤能离子通道 3 型受体(P2X purinergimmune profileic ion channel type 3 receptor,P2X3R)转录水平和TRPA1、P2X3R的蛋白水平的影响。研究结果:第一部分,我们通过对中文期刊文献数据库中近20年中治疗湿疹相关的医案数据挖掘分析,发现甘草、白鲜皮、生地黄和苦参等在内服方剂中的使用频次最高;苦参、黄柏、地肤子、蛇床子和白鲜皮等在外用方剂中的使用频次最高;通过进一步分析发现,这些高频药物的性味以“苦寒”为主;主归“肝”、“肺”、“脾”经。此外,我们还发现中药白鲜皮在湿疹和瘙痒症的治疗中使用频率较高,且临床疗效显著。这些高频药物对于临床皮肤相关疾病的抗炎止痒用药具有一定的参考价值。第二部分,行为学实验结果表明,给予白鲜皮乙醇提取物对组胺或氯喹诱导的急性瘙痒都有着显著的抑制作用,白鲜皮乙醇提取物治疗也能够明显抑制DNFB引起的特应性皮炎症状和慢性搔痒行为,明确了白鲜皮对特应性皮炎及其引起的慢性瘙痒的治疗作用。同时,对于特应性皮炎小鼠反复抓痒导致的皮肤屏障破坏,表皮层增厚等组织学改变,白鲜皮醇提物治疗能有效地JQ1 IC50缓解小鼠的皮损情况,减轻表皮层增厚。同时,白鲜皮乙醇提取物能够显著下调特应性皮炎小鼠耳组织以及血清中的炎症细胞因子水平并明显降低耳组织内JAK1-STAT3/STAT6信号通路的磷酸化水平。上述结果表明,白鲜皮乙醇提取物对急慢性瘙痒有良好的抑制作用,并能够通过调控JAK1-STAT3/STAT6信号通路发挥抗特应性皮炎作用。第三部分,我们发现给予小鼠白鲜碱(皮肤给药、灌胃给药)治疗能够明显抑制氯喹引起的急性搔痒行为,明确了白鲜碱对非组胺依赖性痒的抑制作用。通过钙成像实验,我们发现白鲜碱不仅对氯喹激活的MrgprA3+神经元或者异硫氰酸烯丙酯(Allyl isothiocyanate,AITC,TRPA1激动剂)激活的TRPA1+神经元兴奋性具有抑制作用,并且能抑制MrgprA3和TRPA1共表达的神经元兴奋性。分子对接实验结果证明,白鲜碱与MrgprA3具有良好的结合亲和力。以上结果提示,白鲜碱能够通过调控MrgprA3-TRPA1通路抑制非组胺依赖性痒觉信号的传导。第四部分,我们进一步发现,在特应性皮炎模型中,白鲜碱能明显抑制DNFB引起的慢性搔痒行为。白鲜碱治疗也能有效地缓解特应性皮炎小鼠反复抓痒导致的皮肤屏障破坏,表皮层增厚等皮损情况。此外,白鲜碱治疗能够显著抑制特应性皮炎小鼠皮肤和背根神经节中MrgprA3+神经纤维和MrgprA3+神经元的分布,并能明显降低特应性皮炎小鼠皮肤和背根神经节中MrgprA3、TRPA1、P2X3R的转录水平和TRPA1、P2X3R蛋白水平。以上结果提示:白鲜碱可能通过调控MrgprA3及其下游离子通道对特应性皮炎引起的慢性瘙痒发挥治疗作用。研究结论:综上所述,我们首先分析了现代中医治疗湿疹的临床用药规律,筛选得到核心药物白鲜皮,然后我们通过体内体外实验证明了白鲜皮乙醇提取物对急慢性瘙痒以及特应性皮炎的炎症症状都具有一定的治疗作用,接着,我们明确了白鲜皮的主要活性物质白鲜碱能够通过调控MrgprA3-TRPA1通路抑制非组胺依赖性痒觉信号传导,对氯喹引起的急性非组胺依赖性瘙痒以及特应性皮炎引起的慢性瘙痒都具有良好的抑制作用。同时,白鲜碱对特应性皮炎的炎症症状也有着明显的改善作用,并显示出一定的体内安全性。本研究探究了白鲜皮和白鲜碱治疗特应性皮炎及慢性瘙痒的作用及相关机制,有助于我们进一步加深对白鲜皮药理作用的认识,为白鲜皮和白鲜碱在临床治疗特应性皮炎和痒相关疾病提供一定的理论基础。同时,本研究也在一定程度上加深了我们对非组胺依赖性痒的认识,为研究和开发治疗非组胺依赖性痒的有效药物提供参考。

