目的:对下咽癌组织中肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblasts,CAFs)进行分离和鉴定,进一步检测其生物学特性,分析其与正常成纤维细胞(Normal fibroblasts,NFdiABZI STING agonist研究购买s)的特征差异。并探索CAFs在下咽癌肿瘤衍变过程中所起的作用。方法:取下咽癌病人的肿瘤组织和距肿瘤边缘3cm以上的切缘组织,用组织块法和胶原酶消化法培养原代下咽癌CAFs和NFs。通过观察细胞外形和生长状态对CAFs和NFs进行初步的区分。通过免疫荧光染色分别对CAFs和NFs中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、成纤维细胞激活蛋白(Fibroblast activation protein,FAP)、波形蛋白(Vimentin)、内皮细胞特异性标志物CD31和上皮细胞特异性标志物细胞角蛋白19(Cytokerain19,CK1nature as medicine9)的表达情况进行检测,通过观察蛋白表达位置和荧光强度对两种细胞进行进一步的鉴定。通过Western blot检测CAFs和NFs中α-SMA、FAP和Vimentin的表达情况。应用CCK-8细胞增殖检测试剂盒分别在24h、48h和72h三个时间点对CAFs和NFs的增殖能力进行测定,并绘制增殖曲线,观察两种细胞增殖能力的不同。结果:1.组织块法和胶原酶消化法成功分离下咽癌CAFs和NFs。2.观察细胞形态,CAFs形态较为不规则,伸出触角多,确认细节细胞间有交叉重叠生长的现象;NFs形态规则,细胞呈细长形,细胞间没有交叉重叠。3.免疫荧光结果显示:CAFs和NFs均高表达Vimentin,荧光强度无明显统计学差异(P>0.05)。α-SMA在CAFs和NFs中均表达,CAFs的表达强于NFs,有明显的统计学差异(P<0.05)。FAP在CAFs和NFs中均表达,CAFs略强于NFs,荧光强度分析有显著性差异(P<0.05)。CAFs和NFs均不表达CD31和CK19。4.Western blot结果显示:α-SMA和FAP在CAFs中的表达明显强于同组的NFs,且有显著性差异(P<0.05)。而在Vimentin中,CAFs和NFs之间蛋白表达量无明显的统计学差异(P>0.05)。5.CCK-8结果显示:CAFs的增殖能力高于同组NFs。结论:1.组织块法和胶原酶消化法均可成功分离下咽癌CAFs和NFs。2.CAFs的形态结构和生长方式与NFs不同。CAFs形态不规则,触角多,细胞间交叉重叠生长;NFs形态规则,细长形,细胞间无交叉重叠生长。3.CAFs蛋白表达能力与NFs不同,CAFs高表达α-SMA和FAP,NFs的表达量低。4.CAFs的细胞增殖能力强于NFs。