一、研究背景成簇规则间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)/CRISPR相关(CRISPR-associated,Cas)系统原本是细菌中的一种适应性免疫系统,已经被开发成为了一种高效、方便的基因编辑工具,目前广泛应用于模型构建、基因治疗等领域。随着该技术的应用,其潜在的安全性风险也逐渐显现。已有研究表明,基因编辑技术在应用中存在脱靶、致癌、基因损伤等潜在的不良后果。因此,通过精selleck NMR准调控基因编辑技术以减少其应用中的潜在风险成为了近年来的研究热点。前期研究人员已经开发出了多种调控CRISPR/Cas9基因编辑效率的方法,包括使用抗CRISPR蛋白、小分子化合物、光控元件融合表达的Cas9蛋白等。然而,这些方法通常是利用外源物质通过抑制或调控Cas9蛋白酶进而发挥抑制基因编辑效率的作用,利用宿主细胞自身内源基因进行调节的研究较少,考虑到宿主细胞基因组自身具有一套强大的基因损伤修复系统,因此建立一种通过增强宿主细胞内源基因修复能力降低CRISPR/Cas9基因编辑带来潜在基因损伤的方法,对于提高CRISPR/Cas9今后应用的安全性Biotic indices十分必要。众所周知,CRISPR/Cas9基因编辑引发的DNA双链断裂(Double Strand Break,DSB)通常是通过宿主的DNA损伤修复系统进行修复,主要包括以下类型:非同源末端连接是通过连接酶直接将断裂末端进行连接,若断裂位点两端存在微同源序列也可通过微同源介导的末端连接途径进行修复,上述末端连接修复方式均是易错的,经常伴随着小插入或缺失(insertion-deletion,indels)。精准的同源重组修复途径利用位于姐妹染色单体或同源染色体上的同源序列作为模板进行修复,此外若断裂位点的两端存在长同源序列,还可以通过单链退火途径进行修复。近年来发现了一类新的同源重组修复机制-转录相关的同源重组修复,其可以通LGK-974小鼠过转录本RNA介导或直接以转录本RNA作为模板进行修复。在同源重组修复中,辐射敏感52(Radiation Sensitive 52,RAD52)蛋白发挥重要作用,其帮助辐射敏感51(Radiation Sensitive 51,RAD51)蛋白加载到单链DNA上进行后续同源模板寻找,同时也被首先募集到损伤部位招募下游的修复因子进而启动修复。本研究中,我们建立了…