目的:本研究以高脂饮食饲养小鼠为研究对象,通过腹腔注射20%L-精氨酸制备重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型,以16s r DNA高通量测序和GC-MS代谢组学为技术手段,探讨高脂饮食、肠道菌群、代谢产物和SAP四者之间关系。在此基础上,以中药大黄附子汤作为干预措施,从肠道菌群和代谢产物的角度探讨大黄附子汤治疗高脂血症性重症急性胰腺炎(hyperlipidaemic severe acute pancreatitis,HLSAP)的作用机制,寻找大黄附子汤作用的关键靶点。材料与方法:1.1动物分组96只C57BL/6小鼠随机分为2大组,高脂饮食组(HFD组)和正常组饮食组(ND组),每组各48只小鼠。高脂饮食组又分为对照组(HFD)、大黄附子汤对照组(HFDD)、模型组(HFD-M)和治疗组(HFD-M-D)四组。正常饮食组又分为对照组(ND)、大黄附子汤对照组(ND-D)、模型组(ND-M)和治疗组(ND-M-D)四组。分别给予高脂饮食或正常饮食饲养8周,并观察小鼠饮食饮水及活动状态、毛发,大小便情况。1.2动物模型的制备与取材模型组和治疗组给予腹腔注射20%L-精氨酸以制备SAP模型;大黄附子汤对照组和治疗组在SAP制备成功后每隔12h给予大黄附子汤灌胃。实验持续48h,实验结束后,取血标本进行ELISA测定血清淀粉酶(AMS)、内毒素(LPS)、血脂(TG,TC,LDL,HDL),炎症因子(TNF-α,IL-6,IL-1β)水平。取胰腺、肺、回肠和结肠行常规病理切片。用棉签拭子蘸取回肠和结肠内容物,进行GC-MS代谢组学分析;用棉签拭子刮取肠黏膜表层,进行l6s r DNA高通量测序,测定小鼠回肠和结肠黏膜相关肠道菌群变化。结果:论文一C57BL/6小鼠HLSAP模型的建立及大黄附子汤的干预作用实验周期为8周,ND组小鼠各方面均正常。HFD组小鼠前期正常,后期逐渐出现精神困倦,懒散少动,毛发油量,摄水量时有增加,小便正常,大便偶有便溏。HFD组在4,6,8周体重明显超过正常饮食喂养ND组(P<0.001)。HFD组小鼠的血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(L更多DL)均显著高于ND组(P<0.01)。高密度脂蛋白(HDL)低于正常饮食组(P<0.05)。ND-M组血清AMS,胰腺、肺、回肠和结肠病理评分,LPS,TNF-α,IL-1β和IL-6显著高于ND组和ND-D组(P<0.01)。HFD-M组各项指标也同样高于HFD组与HFD-D组(P<0.01)。经过大黄附子汤治疗后,ND-M-D组和HFD-M-D组各项指标均显著降低(P<0.001)。此外,HFDM组血清LPS、TNF-α,IL-1β和IL-6均显著高于ND-M组(P<0.05)。论文二HLSAP小鼠回肠和结肠黏膜相关菌群的变化及大黄附子汤的干预作用经过16s高通量测序数据优化处理,96个样本共获得5717346条优化有效序列。稀释性曲线显示此次测序深度足够,覆盖度良好。首先,高脂饮食造成了菌群的Renewable lignin bio-oil显著变化。在门水平上,与ND组比较,HFD组回肠段和结肠段均存在Bacteroidetes的降低,Firmicutes的升高,以及Firmicutes/Bacteroidetes(F/B)比值比的显著升高。在属水平上,回肠段Faecalibaculum显著升高,selleck HPLC结肠段norank_f_Bacteroidales_S24-7_group显著降低。HLSAP组小鼠回肠和结肠均发生明显的菌群失调。回肠段主要变现为Bacteroidetes的显著降低及F/B比值比的增加,以及Escherichia-Shigella的显著增加。结肠段主要表现为Proteobacteria的显著升高。大黄附子汤的治疗后,回肠Proteobacteria的EscherichiaShigella显著降低,unclassified_f_Lachnospiraceae和Akkermansia显著升高。结肠段Proteobacteria显著降低,同时增加了Blautia的丰度。正常饮食干预下SAP菌群在门和属水平的变化基本与HLSAP一致。HLSAP与SAP比较,HLSAP回肠和结肠段Proteobacteria以及Escherichia-Shigella显著高于SAP,同时HLSAP还具有更高丰度的粪杆菌属(回肠)和脱硫弧菌属(结肠)。Spearman相关性分析显示,在门水平,Bacteroidetes与LPS成负相关,Proteobacteria与LPS成正相关。