目的:通过检测抗CD52单抗联合NK细胞扩增试剂盒扩增外周血来源的自然杀伤细胞(NK细胞)数量与比例,探讨一种新的体外扩增NK细胞的方法;通过比较NK细胞对分别经小分子药物塞利尼索预处理与DMSO对照预处理的急性髓系白血病细胞(AML)的杀伤活性,探讨塞利尼索能否增强NK细胞对AML细胞的杀伤作用,并进一步研究塞利尼索影响NK细胞杀伤活性的可能的机制,为临床中AML患者的治疗提供新思路。方法:分离与提取来自健康捐献者的外周静脉血中的单个核细胞(PMicroscopesBMCs),在NK细胞扩增试剂盒的基础上加用抗CD52单抗共同刺激培养PBMCs 14天,开始扩增前与扩增结束后对所有细胞进行计数,并使用流式细胞术检测培养前后NK细胞的纯度(即CD3-CD56+细胞所占比例)。使用羧基荧光素琥珀酰亚酯(CFSE)标记AML细胞系(K562、HL-60、THP-1)、初发AML患者骨髓血中提取的单个核细胞、扩增后的NK细胞,然后使用不同低浓度的塞利尼索(0nmol/L、50nmol/L、100nmol/L以及400nmol/L)预处理AML细胞、NK细胞24小时,通过流式细胞术检测AML细胞与NK细胞的凋亡与增殖;使用浓度为100nmol/L的塞利尼索与DMSO对照组预处理AML细胞24 h,然后与NK细胞共培养4小时,检测AML细胞的凋亡和增殖;通过流式细胞术检测经塞利尼索预处理后NK细胞表面的抑制性受体(NKG2A)、激活性受体(NKG2D)、AML细胞表面的激活配体(MICA/MICB)以及抑制配体(HLA-E)分子的表达。结果:使用抗CD52单抗联合NK细胞扩增试剂盒的方法诱导培养PBMCs 14天后,NK细胞数量较扩增前增加约1000倍,NK细胞纯度由扩增前1.39±2.01(%)的增加至扩增后的86.65R428浓度±5.03(%)。与DMSO对照组相比,使用单独低浓度的塞利尼索处理AML细胞、NK细胞,细胞的凋亡与增殖与对照组相比未见显著差异(P>0.05);而通过塞利尼索(100nmol/L)预处理的AML细胞能够明显增强NK细胞介导的细胞毒性,表现为AML细胞的增殖减少和凋亡增加(P<0.05);此外,塞利尼索下调了AML细胞表面的HLA-E配体以及NK细胞表面的抑制性受体NKG2A的表达(P<0.NVP-TNKS656体内实验剂量05),而MICA/MICB和NKG2D的表达无显著差异(P>0.05)。结论:应用抗CD52单抗和细胞因子联合可以从PBMC中扩增出大…