SARS-CoV-2刺突蛋白受体结合结构域编码基因的体外转录及其在293T细胞中的表达

为获得能表达严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）刺突蛋白受体结合结构域（RBD）的体外转录mRNA，将设计、优化并合成的RBD基因片段插入真核表达载体pcDNA3.1(+)，构建重组表达质粒pcDNA3.1(+)-RBD；重组质粒转染哺乳动物细胞293T后，Western blot检测重组蛋白RBD的表达；以表达RBD的重组质粒为模板，PCR扩增包含T7启IDN-6556价格动子的RBD基因片段作为体外转录模板，之后利用T7microbiome modification转录试剂盒体外转录获得修饰的RBD mRNA，添加多聚腺苷酸尾后使用RNA纯化试剂盒进行纯化，纯化后的RBD mRNA转染至293T细胞中，利用Western blot进行目的蛋白表达鉴定。结果显示，编码RBD的重组质粒构建成功并能在293TCHIR-99021细胞培养细胞中表达外源蛋白，体外转录获得修饰的RBD mRNA能在哺乳动物细胞中翻译，表达的RBD蛋白能与抗RBD的单克隆抗体反应，具有免疫反应原性，为SARS-CoV-2 RBD mRNA疫苗的研制奠定了基础。