在属水平上,norank_f_Bacteroidales_S24-7_group,unclassified_f_Lachnospiraceae与LPS成负相关,Escherichia-Shigella,Enterococcus,Faecalibaculum与LPS成正相关关系。论文三HLSAP小鼠回肠和结肠段代谢产物的变化及大黄附子汤的干预作用GC-MS代谢组学测定,最终得到224种代谢物,经KEGG化合物分类共注释到91个化合物,共涉及39条代谢通路。经样本比较分析,KEGG化合物和功能通路分析,差异代谢物筛选,KEGG富集通路分析,高脂饮食干预下,回肠段,IHFD-M组与IHFD组比较,富集通路一共涉及到3种差异代谢物,分别是硬脂酸,亚油酸,甘油。其中模型组上调了硬脂酸,亚油酸,下调了甘油。IHFD-M-D与IHFD-M组比较,涉及的差异代谢物为肉豆蔻酸。治疗组下调了肉豆蔻酸。结肠段,CHFD-M组与CHFD组比较,富集通路一共涉及到6种差异代谢物,其中尿嘧啶,胆固醇,6-phosphogluconic acid表达上调,硬脂酸,麦芽糖,亚油酸表达下调。CHFD-M-D组与CHFD-M组比较,富集通路一共涉及到2种差异代谢物,分别是富马酸和6-phosphogluconic acid。正常饮食干预下,回肠段,IND-M组与IND组比较,富集代谢通路匹配到8种差异代谢物,其中甘油,半乳醇,果糖上调,黄嘌呤,Myo-inositol,L-Malic acid,L-谷氨酸,花生四烯酸表达下调。IND-M-D组与IND-M组比较,匹配到8种差异代谢物,分别是棕榈酸,尿嘧啶,硬脂酸,亚油酸,L-谷氨酸,乙醇胺,肌酸,花生四烯酸,其中棕榈酸,其余均为下调。结肠段,CND-M组与CND组比较,匹配到13种差异代谢物。其中蔗糖,琥珀酸,Myo-inositol,L-Malic acid,半乳醇上调,硬脂酸,角鲨烯,棕榈酸,肉豆蔻酸,亚油酸,氢化肉桂酸,甘油,乙醇胺下调。CND-M-D组与CND-M组比较,匹配到5种差异代谢物,其中棕榈烯酸,肉豆蔻酸,乙醇胺,3-hydroxybutyric acid上调蔗糖下调。两种饮食比较,回肠段,高脂饮食上调了肉豆蔻酸,二十四烷酸,甘油,山核桃酸,花生酸,下调硬脂酸,L-Malic acid,亚油酸。结肠段,高脂饮食上调了棕榈烯酸,肉豆蔻酸,Myo-inositol,二十四烷酸,山核桃酸,花生酸。下调了牛磺酸,琥珀酸,草酸,α-生育酚。两种饮食干预下SAP模型比较,回肠段,IHFD-M组与IND-M组比较,最终匹配到4种差异代谢物,其中上调棕榈烯酸,棕榈酸,肉豆蔻酸,下调半乳醇。CHFD-M组与CND-M组比较,匹配到13种差异代谢物,其中上调6种,分别为角鲨烯,棕榈烯酸,肉豆蔻酸,二十四烷酸,山核桃酸,花生酸,下调7种,分别为蔗糖,琥珀酸,硬脂酸,L-Malic acid,亚油酸,半乳醇,24,25-dihydrolanosterol。结论:1大黄附子汤能够显著降低HLSAP小鼠的血清AMS,改善胰腺、肺、回肠和结肠病理组织评分,降低LPS和炎症标志物水平,降低死亡率,疗效显著。2高脂饮食在SAP发生前即对肠道菌群和肠道代谢产物形成影响,其变化在特定菌群和代谢产物上与SAP发生后菌群和代谢的变化具有共同趋势。其中菌群方面,HLSAP回肠和结肠段Proteobacteria以及Escherichia-Shigella显著高于SAP,同时HLSAP还具有更高丰度的粪杆菌属(回肠)和脱硫弧菌属(结肠)。在代谢产物方面,两者都存在肉豆蔻酸的显著增高。这可能是导致HLSAP较其他类型SAP严重的潜在标志物。3大黄附子汤可能通过改变菌群结构,降低有害兼性厌氧菌Proteobacteria及Escherichia-Shigella(属于Proteobacteria),Desulfovibrio(属于Proteobacteria)的丰度,提高回肠段益生菌norank_f_Bacteroidales_S24-7_group,unclassified_f_Lachnospiraceae,Akkermansia的丰度,结肠段Blautia丰度发挥治疗HLSAP的作用。4在代谢产物方面,大黄附子汤可能通过调节内源性大麻素信号,调节肉豆蔻酸和富马酸的而发挥治疗作用。

