目的:以藏药二十五味鬼臼丸为研究对象,通过体外抑菌活性实验研究,探究二十五味鬼臼丸对常见的致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)的抑制作用,并通过建立两种大鼠宫颈炎模型,从氧化应激和细胞凋亡的角度探究二十五味鬼臼丸抗宫颈炎的潜在作用机制,为二十五味鬼臼丸的临床推广和二次开发提供实验依据。方法:1.二十五味鬼臼丸的体外抑菌活性研究采用琼脂平板打孔Biogeophysical parameters法测定抑菌圈大小;微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);紫外分光光度计绘制细菌的生长曲线、测定胞外核酸相对量和可溶性蛋白含量;多功能酶标仪测定碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)活性;SDS-PAGE凝胶电泳检测菌体总蛋白含量。2.二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆致大鼠宫颈炎模型的治疗作用及机制研究将SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、二十五味鬼臼丸低、中、高(0.2、0.4、0.8 g·kg~(-1))剂量组和抗宫炎片组(0.4725 g·kg~(-1))。除空白组外,采用阴道深处注射25%苯酚胶浆的方法建立苯酚胶浆致宫颈炎大鼠模型。灌胃给药12 d后,观察大鼠一般情况及子宫指数的变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察子宫组织的病理学损伤情况;末端标记(TUNEL)染色法观察子宫组织的细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测子宫组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的含量;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测子宫组织中核因子E2相关因子(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、NADPH氧化酶4(Nox4)的m RNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测子宫组织selleck化学中Nrf2、HO-1、Nox4的蛋白表达。3.二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆混合金黄色葡萄球菌感染致大鼠宫颈炎模型的治疗作用及机制研究将SD雌性大鼠随机分为空白组、模型组、二十五味鬼臼丸中剂量(0.4g·kg~(-1))组和抗宫炎片组。除空白组外,采用阴道深处先后注射25%苯酚胶浆和金黄色葡萄球菌的方法建立苯酚胶浆混合金黄色葡萄球菌致大鼠宫颈炎模型。灌胃给药12 d后,观察大鼠一般情况及子宫指数的变化;HE染色法观察子宫组织的病理学损伤情况;TUNEL染色法观察子宫组织的细胞凋亡情况;ELISA法检测子宫组织中SOD、MDA的含量;q RT-PCR法检测子宫组织中Nrf2、HO-1、Nox4、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl2关联X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、半胱氨酸蛋白酶9(caspase-9)的m RNA表达;Western blot法检测子宫组织中氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、Nox4和细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9的表达。结果:1.二十五味鬼臼丸的体外抑菌活性研究二十五味鬼臼丸50、100、200 mg·m L~(-1)对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为(12.33±0.75)、(16.33±0.41)、(19.17±0.68)mm;对金黄色葡萄球菌的MIC为100 mg·m L~(-1);与对照组比较,二十五味鬼臼丸组的金黄色葡萄球菌生长明显减缓(P<0.05),胞外的AKP活性明显升高(P<0.05),胞外核酸相对量显著升高(P<0.01),胞外可溶性蛋白含量显著升高(P<0.01),菌体总蛋白表达量明显减少。2.二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆致大鼠宫颈炎模型的治疗作用及机制研究与空白组比较,模型组大鼠体重增长显著减慢(P<0.01),外阴炎症评分显著升高(P<0.01),子宫指数显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1 m RNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01),Nox4 m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,二十五味鬼臼丸各给药组大鼠体重显著增长(P<0.01),外阴炎症评分显著降低(P<0.01),子宫指数明显降低(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05),Nrf2、HO-1 m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05),Nox4 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);HE染色结果表明二十五味鬼臼丸可以明显减轻更多大鼠炎症程度;TUNEL染色结果表明,二十五味鬼臼丸可以明显减少细胞凋亡。3.二十五味鬼臼丸对苯酚胶浆混合金黄色葡萄球菌感染致大鼠宫颈炎模型的治疗作用及机制研究与空白组比较,模型组大鼠体重增长显著缓慢(P<0.01),外阴炎症评分显著升高(P<0.01),子宫指数显著升高(P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),Nrf2、HO-1、Bax、caspase-3、caspase-9 m RNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01),Nox4、Bcl-2 m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,二十五味鬼臼丸中剂量组大鼠体重显著增长(P<0.01),外阴炎症评分显著降低(P<0.01),子宫指数显著下降(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05),Nrf2、HO-1、Bax、caspase-3、caspase-9 m RNA和蛋白表达均显著升高(P<0.01),MDA含量显著降低(P<0.05),Nox4、Bcl-2 m RNA和蛋白表达显著降低(P<0.01);HE染色结果表明二十五味鬼臼丸可以明显减轻大鼠炎症程度;TUNEL染色结果表明,二十五味鬼臼丸可以明显减少细胞凋亡。结论:本研究通过建立两种大鼠宫颈炎模型,从氧化应激的角度,研究二十五味鬼臼丸治疗宫颈炎的潜在作用机制,发现二十五味鬼臼丸可以降低氧化应激蛋白的表达,增加抗氧化应激蛋白的表达。通过抑制Nox4的表达,激活Nrf2/HO-1信号通路,发挥抗氧化作用,减轻炎症反应及细胞凋亡,从而抑制宫颈炎发展。