目的：探讨乳腺癌他莫昔芬（TAM）耐药的潜在机制。方法：筛选乳腺癌细胞HCC1937和MCF7的抗性细胞系（HCC1937/TR和MCF7/TR细胞）。TAM处理后，通过高通量测序和siRNA筛选鉴定乳腺癌细胞TAM耐药的关键分子。结果：高通量测序发现TAM可影响多个基因的表达水平。当敲低HSP90α时，HCC1937/FR细胞凋亡水平升高（P<0.05）。过表达HSP90α后，HCC1937/TR和MCF7/TR细胞凋亡水平显著降低（P<0.05）。敲低HSP90α后，MCF7/TR细胞凋亡水平显著升高（P<0.05）。在HCC1937和MCF7细胞中过表达HSP90α后用TAM处理，HCC1937和MCF7显示出对TAM抑制增殖的抵抗（P<0.05）。敲低HSP90α后，PI3K/Akt通路受到抑制。过表达HSP90α后，PI3K/Akt通路激活。PI3K/AGefitinib-based PROTAC 3配制kt通路抑制剂Pectolinarin或Milt更多efosine处理后再以TAM处理，HCC1937/TR和MCF7/TR细胞凋亡水平显著升高（P<0.05）。TAM处理后，MCF7/TR和HCC1937/TR细胞中medical nutrition therapymiR-5003-3p表达水平降低（P<0.05）。在HCC1937/TR和MCF7/TR细胞中，过表达miR-5003-3p后HSP90α表达水平降低（P<0.05）；敲低miR-5003-3p后，HSP90α表达水平升高（P<0.05）。TAM处理后过表达miR-5003-3p,HCC1937和MCF7细胞凋亡水平升高（P<0.05）;TAM处理后敲低miR-5003-3p,HCC1937和MCF7凋亡水平降低（P<0.05）。此外，敲低miR-5003-3p后，PI3K/Akt通路激活。过表达miR-5003-3p后PI3K/Akt通路受到抑制。结论：在受到持续化疗药物TAM处理后，乳腺癌细胞HCC1937和MCF7中靶向HSP90α mRNA的miR-5003-3p表达水平降低，HSP90α表达水平升高可激活PI3K/Akt通路，最终引起乳腺癌细胞对TAM耐药。