马链球菌兽疫亚种SclE蛋白原核表达及其免疫效力评价

【目的】探究马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp. zooepidemicus,SEZ)表面蛋白SclE的免疫效力,为SEZ引起的链球菌病的预防提供新的理论依据。【方法】采用PCR扩增SEZ的SclE基因,再将该片段克隆进原核表达pCold I载体上,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达后以SDS-PAGE进行分析鉴定,获得的重组蛋白SclE(rSclE)(100 μg/mL,0.5 mL)以腹腔注射的形式免疫BALB/c小鼠(n=10,一免selleck产品、二免的周期均为14 d)。一免、二免14 d后收集血清,通过ELISA和Western blotting检测抗体水平和特异性。二免后进行免疫保护实验,并对攻毒后小鼠的肝、脾、肺、肾进行细菌载量检测和病理组织学观察。【结果】SDS-PAGE检测到大小约为93 kD的蛋白表达,与SclE的理论分子量大小一致;Western blotting检测显示,表达所得重组蛋白能与SEZ阳性对照组小鼠血清发生特异性结合,表明其具有良好的反应原性;通过上述试验表明本研究成功表media analysis达rSclE。ELISA检测显示,二免后小鼠血清中特异性抗体滴度与一免后相比均有显著提升,且可诱导小鼠产生高滴度的IgG,其中IgG1抗体水平显著高于IgG2a(0.436±0.031 vs 0.161±0.009,P<0.05),表明rSclE诱导的抗体亚型以IgG1为主;rSclE免疫小鼠可显著抑制SEZ在各脏器中的增殖能力(P<0.05),肝脏、脾脏出血及炎性细胞浸润的症状得到改善,肺脏、肾脏出血等病理损伤减轻;在小鼠免疫攻毒保护实验中保护70%小鼠免受致死剂量SEZ毒株的攻击。【结论】成功表达获得的rSclE且能诱导小鼠产生SclE特异性的抗体,且具有较好的保护效果,PI3K/Akt/mTOR抑制剂为rSclE作为一种SEZ潜在的疫苗候选抗原提供理论依据。