目的:长期暴露于压力下会使大脑功能受损,出现记忆力、学习能力和社会认知能力衰退。在动物研究中,慢性应激已被证明会损害啮齿动物的社交行为,类似于抑郁症患者表现出的社交退缩。慢性应激极大地影响大脑功能,是抑郁症和阿尔茨海默病等脑部病变的诱因。海马体是边缘系统的一部分,主要参与学习和记忆,在应激反应的调节中起着关键作用。慢性应激会导致糖皮质激素释放增加,海马体含有丰富的糖皮质激素受体,这使得它对压力特别敏感。据报道,慢性约束应激(CRS)诱导小鼠海马体中活性氧(ROS)过度产生和氧化损伤,致使海马CA1区域神经元受损,显著加重学习和记忆障碍。已有实验表明在慢性束缚应激大鼠海马中有观察到铁死亡现象,这提示慢性应激中海马功能障碍可能与铁死亡有关,但具体机制还有待研究。我们前期已证明慢性应激小鼠血清和海马的皮质酮(啮齿类动物的糖皮质激素)和抵抗素resistin水平升高,有研究报道皮质酮对Erastin诱导黑色素瘤细胞铁死亡具有促进作用,并且还能够诱导成骨细胞发生铁死亡。resistin是一种促炎脂肪细胞因子,高水平resistin会增加细胞氧化应激。此外,有研究发现皮质酮能够促进脂肪组织及垂体中resistin基因表达增多。因此,我们猜测慢性应激可能通过皮质酮-抵抗素轴致使小鼠海马损伤,从而发生学习记忆障碍。研究方法:1、从GEO数据库中获取有关慢性应激的转录组数据,应用R语言程序及相关数据包分析获取慢性应激小鼠海马组织的差异表达基因,并进行KEGG富集分析和GO功能分析,探索慢性应激中海马结构及功能的损伤机制。2、制备慢性束缚应激小鼠模型,利用免疫印迹实验检测小鼠海马中GPX4的表达情况,在透射电子显微镜下观察小鼠海马体的超微结构,确定慢性应激小鼠海马组织内是否有铁死亡发生。3、体外使用不同浓度的皮质酮作用于HT22细胞和小鼠海马星形胶质细胞系,并通过检测细胞GPX4蛋白和脂质过氧化物LPO水平变化以及观察线粒体结构变化来探讨皮质酮是否参与海马细胞铁死亡的发生4、体内向小鼠侧脑室注射皮质酮,体外实验使用皮质酮刺激HT22细胞、星形胶质细胞系、小鼠脑微血管内皮细胞系Bend3、小胶质细胞系BV2,并通过ELISA试剂盒检测海马组织和细胞中resistin的分泌情况,以确定皮质酮是否能够诱导resistin表达增加。5、将resistin作用于HT22细胞和星形胶质细胞系,同样检测细胞GPX4蛋白和脂质过氧化物水平变化以及观察Food biopreservation线粒体结构变化情况,进一步探讨应激小鼠海马组织高水平的抵抗素是否会导致其出现铁死亡的现象。6、最后,应用流式细胞术检测皮质酮和抵抗素是否会诱发其他形式的细胞死亡。研究结果:1、使用R语言“limma包”分析获得了775个差异表达基因;KEGG分析显示有铁死亡(Ferroptosis)信号通路、阿尔兹海默症及自噬等信号通路富集;GO功能分析显示主要富集的生物学过程包括脂质氧化、脂氧合酶途径等。2、Western Blot结果显示相较于对照组,应激组小鼠海马组织GPX4蛋白表达增加,电镜结果显示应激组小鼠海马神经元和星形胶质细胞的线粒体结构有损伤,表现为线粒体嵴断裂或减少,双膜密度增厚,甚至出现气泡样变点击此处,形成透明的空泡。3、体外使用皮质酮刺激HT22细胞和星形胶质细胞系,在共聚焦显微镜下观察到皮质酮处理组的HT22细胞和星形胶质细胞系脂质过氧化物水平升高,且呈剂量依赖性;免疫印迹实验结果显示皮质酮刺激细胞GPX4的蛋白表达水平高于对照组;电镜结果显示皮质酮能够诱使线粒体结构受损,嵴减少,双膜密度增加。4、ELISA结果显示皮质酮能够诱导HT22、Bend3、BV2、星形胶质细胞系及体内海马组织resistin分泌增多。5、应用resistin刺激HT22细胞和星形胶质细胞系,检测结果显示resistin处理组Captisol浓度LPO、GPX4蛋白水平要高于对照组的,且线粒体结构受损,表现为与铁死亡线粒体相似的结构特征;此外,在HT22细胞中,resistin处理组还有自噬的现象。6、流式细胞术的结果表明皮质酮与resistin对HT22细胞和星形胶质细胞系并无凋亡及坏死诱导作用。结论:1、慢性束缚应激小鼠海马体出现铁死亡现象。2、皮质酮能够促进小鼠海马resistin分泌增加3、皮质酮-抵抗素轴选择性诱导海马细胞发生铁死亡。